结核菌培养方法、

• 比统计学看来，耐INH菌株，应用DPC仍
有效，差异有高度显著性。因此，DPC可 否作为另一种抗结核药物，与RFP、RFD 等联合应用，关键在于DPC是否和PAS那 样，对RFP、RFD吸收有障碍，会降低 RFP的血浓度，降低疗效。如果DPC并没 有PAS这一代谢现象，则DPC作为另一抗 结核药物，其应用前景就较为广阔了。
• 2、研究结果：我们研究的10种抗结核
药物耐药性试验，这10种抗结核药物是： INH、PAS、DPC、TB1、EMB、RFP、RFD、 SM、KM及CPM，围绕本文目的，我们仅取 30例病人的其中INH、PAS及DPC三种药物 的耐药性进行分析，其他另行报道。INH、 PAS的浓度，按国家耐药性标准，分为1μg 及10μg，以每毫升1μg为耐药上界，1μg药 浓下不能生长者为阴性，为敏感菌。1μg生 长者为阳性，为耐药菌。
• Dipasic则暂定为每毫升含药0.1μg、
0.5μg、1.0μg及10μg四种。加入药物后， 充分摇匀混合后，分装在中试管内，每管5 毫升，摆成斜面，进行85℃—90℃一小时 凝固灭菌，24小时后再灭菌一次，制成的 含药培养基，保存在冰箱，一个月内有效。 菌液制备：取培养基上生长一个月内的菌 落，于磨菌器内灭菌生理盐水研磨呈均匀 的菌液，再加灭菌盐水稀释，与标准管比 较（制成每毫升含1毫升的菌液），最后 100倍稀释成每毫升含10-2毫克菌液备用。
• DPC的浓度，由于我们尚需寻求合
适的抑菌浓度，故分为每毫升含药 0.1μg、0.5μg、1.0μg及10μg四种 不同的浓度。为便于统计比较，暂 以1μg作为耐药标准，1μg以下者 为敏感，1μg以上者为耐药。
表1
30例耐药情况分析
敏感
3（10.0）
药物名
INH（%）
耐药
27(90.0)
PAS（%）
INH(%)
敏感与耐药程度的分析 + ++ +++ 3(10.0%) 1(3.3%) 4(13.3%) 22(73.4%)
PAS(%)
22(73.4%) 2(6.6%)
3(10.0%) 3(10.0%)
DPC(%)
20(66.6%) 3(10.0%) 6(20.0%) 1(3.3%)
表1和表2可以说明INH、PAS、 DPC为三种不同的抗结核药物， 他们对不同的结核菌，有不同 的敏感与耐药情况。从8例耐 PAS菌株中，我们发现，此8例 同时有三种以抗结核药物之耐 药，耐DPC菌株10例中，也有 此一现象，是多种耐药性菌株。
表3
30例DPC抑菌浓度的分析
培养阳性
30（100%）
18（60%） 9（30%） 2（6.6%）
抑菌浓度(μg)
0．1
0．5 1 10
培养阴性
0（0%）
12（40%） 21（70） 28(93.4%)
从表3可见,DPC抑菌 浓度,1μg尚有9例培 养仍可生长,10μg时 有6.6培养阳性。
讨论：过去，有人认为DPC是一种
• Kowilsky氏测定DPC服用后血浓度的记载，
氏用DPC与INH同量时，血浓度1小时 5.8mg/L,3小时6mg/1,7小时4.56mg/L,12小 时2.6mg/L,14小时2mg/L，氏认为DPC明显 优于INH，其优点是：（1）DPC排泄慢， INH12小时血浓度仅有0.003mg/L，而KPC 仍有2.6mg/L，14小时时INH浓度已为”0”， KPC仍高达2mg/L。（2）血浓度KPC比INH 高，在二者给同样的药量时，INH血浓度为 5.2mg/L，DPC则为5.8mg/L。
结核菌培养方法、耐药 性及存活时间的研究
抗结核药物的使用，在结核病防治上起了 划时代的作用。50年代采用INH+PAS联 合治疗，取得了较好疗效。但PAS服用量 大，消化道反应多，病人不能耐受，90% 不能完成治疗程。瑞士Geistlich药厂研制 的Dipasic（简称DPC）（德国又名 GEWO399），是以特殊方法，将INH与 PAS合成的化合物。它能代替INH+PAS联 合用Βιβλιοθήκη Baidu，增加疗效，副作用明显比PAS为 少，德国Freudenthal等50余位专家均有 Dipasic临床应用的报告，认为有效。但无 Dipasic耐药性的报道。
INH+PAS的混合物，我们的研究证明从耐 药性及耐药程度分析，DPC是独立的一种抗 结核药物，是INH与PAS的一种化合物，当 前，我国耐INH菌株已达90%，这样的耐药 性，仍在广泛应用，是否降低疗效，值得 重视。INH耐药后，是否致病力全均下降， 从我们的结核菌培养后生长时间看，并未 发现耐药菌的生长延缓。
• 菌液接种：将含不同浓度的含药培养基顺
序排列，并有不含药物的培养基作为对照。 取每毫升含10-2毫克的菌液，每管接种0.1 毫升，接种菌量为10-3毫克的菌液。放在 37℃温箱内培养，每周观察一次，四周报 告结果。报告的标准是，如培养基上无菌 生长者为（一），培养基上有菌落数在50 个以下者为（+），培养基上菌落数50个以 上，但无融合者为（++），培养基上菌落 大部分融合者为（+++）。
当前，我国耐药性病人不断增 加，寻求合理用药，是当务之 急，为此我们对Dipasic作耐性 研究，目的在于， （1）了解Dipasic对耐药菌株是 否有效？ （2）Dipasic的药物抑菌浓度如 何？以便研究用量与用法，提 高临床疗效。
1、研究方法：从安徽医科大学附属医院
的门诊及病房肺结核病人的痰进行结核菌 培养，无论病人是初治抑复治，亦不分男 女老少，凡痰菌培养阳性者，即作为研究 对象。结核菌的检验，按标准常规操作进 行。药敏培养基的制备：液体鸡蛋培养基 内，按比例加入抗结核药物，其浓度按我 国药敏标准，如INH、PAS、TB1，每毫升 分别为1μg及10μg，SM、KM、CPM分别为 10μg，RFP及RFD分别为50μg及250μg， EMB为5μg及50μg。
DPC（%）
22(73.3)
20(66.6)
8(26.7)
10(33.4)
从表1可见耐INH菌珠已达 90%,耐DPC菌株为33.4%,经 统计学处理,X2=27.44,P＜ 0.001,有高度显著性。PAS与 DPC比较，经统计学处理， 校正卡方为0.062，P＞0.05, 无显著性。
表2
药物名