Pollak三色染色液 - 360文档中心

Mallory氏三色染色法

Mallory氏三色染色法
[固定] Zenker氏液及Bouin氏液固定最好。

甲醛固定的组织必须经过二次固定，以重铬酸钾—醋酸液处理15—60分钟。

[试剂]
Lugol氏碘液
Mallory氏苯胺蓝液：
苯胺蓝 0.5g
橘黄G 2.0g
1%磷钨酸水溶液 100ml
配制：苯胺蓝以1%磷钨酸液50ml水浴加热溶解；橘黄G以1%磷钨酸液50ml加热溶解, 冷却后分别过滤后混合.
0.5%酸性复红水溶液
[操作步骤]
1．石蜡切片脱蜡至水。

2．Lugol氏碘液脱汞盐结晶，充分水洗。

3．明矾苏木精常规染色，分化，水洗。

4．0.5%酸性复红水溶液染1—5分钟。

5．自来水洗30秒钟或较长，直至纤维将近无色为止，蒸馏水洗。

6．Mallory氏苯胺蓝液染约20分钟（勿水洗）。

7．直接以95%酒精分化（镜下控制）。

8．无水酒精脱水，二甲苯透明，封固。

[结果]胶原纤维，网状纤维，盐基性颗粒呈深蓝色；软骨，粘液，淀粉样物质呈淡蓝色；纤维素，神经胶质原纤维酸性颗粒呈红色；红细胞，髓鞘呈橘黄至橙红色；细胞核呈紫蓝色。

病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)

病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色，其中蓝色代表胶原和网状纤维，淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质，红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒，橘红色代表髓鞘和红细胞。

图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果，其中A组排列规则。

1.2 Masson三色染色法Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色，其中绿色代表胶原纤维，红色代表肌纤维，橘红色代表红细胞。

图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。

1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维，其中红色代表胶原纤维，黑色代表网状纤维，绿色代表弹性纤维，淡黄色代表肌肉和红细胞。

图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。

胶原纤维染色法2.1 天狼星红苦味酸染色法天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色，其中红色代表胶原纤维，绿色代表细胞核，黄色代表其他物质。

天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察，Ⅰ型呈强双折光性，呈黄色或红色纤维，Ⅱ型呈弱双折光，呈多种色彩疏网状分布，Ⅲ型呈弱双折光，呈绿色的细纤维，Ⅳ型呈弱双折光的基膜，呈淡黄色。

图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。

2.2 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色，其中鲜红色代表胶原纤维，黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞，蓝褐色代表胞核。

图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。

三、网状纤维染色3.1 XXX-Sweets银氨染色法XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色，其中黑色代表网状纤维，红色代表胞核（核固红复染），黄棕色代表胶原纤维，淡红色代表细胞质（红液复染）。

Masson三色法

Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。

混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。

铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。

由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。

能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。

（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。

二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。

2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

Goldner三色染色液

Goldner 三色染色液简介：Goldner 三色染色又称戈德纳三色染色，与Masson 三色染色类似，三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。

Goldner 三色染色液染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、切片二甲苯脱蜡或脱塑料，乙醇漂洗，入水。

2、入配制好的Weigert 铁苏木素染色。

3、流水冲洗1min ，用酸性分化液迅速分化(一般＜5s)。

4、流水冲洗，蒸馏水稍洗。

5、入Acid Ponceau 染色液染色。

6、在上述过程中按蒸馏水:弱酸溶液=4:1比例配制弱酸工作液，用弱酸工作液洗。

7、入Orange G 染色液染色，直至Ponceau 染色液。

8、用配制好的弱酸工作液冲洗。

9、直接入亮绿染色液中染色。

10、用配制好的弱酸工作液冲洗3次。

11、蒸馏水冲洗，吸干或晾干，无水乙醇快速脱水，中性树胶封固。

染色结果：编号名称DB00856×50mlDB00856×100ml Storage试剂(A) :Weigert 铁苏木素染色液A1:Weigert 染液A 25ml 50ml RT 避光 A2: Weigert 染液B25ml50mlRT临用前，取A1、A2等量混合即为Weigert 铁苏木素染色液，不宜提前配制。

试剂(B): 酸性分化液 50ml 100ml RT 试剂(D): 弱酸溶液 50ml 100ml RT 试剂(E): Orange G 染色液 50ml 100ml RT 避光试剂(F): 亮绿染色液 50ml100ml RT 避光使用说明书 1份矿化骨绿色类骨质橙色-红色软骨紫色细胞核蓝色-灰色注意事项：1、切片脱蜡应尽量干净。

固定起着重要的作用，使用不同的固定液可延或缩短染色时间。

Masson三色染色图示

Masson三色染色法
试剂
1.Bouin液
饱和苦味酸75ml，甲醛25ml，冰醋酸5ml.
2.Ⅰ液：1%比布列西猩红水溶液90ml，1%酸性复红水溶液10ml，冰醋酸1ml。

3.Ⅱ液：磷钼酸 2.5g，磷钨酸2.5g，蒸馏水100ml
4.Ⅲ液：苯胺蓝2.5g，冰醋酸2ml，蒸馏水100ml。

5.weigert铁苏木精液
A液
苏木精1g
90%乙醇100ml
B液
30%氯化铁4ml
蒸馏水100ml
纯盐酸1ml
A和B液需要分瓶存放，临用前A液和B液等量混合
6.1%冰醋酸水溶液冰醋酸1ml，蒸馏水100ml。

Masson三色染色步骤
染色步骤
1.石蜡切片常规脱蜡至水
2.Bouin液室温过夜或56℃1h
3.流水冲洗黄色消失
4.蒸馏水洗
5.Weigerrt铁苏木精染核10mins
6.盐酸酒精分化
7.流水冲洗10mins
8.蒸馏水洗
9.Ⅰ液2mins
10.蒸馏水洗
11.Ⅱ液15mins
12.Ⅲ液5mins
13.蒸馏水洗
14.1%冰醋酸浸洗5mins
15.常规脱水、透明、封固
结果
肌肉红色
胶原纤维蓝色
核黑色。

免疫荧光三色染色步骤

免疫荧光三色染色步骤免疫荧光三色染色是一种常用的免疫组化技术，用于检测和定位细胞或组织中的特定抗原。

通过使用三种不同的荧光染料，可以同时检测三种不同的抗原，从而在同一样本中获得更多的信息。

下面是免疫荧光三色染色的步骤：1. 样本处理：首先需要准备好待检测的细胞或组织样本。

可以通过固定、切片和脱脂等步骤来处理样本，以便于荧光染料的渗透和抗原的暴露。

2. 抗原修复：某些细胞或组织中的抗原可能会经历一定程度的损伤或变性，需要进行抗原修复以恢复其免疫反应性。

常用的抗原修复方法包括热处理、酶解和化学修复等。

3. 阻断非特异性结合：为了避免荧光染料的非特异性结合，需要使用适当的阻断剂来防止非特异性结合。

常用的阻断剂包括牛血清蛋白、小鼠或兔子血清等。

4. 一抗染色：选择合适的一抗，加入到样本中与目标抗原结合。

一抗可以是单克隆抗体或多克隆抗体，根据实验的需要选择合适的一抗。

5. 二抗染色：二抗是与一抗结合的抗体，通常是兔抗小鼠或小鼠抗兔的抗体。

二抗上标记有荧光染料，常见的有荧光素、荧光素同工酶和荧光素同工酶等。

6. 染色显色：将标记有荧光染料的二抗加入到样本中，与一抗所结合的抗原发生特异性反应，形成荧光染色的复合物。

7. 洗涤：染色完成后，需要进行多次洗涤以去除未结合的抗体和荧光染料，减少背景信号的干扰。

8. 封片：将处理好的样本用适当的封片剂封装在载玻片上，然后使用适当的封片胶或胶带固定样本。

通过以上步骤，可以实现免疫荧光三色染色的目的。

这种技术可以在细胞或组织中同时检测和定位多种抗原，为科研工作者提供更多的信息和数据。

需要注意的是，在进行免疫荧光三色染色时，要选择合适的一抗和二抗，以及荧光染料的激发和发射波长。

此外，还需要进行严格的实验控制，包括阴性对照和阳性对照，以确保实验结果的准确性和可靠性。

免疫荧光三色染色技术在生命科学研究中具有广泛的应用，可以用于研究细胞分子机制、疾病诊断和治疗等方面。

随着技术的不断发展和改进，相信免疫荧光三色染色技术将在未来的研究中发挥更大的作用。

Masson三色染色

Masson三色染色主要用途：主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别染色。

检验原理:由mallory三色染色改造，利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子大小和组织的渗透性有关。

根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成份显示出来。

主要成份：1.weigert铁苏木素A液2.weigert铁苏木素B液3.丽春红酸性品红染液4.磷钼酸溶液5.苯胺蓝溶液样本要求：组织片充分固定和脱蜡。

检验方法：1.组织固定于bouin氏液或zenker氏液，流水冲洗过夜，常规脱水包埋2.切片脱蜡至水3.weigert铁苏木素（weigert铁苏木素A、B液等比例混和）染5-10分，流水稍洗4. 1%盐酸酒精分化，流水冲洗数分5. 丽春红酸性品红染液染5-10分，流水稍冲洗。

6.磷钼酸溶液处理约5分钟，不用水洗，直接用苯胺蓝人染液复染5分钟7. 1%冰醋酸处理1分钟，95%酒精脱水多次。

.无水酒精脱水、二甲苯透明，中性树胶封固。

检验结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，肌纤维、纤维素和红细胞染红色、胞核染蓝黑色。

、注意事项：1.weigert铁苏木素分A、B两液，应与临用前将两液等分混合，而不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而逐渐失去染色能力。

2.组织用bouin氏液或zenker氏液固定为佳，如已用10%甲醛液固定，切片可在脱蜡至水后，再放入bouin氏液作用一晚或置37℃温箱内1-2小时，然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。

3.磷钼酸处理时，要镜下控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。

三色染色实验服务安全操作及保养规程

三色染色实验服务安全操作及保养规程简介三色染色实验是一种常见的细胞学实验，用于染色细胞的染色体和细胞器，进一步观察细胞结构的变化和功能的活动。

在进行三色染色实验时，需要特别注意实验过程中的化学品及设备的安全操作，以及实验后的设备保养工作。

本文档旨在为实验人员提供三色染色实验安全操作以及设备保养规程，以确保实验过程的安全性和设备的使用寿命。

三色染色实验安全操作规程1. 实验前准备在进行三色染色实验之前，需要进行一系列的准备工作，包括试剂的准备、设备的调试、试剂品质的检测等。

1.1 试剂准备根据实验方案所需的试剂及其浓度，准备相应试剂和稀释液。

同时需检查试剂是否过期，有无变质或污染。

1.2 设备调试检查三色染色实验设备的工作状态和功能是否正常，调试并确认设备参数符合实验要求，如温度、压力等。

1.3 试剂品质检测采用内标法对所采购到的每批试剂进行品质检测并留有记录，严格按照实验方案规定的试剂用量和比例进行混合以避免试剂污染。

2. 实验中的安全操作在进行三色染色实验的过程中，需要注意化学品的安全操作，以保障实验人员的身体健康和实验的顺利进行。

2.1 试剂使用在使用试剂时，需要佩戴手套以避免皮肤接触化学品，同时在处理液体时要注意避免产生气溶胶，避免吸入有害气体，同时注意放置和处理化学垃圾，避免污染环境。

2.2 设备操作在进行三色染色实验时，需要根据设备使用手册操作设备，严格按照实验方案场景参数要求操作设备，同时避免设备损坏，提高设备的使用寿命。

3. 实验后的安全操作在完成三色染色实验后，需要进行一些后续的安全操作，以确保化学品对环境和实验人员的影响降到最低。

3.1 试剂处置在实验完成后，要按照相关规定进行试剂的处理，避免化学品的污染和环境的污染。

3.2 设备保养及时对设备进行维护和保养，避免设备因为未及时保养而损坏，为设备换配件时遵照厂家原配件规格进行更换，维护设备的使用寿命并保证实验的精度和稳定性。

三色染色设备的保养规程在保证实验安全操作后，设备的保养工作必不可少，以下是三色染色设备保养规程：1. 清洗消毒三色染色实验设备在使用过程中，需要经常清洗消毒，以确保设备内部和外部环境的干净和卫生。

改良Gomori三色染色液使用说明书

改良Gomori三色染色液使用说明书货号：G3510规格：4×50ml/4×100ml保存：RT避光，6个月有效。

产品内容：名称4×50ml4×100ml Storage试剂(A):Weigert铁苏木素A1:Weigert染液A25ml50ml RT避光A2:Weigert染液B25ml50ml RT避光临用前，取A1、A2等量混合即为Weigert铁苏木素染色液，不宜提前配制。

试剂(B):酸性分化液50ml100ml RT试剂(C):Gomori染色液50ml100ml RT避光试剂(D):Gomori分化液50ml100ml RT产品简介：Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。

所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

Gomori染色液采用媒染剂和促染剂同时染色，可使结缔组织中的多种成分着色。

改良Gomori三色染色液可将胶原纤维染成绿色，肌纤维染成红色，细胞核染成蓝色。

操作步骤(仅供参考)：1、新鲜肌肉组织取材后立即进行冰冻切片，切片厚度为10-15µm。

2、用配制好的Weigert铁苏木素染色5-10min。

水洗。

3、流水冲洗5-10min，镜下观察。

如果染色过深，可用酸性分化液分化数秒（镜下观察）。

4、水洗返蓝，蒸馏水洗2-3次。

5、加入Gomori染色液染色20-40min，流水冲洗。

6、在上述操作过程中按蒸馏水：Gomori分化液=4:1比例配制Gomori分化工作液。

7、用Gomori分化工作液洗30s-90s，以镜下观察适当为宜，流水冲洗。

8、95%乙醇快速脱水，无水乙醇脱水3次，每次5-10s。

MASSONS三色

胶原纤维- MASSON'S 三色(TRI)目的：用于鉴别胶原纤维和平滑肌肿瘤，肝硬化的胶原纤维增生。

肝肾活检组织的常规染色。

原理：与名称暗示的一样，三种染料分别着染肌肉、胶原纤维、纤维蛋白和红细胞。

三色染色的基本原理是孔隙较小的组织被最小的染料分子着染。

只要大分子的染料能够穿透组织，而损失的总是较小的染料分子。

建议染色时首先染酸性染料。

比布里希猩红能与嗜酸性组织成分结合。

当用磷酸处理时，只有渗透性较小组织成分能保留红色，胶原纤维组织的红色被冲出。

同样原理使胶原纤维与苯胺蓝结合。

固定：首选Bouin's液，10%甲醛。

技术：石蜡切片4μm。

设备：蒸馏水清洗玻璃器皿，染色缸，60°C 烤箱或水浴箱，微波炉。

试剂：Bouin’s 固定液饱和苦味酸1500.0 ml甲醛500.0 ml冰醋酸100.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期2年。

警告：致癌物质，刺激性。

比布里希猩红：比布里希猩红 2.7 gm酸性品红0.3 gm蒸馏水300.0 ml冰醋酸 3.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

Weigert's铁苏木精原液A：苏木精 5.0 gm95% 酒精500.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期1年。

警告：易燃性，避免接触和吸入。

原液B：29%三氯化铁20.0 ml蒸馏水475.0 ml盐酸 5.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期1年。

Weigert's 苏木精工作液溶液A 25.0 ml溶液B 25.0 ml混合溶解，溶液可保留3-4。

磷钼酸/磷钨酸溶液：磷钼酸25.0 gm磷钨酸25.0 gm蒸馏水1000.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

苯胺蓝：苯胺蓝 2.5 gm蒸馏水100.0 ml冰醋酸 1.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

Masson三色染色液染色步骤及注意事项

Masson三色染色液染色步骤及注意事项步骤一：预处理1. 切片：将需要染色的组织标本切成厚度约为5um的切片，将切片均匀地放置在已经预先烘干和标记好的玻片上。

2.固定：用10%中性缓冲福尔马林固定切片，固定时间约为24小时。

步骤二：染色1. 染色剂的准备：将Masson三色染色液购买回来后，根据品牌推荐比例稀释至适当浓度。

不同品牌染色液稀释比例可能有所不同，因此以具体品牌的说明为准。

2.染色操作：(1)将切片放入染色盒中，并将染色盒放入水浴中加热，温度为60-70摄氏度，时间为20-30分钟。

(2)将加热后的染色盒取出，用水冲洗2-3分钟，直至明显的污染物被冲走。

(3)将切片置于70%酒精中，时间为5分钟。

(4)在20%盐酸酒精中浸泡1-2秒钟，然后立即将切片漂洗至酸性的第一盐酸酒精。

(5)在酸性的第一盐酸酒精中浸泡30秒至1分钟，然后漂洗至酸性的第二盐酸酒精中。

(6)在酸性的第二盐酸酒精中浸泡30秒至1分钟，然后漂洗至蒸馏水中。

(7)转移到可溶性亮蓝GR中染色5分钟。

(8)快速漂洗后，放入蒸馏水中清洗1-2分钟。

(9)再次转移到1%醋酸中染色1分钟。

(10)最后，在6%石蜡溶液中浸泡5-10分钟。

步骤三：封片1.脱水：将切片放入95%乙醇中，时间为1-2分钟，然后放入绝对乙醇脱水2-3分钟。

2.渗透：将切片放入二氯甲烷中，时间为5分钟，再在房温下放置3-5分钟以充分渗透。

3. 封片：将切片放入500-1000ml锡兰红封片剂中，时间为1-2分钟，然后将切片转到盖玻片上，将封片剂挤满，盖上玻片，压平后放在60摄氏度的烘箱中加热2-3小时。

注意事项：1.操作中应注意个人防护，佩戴手套和口罩，避免接触有害物质。

2.染色过程中要严格控制温度和时间，避免染色过程中出现偏差。

3.在脱水和封片过程中要注意将切片完全浸透，防止切片变形或脱落。

4.染色溶液和液体处理过程中，应注意防止溅溢和污染，保持操作环境清洁。

马松三色染色原理masson.

马松三色染色原理masson.Masson染色(2010-09-02 14:43:20转载标签:杂谈分类:实验日志masson 染色原理Masson三色法(根据Masson,1929试剂配制(一Weigert氏铁苏木素液(见苦味酸——酸性品红法(二丽春红酸性品红液丽春红(Ponceau 2R 0.7g酸性品红(acid fuchsin 0.3g蒸馏水 99ml冰醋酸(glacial acetic acid 1ml(三 1%磷钼酸水溶液磷钼酸(phosphomolybdic acid 1g蒸馏水加至 100ml(四 2%苯胺蓝液苯胺蓝(aniline blue 2g冰醋酸(glacial acetic acid 2ml蒸馏水加至 100ml(五亮绿液亮绿(light green 1g蒸馏水 99ml冰醋酸(glacial acetic acid 1ml操作方法1. 组织固定于Bouin氏液或Zenker氏液,流水冲洗一晚,常规脱水包埋。

2. 切片脱蜡至水。

如用Zenker氏液固定者,应进行除汞处理,其步骤如下:(1 切片脱蜡后于0.5%碘酒精作用10分钟。

(2 稍水洗(3 5%硫代硫酸钠作用5分钟。

(4 流水冲洗10分钟3. Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

4. 流水稍洗。

5. 1%盐酸酒精分化。

6. 流水冲洗数分钟。

7. 丽春红酸性品红液染5-10分钟。

8. 蒸馏水稍冲洗。

9. 1%磷钼酸水溶液处理约5分钟。

10.不用水洗,直接用苯胺蓝液或绿液复染5分钟。

11.1%冰醋酸处理1分钟。

12.95%酒精脱水多次。

13.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固结果:胶原纤维虽蓝色(用苯胶蓝液复染或绿色(用亮绿复染。

胞质、肌纤维和红细胞红色。

胞核蓝褐色。

注意事项:1.组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。

如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37。

C温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。

Wheathley三色染色液

版本：A1 修改日期：2023.12.21 Wheathley 三色染色液产品简介：临床寄生虫检验主要是从临床标本中检出寄生虫并进行鉴定，为临床诊断、治疗、预防和流行病学调查提供可靠的依据。

检获寄生虫病原体是确诊寄生虫感染的依据，也是目前主要的检查方法。

有些寄生虫病因难以检获病原体，可采用免疫学或分子生物学方法辅助诊断。

类便样本是实验室诊断寄生虫感染的最常见样本，可以通过直接涂片法、浓集法及永久染色涂片三个独立的步骤对每个样本进行检查。

直接涂片法要求新鲜粪便，可以检获活动的原虫滋养体、原虫包囊、蠕虫虫卵和幼虫；浓集法可提高原虫包囊、球虫卵囊、微孢子虫孢子及蠕虫虫卵和幼虫的检出率，有沉淀法和浮聚法；永久染色涂片更易于进行肠道原虫的鉴定。

其中，永久染色法可对湿片中发现的可疑物进行确认，以及鉴定在湿片中未发现的原虫。

其他的来自肠道的样本如十二指肠吸取物或引流液，肠检胶囊法获得的黏液，乙状结肠镜获得的样本也可用永久染色法检查原虫。

多种染色方法可用，最常用的是铁-苏木素染色法和Wheathley 三色染色法。

Leagene Wheathley 三色染色液即Wheatley Trichrome Stain ，又称作惠特利三色染色液，最初由Gomori 开发并用于染色组织切片和细胞涂片。

1951年，Wheatley 通过添加固定和脱水过程改进了Gomori 的技术，形成了一种简单、快速的肠道变形虫和鞭毛虫染色程序。

Chromotrope 2R 可将核染色质、染色质、核体、寄生虫卵和幼虫、细菌以及吞噬的红细胞染为红紫色；淡绿或固绿染料可将包囊、滋养体和其他细胞成分的细胞质染成蓝绿色。

本产品常用于从粪便样本中检测、鉴定和区分肠道原生动物与背景材料。

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：自备材料：1、PVA 固定液或肖氏液(Schaudin 溶液)、70%乙醇、95%乙醇、无水乙醇2、二甲苯或环保脱蜡透明液、中性树胶、蒸馏水3、加热器、显微镜、涂抹棒或刷子、吸水纸、载玻片、盖玻片编号名称 DZ0280 3×50ml Storage 试剂(A): 碘酒溶液 50ml RT 避光试剂(B): Wheathley 染色液 50ml RT 避光试剂(C): 乙酸分化液 50ml RT 使用说明书 1份操作步骤(仅供参考)：1、涂片制备：PVA保存的粪便标本必须固定至少30分钟。

Pollak三色染色液使用说明书

Pollak三色染色液使用说明书货号：G3500规格：4×50ml/4×100ml保存：RT避光，6个月有效。

产品内容：名称4×50ml4×100ml Storage试剂(A):Weigert铁苏木素A1:Weigert染液A25ml50ml RT避光A2:Weigert染液B25ml50ml RT避光临用前，取A1、A2等量混合即为Weigert铁苏木素染色液，不宜提前配制。

试剂(B):酸性分化液50ml100ml RT试剂(C):Pollak染色液50ml100ml RT试剂(D):Pollak分化液50ml100ml RT避光产品简介：Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。

所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

Pollak三色染色是在Masson三色染色法基础上改良而来的结缔组织多色染色法，采用媒染剂和促染剂同时染色，可使结缔组织中的多种成分着色。

操作步骤(仅供参考)：1、切片常规脱蜡至水。

2、用配制好的Weigert铁苏木素染色15-20min。

3、充分水洗，镜下观察。

如果染色过深，可用酸性分化液分化数秒。

4、水洗返蓝，蒸馏水洗2～4次。

5、Pollak染色液染色3-7min。

6、蒸馏水快速冲洗，0.2%冰乙酸分化（镜下控制）大约10-20s。

过分化会使黏液，胶原纤维，纤维素的第1页，共2页颜色过浅，不易观察7、乙醇快速脱水。

8、无水乙醇脱水3次，每次5～10s。

二甲苯透明3次，每次1～2min。

9、中性树胶封固。

染色结果：胶原纤维、黏液、软骨、神经纤维蓝色肌肉、弹力纤维红色纤维素紫红色红细胞橘红色细胞核蓝黑色注意事项：1.切片脱蜡应尽量干净。

改良Masson三色染色试剂盒

改良Masson三色染色试剂盒产品简介：改良Masson三色染色试剂盒是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。

分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

改良Masson染色胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，胞核呈蓝褐色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

Leagene 改良Masson三色染色试剂盒的特点：分化时间短(1～2分钟)；色彩清晰鲜艳；适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；所染切片保存时间长且不易褪色。

产品组成：自备材料：1、10%的福尔马林2、蒸馏水3、系列乙醇4、二甲苯5、染缸操作步骤（仅供参考）：1、组织固定于10%的福尔马林中，常规脱水包埋。

2、切片厚4μm，常规脱蜡至水。

3、切片入Bouin液，于室温作用一晚或置入37℃的温箱内2h进行媒染，然后流水冲洗至切片上的黄色消失。

4、天青石蓝染色液滴染2~3min。

5、稍水洗。

6、Mayer苏木素染色液滴染2~3min。

7、稍水洗。

8、酸性乙醇分化液分化。

9、流水冲洗10min。

10、丽春红品红染色液滴染10min。

11、蒸馏水稍冲洗。

12、磷钼酸溶液处理约10min。

13、倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染5min。

14、弱酸溶液处理2min。

15、95%的乙醇快速脱水。

16、无水乙醇脱水3次，每次5~10s。

17、二甲苯透明3次，每次1~2min。

18、中性树胶封固。

染色结果：胶原纤维蓝色肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞红色胞核蓝褐色注意事项：1、切片脱蜡应尽量干净。

2、酸性乙醇分化液的分化时间应该依据切片薄厚，组织的类别和新旧而定。

3、磷钼酸溶液的作用一方面是使染上红色的胶原纤维被分化成无色或淡红色，而肌纤维纤维素等仍呈鲜红色；另一方面对胶原纤维又起媒染作用。

病理学特殊染色技术Mallory三色染色法

病理学特殊染色技术Mallory三色染色法
Zenker液固定的组织染色效果最佳
甲醛或其它固定液固定的组织，须用Zenker液二次固定，或切片脱蜡至水，作铬化处理（蒸馏水95毫升，重铬酸钾2.5克，冰醋酸5毫升）1小时
试剂：
①0.5%酸性品红水溶液：酸性品红0.5克，蒸馏水100毫升
②苯胺蓝-橘黄G液：蒸馏水100毫升，磷钨酸1克；取1/3量分别加入水溶性苯胺蓝0.5克，橘黄G 2克，完全溶解，过滤并混合。

用剩下的磷钨酸水溶液冲洗并过滤。

染色前再过滤一次
方法：
⑴石蜡切片4~6微米，脱蜡至水
⑵脱汞处理，自来水冲洗，蒸馏水洗
⑶苏木精溶液染色2~3分钟，水洗
⑷1%盐酸酒精分色数秒，水洗使细胞核呈清晰蓝色，蒸馏水稍洗
⑸0.5%酸性品红水溶液1~5分钟
⑹直接入苯胺蓝橘黄G液20~40分钟
⑺80%酒精速洗
⑻95%酒精分色
⑼无水酒精脱水
⑽二甲苯透明
⑾中性树胶封片
结果：
胶原纤维、网状纤维、嗜碱性颗粒呈深蓝色；
黏液、软骨、淀粉样物质呈蓝色；
纤维蛋白、肌纤维、神经胶质、嗜酸性颗粒呈鲜红色或粉红色；
弹性纤维、红细胞、髓鞘呈橘黄色或橘红色；
细胞核呈蓝黑色。

MASSON三色染色法

来源于间胚叶的肿瘤，如纤维瘤，横纹肌瘤，神经纤维瘤甚至它们的肉瘤等都产生一定的纤维，这些纤维在HE染色中都染成红色而难以区别，通过上述方法，一般可区分出该肿瘤组织是胶原纤维源性，还是肌源性，或者是神经纤维源性。
如： 1．显示组织，器官的损伤或炎症的修复与纤维板化程度 2．判断心肌坏死后被除纤维结缔组织所取代的区域：HE染色时胶原纤维与心肌均为红色，胶原纤维染色则使胶原纤维呈红色，心肌纤维呈黄色。 3．鉴别心肌纤维化与心内膜弹纤维增生症。 4．区别胶原纤维透明变性与淀粉样变性。 5. 对肿瘤方面提供诊断和诊断鉴别的依据。
MASSON三色染色法
主讲：李磊姜明兴
原理
Masson染色法是利用两种或三种阴离子染料混合或先或后作用而完成鉴别染色的。胶原纤维呈蓝色（被苯胺蓝所染）肌纤维呈红色（被酸性品红和丽春红所染），这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。组织的渗透性，取决于组织的结构密度，如细致观察，会发现组织和细胞成分都是多孔的构造。
注意事项：
（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时需要使用显微镜控制肌纤维清晰为止。（2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。
染色结果：
胶原纤维呈绿色（苯胺蓝染色为蓝色，如上图），肌纤维呈红色，红细胞呈橘红色
应用意义
定性定量胶原纤维在体内分布广泛。HE染色不能以不同颜色将其显示出来，而胶原纤维定性特染可作到这一点，故在多种疾病的病理诊断和研究用中具有实用价值.
染料分子的大小，主要由其分子量来体现。一般来说小分子量者易于穿透结构致密，渗透性低的组织，而大分子染料只能进入结构疏松，渗透性高的组织。常用胶原纤维染色而几种阴离子染料的分子量由小到大分别是：

对Pollak三色染色法的重新估价

对Pollak三色染色法的重新估价
杜静华;董剑强;虞有智;杜青;郭钤新
【期刊名称】《诊断病理学杂志》
【年(卷),期】1996(3)1
【摘要】对Ｐｏｌｌａｋ三色染色法的重新估价杜静华，董剑强，虞有智，杜青，郭钤新（北京医科大学人民医院病理科１０００４４）Ｐｏｌｌａｋ（１９４４）曾介绍一种快速三色染色法，以鉴别胶元纤维及肌纤维，该法着色鲜明，步骤简单，需时１５分钟即可。

但国外一些图谱未见引用...
【总页数】2页(P49-50)
【关键词】Pollak;三色染色法;病理诊断;估价
【作者】杜静华;董剑强;虞有智;杜青;郭钤新
【作者单位】北京医科大学人民医院病理科
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8
【相关文献】
1.蓝氏贾第鞭毛虫粪样刮片标本复合三色染色法的初建 [J], 郭俭;陈家旭;陈韶红;
田利光;蔡玉春;张永年;李浩;童小妹
2.改良Masson三色染色法在应用中的体会 [J], 平国强;唐锦玲;杨春青
3.介绍一种Masson三色的微波改良染色法 [J], 林云恩;许惠娟;何萍;余妙丽;何新
明
4.三色荧光抗体染色法测定T细胞亚群方法学的建立及临床应用 [J], 朱宁;程浩;张行;徐妍
5.介绍一种改良的Masson氏三色染色法 [J], 陈敬文;钟端阳;张伟;王蔚
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小鼠三色染色标记方法百位

小鼠三色染色标记方法百位
用毛笔或棉签蘸取不同颜色的化学药品涂染在小鼠特定部位的毛发上，代表不同编号。

常用的标记液有：
（1）3%~5%的苦味酸溶液（黄色）；
（2）2%硝酸银溶液（咖啡色）；
（3） 0.5%的中性品红溶液（红色）；
（4）煤焦油酒精溶液（黑色）。

编号的次序采用九分法原则：先左后右、由前至后。

左前肢上代表1号
腹部左侧为2号
左后肢上为3号
头顶为4号
腰背部为5号
尾基部为6号
右前肢上为7号
腹部右侧为8号
右后肢上为9号
小鼠体型小，同一部位一般最多可用两种不同颜色做标记，分别代表个位和十位（图1）。

图1染色法示意图-九分法[1]
染色法的优点是操作简单，不伤害小鼠。

缺点是小鼠体型小，编号范围有限；只适合如ICR和BALB/C等毛色浅的品系，不适合毛色深的品系如C57BL/6小鼠；小鼠之间会相互扎堆嬉戏打闹，时间长了染色易褪色；苦味酸（2,4,6三硝基苯酚）是炸药的一种，属于国家限制使用的试剂；另外虽然这些染色剂属于低毒物质，但会通过小鼠理毛等行为进入体内，对实验结果的影响仍需要考虑。

现在市场上有售小动物标记专用的实验标记笔，使用更方便。

优点是不用配制染色剂，而且颜色更丰富，染色后周期能保持6-12周左右，动物舔舐也不会掉色。

缺点同样是不适合毛色深的品系使用。