常规组织切片技术
组织切片操作流程
组织切片操作流程切片法主要步骤1、取材与固（1）取材：从动物体取下所需的器官材料。
取材的动物要健康，材料愈新鲜愈好，应在致死后立即取材，防止组织细胞自溶变性；取材的器械要锋利；所取材料力求小而薄（以不超过0.5cm为宜），不能挤压和损伤。
（2）固定：将所取的材料立即投入固定液中，目的是使组织蛋白迅速凝固，使细胞内的结构和成分不再发生变化，保持组织细胞与活体相似的形态结构，固定后的组织块变硬，便于进一步处理。
常用的固定剂有甲醛、乙醇、苦味酸或混合固定液。
实验室常用Bouin固定液，固定时间为12～24小时，其固定的组织块不需进行水洗，可直接进行脱水。
2、脱水与透明（1）脱水：固定后的组织块内含有的大量水分要彻底脱去，以便石蜡的浸入。
常用的脱水剂为乙醇，脱水过程必须循序渐进，从低浓度开始，逐步升高，使组织块中的水分逐渐被乙醇所取代。
具体操作为：Bouin固定液固定的组织块可直接进入70％的乙醇进行脱水，时间12小时左右。
（若材料暂不制片，可保存于70％乙醇中。
）然后将组织块依次移入85％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各8-12小时，→95％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各2小时，→100％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各1小时。
因无水乙醇对组织有脆化作用，故在无水乙醇中时间不能超过2小时。
（2）透明：由于乙醇与石蜡不能相溶，故浸蜡前要对脱水后的组织块进行透明。
常用透明剂有二甲苯、氯仿、苯、香柏油或冬青油等，透明剂能同与乙醇和石蜡相溶，并能增强组织块的折光系数，故透明后的组织块呈半透明状。
使用二甲苯作透明剂的透明过程为：将脱水后的组织块放入无水乙醇与二甲苯混合液（1:1）中30分钟，再移入二甲苯中15-20分钟。
3、浸蜡与包埋（1）浸蜡：将透明后的组织块置于刚过熔点的熔化石蜡中浸渍，使石蜡逐渐渗入并完全置换出透明剂。
过程为：先将透明的组织块移入二甲苯与石蜡混合液（1:1）中，在60℃温箱中放置30分钟，再移入熔化的石蜡（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）中，在温箱中每级各1小时。
组织病理切片制作流程(完整版)
组织病理切片制作流程(完整版)组织病理切片是一种常规病理学检查方法，用来对病理组织进行形态学观察和病理诊断。
制作一张优质的组织病理切片需要严格按照一定的流程进行。
组织标本采集组织标本的采集是组织病理学检查的第一步。
组织标本的质量直接影响到切片的质量。
因此，采集前需要确保标本来源正确，并与患者信息相符。
对于手术标本，需要注意保护血管、神经、肌肉等结构，避免对组织结构造成不必要的损害。
对于活检标本，需要选择有代表性的组织，避免损伤重要结构和血管。
组织处理组织标本采集后，需要进行组织处理。
对于手术标本，可以直接收取。
对于活检标本，需要迅速固定，避免组织发生变性和坏死。
常用的固定剂包括10%中性缓冲福尔马林、乙醇、甲醛等，选择固定剂需要根据样本的性质和检测需要来确定。
样本包裹固定后的组织标本需要进行包裹以便于切片操作。
包裹材料通常选择的是聚苯乙烯、增韧剂聚苯乙烯等塑料材料，包裹材料必须能够完全包裹组织标本，并保证固定。
切片制备组织标本包裹后，需要进行切片制备。
切片机是用于切割病理标本的设备，其切割面的厚度一般在4-6μm之间。
在切片制备中，需要根据标本要求来选择显微镜下的切面。
切片后，标本必须尽快贴在玻片上进行染色。
组织染色组织染色是组织病理学检测的重要环节。
目前常用的染色包括常规的苏木素-伊红染色和免疫组化染色等。
苏木素-伊红染色是一种常规染色方法，可以显示出组织的基本结构和染色体。
免疫组化染色可以显示出特定的蛋白质和胚间充质细胞等。
组织标签和包装染色后的组织切片需要进行标签和包装。
标签需要包含姓名、性别、年龄和检测日期等基本信息。
组织切片还需要包装防止刮损和振动。
结果解释组织病理切片制备完成后，需要进行结果解释。
结果解释需要根据不同的病理学检测目的进行，一般是通过显微镜进行观察和诊断。
有时候，还需要通过综合分析临床病史和症状等信息来确定诊断结论。
总结组织病理切片制备流程需要严格按照一定的步骤来进行，包括组织标本采集、组织处理、样本包裹、切片制备、组织染色、组织标签和包装以及结果解释。
常规病理切片的制备(讲稿)
常规病理切片的制备（讲稿）亲爱的各位领导，各位老师，大家好。
能站在这个讲台上，对我来说本身就已经是一份莫大的荣誉，但我知道，这个讲台肯定不是属于我的。
我在这里也只能是班门弄斧了。
还真诚的希望各位不要见笑。
如果有什么不对的地方，希望各位领导和老师能够提醒我，帮助我。
因为我是分到了病理科，现在阶段的主要工作是病理技术。
那么我今天就简要的介绍一下在我们科室常规病理切片的制备过程。
这里我们以常规手术标本为例：一．收取标本。
在手术室收取标本，并仔细核对标本的各项信息。
如有误，应立即联系相应科室及医师。
如仍然有误，则可拒收该标本。
二．固定。
第二步和第一步并没有明显的时间上的先后顺序。
其实，准确的说固定必须在收取标本之前就已经进行。
因为活体的器官或组织在离体的那个时候就应该固定。
因为器官或组织离体后，在自然状态下会立刻开始腐败和自溶。
而组织或器官经固定液固定之后能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。
细菌无处不存在，它们随时都可污染腐蚀未经处理的组织。
固定液可以固定任何蛋白质，凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命就停止，细菌也就失去了活力。
另者，在日常生活中，人们常可碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，这是为什么呢？除了细菌参与外，其本身也是很重要的。
因为组织离体后，供应这此组织的血液随之消失，细胞缺氧，细胞内溶酶体膜的结构受到破坏，破坏后释放出溶酶体酶，组织在溶酶体酶的作用下开始自溶。
日常生活中常碰到的肉变质，就是细菌污染加组织自溶的结果。
这也就是为什么离体器官或组织必须在手术室刚切下来的时候就固定的原因。
在我们科室最常用的固定液是4%中性甲醛溶液（10%中性福尔马林溶液）。
三．水洗及常规取材。
１．水洗是指针对已经固定充分的组织及器官用流水冲洗。
洗去待检标本表面的杂质及其它可能影响诊断的物质。
２．取材，主要是对送检标本进行肉眼检查并记录同时从标本中切取有病变或怀疑有病变的部位。
而对于微小标本，如通过胃镜或纤支镜等取出的标本我们一般对标本进行全取检查。
皮肤组织病理切片技术
一、V — G法（胶元纤维染色法） 结缔组织含有三种纤维，即胶原纤维、网 状纤维、弹力纤维。胶原纤维在结缔组织中 含量最多，起支持作用，具有一定的韧性和 坚固性，抗拉力强的特点。胶原纤维染色在 病理诊断上主要用于和肌纤维的鉴别。常用 的胶原纤维染色方法为V—G法。 结果： 细胞核蓝黑色或黑色，胶原纤维红色，肌 纤维、细胞浆、红血球呈黄色。
配法：(PH 7.0~7.2)
甲醛 NaH2PO4· 2H2O 或 无水 Na2HPO4· 12H2O 或 无水 蒸馏水 100ml 5.2g 4.0g 16.4g 6.5g 900ml
三、脱水
组织脱水，就是把组织内的水分彻底 除掉，故亦称无水法。无论任何组织都 含有不同程度的水分。一般组织经过固
皮肤组织病理切片技术
一、取材
1、手术取材。 适用于：（ 1 ）面部、关节部，易出血部位 等；（2）较大、较深的皮疹；（3）结节 和囊肿性皮疹；（ 4 ）切除治疗和检查， 主要用于小的肿瘤。 2、钻孔取材。（角膜钻孔器）
适用于一般的皮疹取材。
二、固定
固定的作用和目的：
1、可以防止组织溶解及腐败。
2 、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶 等各种成分沉淀保存下来，保持它原有
透明
切片 染色
切 片 质 量 标 准（100分）
切片完整 没有刀痕 厚薄均匀 附贴适量 平坦无褶 10分 5分 10分（一层细胞） 5分 10分
树胶适量 染色鲜艳 对比清晰 透明度好 片内无污染 无“人工”现象 玻片整洁 标签端正
5分 10分 10分 10分 10分 5分 5分 5分
常 规 染 色
固定的注意事项：
1、组织块必须小而薄。 2、固定液对组织有收缩及硬化作用，亦有 使组织膨胀的作用。
常规HE病理切片制作流程
• 制作优良的病理切片是以充分的固定为前 提的。
• 常规的固定方法是用10％的中性福尔马林 ，固定时间一般为24h，原则上组织与固定 液的最佳比例是1:10，组织的厚度≤ 3mm
• 组织脱水：
• 乙醇是最常用的脱水剂，可以硬化组织，有明显收缩 作用。为了避免组织过度的收缩，脱水过程应从低浓 度向高浓度过渡，在无水乙醇中的时间不应过长，防 止组织过度硬化。
• 脱水 切片染色后通过各级乙醇脱水，浓度应从低到高， ，低浓度的乙醇对伊红有分化作用，在高浓度的乙醇中时 间应相应延长，否则切片会有雾化的现象，在显微镜下组 织结构模糊不清。
HE染色的质量标准： 染色核质分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美 观
谢 谢！
14.伊红染色15~30s
15.95%乙醇Ⅰ30s 16.95%乙醇Ⅱ30s 17.95%乙醇Ⅲ30s 18.无水乙醇Ⅰ1min 19.无水乙醇Ⅱ1min 20.无水乙醇Ⅲ1min 21.二甲苯Ⅰ（可加苯酚）1min 22.二甲苯Ⅱ1min 23.二甲苯Ⅲ1min 24.中性树胶封片
• 染色中注意事项：
处理步骤
1. 75%乙醇 2. 85%乙醇 3. 95%乙醇 4. 无水乙醇Ⅰ、Ⅱ
处理时间（min）
60 90 90 各60
• 组织的透明：
• 二甲苯是常用的透明剂，对组织收缩性强，易使组织 变脆变硬，因此时间不宜过长。其既与乙醇混合，又 能溶解石蜡，可以达到使石蜡浸入组织的目的，折射 指数接近组织蛋白折光指数，使组织细胞变透亮。
• 脱蜡 组织切片脱蜡应彻底，主要取决于二甲苯的温度和 时间，需要根据环境条件的不用做出相应的改变，脱蜡不 净是影响染色不良的重要原因之一。
• 染色 石蜡切片经水后放入Harris苏木精染色，在新配的染 液中只需染1min分钟左右，根据染片的多少逐步延长染色 时间。苏木素的染色属于一种过染法，胞核胞质都会被染 色，但细胞核中的带负电荷的染色质与带正电荷的苏木精 结合的更为牢固，因此当用盐酸酒精进行分化，改变组织 蛋白质的PH值，使胞质的苏木精被洗脱下来，所以分化 的程度决定了染色的好坏，需要严格控制分化的时间。
组织学技术与染色方法
组织学技术与染色方法组织学技术是研究组织构造和生物学特性的基础。
在生物学、医学和病理学领域，人们广泛应用组织学技术来研究细胞和组织的结构和功能。
染色方法是组织学技术中的一种重要方法，它可以改变组织的颜色和形态结构，从而使人们更加清晰地观察和研究组织。
本文将介绍组织学技术和染色方法的相关内容。
一、常规组织学技术常规组织学技术是指在组织学和病理学研究中常用的组织学技术，主要包括固定、包埋、切片和染色等步骤。
其中，固定是针对活体组织的一种处理方法，用于保持组织的形态结构和化学结构，同时杀死细胞，以避免组织或细胞的萎缩变形。
主要方法有酸性酒精、福尔马林等。
包埋是将固定后的组织放入合适的包埋剂中，使组织变硬，便于制备切片。
切片是将包埋后的组织切成同样大小的薄片，然后染色或进行其他特殊处理，便于观察和诊断。
二、染色方法染色是组织学技术中的一项重要方法。
染色可以使组织或细胞的不同结构和化学成分显示出不同的颜色，从而方便人们观察和研究组织。
1. 常用染色方法（1）H&E染色H&E染色是组织学研究中最常用的染色方法之一。
该方法主要利用酸性染料和碱性染料的性质不同，在染色后能够将细胞核染成深蓝色，胞浆和细胞质染成淡粉红色，从而方便人们观察和区分不同的细胞类型和组织结构。
（2）伊红染色伊红染色是一种常用的组织学样本染色方法，主要用于染色血液和骨髓切片。
该方法主要利用伊红染料的亲和性，将细胞核染成红色或紫色，细胞质和其他组织及细胞结构则染成红色，能够明显突出血液细胞和骨髓组织结构。
（3）PAS染色PAS染色是糖和糖蛋白类物质的特异性染色方法，主要用于组织中糖和糖蛋白的检测和定量。
该方法主要利用PAS染料与糖类物质形成复合物的性质，将糖染成淡红色或玫瑰红色。
2. 新兴染色技术（1）免疫组化染色免疫组化染色技术是一种利用抗体与特定抗原相互作用的特异性染色方法。
该技术可以检测和鉴定组织或细胞中特定的蛋白质、抗原等，从而在诊断和治疗等方面具有非常重要的应用价值。
免疫组化之组织处理、切片和染色实验技术步骤
免疫组化之组织处理、切片和染色实验技术步骤展开全文1.组织处理恰当的组织处理是做好免疫组化染色的先决条件，也是决定染色成败的内部因素，在组织细胞材料准备的过程中，不仅要求保持组织细胞形态完整，更要保持组织细胞的抗原性不受损或弥漫，防止组织自溶。
如果出现自溶坏死的组织，抗原已经丢失，即使用很灵敏的检测抗体和高超的技术，也很难检出所需的抗原，反而往往由于组织的坏死或制片时的刀痕挤压，在上述区域易出现假阳性结果。
1) 组织及时取材和固定组织标本及时的取材和固定是做好免疫组化染色的关键第一步，是有效防止组织自溶坏死，抗原丢失的开始，离体组织应尽快的进行取材，最好2h内，取材时所用的刀应锐利，要一刀下去切开组织，不可反复切拉组织，造成组织的挤压，组织块大小要适中，一般在2.5cm×2.5cm× 0.2cm，切记取材时组织块宁可面积大，千万不能厚的原则，(也就是说组织块的面积可以大到3cm×5cm，但组织块的厚度千万不能超过0.2cm，否则将不利于组织的均匀固定)。
固定液快速渗透到组织内部使组织蛋白能在一定时间内迅速凝固。
从而完好的保存抗原和组织细胞形态。
对于固定液的选择，原则上讲，应根据抗原的耐受性来选择相应的固定液，但除非是专项科研项目，在病理常规工作很难做到这一点，因为病理的诊断和鉴别诊断都是在常规HE病理诊断的基础上决定是否进行免疫组化的染色，而HE染色的常规组织处理是采用10%的中性缓冲福尔马林或4%缓冲多聚甲醛4倍于组织体积进行组织固定，利用其渗透性强，对组织的作用均匀进行固定，但组织固定时间最好在l2h 内，一般固定时间不应超过24小时。
随着固定时间的延长对组织抗原的检出强度将逐渐降低。
2) 组织脱水、透明、浸蜡组织经固定后进行脱水、透明、浸蜡和包埋。
掌握的原则是脱水透明要充分但不能过，浸蜡时间要够，温度不能高，否则造成组织的硬脆使组织切片困难，即使能切片，由于组织的硬脆，也使切片不能完好平整，染色过程中极易脱片，对免疫组化染色抗原的定位及背景都不利，所以无水酒精脱水和二甲苯透明的时间不宜过长，正常大小的组织无水酒精脱水lh×3次，二甲苯透明lh×2次即可，浸蜡及包埋石蜡温度不要超过65℃。
常规组织切片染色制作中常见问题及其解决方法
切片太厚，
烤片不
洗净载玻片， 脱 水彻底， 均 匀 切 片 ３～５μｍ 片温度和时间充分， 捞片避免气泡
烤
１２ 组织中央区嗜碱性片状毛玻璃样模糊 脱蜡不全
１３ 横行大片“垄沟”状平行皱褶
刀钝
１４ 纵行皱褶和／或组织堆积
刀刃粘蜡
１５ 横行宽大的组织厚薄不均
跳 刀 、刀 钝
１６ 纵行齐边的裂痕
刀刃豁口
１７ 组织干固皱缩、组织焦化、折光强
３ 切片、摊片、烤片
３．１ 切片
环境温度高时， 切片前可将蜡块放入冰箱冷藏柜 预冷 ３０ ｍｉｎ。刚包埋好的热蜡块不能立刻冷冻， 速冷 会造成蜡块裂痕， 组织块易碎。在刀架上放置组织蜡 块时， 应注意组织块包埋方向、组织层次等， 使纤维和 肌肉走向与切片刀刃平行， 较难切的组织部分应放在 上面， 如皮肤表皮、包膜、胃肠道浆膜等， 以减少组织 断裂现象。操作切片机时应用力均匀， 避免用力过重。 脱钙的组织、骨髓， 以及钙化组织， 应选用固定刀口， 以减少刀刃过多的缺口。用毛笔展片时， 要防止笔丝 进入刀口， 以免增加刀刃缺口。
·５２·
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｒｅｎｓｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２００８，Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．１
表 １ 常规组织切片染色制作中常见问题及其解决方法
序号
异常现象
可能的原因
解决方法
１ 组织细胞弥漫均匀溶解， 多见气泡和液 自溶、腐败 气泡
死后 ４８ 小时内尸 检或尽早冷冻 尸体 （ 一 般 不超过 １ 周）
更换苏木素液， 缩短伊红分化时间， 弱碱液 返蓝或延长冲水时间
１９ 组织嗜碱性强过蓝、伊红色淡
苏木素浸染时间过长， 伊红过期， 分化不足 更换伊红液， 延长分化时间
组织切片技术PPT72页
2.1.3 组织取材注意事项
1.组织要求离体后30min内浸入固定液，尤其是开展分子生物学研究。 动物放血处死后立即取材，最好在心脏还在跳动时立即取材，马 上投入固定液中；
2.注意防止人为因素的影响 切取组织的刀剪必须锋利，刀要足够长。切分组织块时，不
可来回切割。夹取组织时，镊子要轻，切勿挤压。以免损伤组织； 3.组织块的大小
大多数的生物材料，在自然状态下是不适合显微观察 的，也无法看到其内部结构。因为材料较厚，光线不易透 过，另外由于细胞内各个结构的折射率相差很小，即使光 线可透过，也难以辩明。
组织学技术是教学和科研中常用的方法。组织在经过 固定，脱水，透明，包埋等手续后，用切片机切成较薄的 切片，再经不同的染色就可以显示不同细胞组织的形态及 其中某些化学成份含量的变化，组织切片也便于保存。
混合固定液：是用几种化学试剂，按一定的比例混 合配制而成的，由于各种试剂的优缺点互相弥补，因此 可产生较好的效果。
（1）甲醛固定液：
是一种还原剂，呈酸性，原液浓度为37%～40%，配成 固定液的浓度为4%，习惯上称为10%，配制时取甲醛原液 10ml，加蒸馏水（D.W）或缓冲液至100ml，为甲醛固定液 （10％福尔马林） 。
二甲苯是使用最广泛的一种透明剂，它具有渗透力强， 溶解石蜡量大，又易挥发的优点，其缺点是易使组织收缩， 变硬，变脆，因此透明时间应根据组织块大小及质地酌情 而定
注意事项：
1.使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分 进入。
2.更换每级透明剂，动作要迅速，一方面为了不使材料 块干涸，另一方面能避免吸收湿气。
(3) Bouin’S液
苦味酸饱和水溶液 75ml
甲醛
25ml
冰醋酸
5ml
组织切片染色技术
三、染色原理
促染剂
用以加强染料和组织细胞结合能力的物质称为促染剂 促染剂如化学反应中的催化剂，少量存在就有明显的
促染作用。它们的作用机制也许是降低表面张力或是 改变了染液的pH值。
（一）染色剂染色的化学基础
染色剂分子能够显示颜色的基因，称为发色团。 主要的发色团有：
－N=N， －N=O， C=O， C=C
偶氮基
亚硝基 羰基 烯基
含有发色团的苯环化合物，称为色原。
苯+发色团=色原
染色剂分子中还需具备促使染色剂与组织细胞相结合 的基因，这样基因又称为助色团。
如—NH2 —COOH —OH —SO3H
六、染色前后处理
2．除去汞盐沉淀物
对于用升汞固定或含有升汞混合固定液的切片，切片 脱腊后需脱汞（浸入5%碘酒精10min），脱碘（5%硫代 硫酸钠）→流水洗→染色。
六、染色前后处理
3．脱甲醛色素
（1）浓氨水1ml，75%乙醇200ml。切片脱蜡后置溶液 中30min或较久→流水洗→染色。
（二）染色后的处理
1．脱水 95%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5min→100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5min。 2．透明 二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5min透明。 3．封固 通常用中性树胶或加拿大树胶加盖玻片封固。
七、染色的注意事项
1．切片脱蜡应彻底。 2．常规染色、特殊染色等，组织要进行固定处理，做酶
反应的组织固定更应严格。凡用含升汞固定液固定的组织， 切片脱蜡后，应经脱汞处理，同时要慎防切片脱落。 3．各种染料试剂一般选用化学纯。各种染料启用新品时 应先试染。配成的染液、试液应盛于有色试剂瓶内，瓶签 应写明名称、含量、配制年月日，顺序保存于避光橱中， 必要者放冰箱内。凡须临用时配制者，配量应适当。 4．染色各步骤所需的时间，常受温度、切片厚度等影响， 可根据镜下观察所见酌情予以调整。
病理科常规切片(HE切片)质量PDCA管理循环案例示范
病理科常规切片（HE切片)质量PDCA管理循环案例示范病理切片质量的好坏关系到病理诊断质量和水平的高低,正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果.一张好的病理切片与标本的固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等环节有密切的关系。
过去,我科一直严抓病理切片质量,每月都随机抽查30例常规切片进行质量评价，总体来说切片质量较高，基本达到诊断的要求.但是每月的切片质量检查或多或少总发现存在一些缺陷，如切片刀痕、裂隙、气泡、胶液外溢等。
目的：通过检查常规切片质量,发现存在影响切片质量的问题,查找原因,提高切片质量。
数据收集：参照《临床技术操作规范病理学分册》中的常规石蜡包埋—HE染色切片质量的基本标准（见表1),对今年1—7月常规病理切片进行质量分级评定（每月随机抽查30例常规切片，见表2），总的优级率87.1％,优良率97。
6%，总体达标.表1 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准优质标准满分(分）质量缺陷减分组织切面完整，内镜咬检、穿刺标本切面数10 组织稍不完整：减1～3分；不完整：减4~10分;未达到规定面数：减5分切片薄（3～5μm）,厚薄均匀10 切片厚（细胞重叠)，影响诊断:减6～10分；厚薄不均匀：减3～5分切片无刀痕、裂隙、颤痕10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减2分；有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减5分切片平坦，无皱褶、折叠10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断:各减2分;有皱褶折或折叠,影响诊断：各减5分切片无污染10 有污染：减10分无气泡（切片与载玻片间/盖片与切片、载玻片间），盖片周围无胶液外溢10 有气泡：减3分；胶液外溢：减3分透明度好10 透明度差：减1~3分；组织结构模糊：减5~7分细胞核与细胞浆染色对比清晰10 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分红（细胞浆）与蓝（细胞核）对比不清晰：减5分切片无松散，裱贴位置适当10 切片松散：减5分；切片裱贴位置不当:减5分切片整洁,标签端正粘牢，编号清晰10 切片不整洁:减3分；标签粘贴不牢:减3分;编号不清晰：减4分合计100注:切片质量分级标准:①甲级片：≥90分（优)；②乙级片:75～89分（良）;③丙级片:60~74分（基本合格);④丁级片：≤59分（不合格）表2 2012年1—7月常规切片质量抽查情况注：每月随机抽查30例常规切片。
组织病理切片制作流程(完整版)
组织病理切片的制作流程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
常规组织制片技术在病理学实验教学中的应用
学生 的学 习要求 ， 而 且 有 时 还会 把 一 些 人 为 制 片 的 “ 假象” 误 认 为 病 理 现 象 。 因此 本 课 题 组 在 医科 大 学部 分 专业 的病理 实验 教学 中讲 授 了常规 组织 制 片 技术 及优 质 切片 的判 断 标 准 ， 同时 为 学 生 进 行 现场 演示 操作 并 让其 亲 自参 与 。该技 术方 法在 病 理实验 课 中的推 广 ， 不仅使 学 生 通 过 观 察 实 验 切 片 的 内容 来 加 深掌 握 所学 的理 论 知 识 ， 而 且 使 学 生 对该 技 术 有一 个全 面 的 了解 和 认 识 ， 为 将 来 的 进 一 步 深造 奠
研 究 细胞 生理 和病 理形 态变 化 的一 种 主要 的技术 方
生在 实验课 中真正 能有 所 收获 。
１ 实验模 式 的施行
法 ． ３ Ｊ 。在常 规组 织 制 片 技 术 中最 常 用 的 是 Ｈ Ｅ染 色 。Ｈ Ｅ染 色是 一 种 以形 态 为基 础 结 合 应 用 化 学 技 术 对组 织各 种 细胞 进行 染色 的实验技 术 。 目前在 病 理实 验课 教学 中单 纯地 讲 授疾 病 的病 理 知识 ， 并 未让 学生 了解 切 片 制 作 的 过 程 及 如何 判
迎 。
关键词 ： 病理学 ； 实验教学 ； Ｈ Ｅ染色
中图 分 类 号 ： Ｒ ３ ６ 文 献标 志码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ２ ０ ９ ５—１ ４ ５ ０ （ ２ ０ １ ３） ０ ７— ０ ６ ８ ５— ０ ２ ＤＯ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ Ｊ ． Ｉ Ｓ Ｓ Ｎ． ２ ０ ９ ５—１ ４ ５ ０ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ７ ． １ ２
２ ０ ０ ２． ４： ２ ８—３ ０ ．
病理组织切片制作技术
病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：组织取材T固定T冲洗T脱水T透明T浸蜡T组织包埋T组织切片T展片附贴T切片脱蜡T染色T脱水T染片透明T封固。
以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。
一、取材采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24 小时。
应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。
带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小，以 1.5X 1.5X 0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。
切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后，应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。
因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90 毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。
一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔相当时间换水一次。
整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。
酒精固定的组织材料不需冲洗。
四、脱水经过固定的组织，冲洗后要进行脱水。
常规石蜡切片检查的流程
常规石蜡切片检查的流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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常规组织病理技术ppt课件
缺点： ●经酒精固定的标本对核的染色不良，也不利于 染色体的固定。 ●要证明细胞含的脂肪和类脂质时，不能用酒精 固定。 ●如要证明组织内的色素时，不宜以酒精作为固 定剂。 ●不适用于固定大块组织。 ● 酒精价格较贵。
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80%-95%的酒精作为固定剂为好 高浓度酒精组织硬化显著,放置过久组织 收缩明显且质脆,不但影响制片, 组织形态也 不好。 很少单独使用
甲醛氧化 --- 蚁酸与血红蛋白结合—福尔马林色素 避免长时间固定， 固定后流水冲洗
●尿酸结晶可被溶解。
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甲醛固定液的配制:
（1）10% formalin
市售甲醛（浓度为37~40%） 1份
水
9份
(2)中性甲醛 以PH7.2-7.4PBS为溶液配制的甲醛固定液
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优点： ● 如要证明尿酸结晶和保存糖类，则须用 100%酒精固定。 ●在已用别种固定液后，可用70%酒精较 久的保存组织。 ● 酒精既有固定作用，又有脱水作用。
染色
常规染色 染色的目的：增加组织在显微镜下的分辨率
HE染色 主要用以显示各种组织、细胞的一般形
态结构以及疾病过程中病变的发生、发展及修 复的过程。
常规染色 特殊染色
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（一）染色原理
1、细胞核染色原理：核酸阴离子+苏木素阳离子→蓝色
2、细胞浆染色原理：蛋白质阳离子+伊红阴离子→伊红色
PH值低于蛋白质等电点
传统病理学技术
常规组织病理技术
（formalin固定 石蜡切片 HE）
现代新技术
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免疫组化
HE
乳腺导管
8
免疫荧光
HE
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结肠癌 EB病毒原位分子杂交
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病理常规切片技术
而用一次性刀片切的片子，一 碰到热水，片子上的皱摺就无法再 展开，这有二个方法可以解决： 第一、可以在切片时边切边向蜡 片吹气，这样的片子就会非常平整， 放到热水里就会自然展开，比较方 便快捷，但这样的片子会略微厚一 点；
第二、在切完片子后，先把切片 放在冷水里，再放到热水里就容易 展开。也有人把切片放入10-30%的 酒精里，让酒精的张力自动把皱摺 展开，然后再将切片移到热水，这 样的片子会较薄，但容易引起切片 破碎，出现裂隙，像脂肪之类细胞 间粘附性较小的组织一碰到酒精就 会散开，故不是十分完美。
包埋的蜡更应过滤，留有杂质 的石蜡，容易造成污染或刀口受损。 蜡的熔点应在56-58℃之间选择，不 提倡在冬天使用软蜡。因为用软蜡 包埋的蜡块，到了夏天，会粘在一 起，不利于资料的保存，而且即使 在冬天，用硬蜡包埋的蜡块也比用 软蜡包埋的蜡块要好切。
切片
切片前要把切片机上有关的螺旋拧紧， 并调整好切片刀的角度。切片的第一步 必需粗切。粗切的厚度大约在15--30微米 左右，质地较硬的组织或较小的组织应 再薄一些，粗切致组织全部暴露后，才 进行细切。细切至组织块表面均匀一致， 无白点后，再把切出的蜡片放入温水中。 切片时要求用力均匀、柔和，摇速不易 过快或过慢。过快会导致切片厚薄不均， 切片难以展开；过慢会使切片增厚。
脱水
所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分 置换出来，以利于有机溶剂的渗入，这一过程 称为脱水。脱水是否彻底，直接关系到组织是 否能充分透明。一般我们总认为脱水主要跟高 浓度酒精有关，而忽视了与低浓度的酒精关系 。 低浓度的酒精可以减少细胞的收缩，使组织更 好切。 脱水的关键是如何使低浓度的酒精脱水时 间和高浓度的酒精脱水时间的正确搭配。
我们在实践中发现，室温在12-15℃时，可作为一个临界温度范围。 当室温高于此温度范围时，组织容 易脱水，可适当缩短脱水时间；而 室温低于该温度范围时，应适当延 长脱水时间。从规范化角度出发， 应该尽可能的减少变量，也就是： 温度、浓度和作用时间。如果一年 四季都在一个恒定的温度下（35℃） 最好，有条件的应该买全封闭自动 脱水机。
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常规组织切片技术一.(A1型题)10%福尔马林固定组织的原理A
A使蛋白质发生凝固.
B使蛋白质发生交联.
C沉淀核蛋白.
D使蛋白质沉淀.
E凝固脂肪
二.(X型题)标本取材的注意事项ABCDE
A选择恰当的取材部位
B避免组织受挤压变形
C大小适当
D根据组织.器官的不同选择正确的切面方向
E正确记录并做好组织块标记
三(A1型题)病理标本应及时固定,常用的固定液是D A 95%酒精
B丙酮
C戊二醛
D 10%xx
E A-F液(乙醇.甲醛液)
四(X型题)常规组织切片的质量标准是ABCDE
A切片完整
B薄厚均匀,厚度4-6微米
C无皱褶.无刀痕
D切片无污染
E捞片位置适当.美观
五(A2型题)送检标本中如鼻咽.淋巴结等组织常需要做免疫组化检查,应选用的固定液是CA 10%福尔马林
B 95%酒精
C中性甲醛缓冲液
D Zenker固定液
E丙酮
六(A3型题)临床送检组织的处理包括取材.固定.脱水.透明.浸蜡与包埋
1送检组织保存时固定液体积与组织体积比为E
A 2倍
B 4倍
C 6倍
D 8倍
E 10倍
2脱水用酒精浓度应从低到高,脱水的作用D
A将组织进一步固定
B减少组织的硬度
C去除细胞内沉淀物
D置换组织内的水分
E去除细胞内未结合的固定剂
3组织石蜡切片最常用的透明剂是E
A酒精
B丙酮
C异丙醇
D正丁醇
E二甲苯
七(A4型题)在常规组织切片过程中经常会碰到各种问题
1制作好的石蜡组织块放一段时间后,组织发生凹陷,原因是D A没有用蜡封组织块
B制作蜡快时透明时间过长
C浸蜡时间短
D脱水时间不够
E组织块过大
2组织脱水后透明时间过长切片时会出现A
A切片易碎成粉面
B切片与切片刀粘附
C切片薄厚不均或间歇出片
D不能成连续切片
E切片打卷
3能形成连续切片,但切片上有纵裂或纵向划痕原因是B
A脱水时间长造成组织过硬
B刀锋损伤有缺口
C蜡块冷冻时间短,不凉
D脱水时间短或浸蜡时间短
E蜡块没固定紧
4有些组织捞片后在烤片机烤时出气泡,主要原因是E
A烤片时间短
B烤片时间长
C切片厚
D切片过薄
E捞片后水没有控干净直接烤片
八(X型题)在病理组织制片过程中,取材的一般要求为ABCD A一般标本取的组织块的厚
0.2-
0.3厘米
B大小以
1.5厘米×
1.5厘米×(
0.2-
0.3)厘米为宜
C免疫组化以1厘米×厘米×
0.2厘米为宜
D冰冻切片以1厘米×厘米×
0.2厘米为宜
E组织块越大越好
九(X型题)制作高质量的切片应该具备下面哪些个条件ABCDE
A技术员经验丰富,水平高超.
B组织取材.固定.脱水.透明.浸蜡.包埋每个步骤都处理得好
C切片机精准
D切片刀锋利
E刀座.刀架.蜡块固定充分
十(X型题)蜡块做得很好,切片时打卷且薄厚不均匀,原因为ABCDE
A蜡块冷冻不够好
B切片刀或一次性刀片没固定紧
C摇动转轮速度过快不匀
D蜡块没固定好
E刀架没固定紧
十一(多项问答题)男孩子12岁,颈部淋巴结肿大,临床疑淋巴瘤,外科取淋巴结送检问题1制作成切片需要下面哪些步骤ABDEFGIJ
A取材
B中性甲醛缓冲液固定,以备免疫组化检查
C酒精直接固定以提高速度
D脱水
E透明
F浸蜡
G包埋
H冰冻直接确诊
I切片
J捞片和烤片
问题2制作质量好的切片需要注意下面哪些问题ABCFG A中性甲醛固定液体积是淋巴结体积10倍
B固定时间应该充分
C切片厚度应稍微薄些,以利诊断
D脱水时间可以过长些
E脱水剂体积比组织体积多些即可
F切片前蜡块应该冻凉
G切片时刀架.刀片.刀座.蜡块应固定紧
问题3淋巴节制片应注意的事项ABEF
A切片应相对薄些
B捞片时把水控干净再烤片,避免出气泡
C固定充分
D脱水剂从高浓度开始
E应该选用中性缓冲甲醛固定液,以备做免疫组化
F透明时间不宜过长,,以免组织切片时过脆,成粉末
十二(多项问答题)患者男性,间歇血尿,疑膀胱癌,膀胱镜取材松检问题1由于材料过小,应注意以下哪些ABCEF
A取材时应用伊红标记
B材料应该用滤纸包裹
C包埋时不能包太深
D可以跟体积大的组织一起脱水.透明,不必单独走
E切削时速度要慢,以免把组织切光
F切片平整,不能有皱褶
问题2小材料脱水.透明应注意以下哪些ABDEF
A材料应单独走
B脱水透明时间不能过长,以免材料过硬.过脆
C脱水时间把握不好,宁可短
D透明最好对光观察
E组织块不透明说明脱水不够
F二甲苯必须保持无水
问题3小膀胱镜材料包埋.切片应注意BCDE
A小材料可以不分方向地包埋
B切片时应小心,不能削得太很,应切到组织的最大面
C捞片时要多捞些
D材料要平整无褶
E展片水温适当,太低出褶,太高组织散花
F捞片后水不必空净可直接放烤片机上烤
十三(多项问答题)女性患者,急性阑尾炎,急诊手术切除阑尾送检问题1标本固定.取材应注意ACDF
A标本先固定后取材
B标本先取材后固定
C标本固定后变硬
D取材厚度
0.2-
0.3厘米为宜
E取材不需记录
F固定剂用10%甲醛
问题2包埋时应注意ABCF
A需将管壁横断面朝下包埋
B多块组织包埋在一个蜡块上,要在一个平面
C组织块要与蜡充分融合在一起
D可以将小块组织放在阑尾的管腔内一起包埋
E组织可以任意方向包埋
F用石蜡包埋法
问题3切片时应注意BCDF
A切片刀角度任意
B多块组织包埋在一起要切全C厚度4-6微米既可
D刀架.刀片.蜡块要固定好
E包埋后不必冻凉可以直接切片F切片应完整.厚薄均匀.无皱褶。