紫菀药材的高效液相色谱指纹图谱与定量分析讲解
高效液相色谱法测定复方立止咳颗粒中紫菀酮的含量
８ ％、０ ％、２ ％的紫菀酮对 照品溶液 ，按 质量标准制 备 ６ ０ １０ １０ 份供试液 ， 分别进样 ， 测定 回收率 ， 计算相对标准偏差 。结果
ｈ超声处理 ， ， 取出放冷， 滤过， 用三氯甲烷 ２ １ ０ 分次洗涤容 ｍ
１ 资 料 与 方 法
１ 仪器与试药 ． １ Ａ ｉ ｎ １０ 高 效 液 相 色 谱 仪 ，检 测 器 ： Ｖ－ｌ ， ｇ ｅｔ １０ ｌ ｕ Ｖ Ｓ Ａ Ｗ１０ Ａ １ ０ Ｕ ２ Ｄ， Ｓ— ０自动进样 器 ， Ｐ １Ｄ十万分之一 电子天 １ Ｂ ２ １ 平 （ 国 Ｓａｔ ｉｓ ； 德 ｔｒ ｒ ） 乙腈 为 Ｈ Ｌ ｏｕ Ｐ Ｃ级 ， 为纯化水 ； 水 紫菀酮对
ｇ共 ６份 ， ， 测定紫菀酮 含量 ， 算相对标 准偏差 ， 计 结果表 明 ， Ｒ Ｄ值为 １ ６ Ｓ ． ％。表明该方法重现性 良好 。 ８
ｎ ｍ。理论塔板数按紫菀酮计算应不低 于 ３０ 。 ０ ０ １ ． 对照 品溶 液的制备 ［： 密称取紫莞 酮对照 品 ５ｍ ， ．２ ２ ２精 ］ ｇ
见表 １紫菀酮的平均回收率为 １１ ６ Ｒ Ｄ值为 １ ３ ， ０． ％，Ｓ ０ ． ％。 ３
表 １ 回收率实验结果
１ ． 样 品测定干扰性试验 ： 上述 色谱 条件 ， ．１ ２Ｏ 按 分别 取供 试
式计算含量 ：
Ｍ 含量 （ 袋 ） —ｘＡ ｘ ２５ ｘ ｌ － ｍ ＝ Ｃｘ ｘ ｘ ０ Ｏ ３
中国药物与临床 ２ １ 年 ４ ０２ 月第 ｌ 卷第 ４ Ｃ ｉ ２ 期 ｈｎ
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・４ ７ ・ ５
紫菀(紫菀酮)高效液相色谱图(对照和样品)
<色谱图>
采集人: Admin 样品名称: 紫菀 样品 ID : 紫菀酮 进样体积: 20 uL
数据文件名: 紫菀（技术部样）对照02.lcd 方法文件名: 紫菀方法.lcm 批处理文件名:
报告文件名: Default.lcr
数据采集: 2010-8-2 10:55:49
数据处理: 2010-8-2 16:30:32
峰表
检测器 A Ch1 200nm 峰# 1 总计
保留时间 47.462 面积 1944877 1944877
高度 34377 34377
面积 % 100.000 100.000
高度 % 100.000 100.000
理论塔板# 16248.163
２０１０版药典方法，岛津ＬＣ－２０１０Ｃ，迪马柱子（Ｃ１８＼２５０＊４０６）
<色谱图>
采集人: Admin 样品名称: 紫菀 样品 ID : 紫菀酮 进样体积: 20 uL
数据文件名: 紫菀（技术部样）样品001.lcd 方法文件名: 紫菀方法.lcm 报告文件名: Default.lcr
数据采集: 2010-8-2 13:33:56
数据处理: 2010-8-2 16:27:17
峰表
检测器 A Ch1 200nm 峰# 1 总计
保留时间 48.071 面积 2540849 2540849
高度 43793 43793
面积 % 100.000 100.000
高度 % 100.000 100.000
理论塔板# 16390.375
２０１０版药典方法，岛津ＬＣ－２０１０Ｃ，迪马柱子（Ｃ１８＼２５０＊４０６）。
中药材高效液相色谱指纹图谱研究概述
指 纹图谱 ： 色谱条件 ， 依利 特 Ｋ ｒ ｏ ｍ ａ ｓ ｉ ｌ Ｃ １ ８ 色谱 柱 （ ２ ０ ０ ｍ ｍ Ｘ ４ ． ６ ｍｍ， ５ ｍ） ； 柱 温 ４ ０ ℃； 流 动相 为 甲醇 （ Ａ相 ） 、 ６ ｍ ｍ ｏ ／ Ｌ— Ｎ ａ Ｈ Ｐ Ｏ （ Ｂ相 ， Ｈ Ｐ Ｏ 调 ｐ Ｈ ６ ． ５ ） ， 梯 度 洗脱 。流速 ０ ． ６ ｍ ｌ ／ 分； 检测 波 长 分段 用
科研人员对 指纹 图谱分 析技术 进行 了大
量研究 ， 取得 了可喜 的成绩 。中药指纹 图
谱 的研究 已经从早 期 只对单一 谱 图进行
简单评述 的阶段 ， 发展到利用计算机技术
雷海 民等 ｊ 报道， 不 同产地 牛 蒡 子
药材 Ｒ Ｐ—ＨＰ Ｌ Ｃ指 纹 图谱 研 究 ， 由于采 用梯度洗脱 的方式 ， 各批次供试 品指 纹图 谱 中色谱峰保 留时间可能不一致 ， 故 相似 度计算时未采用 自动校正方式 ， 而是使 用
获 取 的 色谱 条 件 ， 供 试 品 制备 方 法及 评 价
研 究等 ３个 方 面进 行 阐述 。结 果 ： 中药 指
数的一致性 ） ， 且稳定， 制 定 的指 纹 图谱
可对 白术药材组 分群体 特征 的一 致性作 出判断 。白术指 纹 图谱 有 自身化 学条码 的特征 ， 是其 内在化学成分种类与数量 的
色谱指纹图谱 ， 流速 ０ ． ５ ｍ ｌ ／ 分， 检 测波长 ２ ５ ０ ｎ ｍ， 其他色谱条件与 白术基本相 同。
李小 燕 等 报 道 ， 广 西 粉葛 药 材 高 效液相色谱指纹 图谱 的研究 ， 用 乙腈 一 ０ ．
高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定紫菀止咳冲剂中紫菀酮的含量
高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定紫菀止咳冲剂中紫菀酮
的含量
李萍;范向红;李秀萍;张彬
【期刊名称】《中国药物与临床》
【年(卷),期】2004(004)010
【摘要】紫菀止咳冲剂为紫菀、知母、百合、川贝等中药组成的经水煎取的冲剂，具有化痰止咳的功能。
为了进一步提高中药的产品质量标准，达到质量可控，对该制剂中的君药紫菀的有效成分紫菀酮，采用高效液相色谱法(HPLC)测定含量。
【总页数】1页(P804)
【作者】李萍;范向红;李秀萍;张彬
【作者单位】山西省活血化瘀研究所药剂科,030001;山西省活血化瘀研究所药剂科,030001;山西省活血化瘀研究所药剂科,030001;山西省药品检验所中药室
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.HPLC法测定雪梨止咳糖浆中紫菀酮的含量 [J], 郭迎霞
2.薄层扫描法测定止咳清肺口服液中紫菀酮的含量 [J], 张旭;佟志清;姜铁夫;汪宇;
李长见
3.高效液相色谱法测定复方立止咳颗粒中紫菀酮的含量 [J], 张颖娟;郭阿霞
4.HPLC法测定紫菀止嗽颗粒中紫菀酮的含量 [J], 张军;于红宇;蔡晓燕;罗绮祺
5.薄层扫描法测定蝉蜕止咳颗粒中紫菀酮的含量 [J], 秦文杰;马开;高寒;曲彩虹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法制定中药材和中药注射剂特征指纹图谱的探讨
２０００年７月第２２卷第７期中成药ＣｈｉｎｅｓｅＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＰａｔｅｎｔＭｅｄｉｅｉｎｅＪｕｌｙ，２０００Ｖ０１．２２Ｎｏ．７［中药指纹图谱］高效液相色谱法制定中药材和中药注射剂特征指纹图谱的探讨屠鹏飞（北京大学医学部药学院，北京１０００８３）中图分类号：Ｒ２８４．１文献标识码：Ｂ文章编号：１００１—１５２８（２０００）０７—０５１６—０１１建立特征指纹图谱的意义特征指纹图谱是指某种（或某产地）中药材或中成药中所共有的、具有特异性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。
其特点在于：（１）通过指纹图谱的特异性，能有效鉴别样品的真伪或产地；（２）通过指纹图谱主要特征峰的含量或比例的制定，能有效控制样品的质量，确保样品质量的相对稳定。
因此，在有效成分不完全明确的前提下，特定中药材或中成药的特征指纹图谱，对于有效地控制中药材或中成药的质量，具有重要的意义。
目前指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的最有效手段。
２用ＨＰＬＣ法建立特征指纹图谱的方法学考察特征指纹图谱必须具备特异性、重现性和再现性。
为此，必须进行严格的方法学考察。
２．１样品处理方法考察样品处理包括：样品提取方法、提取溶剂、纯化方法等考察。
应选择提取率高、操作简便的提取、纯化方法。
在选定提取、纯化方法后，必须考察１０份以上同一批号的样品，要求１０份样品的指纹图谱完全一致，特征色谱峰面积的ＲＳＤ％不得大于５％。
２．２特征指纹图谱确定对于所含成分类型相同或相似的中药材或注射剂，可以采用一张指纹图谱；对于所含成分类型较多的中药材或注射剂（尤其是复方中药注射剂），应根据所含成分类型，制作多张指纹图谱。
确定特征指纹图谱必须具有充分的代表性和特异性，至少对１０个产地以上不同等级的样品进行分析，或对同一产地不同规格的１０批以上的样品进行考察，从中归纳出各批合格样品所共有的、峰面积相对稳定的色谱峰作为指纹峰。
所选取色谱峰的组合必须具备特异性，对于原药材多来源的品种，必须考察种间的特异性。
高效液相色谱法在中药化学指纹图谱研究中的应用(6)
1-2色谱条件及系统适用性试验 Cromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm， 5µ m)；流动相乙腈50mmol· -1磷酸二氢钾 L 溶液(磷酸调pH 3.0) (50:50)，内含SDS 12.5mmol· -1；检测波长345nm；流速 L 1mL· -1；柱温为室温；进样量10µ min L； 盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱与 其他峰的分离度均大于1.5。
2方法与结果 2-1稳定性试验 取酒制黄连供试液，分别于0，2， 4，6，8，12，24，36，48h进样10µ L， 记录指纹图谱。 2-2精密度试验 取酒制黄连供试液，重复进样6次， 记录指纹图谱。
2-3重复性试验 取酒制黄连药材粉末6份，精密称定， 按1-1项下方法制备供试液，分别进样， 记录指纹图谱。结果表明，各主要色谱 峰相对保留时间和相对峰面积比值无明 显变化，RSD分别为0.02%~1.02%和 1.24%~ 1.93%，符合指纹图谱要求。
2-4指纹图谱的建立
2-5相似度计算与系统聚类分析
图2 黄连不同炮制样品聚类谱系图
1.5.3中药提取物或制剂中间体的质量 评价
示例一： 穿心莲提取物的HPLC指纹图谱研究 蒋珍藕，饶伟源，陈秋虹，等. 中成药, 2008,30(2):243.
1-1色谱条件和系统适用性试验 Waters C18色谱柱；以乙腈为流动 相(A)和0.1%磷酸溶液为流动相(B)进行 梯度洗脱，流速：1.0mL/min；检测波 长为254nm；柱温：25℃。记录60min 色谱图，35min以后没有出峰，说明 35min内穿心莲提取物成分出峰完全。
虽然无论是原药材、中间体还是成 品，都因组方已固定、生产工艺相对恒 定，而使药品的安全性不可能直接通过 指纹图谱来保障，但因为中药指纹图谱 可直接解决中间体、成品的批间一致性 及稳定性问题，从而可以间接并最终保 障成品的安全性和有效性。
高效液相色谱技术在中药指纹图谱研究中的应用
几种特征成分（如色谱指纹图谱）以保证制剂和产品质量的一致”［２］。
我国国家药品监督管理局２０００年颁布了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》，要求到２００２年末，所有申报的中药注射剂均应有相关的指纹图谱资料， 使中药指纹图谱的研究成为中药研究的热点。
为实现中药材、中成药质量标准现代化，使中药走向世界，研究建立指纹图谱对实现中药质量标准现代化具有重要的意义。
２ 高效液相色谱技术在中药指纹图谱研究中的应用２．１ 高效液相色谱法构建中药指纹图谱应用于中药材的真伪鉴别及质量评价由于高效液相色谱仪的诸多优点并能对中药样品中含有的绝大多数成分进行分析检测及质量评价，故高效液相色谱技术已成为当前研究中药指纹图谱的主要手段。
欧洲国家现在普遍采用高效液相色谱法对植物药物中已知及未知组分进行控制，并形成相应的规范。
因此高效液相色谱法在构建中药指纹图谱对中药的定性鉴别与定量分析中得到广泛应用。
采用高效液相色谱法测定指纹图谱可对中药材的产地、采收时间、加工方法、工艺流程等多方面通过化学成分的差异来反映中药材的种属差异、真伪鉴别等，从而达到控制中药质量的目的。
刘梅［３］等采用ＨＰＬＣ色谱指纹图谱可以快速、准确对药材夏天无和延胡索进行定性鉴别。
张玉杰等［４］对不同产地正伪品沙苑子及伪品的主要有效成分黄酮类进行利用ＨＰＬＣ指纹图谱进行鉴别研究，研究显示不同来源的正品沙苑子ＨＰＬＣ指纹图谱十分相似，而２种伪品则显示出完全不同的指纹图谱特征，得出ＨＰＬＣ指纹图谱特征可以作为沙苑子质量评价和药材鉴别的依据。
李磊等［５］以不同产地正宗丹参和市场上充作丹参的其他鼠尾草属植物为分析对象，采用ＨＰＬＣ法构建丹参ＨＰＬＣ指纹图谱，可鉴别不同来源丹参与其他鼠尾草属丹参伪品。
高效液相色谱技术在中药指纹图谱研究中的应用许一平１ 罗启恩２１．山东中医药高等专科学校 ２６５２００２．莱阳农学院 ２６５２００高效液相色谱法（Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）是在经典液相色谱法的基础上发展起来的一种新的色谱技术。
HPLC法测定紫菀中紫菀酮的含量_吴
第 28 卷第 8 期 2003 年 8 月
中 国
China Journal of
中药杂志
Chinese Materia
Medica
V
ol .28 , Issue 8 August , 2003
行测定 。 1 仪器和材料
Agilent 1100 型高效 液相色谱仪(美国 Agilent 公司 , 包括 1100 四元泵 、自动进样器 、柱温箱 、DAD 检测器 、Agilent 化学工作站)。
图 1 对照品 HPLC 图谱 1 .紫菀酮(图 2 同)
图 2 紫菀药材 HP LC 图谱
3 讨论 3 .1 由于紫菀酮无紫外吸收 , 药典采用薄层扫描方 法对其进行含量测定 , 测定步骤繁琐 , 误差较大 , 另 外 , 与紫菀酮结构近似 , 极性相差不大的化合物 , 如 木栓酮 , 在薄层色谱中具有相同的 Rf 值 , 颜色反应 一致 , 极易造 成分析结 果的误差 , 我们 采用 HP LC 法 , 末端吸收检测 , 结果比较理想 。
第 28 卷第 8 期 2003 年 8 月
中 国
China Journal of
中药杂志
Chinese Materia
Medica
V
ol .28 , Issue 8 August , 2003
国药业 , 1999 , 8 (11):36 . [ 13] 潘 扬 , 王天山 , 张 弦, 等 .RP-HPLC 法测定 中药 山茱萸 中
[ 关键词] 紫菀 ;紫菀酮 ;含量测定 ;HPLC [ 中图分类号] R 284.1 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1001-5302(2003)08-0738-03
紫菀为常用中药 , 具有润肺下气 、止咳祛痰之功 效 , 主治气逆咳嗽 、痰吐不利 、肺虚久咳 、痰中带血等 症 。2000 年版《中 国药典》收 载其来源为菊科植物 紫菀 Astertataricus L .f .的干 燥根 茎及 根[ 1] 。紫 菀
河北道地药材紫菀的指纹图谱研究
河北道地药材紫菀的指纹图谱研究范丽芳;王巧;张兰桐;郑旭光;何伟【期刊名称】《中草药》【年(卷),期】2007(38)10【摘要】目的研究河北道地药材紫菀的HPLC-UV指纹图谱以获取对照图谱,并比较不同产地紫菀药材指纹特征,测定其有效成分紫菀酮的量,为科学评价与有效控制紫菀药材质量提供方法。
方法色谱柱为DiamonsilTMC18柱(250mm×4.6mm,5μm);柱温为30℃,检测波长为200nm,进样量20μL,流动相为乙腈-0.05%磷酸进行梯度洗脱,定量测定中流动相为乙腈等度洗脱,体积流量为2.0mL/min。
结果道地药材指纹图谱相似度均大于0.95,不同产地药材存在较大差异。
紫菀酮线性范围为0.099～0.895mg/mL(r=0.9996,n=5),平均回收率为99.27%,RSD=1.15%(n=6)。
结论本方法操作简便、快速、准确,可作为紫菀药材的质量控制方法。
【总页数】5页(P1566-1570)【关键词】紫菀;指纹图谱;紫菀酮;高效液相色谱法【作者】范丽芳;王巧;张兰桐;郑旭光;何伟【作者单位】河北医科大学药学院药物分析教研室【正文语种】中文【中图分类】R282.710【相关文献】1.河北道地药材酸枣仁HPLC-UV指纹图谱研究 [J], 张志斐;王巧;张兰桐;范丽芳;冯锐2.河北道地药材酸枣仁脂肪油GC-MS指纹图谱研究 [J], 张志斐;宫立红;张兰桐;郭炜;王巧;王春英3.河北道地药材远志HPLC-ELSD指纹图谱研究 [J], 孟岩;范丽芳;朱梦楚;生宁;何玉芳;张兰桐4.河北道地药材板蓝根HPLC指纹图谱研究 [J], 孟岩;范丽芳;张兰桐;贾聚坤;王巧5.河北道地药材远志HPLC-UV指纹图谱研究 [J], 范丽芳;张兰桐;景秀娟;王巧;何伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法在中药指纹图谱中的应用现状及分析(一)
高效液相色谱法在中药指纹图谱中的应用现状及分析(一)【关键词】高效液相色谱法摘要：综述了高效液相色谱(HPLC)法指纹图谱在中药质量控制方面的应用，并通过供试品的制备、标准品的选择、结果分析方法来阐述中药指纹图谱的应用现状，指出高效液相色谱法应用于中药指纹图谱中现有不足之处和未来的发展方向。
关键词：高效液相色谱；中药指纹图谱ApplicationandAnalysisofFingerprintinTraditionalChineseMedicinebyHPLCAbstract:ThispapersummarizedtheapplicationoffingerprintoftraditionalChinesemedicinebyHPLCto thequalitycontrol.ItalsoreviewedtheactualityoffingerprintintraditionalChinesemedicinethroughth epreparationforsample,thechoiceforstandardsample,andthemethodofresultanalysis.Thenpointed outthemainproblemsatpresentandtheprospectivefutureinapplicationoffingerprintoftraditionalChi nesemedicinebyHPLC.Keywords:HPLC;FingerprintofTraditionalChinesemedicine当前，中药指纹图谱技术在国内外已成为一种发展趋势。
首先是美国食品与药品管理局(FDA)允许草药保健品申报资料可以提供色谱指纹图。
世界卫生组织(WHO)在1996年草药评价指导原则中也规定：如果草药的活性成分不明，可以提供指纹图谱以证明产品质量的一致。
欧共体也将指纹图谱监控技术应用于植物药质量控制〔1〕。
高效液相色谱指纹图谱技术在中药质量控制中的应用
高效液相色谱指纹图谱技术在中药质量控制中的应用随着人们对健康的关注度不断提高，中药在临床治疗中的应用越来越广泛。
中药虽然天然、绿色、有效，但是它们对人体的作用机制和剂量较为复杂，从而引起了大众对其安全性和有效性的关注。
因此，中药的质量控制显得尤为重要。
本文将介绍高效液相色谱指纹图谱技术，在中药质量控制中的应用。
一、高效液相色谱指纹图谱技术的原理高效液相色谱指纹图谱技术是利用高效液相色谱手段，对中药复杂体系进行多维度、多角度、多信息的综合分析，建立中药的指纹图谱，并利用图谱信息进行中药的质量控制。
其基本原理为：将中药提取液通过高效液相色谱系统进行分离，将其检测到的峰图谱记录下来，形成指纹图谱。
指纹图谱包括样品数量、峰位、峰面积、峰形、峰间距等信息，反映了样品中的物质组成信息。
通过比对、统计、分析峰物质量浓度等数据，判断样品质量是否符合标准。
二、高效液相色谱指纹图谱技术的优势高效液相色谱指纹图谱技术具有以下优势：1.标准化的技术方案，可大大提高分析的准确性和可靠性；2.对中药体系中的芳香族、酚、生物碱等具有不同极性和不同分子量的化合物都能进行检测，适用范围广；3.检测结果直观，比较客观，可以较准确地反映药材本质和组成；4.可以通过比对已建立的公开指纹图谱库对中药的质量进行定量和定性分析，提高了分析效率和准确性；5.技术操作相对简单，峰型分离准确，重现性好。
三、高效液相色谱指纹图谱技术在中药质量控制中的应用目前，高效液相色谱指纹图谱技术在中药质量控制中的应用已经得到了广泛的认可。
其应用领域主要包括以下几个方面：1.辨识防伪性在中药的种类繁多的情况下，对于一些常见草药、药材，可以采用指纹图谱技术，对比分析检测样品和已知指纹图谱，如果完全一致，说明质量上乘，如果出现差异，可能意味着品质欠佳甚至是假药。
2.质量评价与控制中药材质量的差异通常来自于其生长环境、采收季节、保管期限等因素，因此，需要建立相应的质量指标和标准，科学地评价和控制中药质量。
HPLC_ELSD法测定紫菀中紫菀酮的含量
HPLC-ELSD法测定测定紫菀中紫菀酮的含量目的:建立HPLC-ELSD 检测紫菀中紫菀酮的含量方法。
方法:采用Dionex极性色谱柱以乙腈-水(96∶4) 为流动相;ELSD 漂移管温度45℃，雾化气体( 空气) 流速1.0L·min － 1。
结果:紫菀酮进样量在1.24 ～8.34μg 范围内线性良好( r= 0.9998); 平均回收率。
结论:本法准确、灵敏、重复性好，为紫菀的质量控制提供了依据。
紫菀为菊科植物紫菀Aster tataricus L.f.的干燥根和根茎[1]。
春、秋二季采挖，除去有节的根茎(习称“母根”)和泥沙，编成辫状晒干，或直接晒干。
国内主产于河北、内蒙和东北三省，通常生长于潮湿的河边地带，是一味著名中药，有止咳祛寒之功效。
根含紫菀酮（shionone）、槲皮素、无羁萜、表无羁萜和挥发油，尚含紫菀皂甙（astersaponin），水解得常春藤皂甙元（hederagenin）。
紫菀具有止痛、抑菌、抗氧化、抗肿瘤等作用[2,3,4]。
在七月原创的一篇文章“运用不同色谱柱测定紫菀含量的研究”，初步研究了两种不同色谱柱来测定紫菀中紫菀酮的含量，由所得的图谱，可以看到极性色谱柱稍优于普通柱。
考虑到2010版药典中紫菀酮的含量测定方法中所选波长有末端吸收，笔者利用极性色谱柱并采用了蒸发光散射方法来测定紫菀中紫菀酮的含量，效果明显，以期为后续进一步研究奠定基础。
1.仪器与试药1.1仪器Dionex 3000 高效液相色谱系统（配置Alltech ELSD 3300），Dionex 极性色谱柱Acclaim® Polar Advantage II (PA2) columns (5um, 4.6*150mm)，KQ250超声波清洗器（江苏昆山超声仪器厂），高速离心机（上海飞鸽）十万分之一分析天平（梅特勒公司）。
1.2试药紫菀药材：由安徽亳州中药饮片厂提供。
经郑建宝主管药师鉴定符合2010版中国药典规定。
紫菀的电化学指纹图谱研究_程旺兴
LK2005A 型电化学工作站（ 天津兰力科化学 电子高技术有限公司） ； HH-501 型超级恒温水浴 锅（ 江苏金坛市国盛实验仪器厂） ； CJJ78-1 型恒 温磁力搅拌器（ 城西晓阳电子仪器厂） ； FA1104N 型分析天平； HS3120 型超声器（ 天津恒奥科技发 展有限公司） ； 217 型复合甘汞电极（ 上海精密科 学仪器有限公司） ； 213 型金属铂电极（ 上海精密 科学仪器有限公司） ； 带夹套的玻璃反应器 （ 自 制） ； 高速万能粉碎机（ 天津市泰斯特仪器有限公
比较图 2 的曲线，可以明显看出改变振荡体 系中各组分的浓度将直接影响到测定体系的灵敏
a. H2 SO4 ； b. CH2 （ COOH） 2 ； c. Ce（ SO4 ） 2 ； d. KBrO3
图 2 体系中不同组分的浓度变化对最大振幅的影响 Fig． 2 The maximum amplitude change with the
concentration of the different components of the system
度，通过较为系统地研究了同一组分在不同浓度 下对振荡体系的最大振幅的影响，由图中的曲线 关系可以确定 KBrO3 、CH2 （ COOH） 2 、Ce（ SO4 ） 2 、 H2 SO4 的最佳浓度： 3 mL （ 0. 2 mol / L） 溴酸钾溶 液、6 mL （ 1. 0 mol / L） CH2 （ COOH） 2 溶 液、3 mL （ 0. 1 mol / L） Ce（ SO4 ） 2 溶液、12 mL（ 3. 0 mol / L） H2 SO4 溶液，组成 24 mL 的振荡底液，用于振荡体 系的研究。 2. 3 电化学指纹图谱的影响因素
HPLC法测定紫菀及其蜜炙品中槲皮素及山奈酚含量
HPLC法测定紫菀及其蜜炙品中槲皮素及山奈酚含量曹思思;王伟明;霍金海;任晓蕾【摘要】Objective: To determine the contents of flavonoids in Aster tataricus before and after processing with refined honey. Method:HPLC was used for the determination. Results; After processing with refined honey,the content of quercitrin decreased from 0. 168 0mg/g to 0. 1308mg/g; After processing with refined honey, the content of kaempferol decreased from 0. 164 2mg/g to 0. 121 3mg/g. Conclusion: Flavonoid content in Aster tataricus is decreased after processing.%目的:测定紫菀蜜炙前后黄酮类成分的含量.方法:采用高效液相色谱法.结果:紫菀中槲皮素含量为0.168 0mg/g,蜜炙品槲皮素含量为0.130 8mg/g;生品山奈酚含量为0.164 2mg/g,蜜炙品山奈酚含量为0.121 3mg/g.结论:炮制前后紫菀中黄酮类成分含量均有降低的趋势.【期刊名称】《中医药信息》【年(卷),期】2011(028)006【总页数】3页(P27-29)【关键词】紫菀;槲皮素;山奈酚;高效液相色谱法【作者】曹思思;王伟明;霍金海;任晓蕾【作者单位】黑龙江省中医研究院,黑龙江哈尔滨150036;黑龙江省中医研究院,黑龙江哈尔滨150036;黑龙江省中医研究院,黑龙江哈尔滨150036;黑龙江省中医研究院,黑龙江哈尔滨150036【正文语种】中文【中图分类】R28紫菀为菊科植物(Aster tataricus L.f.)的干燥根及根茎。
高效液相色谱指纹图谱在中药制药过程中的研究进展
高效液相色谱指纹图谱在中药制药过程中的研究进展摘要：中药作为我国传统医药种类，经过几千年的发展，已经形成了极其系统完善的中药制药理论和制药体系，并且在现代化技术的帮助下，中药制药效率和产品质量都在不断进步。
但是由于中药种类繁多，药性复杂，在中药制药过程中必须通过准确有效的检测技术来指导和管理中药制药生产过程，切实保证中药制药产品质量的合格达标。
基于此，文章就对指纹图谱技术和高效液相色谱技术进行了分析，并进一步探究了高效液相色谱指纹图谱在中药制药中的应用和研究进展，以期为中药制药行业的发展提供借鉴和参考。
关键词：高效液相色谱；中药指纹图谱；制药生产；应用引言中药制药必须结合相应的中药理论，全面分析论证药方配伍中的各类中药及天然产物，后再通过现代化制药技术完成对相应中药的规模化制备。
经长期验证表明，中药在各类疾病的治疗中都展示了极好的应用效果，并且与西药联合应用也能够更好促进临床治疗效果的提升，在现阶段备受社会大众所关注，但是在中药制药中，如何控制药品质量，优化制药工艺是当下中药制药研究的重点和难点[1]。
中药指纹图谱通过现代化分析手段能够实现对各类中药化学特性图谱的检测、分析和对比，从而为中药制药工艺改进和质量控制提供有效的参考和依据，其中尤其以高效液相色谱指纹图谱的应用最为普遍，可以完美适用于中药提取、精制、干燥、工艺改进、质量控制等多项工作之中，能够有效促进中药制药工艺和制药质量的提升。
1中药指纹图谱以及高效液相色谱技术概述早在2000年食品药品监督总局就已经提出了构建以指纹图谱为技术基础的中药质控要求，并有序开展对各类中药制剂、中药材等的指纹图谱研究，当下大多数中药材都已经完成了标准指纹图谱的构建。
中药制剂按照中医理论，采用多种不同药材配伍而成，其成分组成及其复杂，并且包含多个活性成分，在药物起效中需要多成分多靶点的共同作用，因此通过指纹图谱来管控整个中药制药过程有着非常好的应用效果。
中药指纹图谱是利用光谱或者色谱技术对已完成处理中药材或者中药进行检测分析，从而得到相应的光谱色谱，不同中药材都对应着相应的光谱和色谱，彼此间存在明显的特异性，其就相当于人的指纹，所以被称之为中药指纹图谱。
中药色谱指纹图谱研究及化学计量学方法的应用
色谱指纹图谱技术的发展历程
色谱指纹图谱技术的应用领域
色谱指纹图谱技术的最新研究成果
色谱指纹图谱技术的发展趋势和挑战
中药色谱指纹图谱技术的挑战与机遇
机遇：通过化学计量学方法，可以对中药指纹图谱进行优化和改进，提高其稳定性和重现性
挑战：中药指纹图谱的识别和分类需要大量的数据和算法支持
机遇：利用人工智能和大数据技术，可以提高中药指纹图谱的识别和分类效率，推动中药色谱指纹图谱技术的发展。
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中药色谱指纹图谱研究及化学计量学方法的应用
/目录
目录
02
中药色谱指纹图谱的原理
01
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03
化学计量学方法在中药色谱指纹图谱中的应用
05
中药色谱指纹图谱的未来发展
04
中药色谱指纹图谱的应用前景
01
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02
中药色谱指纹图谱的原理
中药色谱指纹图谱的建立
指纹图谱的特点：具有唯一性、稳定性和可重复性
色谱指纹图谱的概念：通过色谱分析得到的中药化学成分的指纹图谱
建立方法：采用高效液相色谱、气相色谱等色谱技术，对中药中的化学成分进行分离和检测
应用：用于中药质量控制、鉴别和评价，以及中药新药研发等领域
中药色谱指纹图谱的化学信息
优势：能够快速、准确地分析中药成分，提高分析效率
优势：能够实现中药成分的定量分析，为中药质量控制提供依据
局限性：可能会受到样品处理、仪器误差等因素的影响，导致分析结果不准确
局限性：需要大量的数据和复杂的计算，对实验设备和操作人员的要求较高
04
中药色谱指纹图谱的应用前景
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生长在同一地段而致误采。
其二是三脉叶马兰生长范围较广而且量多，某些药农见利忘义有意伪充。
４．２药材切成饮片后，形状上较难分辩，但二者的头状花序较易区分，刘寄奴的呈椭圆形，白色似米粒，小花全为管状花，其叶脉羽状，无离基三出脉。
药材具芳香气，味淡。
而三脉叶马兰头状花序呈半球形，较大，小花有舌状花和管状花，其叶有离基三出脉和羽状脉。
气微，苦、辛。
４．３二者的显微特征差别较大，刘寄奴药材表面具“Ｔ”字形非腺毛，腺毛顶面观呈鞋底形；叶主脉底部钝圆略呈圆锥形，上表面稍突起，且中央微凹。
叶图６三脉叶马兰的粉末显微特征１．非腺毛２．草酸钙针晶３．方晶４．腺毛５．簇晶６．花粉粒７．叶下表皮及气孔肉组织与茎髓薄壁细胞中有草酸钙簇晶散在。
三脉叶马蓝无“Ｔ”字形非腺毛，叶主脉上下面突起明显，底部钝圆呈半圆形。
髓部薄壁细胞内含多数短小的草酸钙针晶。
二者花粉粒的形态和大小，表面特征差异也较明显。
参１处理２０ｍｉｎ，过滤，取滤液加９５％乙醇稀释至适量浓度。
于岛律ＵＶ２４５０型紫外分光度计上，在２００—４００ｎｍ波长范围内测定其紫外光谱。
结果：刘寄奴考文献在３３０ｎｍ波长处有一最大吸收峰，在３００ｎｍ波长处有肩峰；而三脉叶马兰仅在３２９ｎｍ波长处有一最大吸收峰。
４４．１中国医学科学院药用植物资源开发研究所，中国医学科学院药物研究所等．中药志．第四册．ｊＥ京：人民卫生出版，１９８８：４３讨论刘寄奴的混杂原因可能有二：其一是二者均２李时珍．本草纲目（校点本，上册）．北京人民出版社，１９９ｌ：９５９来源于菊科植物，在开花之前茎叶的形状和色泽均有相似之处，其生长环境与习性相似，且二者常混杂（２００３一１１—２６收稿）紫菀药材的高效液相色谱指纹图谱与定量分析周军辉１伍蔚萍１谢子民２孙文基ｈ（１．西北大学陕西省生物医药重点实验室，西安７１００６９；２．西安市药品检验所，西安７１００６８）摘要目的：建立紫菀药材的反相液相色谱定性和定量鉴别分析方法。
方法：ＵｌｔｒａｓｐｈｅｒｅＯＤＳＣ。
色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５斗ｍ），流动相为甲醇－乙腈（１：２）－０．４％磷酸梯度洗脱，流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为３６０ｎｍ，柱温为２５℃。
紫菀药材经８０％甲醇超声处理，进行指纹图谱分析，并对紫菀药材中的主要成分槲皮素进行含量测定。
结果ｉ在该色谱条件下，６份不同紫菀药材的ＲＰ－ＨＰＬＣ指纹图谱中可检出１０个共有峰作为定性鉴别；紫菀药材中槲皮素的含量在０．１３５％一０．２４６％之间。
结论：本方法样品处理简便，准确性好，可用于紫菀药材的质量控制。
关键词紫菀槲皮素反相高效液相色谱法紫菀为菊科植物ＡｓｔｅｒｔａｔａｒｉｃｕｓＬ￡的干燥根在我们制定的紫菀指纹图谱中，含有分离较好的槲皮素色谱峰，这样，既可以得到指纹图谱提供的紫菀化学成分组成信息，又可测定槲皮素有效成分的含量。
１及根茎，有润肺下气、消痰止咳的功能，用于痰多喘咳，新久咳嗽，劳嗽咳血，是许多常用的止咳平喘复方中药制剂中的重要药物之一。
槲皮素（ｑｕｅｒｃｅ．ｔｉｎ）为紫菀中已知的有效成份之一，现代药理研究表明，它具有较好的祛痰、止咳和一定的平喘作用。
－５６２・仪器与试药ＢｅｃｋｍａｎＧｏｌｄＳｙｓｔｅｍ高效液相色谱仪，包括中药材第２７卷第８期２００４年８月万方数据１２５泵、１６８ＰＤＡ二极管阵列检测器、自动进样器和３２Ｋｒａｔ工作站。
甲醇、乙腈均为色谱纯（ＴＥＤＩＡ，美国）；其它试剂均为分析纯。
槲皮素对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号００８１－９９１５）。
６份紫菀药材分别采自河北祁州（２００２年９月和２００３年５月），购自西安空军４５１医院、陕西西安藻露堂药店、河北某地及河北定州，分别编号为２０９０１、３０５０１、３０９０１、３０９０２、３０９０３、３０９０４。
以上样品均经过陕西省生物医药重点实验室鉴定，留样保存于陕西省生物医药重点实验室。
以上样品粉碎后过４０目筛，６０。
（２干燥１ｈ，密封保存，待用。
２实验部分２．１对照品溶液的配制精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每１ｍｌ含２７¨ｇ的溶液，摇匀。
２．２供试品溶液的配制精密称取紫菀粉末１．００９，置具塞锥形瓶中，精密加入２０ｍｌ８０％甲醇溶液，超声３０ｍｉｎ，取出，放冷，补足减失重量，离心，取上清液１０ｍｌ，蒸干，加入适量８０％甲醇溶解，转移至５ｍ１量瓶，用８０％甲醇稀释至刻度，０．４５斗ｍ滤膜过滤。
２．３色谱条件的选择优化ＢｅｃｋｍａｎＵｈｒａｓｐｈｅｒｅＯＤＳＣ１８色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｒａｍ，５＃ｘｍ）；柱温：２５。
Ｃ；流速：１．０ｍ／ｍｉｎ；检测波长：使用ＰＤＡ二极管阵列检测器记录不同波长的色谱图，结果表明，在３６０ｎｍ检测波长下，槲皮素有较大吸收，色谱图中色谱峰较多，信息丰富，故选择３６０ａｍ为检测波长；流动相：Ａ．０．４％磷酸水溶液，Ｂ．（甲醇－乙腈，１：２），梯度洗脱：０＿５ｍｉｎ，８７％Ａ，１３％Ｂ；５＿５０ｍｉｎ，７３％Ａ，２７％Ｂ；５０－－＊７５ｍｉｎ，５５％Ａ，４５％Ｂ。
３方法学研究３．１线性关系考察分别精密吸取不同体积的槲皮素对照品贮备液，用甲醇稀释调配成系列对照品溶液，分别进样１０“ｌ，测定峰面积积分值，以槲皮素进样量（斗ｇ／ｍ１）为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得到槲皮素的线性方程为：Ｙ＝８０９４８Ｘ一３５０１４８，ｒ＝０．９９９２。
结果表明，槲皮素在２．７—１３．５¨∥ｍｌ（ｎ＝３）范围内线性关系良好。
３．２重复性实验取同一批号紫菀材料五份，按“２．２”项方法制得供试品溶液。
按“２．３”项下色谱条件分别测定，得到相应色谱图数据，用计算机辅助相似度评价系统评价整体相似度，结果以相关系数法计算，分别为０．９８８３、０．９６２９、０．９６０３、０．９９０５、０．９６８７，ＲＳＤ＝１．４７％（ｎ＝５）。
计算槲皮素峰的面积，分别为６１１４０６、６０４０８５、５８３６１８、５９０１４６、５８２０８３，中药材第２７卷第８期２００４年８月万方数据ＲＳＤ＝２．１８％（ｎ＝５）；计算槲皮素峰的保留时间分别为６１．９８ｍｉｎ、６１．８５ｍｉｎ、６１．５２ｍｉｎ、６１．８０ｍｉｎ、６２．１８ｍｉｎ，ＲＳＤ＝０．３９％（ｎ＝５）。
３．３精密度实验取紫菀药材（祁州）一份，按“２．２”项方法制得其供试品溶液。
按拟定的色谱条件平行测定５次，得相应色谱图数据，并用计算机辅助相似度评价系统评价整体相似度，结果以相关系数计算，分别为０．９７９２、０．９９１４、０．９９１７、０．９８６８、０．９８６７，ＲＳＤ＝０．５１％（ｎ＝５）。
计算槲皮素峰的面积，分别为５１６５４１、５１６９８３、５２５４８１、５３２４２６、５１６４５ｌ，ＲＳＤ＝１．３７％，槲皮素峰的保留时间分别为６２．４０ｍｉｎ、６２．１２ｍｉｎ、６２．０７ｍｉｎ、６２．１８ｍｉｎ、６２．１０ｍｉｎ，ＲＳＤ＝０．２１％（ｎ＝５）。
３．４稳定性实验按“２．２”项下制备供试品溶液，按“２．３”项下色谱条件分别在０ｈ，２ｈ，４ｈ，６ｈ，１２ｈ，２４ｈ进样。
得到相应色谱图数据，用计算机辅助相似度评价系统评价整体相似度，结果以相关系数法计算，分别为０．９９１８、０．９７５８、０．９９１５、０．９８４５、０．９８０９，ＲＳＤ＝０．７０％（ｎ＝５）。
计算槲皮素峰的面积，分别为７６１４１９、７４１５２４、７４２９２２、７３４０６４、７２３１６９，ＲＳＤ＝１．８９％（ｎ＝５）；计算槲皮素峰的保留时间分别为６３．０５ｍｉｎ、６１．８８ｍｉｎ、６１．８７ｍｉｎ、６１．８５ｍｉｎ、６１．８０ｍｉｎ，ＲＳＤ＝０．８７％（ｎ＝５）。
３．５加样回收率精密称取已知含量的样品粉末５份，准确加人一定量的槲皮素对照品，按“２．２”项下色谱条件测定槲皮素的含量，计算回收率。
结果平均回收率９８．２０％，ＲＳＤ为１．７８％（ｎ＝５）。
３．６系统适用性按“２．２”项方法处理６种不同产地的样品，得到相应的供试品溶液。
在拟定色谱条件下分别测定，结果均以槲皮素峰计算理论塔板数。
结果表明，理论塔板数以槲皮素峰计算不得暑■ｌ‘Ｊ■１●ｌｔ－●图１紫菀药材（Ａ）和槲皮素对照品（Ｂ）ＨＰＬＣ色谱图・５６３・表１不同紫菀药材Ｉ－ＩＰＬＣ图谱中共有峰相对保留时间比较共有峰相对保留时间（ｄ）样品编号———２————了—————４—————６—————７————１—１————１—２————１—３————１—４————Ｓ———＿１６３２０９０１３０５０１３０９０１３０９０２３０９０３３０９０４ｄ０．２４６０．２４８０．２３６０．２３５０．２４９０．２３６０．２４２２．７５０．２５４０．２５６０．２４６０．２４３０．２５６０．２４５０．２５０２．３９０．３１００．３０９０．３０００．３０００．３１００．３０２０．３０５１．６４０．３９８０．３９６０．３９７０．３９３０．３９７０．３９４０．３９６０．４９０．４６８０．４６４０．４５９０．４５９０．６５２０．６３９０．６４４０．６９００．６９３０．６８１０．６８００．６８８０．６８００．６８５０．８３０．７３５０．７３８０．７２５０．７２６０．７３４０．７２６０．７３２０．７７０．７７６０．７９６０．７６５０．７６５０．７７６０．７６６０．７７４１．１５１１．１４９１．１４５１．１５２１．１５１１．１５１１．１５８１．１５ｌ０．６４３０．６５００．６４３０．４６４０．４６００．４６２０．７８０．６４５０．７６ＲＳＤ！％００．３７表２不同紫菀药材Ｉ－ＩＰＬＣ图谱中共有峰相对峰面积比较比较６批供试品的ＨＰＬＣ图谱发现，其中有ｌＯ个色谱峰是６批供试品所共有的。
计算图谱中各共有色谱峰相对于参照峰（ｓ，槲皮素）的相对保留时间（０【＝ｔｉ／ｔ。
）和相对峰面积值（Ａ。
＝Ａｉ／Ａ。
）（见表１、２）。
计算每个紫菀样品的色谱图中槲皮素峰的面积积分值（ｎ＝３）。
图２６批不同紫菀药材色谱图５相似度评价及样品分析以２、１１和ｓ峰作为标记峰，分别用中南大学计从下至上依次为２０９０１，３０５０１，３０９０１，３０９０２，３０９０３，３０９０４低于４０００。
４算机辅助相似性评价系统和西北大学中草药指纹图谱比对系统计算６批不同批次的紫菀药材相似度，结果见图２和表３。
６标准指纹图谱的建立与槲皮素定量分析分别精密吸取槲皮素对照品溶液适量和６批供试品溶液各１５恤ｌ，注入液相色谱仪，色谱图见图１。
・５６４・讨论中药材第２７卷第８期２００４年８月万方数据６．１样品处理过程中曾使用水煮醇沉法，８０％甲不尽相同（如表４中两种软件的相关系数法计算结果），因此应制定合适的相似度软件评价标准，使结果具有一定的统一性。
６．３醇超声和甲醇超声等不同方法，其中甲醇超声所得槲皮素的含量最高，８０％甲醇超声稍次之，水煮醇沉方法所得样品中槲皮素含量最低。