P53基因突变检测方法

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p53基因突变与非霍奇金淋巴瘤病因学关系研究

ｐ53基因突变与非霍奇金淋巴瘤病因学关系研究【摘要】目的：研究p53基因突变在非霍奇金淋巴瘤（NHL）发生发展中的作用。

方法：在37例非霍奇金淋巴瘤组织中采用PCR-单链构象多态性分析法(PCR-SSCP)进行p53基因外显子5~8的突变检测。

结果：p53基因总突变率为54.1%，惰性组、侵袭性组、高侵袭性组突变率分别为0.0%、58.1%、100.0%；T和NK细胞组和B细胞组突变率分别为37.5%、58.6%。

结论：非霍奇金淋巴瘤中存在p53基因的突变，p53基因的突变在NHL的发展演变中可能起重要作用。

【关键词】非霍奇金淋巴瘤；p53基因；突变p53基因是目前发现与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因[1]。

在大量的研究基础上，发现多种肿瘤中均有p53基因结构和功能的异常，p53基因及其产物在人类肿瘤发生发展中起着重要的作用，具有泛瘤性，这为p53基因作为肿瘤的标记物提供了理论基础。

非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)是一种常见的恶性肿瘤，其发病率近20多年来在世界各国明显上升。

本研究在NHL组织中检测p53基因的异常，为NHL的病因学积累资料。

1 资料与方法1.1 资料：标本来自2004年1月～2006年10月贵州省人民医院病理科和遵义医学院附属医院病理科的淋巴瘤档案材料37例，标本均为4%福尔马林固定、石蜡包埋的组织。

根据WHO在2001年制定的淋巴造血肿瘤分类[2]，按细胞来源分：B细胞肿瘤29例，T和NK细胞肿瘤8例；按生物学行为分:惰性组4例，侵袭性组31例，高度侵袭性组2例。

选取淋巴结反应性增生作为p53基因突变分析的正常对照。

1.2 方法与结果判断1.2.1 DNA的提取：按常规提取采用石蜡包埋组织、外周血DNA。

1.2.2 p53基因突变的检测：PCR扩增p53的E5~8，各对引物及扩增片段大小见表1，扩增产物进行单链构象多态性分析(SSCP)。

1.2.3 图像分析：采用全自动凝胶成像分析系统。

肝癌组织中p53基因的突变

肝癌组织中p53基因的突变
吴怡春;陈旭峰
【期刊名称】《浙江中西医结合杂志》
【年(卷),期】1998(008)002
【摘要】目的：对２３例原发性肝细胞肝癌组织中ｐ５３基因的５～８四个外显子可能发生的点突变进行检测分析，方法：通过聚合酶链反应／单链构象多态性分析技术，结果：１３例（５６．５０％）癌变组织中检测到点突变的发生，第７及５外显子的突变率分别为４７．８３％，４３．４７％，１１例癌变组织中同时出现两个外显子以上的多位点突变。

结论：提示ｐ５３基因的突变在原发性肝细胞肝癌中可能是细胞内一系列基因调变至癌过程中的一个关键
【总页数】2页(P85-86)
【作者】吴怡春;陈旭峰
【作者单位】浙江省卫生学校;浙江省卫生学校
【正文语种】中文
【中图分类】R735.7
【相关文献】
1.人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ基因P3,P4启动子表达及其与p53基因突变的关系 [J], 陈潮文;刘序友;杨冬华;汤绍辉
2.肝癌组织中c-myc基因突变的研究 [J], 李莉;刘利锋;武彦宁;李庆;陈德喜
3.喉癌中P53基因突变与突变型P53基因蛋白表达的相互关系及意义 [J], 刘克杰;王惠忠;张信行
4.肝癌组织中p53基因及其下游基因的研究进展 [J], 赵劲风;张阳德
5.利用酵母功能检测技术筛选肝癌组织p53基因显性负抑制效应突变体 [J], 傅景庚;王佳琦;曾敏;施慧莉;霍克克
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胃癌患者血浆DNA p53基因突变的检测

ＤＮＡｒｇｎｓｗｅｅａｌｉｄｂＣＲ．ＴｈｒｄｃｉｎｗｅｅａａｙｅｙｄｎｔｒｎｉｈｐｒｏｍａｃｆａｍｅｔｒｍｐｉｅｙＰｆｅｐｏｕｔｒｎｌｚｄｂｅａｕｉｇｈｇｅｆｒｎｅｏ
摘要目的：探讨胃癌患者血浆循环核酸ｐ３基因突变检测的可行性，究基因突５研
变与胃癌的发生、发展、预后的关系。方法：采用聚合酶链反应（Ｃ扩增ｐ３基因外显子ＰＲ）５
７用变性高效液相色谱技术（ＨＰＣ），ＤＬ对产物进行突变分析，与各生物参数进行相关性研再
胃癌患者血浆循环核酸ｐ３基因突变，胃癌的恶性程度、５对预后评估有一定的临床价值。而ＤＨＰＣ可作为一种快速简便的基因检测手段。Ｌ
主题词胃肿瘤基因，５ｐ３基因转变
ＤＨＰＬＣｔｃｉｆｐ５ｅｕａｉｎｎｐａｍａＤＮＡｒｍｄｅｅｔｏｎｏ３ｇｎｅｍｔｔｏｉｌｓｆｏ
３ａｔｉａｅｔｅｔ４ｇｓｒｃｃｎｃｒｐａｉｎｓ
ＳｈａｎｘｏｖｎｉｌＣｏｐｓｔ１ｏｍｅｌｃａｉＰｒｉｃａｒｓＨｏｐｉａｆＡｒｄＰｏｉｅ
Ｆｒｅ（ ’ ｎ７０５）ＬｈｏｎＭｅｇＴｉｇＩｉｕｎｏｃｓＸｉａ１０４ｖＳａｍｉｎｎｕＪａｅｌｔａ

毛细管电泳和聚丙烯酰胺电泳法检测肺癌组织p53基因突变效果分析

肺癌的早期诊断提供简便可靠的方法。［关键词］毛细管电泳；限制性片段长度多态性；３基因；５０点突变
［中图分类号］Ｑ０５３［文献标识码］Ａ［文章编号］１０－６Ｘ（０８４－０５００２２６２０）４０１－３
ＣＥｃｎｏｅｏｖｎｅｔｄｒｌｂｅｍｅｈｏｔｅｌｒｅｓａｅｏａｌｉｇｏｉｏｎａｃｒａｆｒａｃｎｅｉｎｅｉｌｔｏｔｈｇｃｌｆｅｒｄａｎｓｓｆｌｇｃｎｅ．ｎａａｄａｙｕ
ｅｅｔｐｏｅｉ（ＡＥｎａｉａｙｅｃｏｈｒｓ（Ｅｒｓｅｔｅ．ｅｕｔＴｅＣｄＰＧｏｌｂｔｅｅｔｈｌｒｈｒｓＰＧ）ａｄｃｐｌｒｌｔｐｏｅｉＣ）ｅｐｃｉｌＲｓｌｈＥａＡＥｃｕｄｏｄｔｃｔｅｃｏｓｌｅｒｓｖｙｓｎｈ２９ｃｅｆ３ｇｎｏｔｕａｏ．ＴｅｄｔｔｎｔｅｆＥｗｓｈｒｒａｄｔｅｃｏｔｗｓｈｈｒｏｃｓｏ４ｏｎｏｅｅｉｔｔｎｈｅｃｉｍａｏｔ，ｎｅｄｔｔｎｒｅａｉｅ．Ｃｎｌｉｎｄ５０ｐｎｍｉｅｏｉｏＣｓｅｈｅｉａｇｕ
Ｄｅｅｔｎｏ５ｅｅｐｉｔｍｕａｉｎｉｎａｃｒｔｓｅｂａｉａｙｔｃｉｆｐ３ｇｎｏｎｔｔｎｌｇｃｎｅｉｕｙｃｐｌｒｏｏｕｓｌｅｅｔｏｈｒｓｓａｄｐｌａｒｌｍｉｅｇｌＩｃｒｐ０ｅｉｌｃｒｐｏｅｉｎｏｙｃａｄｅｅｔＯｈｒｓｓｙｅ

p53基因与蛋白质水平检测技术方法

p53基因与蛋白质水平检测技术方法
检测p53基因和蛋白质水平的常用技术方法有：
1. 基因测序：通过测序技术检测p53基因的DNA序列，从而
确定基因是否存在突变或缺失。

2. PCR（聚合酶链反应）：通过特异性引物扩增p53基因的片段，采用凝胶电泳或实时荧光定量PCR测定扩增产物的数量。

3. Southern印迹：通过限制性内切酶切割DNA并通过凝胶电
泳分离DNA片段，然后将片段转移到膜上并进行特异性探针
杂交，来检测p53基因是否存在缺失或重组。

4. Northern印迹：通过RNA提取、琼脂糖凝胶电泳和探针杂
交技术，来检测p53基因的转录水平。

5. Western印迹：通过蛋白质提取、SDS-PAGE凝胶电泳、膜
转移和抗体识别等步骤，来测定p53蛋白质的表达水平。

6. 免疫组织化学染色：通过对组织标本进行抗体染色，来观察p53蛋白质在组织中的表达。

7. 免疫荧光染色：通过使用荧光标记的抗体与细胞中的p53蛋白质结合，然后通过荧光显微镜观察p53蛋白质的分布和表达情况。

8. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：通过特异性抗体与p53蛋白
质结合，在酶的作用下产生发光或色素反应来测定p53蛋白质的浓度。

9. 质谱法（Mass spectrometry）：通过分析p53蛋白质的质量和碎片谱图，确定蛋白质是否含有突变。

以上这些方法可以在基础科研和临床实验室中使用，用于检测p53基因和蛋白质的水平，以研究其在细胞内的作用及与疾病的关联。

人类抑癌基因—p53点突变检测方法研究进展

患者表现为烦躁易怒、眠健忘、梦、溃怔忡、晕目失多心头眩、鸣、色潮红、热、汗、燕潮热、膝酸软、耳面低益骨嘎浮肿便德、月经紊乱、志异常、红少苔、弦细数等，医辩证为肝肾情舌脉中阴虚型更年期综合征
１２诊断辨证标准
２临床辨证
根据《药新药临床研究指导原则》更中中
治疗组
年期综合征的诊断标准和中医肝肾阴虚辨证标准４３安全性评价的任何毒副反应。
５讨论
在用药期间和用药结束后均未见本品引起
气醒脾加丰香，药合用共凄补益肝肾、诸养心安神之效，日１每
剂，水煎．２次服，个月为１疗程，洽２个疗程；照冷分１个其对组，乙烯雌酚，．ｒ每目３次，服１月为】疗程．治服０５ａｇ连个个共
３治疗方法治疗组选用六昧地黄丸合二至丸。
更年期是女性从生殖功能，活动由旺盛转人衰退的过渡性时期，必然会带来全身各器官的一系列变化，多数人能通过它太神经系统和内分泌等系统的调节，以较顺利地度过这阶段，可约有１％～２％的人会出现轻重不等的，植物神经系统功能紊５Ｏ乱为主的症候群以往认为更年期综合症与雌激素降低有关，故以补充雌激素为主来治疗本病但临床实践证明，雌激素用治疗往往不能完全解除或减轻症状。本研究也表明．雌激素用治疗的患者，总有救率仅为７．３，选用六味地黄丸合二其３３％而至丸对于中医辩证为肝肾阴虚型更年期综合征具有显著疗效其总有效率达９０，用明显优于对照组，得进一步推广Ｏ０％作值

变性高效液相色谱法对恶性肿瘤患者血浆DNA p53突变的检测

ＤＨＰＬＣｔｃｉｎｏｇｎｅｍｕｔｔｏｎｐａｍａＤＮＡｒｍ０ｍａｉｎａｔｐｔｅｓｄｅｅｔｏｆｐ５ｅ３ａｉｎｉｌｓｆｏ４ｌｇｎａｉｎｔ
ＤｅａｔｅｆＩｔｒｌＭｅｃｎｐｒｍｎｔｏｎｅｎａｄｉｉｅ，ＳｈａｉＰｒｖｎｃａａｎｘｏｉｉｌＣｏｒｓＨｏｐｔｌＣｈｉｅｅｐｓｉａｎｓ
ｍａｉｎｎａｉｎｓｂｓｎＡＧｅｌｏｔａｄｔｅｔｒｅｌａｔｐｔｔｙｕｉｇＱＩｇｅｎＢｏｄＫｉｎｈａｇｔＤＮＡｆａｍｅｔｒｍｐｉｅｂＣＲ，ｔｅｒｇｎｓｗｅｅａｌｉｄｙＰｆｈ
陕西医学杂志２１００年１０月第３卷第１９Ｏ期
１０３７
变性高效液相色谱法对恶性肿瘤患者血浆ＤＮＡ５ｐ３突变的检测
武警陕西总队医院（西安７０５）吕韶敏何利红岳晨莉杨晓燕１０４摘要目的：讨扩增恶性肿瘤患者血浆Ｄ探ＮＡ的可行性，立一种快速检测血浆ＤＮＡ建
ｐｏｕｔｏｒｎｌｚｄｂｅａｕｉｇｈｇｅｆｒｎｅｌｕｄｃｒｍａｏｒｐｙＤＨＰｒｄｃｉｎｗｅｅａａｙｅｙｄｎｔｒｎｉｈｐｒｏｍａｃｉｉｈｏｔｇａｈ（ｑＬＣ）ｔｅｍｕａｉｎｓａｕ，ｈｔｔｔｔｓｏ
ｏｂｔｉｄｙａｎｅｂＤＨＰＬＣｗａｐｒｖｂｙＤＮＡｅｅｅｓｏｅｄｓｑｕｎｃｄ．Ｒｅｕｌｓ：ｓｔＴｈｅａｇｅｆａｔｒｔｒｇｍｅｓｅｅｎｔｗｒｏｂｔｉｄｒａｎｅｆｏｍａｌＩ

基因突变的检测方法

基因突变的检测方法基因突变的检测方法基因突变的研已成为当今生命科学研究的热点之一，检测方法也随之迅速发展.人类细胞癌基因的突变类型已如上所述,对于基因突变的检测，1985以前，利用Southern印迹法，可以筛选出基因的缺失、插入和移码重组等突变形式。

对于用该法法不能检测的突变，只能应用复杂费时的DNA序列测定分析法。

多聚酶链反应（polymerase chain reaction，PCR)技术是突变研究中的最重大进展,使基因突变检测技术有了长足的发展，目前几乎所有的基因突变检测的分子诊断技术都是建立于PCR的基础之上，并且由PCR衍生出的新方法不断出现，目前已达二十余种,自动化程度也愈来愈高，分析时间大大缩短,分析结果的准确性也有很大很提高.其中包括单链构象多态性（single—strand comformational polymorphism,SSCP)和异源双链分析法（heteroduplex analysis，HA）。

下面分别介绍几种PCR衍生技术及经典突变检测方法，可根据检测目的和实验室条件选择时参考。

PCR—SSCP法PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变.其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构,这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率.由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。

用PCR—SSCP法检测小于200bp的PCR产物时，突变检出率可达70％—95％,片段大于400bp时,检出率仅为50％左右，该法可能会存在1％的假阳性率。

应用PCR-SSCP法应注意电泳的最佳条件，一般突变类型对检测的灵敏度无大的影响，同时该法不能测定突变的准确位点,还需通过序列分析来确定。

Sarkar等认为对于大于200bp的片段，用其RNA分子来做SSCP会提高其录敏度。

乳腺癌的基因突变与预后评估

乳腺癌的基因突变与预后评估乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，也影响着全球范围内大量女性的身心健康。

然而，乳腺癌的病因复杂多样，不同基因的突变与预后评估关系密切，为科学预防与个体化治疗提供了重要依据。

因此，本文将探讨乳腺癌基因突变与预后评估的研究进展，为临床实践提供参考。

一、乳腺癌基因突变的类型和影响1. BRCA基因突变BRCA基因是BRCA1和BRCA2两个不可或缺的乳腺癌抑制基因，其突变与乳腺癌的发生有密切关联。

BRCA基因突变可导致DNA损伤修复功能异常，进而增加乳腺癌的发生风险。

同时，乳腺癌患者中BRCA基因突变还与较年轻的发病年龄、家族病史以及双侧乳腺癌的发生等特征相关。

2. PIK3CA基因突变PIK3CA基因突变是乳腺癌中最常见的基因突变之一，其突变频率高达30%至40%。

PIK3CA基因编码的蛋白激酶与PI3K信号通路相关，通过调节细胞增殖、存活和凋亡等功能对乳腺组织的正常生理过程发挥作用。

PIK3CA基因突变可导致PI3K信号通路过度活化，从而促进乳腺癌细胞的生长和存活，与患者预后不良相关。

3. TP53基因突变TP53基因被称为“癌症的守门人”，其突变在多种肿瘤中发生频率较高，包括乳腺癌。

TP53基因突变导致了p53蛋白功能的丧失，进而增加了肿瘤细胞抵抗凋亡、增殖和侵袭的能力，与乳腺癌的恶性程度和预后密切相关。

二、乳腺癌基因突变的检测方法1. 基因组测序基因组测序技术的发展使得全基因组水平的突变分析成为可能。

通过基因组测序技术，可以发现乳腺癌基因的突变，并进行预后评估。

这种方法能够全面观察乳腺癌基因的突变情况，为个体化治疗提供精准的依据。

2. PCR扩增和测序PCR扩增和测序技术是常用的突变检测方法之一。

通过PCR扩增乳腺癌相关基因的特定区域，然后使用测序技术进行突变检测。

这种方法操作简单，且具有较高的灵敏度和特异性，常用于临床实践中的乳腺癌突变检测。

三、乳腺癌基因突变与预后评估的临床意义乳腺癌基因突变的类型和频率与患者的预后评估密切相关。

子宫内膜癌p53突变诊断标准

子宫内膜癌p53突变诊断标准
子宫内膜癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，其诊断标准主要包括以下几个方面：
1. 临床表现：子宫内膜癌患者可能会出现阴道不规则流血、腹痛、阴道分泌物增多等症状。

2. 病理学检查：子宫内膜癌的确诊需要依靠病理学检查，包括子宫内膜活检、宫腔镜活检等。

病理学检查可以确定肿瘤的性质、分化程度、浸润深度等。

3. 影像学检查：影像学检查可以帮助医生了解肿瘤的大小、形态、位置以及是否有转移等情况，常用的影像学检查包括超声、CT、MRI等。

4. 血清肿瘤标志物：部分子宫内膜癌患者可能会出现血清肿瘤标志物升高，如CA125、CEA等，但血清肿瘤标志物不是子宫内膜癌的特异性诊断指标。

对于p53突变，它是子宫内膜癌的一个基因突变类型，但并不是子宫内膜
癌的特异性诊断指标。

p53突变可以出现在多种恶性肿瘤中，因此不能仅凭p53突变诊断子宫内膜癌。

综上所述，子宫内膜癌的诊断需要综合考虑临床表现、病理学检查、影像学检查和血清肿瘤标志物等多个方面的因素，而p53突变只是其中的一个方面。

如果您有相关症状或疑虑，建议及时就医进行检查和治疗。

p53基因序列

p53基因序列P53基因是一种常见的肿瘤抑制基因，它位于人类染色体17p13.1区域。

该基因编码的蛋白质p53是一种转录因子，可以调控细胞周期、DNA修复、凋亡等多个生物过程。

在正常情况下，p53蛋白质的水平很低，但当细胞遭受DNA损伤或其他压力时，p53的水平会迅速上升，进而引发一系列反应来保护细胞免受损害。

然而，在许多类型的癌症中，p53基因突变导致其功能丧失或严重受损，从而使得肿瘤细胞能够逃避正常的生长抑制和凋亡机制。

一、P53基因序列特点1. 基因长度： P53基因全长约20kb。

2. 编码区： P53基因编码区域共有11个外显子（exon），编码一个393个氨基酸残基组成的蛋白质。

3. 调控区： P53基因调控区包括启动子（promoter）、增强子（enhancer）和转录因子结合位点等。

4. 突变热点：P53基因突变热点主要分布在编码区的第5-8个外显子，其中第7个外显子是最常见的突变位点。

二、P53基因功能1. 细胞周期调控： P53蛋白质可以通过激活p21、GADD45等基因来抑制细胞周期的进程，从而使细胞停留在G1/S或G2/M期，以便进行DNA修复或凋亡。

2. DNA修复： P53蛋白质可以通过激活XRCC5、BRCA1等DNA修复相关基因来促进DNA双链断裂的修复。

3. 凋亡调控： P53蛋白质可以通过激活BAX、PUMA等凋亡相关基因来诱导细胞凋亡，从而消除受损细胞。

4. 代谢调节： P53蛋白质可以通过调节AMPK、PGC-1α等代谢相关基因来影响细胞能量代谢和氧化应激反应。

三、P53基因突变与肿瘤1. 突变频率：在多种类型的癌症中，P53基因突变的频率高达50%-70%以上。

其中最常见的突变类型是错义突变和无义突变，导致p53蛋白质的稳定性和功能受损。

2. 功能丧失： P53基因突变会导致p53蛋白质的功能丧失或严重受损，从而使得肿瘤细胞能够逃避正常的生长抑制和凋亡机制。

p53基因克隆表达及其活性测定

作者签｝＇４ａ一ＴＡＨ期 ’ ０１，歹／ ‘
论文使用授权说明
本人完全了解上海师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。
卖验证明，通过原核表达的Ｐ５３蛋白具有较高的活性，在体外分
析时发现Ｐ５３蛋白能抑制Ｋ５６２细胞生长并促使其发生凋亡。本实验为寻找新型抗肿瘤基因工程药提供可靠的数据和资料。
关键词：ｐ５３基因基因克隆细胞凋亡荧光磁性纳米粒子
Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ５３ｇｅｎｅａｎｄｉｔｓａｃｔｉｖｅｔｅｓｔ
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐ５３ｇｅｎｅ，ｇｅｎｅｃｌｏｎｅ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｍａｇｎｅｔｉｃｎａｎｏｍｅｔｅｒｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ
ｖ
论文独创性声明
本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构己经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均己在论文中做了明确的声明并表示了谢意。
ｍａｇｎｅｔｉｃｎａｎｏｍｅｔｅｒｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅｔｏｌｉｎｋｗｉｔｈｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎ（ＭＮＰ－ＮＨｚＰ５３）

p53基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）说明书

p53基因检测试剂盒（荧光原位杂交法）说明书【产品名称】通用名称：p53基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）英文名称：FISH detection Kit for the p53 gene【包装规格】10人份/盒、20人份/盒【预期用途】本产品用于检血液、骨髓、尿液等组织样本中细胞p53基因缺失情况。

以辅助诊断和治疗。

【检验原理】荧光原位杂交法（Fluorescent In Situ Hybridization，FISH）能够使细胞中特定的核苷酸片段通过荧光而清楚的呈现，FISH试验过程中包含了双链DNA的解链，荧光标记的DNA探针能够与目标序列结合[2-3]。

杂交完成之后，多余的探针被清洗掉，同时，细胞核被复染剂4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色会发出蓝色的荧光。

本试剂盒包含一组探针：CEP17(绿色)位点和p53（红色）位点及FISH操作配套试剂。

正常细胞信号方式：每个细胞显示两个绿色信号及两个红色信号（即2G2R）。

异常细胞信号方式：细胞中出现两个绿色信号且红色信号少于两个。

【主要组成成分】【储存条件及有效期】p53/CEP17探针及DAPI于-20℃避光、密封储存；不应与有毒、有污染和有不良气味的物品混存；开封后，探针及DAPI 24小时内可在2-8℃避光、密封储存；24小时内不能使用完的，请放置于-20℃±3℃避光、密封储存；自生产之日起有效期为一年。

【适用仪器】本试剂盒探针杂交需在杂交仪上进行杂交，如ThermoBrite。

本试剂盒探针需在荧光显微镜下观察并分析结果。

所需荧光显微镜的配置包括：物镜：在FISH分析上，使用100×消色差浸油类型物镜可取得满意效果。

镜油：在浸油式物镜上使用的镜油应为低水平自发荧光配方，并专门在荧光显微镜上使用。

滤光片：建议客户处客使用探针前向滤片组供应商了解所使用的滤片组的详细情况，以便选择与标记荧光染料相适应的滤片组。

p53基因突变在胃癌组织中的检测及临床意义

的变化。癌变是多基因相互协同作用的过程，ｒａｓ基因与ｐ５３基
因在此过程中有协同致癌的可能，尚待进一步研究。
（本文图１，２见插页Ｉ）
８．０％，Ｐ＜０．０５，差异有统计学意义。具体见图２。
突变所在的位点。
型Ｐ５３抑制肿瘤增殖的作用，而且突变本身又使得该基因具备
了癌基因的功能。突变后的Ｐ５３蛋白与野生型Ｐ５３蛋白相结
１．５统计学方法
应用ＳＰＳＳ１１．５版统计学软件对实验数据进
合，形成不能结合ＤＮＡ的寡聚蛋白，这使得一些癌基因转录失
控，进而导致肿瘤的发生。综上所述，ｐ５３基因突变在胃癌发生过程中较为常见，也可能占据主要地位。胃癌的发生可能是ｐ５３基因的突变导致Ｐ５３蛋白异常积累的结果。本研究中所涉及的部分病例出现了ｐ５３
行，反应条件为预变性９４ ℃３ｍｉｎ；９４￣Ｃ３０ｓ，６２￣Ｃ４５ｓ，７２￣Ｃ３０ｓ，２８个循环；最后７２ ℃延长５ｍｉｎ。扩增产物置于一２０ ℃ 冰箱中保存备用。
潍坊医学院学报
２０１３年
第３５卷
第２期
１３７
２０ ℃保存备用。１．４．２ＰＣＲ扩增反应ｐ５３扩增以胃组织所提取的ＤＮＡ为模板进行，反应体系为５０１ｘｌ，模板ＤＮＡ为２ｌｘｌ，于ＰＣＲ扩增仪中进

脑胶质瘤分子标志物IDH1、IDH2、p53基因突变和Ki-67蛋白表达与病理分级临床特征的关系

脑胶质瘤分子标志物IDH1、IDH2、p53基因突变和Ki-67蛋白表达与病理分级临床特征的关系孙怡;李惠;吴颐;李健;申龙树;王耀辉;王剑蓉;章宜芬【摘要】目的通过联合检测脑胶质瘤样本异柠檬酸脱氢酶1、2(IDH1、IDH2)基因突变/p53基因突变以及Ki-67蛋白表达情况,明确不同脑胶质瘤基因型特征,探讨其表达与胶质瘤病理分级和临床特征的相关性,为临床诊断与治疗提供分子病理学依据.方法采用直接测序法检测46例胶质瘤样本IDHl基因第132位密码子、IDH2基因第172位密码子突变及p53基因第5~8外显子突变,免疫组织化学方法检测样本Ki-67蛋白表达,分析分子标志物与样本临床特征和病理分级相关情况.结果共检出32.6%(15/46)的样本发生IDH1基因R132H突变,WHOⅡ~Ⅳ级样本中突变率分别为40.0%、58.3%、17.4%,IDH1基因突变与较低年龄(P=0.028)、肿瘤位置发生于额叶(P=0.002)、WHOⅡ~Ⅲ级组织学分级(P=0.047)、Ki-67蛋白低表达(P=0.034)显著相关;检出4例胶质母细胞瘤样本发生p53基因突变,突变位点位于第7、8外显子,并伴IDH1基因野生型;所有样本Ki-67均有阳性表达,在Ⅱ~Ⅳ级胶质瘤中Ki-67表达呈上升趋势,不同级别胶质瘤间Ki-67阳性表达程度有统计学差异(P<0.01),Ki-67低表达组IDH1突变率高于Ki-67高表达组,IDH1基因突变与Ki-67表达呈负相关.结论不同病理分型胶质瘤的IDH1基因突变比例存在差异,在WHOⅡ~Ⅲ级中最高,IDH1、Ki-67表达水平与胶质瘤分级密切相关,p53基因突变在原发性胶质母细胞瘤中更常见,IDH1、p53、Ki-67联合检测有利于胶质瘤的诊断分级和预后评估,具有一定的临床价值.%Objective To investigate the mutations of IDH1,IDH2,p53 gene,and Ki-67 protein expression in different grade of gliomas and identify the association with its clinical relevance. Methods The mutations of IDH1,IDH2 and p53 gene were detected bydirect DNA sequencing,and protein expression of Ki-67 was analyzed by immunohistochemistry. The correlations between gender,age,tumor site,differentiation degree and pathological type of patients were analyzed. Results R132H mutation of IDH1 gene was detected in 32.6% samples (14/46 cases),of which the proportion of WHO classification grade Ⅱ was 40.0%,and grade Ⅲ was 58.3%. IDH1 mutations were shown correlated with age,pathology level Ⅱ-Ⅲ,and Ki-67 low expression. p53 mutations were detected in 4 glioblastomas,with mutations located at exon 7,8. IDH1 gene mutation was negatively correlated with Ki-67 expression. Conclusions The proportion of IDH1 gene mutation in different pathological types of gliomas is different,which is the highest ingradeⅡ~Ⅲ. It is suggested that the subtypes should be listed independently by routine tests. Mutations in p53 gene are more common in primary glioblastomas and may be associated with adverse outcomes. The combined detection of DH1,p53 and Ki-67 is conducive to the diagnosis and prognosis of glioma.【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2018(034)009【总页数】5页(P1455-1459)【关键词】胶质瘤;突变;IDH1;IDH2;p53;Ki-67【作者】孙怡;李惠;吴颐;李健;申龙树;王耀辉;王剑蓉;章宜芬【作者单位】南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院神经外科南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院神经外科南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029【正文语种】中文胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，其发病率约占原发性脑肿瘤的40%～50%左右，而且呈逐年上升趋势［1-2］。

非小细胞肺癌患者外周血细胞中p53基因突变的研究

ｗｅｅｄｔｃｅｎｂｏｒｍ２ｏ２ＮＳＣｐｔｎｓｔＳｍｕａｉｎｒｔｓ３．．ｒｅｅｔｄｉｌｏｆｄｏ１ｆＣＬａｉｔ．ｉｔｔａｅｗａ７５％．Ｔｈ５ｅｅｍｕａｉｎｒｏｎｎｂｏｄｏ３ｅｏｅｐ３ｇｎｔｔｓｗｅｅｆｕｄｉｌｏｏｆ
患者和３例健康者的外周血标本，Ｏ采用ＰＲ结合ＤＡ测序方法检测血标本中ｐ３基因突变，ＣＮ５然后进行统计学分析。结果患者血液ｐ３５基因突变率在（Ｉ＋１）Ｉ期为９１（１＋Ｉ）．％、１Ｖ期为５．％，Ｉ２４差异有统计学意义（００）Ｐ＜．５。结论
Ｔｅｐ３ｇｎｔｔｎｉｅｉｈｒｌｌｄｃｌｆｎｎ—ｓｌｃｌｌｎａｃｒｐｆｎａｄｉｌｉｌｉｎｆｈＳｅｅｍｕａｉｐｒｐｅａｏｅｓｏｏｏｎｂｏｌｍａｌｅｇｃｎｅａｅ￣ｎｓｃｉｃｇｉ－ｕｉｔｎａｓｉ
ｃｃｒＮＣＣａｅｔ．ＭｅｈｄＰｒｈｒｌｄｓｍｐｅｆ２ＮＣＣｐｔｎｓａｄ３ｅｔｏｎｅｒｗｒｏｅｔｄ５ｅｅｎａｅ（ＳＬ）ｐｔｎｓｉｔｏｓｅｐｅａｂｏａｌｓＳＬａｉｔｎ０ｈａｈｖｌｔｅｓｅｅｃｌｃｅ．ｐ３ｇｎｉｌｏｏ３ｅｌｙｕｌｍｕａｏｎｂｏｄＷｓｄｔｔｙｐｌｍｒｓｈｉｒａｔｎ（Ｃ）ｄＤＡｓｑｅｃｎｅｈｄｔｉｎｉｌａｅｅｅｂｏｅａｅｃａｎｅｃｏＰＲａＮｅｕｎｉｇｍｔｏ．Ｒ‘ ｔ ① Ｔｅｐ３ｇｎｔｔｎｔｃｄｙｉｎ则ｓｈ５ｅｅｍｕａｏｓｉ

tp53突变调控基因表达的研究方法

tp53突变调控基因表达的研究方法TP53基因又称为P53，是一种抑癌基因，该基因编码一种分子量为53kDa 的蛋白质。

细胞中抑制癌变的基因"TP53"会判断DNA变异的程度，如果变异较小，这种基因就促使细胞自我修复，若DNA变异较大，"TP53"就诱导细胞凋亡。

在人的基因里面，TP53是非常重要的抑癌基因，在正常细胞中低表达，在恶性肿瘤中高表达。

关于TP53突变调控基因表达的研究方法，主要可以参考以下步骤：1. 确定研究目的：了解TP53突变对基因表达的调控作用，以及这种调控作用对细胞生长、增殖和损伤修复的影响。

2. 收集样本：收集具有TP53突变和正常TP53基因的细胞样本，以及相应的正常细胞样本作为对照。

3. 基因表达分析：通过基因表达谱分析技术，比较突变和正常细胞样本中基因表达水平的差异。

这可以通过微阵列技术、高通量测序等技术实现。

4. 数据分析：对基因表达谱数据进行统计分析，找出TP53突变对基因表达的影响。

包括对差异表达基因的筛选、聚类分析、功能注释等。

5. 实验验证：对于筛选出的差异表达基因，可以通过进一步的实验验证TP53突变对其调控作用。

例如，使用荧光定量PCR、Western blot等技术验证基因的表达水平。

6. 功能研究：深入研究TP53突变对细胞生长、增殖和损伤修复的影响，可以通过细胞生物学实验、动物模型等手段进行。

7. 结果分析：综合分析实验结果，理解TP53突变对基因表达的调控机制及其对细胞生长、增殖和损伤修复的影响。

8. 撰写论文：将研究结果整理成论文，并按照学术规范进行撰写和发表。

通过以上步骤，可以对TP53突变调控基因表达进行深入研究，为癌症治疗提供新的思路和靶点。

不过请注意，具体的研究方法可能因实验室条件、研究目的和样本来源等因素而有所不同，请根据实际情况进行调整。

同时，也需要注意遵守学术道德和规范，确保研究的准确性和可靠性。

胃癌组织中p53基因突变及蛋白表达的研究

维普资讯
贵州医药２００７年２月第３１卷第２期
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胃癌组织中ｐ５３基因突变及蛋白表达的研究
贵阳医学院病理教研室（５５０００４）于燕妮陈中ｐ５３基因第５～８外显子突变率及ｐ５３蛋白的表达。方法应用聚合酶链反应一单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和银染技术，对３Ｏ例胃癌石蜡包埋组织中ｐ５３基因第５～８外显子突变率进行检测；同时应用免疫组织化学Ｅｎｖｉｓｉｏｎ二步法检测胃癌组织中ｐ５３的表达水平。结果３Ｏ例胃癌石蜡标本中有ｌ１例发生ｐ５３基因的突变，突变率为３６．６７。病理组织学观察胃癌中乳头状腺癌／管状腺癌（分化较好）１６例，低分化腺癌／印戒细胞癌（分化较差）１４例。ｐ５３蛋白随胃癌的分化程度降低而增加，阳性表达率递增（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论胃癌组织中ｐ５３基因突变及ｐ５３蛋白高表达在胃癌的发生中有重要的作用及意义。从石蜡包埋组织中提取ＤＮＡ进行分子生物
学检测适用于肿瘤研究。
关键词胃癌ｐ５３基因聚合酶链反应一单链构象多态性分析第５～８外显子突变
Ｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｐ５３ｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎａｎｄｐ５３ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａＹｕＹａｎｎｉ，ＣｈｅＴ＂ｌＹａｎｇ。Ｈ “Ｊｕｎ，ｅｔａ１．ＧｕｉｙａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４
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