双硫腙光度法测定化妆品中微量铅

➢主要仪器与试剂
仪器：721分光光度计，分流漏斗， 铁架台，铁圈
试剂：Pb标准溶液 100.0ug/L； 双硫腙-CCl4溶液 0.04g/L； 20％柠檬酸铵溶液；
20％盐酸羟胺溶液 ；酚红指示液 HNO3 （20%）；氨水（1:1）；
10％氰化钾溶液 Pb未知试液。
➢试剂的具体配制方法
• l、1：1氨水；2、酚红指示液：0.1％乙醇溶液。 3、20％盐酸羟胺溶液：称 取20克盐酸羟胺，加水溶解至约50ml，加2滴酚红指示液，加1：1氨水，调 PH至8.5-9.0(由黄变红，再多加2滴)用双硫腙-三氯甲烷溶液提取至三氯甲烷 层绿色不变为止，弃去再用三氯甲烷洗二次，弃去三氯甲烷层，水层加6N盐 酸呈酸性，加水至100毫升。 4、20％柠檬酸铵溶液：同理 5、10％氰化钾溶 液；6、三氯甲烷；不应含氧化物。 处理方法：于三氯甲烷中加人工1／10-1／20体积的20％硫酸钠溶液洗 涤，再用水洗后加入少量无水氯化钙脱水后进行蒸馏，弃去最初及最后的l／ 10馏出液，收集中间馏出液备用。 7、20％硝酸：量取1ml硝酸，加水稀释至100ml。8、双硫腙溶液：0.5 ％三氯甲烷溶液，保存冰箱中，必要时用下述方法纯化。9、双硫腙使用液： 吸取1.Oml双硫腙溶液，加三氯甲烷至10ml，混匀。用：1cm比色杯，以三氯 甲烷调节零点，于波长510nm处测吸光度(A)下式用算出配制100m1双硫腙使 用液(70％透光率)所需双硫腙溶液的毫升数(N)。
冷。
双硫腙比色法
➢实验步骤:
痕量Pb离子 + 双硫腙 pH:8.5-9.5 红色螯合物
溶于CCl4 萃取富集
分光光度法测Pb含量
通过遮蔽剂除去无关离子，氨水调节PH值，在符合反应发生条 件的情况下萃取富集提高铅含量测定的精确度。
➢实验步骤：
1、标准曲线的绘制
1-6号用水补充至100 ml → HNO3 （20%）调pH:2-3 →加2m120％柠檬酸铵溶液lml20％盐酸羟胺溶液和2滴酚红指 示液混匀 →1:1氨水调pH:8.5~9.5 （加入的酚红指示剂显红色） → 2ml10％氰化钾溶液 → 10.00ml双硫腙工作液 →剧烈振荡2min(注意放气) →静置分层→脱脂棉滤人1cm比色 杯中,
萃取分离-双硫腙光度法测定 粉质化妆品中微量铅
主讲人：郑芷昕 生化设计性实Biblioteka Baidu小组成员：郑芷昕，陈雪静， 李庆福
铅(Pb)的危害
➢ 中枢神经系统中，大脑皮层和小脑是铅毒性作用的主要靶组织；而在周围神经系 统中，运动神经轴突则是铅毒害的主要靶组织。其中铅对神经系统的毒害主要表 现为以下4种：（1）使铅中毒者的心理发生变化，例如成人铅中毒后会出现忧郁、 烦躁、性格改变等症状，而儿童则表现为多动。（2）铅中毒会导致智力下降， 尤其是儿童会出现学习障碍，据报道高铅儿童的IQ值平均比低铅儿童低4－6分。 （3）铅中毒会导致感觉功能障碍，例如很多铅中毒病人时会出现视觉功能障碍： 视网膜水肿、球后视神经炎、盲点、眼外展肌麻痹、视神经萎缩、眼球运动障碍、 瞳孔调节异常、弱视或视野改变；或嗅觉、味觉障碍等。（4）铅对周围神经系 统的主要影响是降低运动功能和神经传导速度，肌肉损害是严重铅中毒的典型证 明之一。 铅对血液系统的主要作用表现在2个方面，一是抑制血红蛋白的合成，二是缩短 循环中的红细胞寿命，这些影响，最终会导致贫血。
• 12.化妆品铅试样的配制（湿化法）
• 吸取10.Oml化妆品液体样品)，置于250ml定氮瓶中，加数粒玻璃珠， lOml硝酸，放置片刻，小火加热、待作用缓和，放冷，沿瓶壁加入1 ％硝酸，再加热，至瓶中液体开始变成棕色时，不断沿瓶壁滴加硝酸
有机质分解完全。加热火力，至产生白烟，溶液应澄清无色或微带黄 色，放冷。在操作过程中应注意防止爆炸。加20ml水煮沸，除去残 余的硝酸至产生白烟为止，如此处理两次，放冷。将冷后的溶液移入 50ml或lOOml容量瓶中用水洗涤定氮瓶，洗液并容量瓶中再放冷， 加水至刻度，混匀。定容后的溶液每lml相当于2g样品或2ml样品。b、 含酒精性饮料或二氧化碳饮料：吸取10.Oml样，置于250ml定氮瓶中， 加数粒玻璃珠，先用小火加热除去乙醇或二氧化碳，再加lOml硝酸， 混匀后，以下按(a)自“放置片刻”起依法操作，但定容后的溶液每 10ml相当于2m1样品。c、含糖量高的食品：称取1.0克样品，置于 250ml定氮瓶中，先加少许水使湿润，加数粒玻璃珠，10ml硝酸，摇 匀，缓缓加入10ml硫酸，待作用缓和停止起泡沫后，先用小火缓缓加 热(糖分易炭化)，不断沿瓶壁：加硝酸，待泡沫全部消失后，再加大 火力，至有机质分解完全发生白烟，溶液应澄清无色或微带黄色，放
铅对心血管系统的伤害主要表现在：（1）心血管病死亡率与动脉中铅过量密 切相关，心血管病患者血铅和24小时尿铅水平明显高于非心血管病患者。（2） 铅暴露能引起高血压。（3）铅暴露能引起心脏病变和心脏功能变化。
骨骼是铅毒性的重要靶器官系统，铅一方面通过损伤内分泌器官而间接影响骨 功能和骨矿物代谢的调节能力，另一方面通过毒化细胞、干扰基本细胞过程和酶 功能、改变成骨细胞－破骨细胞耦联关系并影响钙使系统从而直接干扰骨细胞的 功能。
V =(10(2-lg70))/A=1.55/A 10、铅标准溶液：精密称取0.1598克硝酸铅，加10ml1％硝酸，全部溶 解后，移入100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于lml铅。 11、铅标准使用液：吸取1.0ml铅标准溶液，置于100毫升容量瓶中，加水稀 释至刻度。此溶液每毫升相当于10mg铅。
2、铅试剂暴露在强光下可明显褪色，所以整个 实验要避免强光照射。 3、所用玻璃仪器均用l0-20％硝酸浸泡24小时以 上，用自来水反复冲洗，最后用水冲洗干净。 4、CCl4有一定毒性且易挥发,及时盖好试剂瓶。
➢预期实验结果分析
经过检测，本试验所测化妆品样品中重金属铅的 含量范围在0.87mg/kg左右。
我国《化妆品卫生规范》对于重金属含量限定
规范要求铅Pb含量﹤40mg/kg
铅的检测方法:
●原子吸收分光光度法：选择性好、灵敏度 高、 简便、快速，但仪器昂贵。
●比色法：设备简单、价廉，灵敏度可满足 要求。
●极谱法和荧光分光光度法。
原子吸收光度法
• 原子吸收光谱法，指的是利用气态原子可以吸收 一定波长的光辐射，使原子中外层的电子从基态 跃迁到激发态的现象而建立的。由于各种原子中 电子的能级不同，将有选择性地共振吸收一定波 长的辐射光，这个共振吸收波长恰好等于该原子 受激发后发射光谱的波长，由此可作为元素定性 的依据，而吸收辐射的强度可作为定量的依据。 AAS现已成为无机元素定量分析应用最广泛的一 种分析方法。
4、根据结果比较不同化妆品 中铅含量多少，提出相应建议
➢实验原理：
样品经消化后，在pH8.5-9.0时，铅离子 。与双硫腙生成红色络合物，溶于三氯甲 烷，加入柠檬酸铵，氰化钾和盐酸羟胺 等，防止铁、铜、锌等离子干扰，与标 准系列比较定量。
反应式
双硫腙（绿色）
Pb -双硫腙螯合物（淡 红色）
有机相在λmax=510nm测A，求Pb含量。
弃去1~2 ml→以1号为参比，510nm测A。
2、铅试样测定
任取一份铅试样2ml→分液漏斗，加水至 100 ml，以下按标准曲线测定步骤进行。
计算样品中铅含量： 含铅量=m/v
m：从标准曲线上查到 的样品中的铅质量；
v： 水样的体积。
➢实验关键及注意事项：
1、控制好萃取操作条件的一致性： 萃取液体积、时间、力度、静止时间等 。
同一类别化妆品中重金属铅含量范围广且离散。 其中保湿营养霜类变异系数最大，柔肤水类变异系数小。 化妆品中重金属铅含量的顺序为：保湿营养霜＞美白保湿霜类＞洗面奶
类＞防晒霜类＞柔肤水类＞乳液类。
双硫腙比色法
• 测定铅含量的方法之一。 样品经消化后，在pH8.5-9.0时，铅离子与
双硫腙生成红色络合物，溶于三氯甲烷，加入柠 檬酸铵，氰化钾和盐酸羟胺等，防止铁、铜、锌 等离子干扰，与标准系列比较定量。
➢实验目的：
1、掌握样品处理方法
2、比较两种实验方法测定铅 含量的优缺点。
3、通过标准曲线的制作粗略 测量化妆品中铅含量