脐带血有核细胞不同提取和保存方法的比较
脐血造血干细胞分离方法的实验研究
脐血造血干细胞分离方法的实验研究作者：王永娟来源：《科学与财富》2018年第18期摘要：脐血作为一种造血干细胞来源可替代骨髓进行造血干细胞移植，脐血移植在治疗儿童遗传性疾病和血液病方面取得了巨大的成效。
为进一步推广脐血移植，必须相应地建立起完备的脐血库。
脐血库不同于骨髓库，它必须冻存实物。
为减少冻存体积，降低成本，需要采取有效的方法分离脐血中有核细胞，从而使大规模、广泛地建立脐血库成为可能。
本文对脐血造血干细胞分离进行实验研究分析。
引言脐带血（umbilical cord blood，UCB）是产后留存在胎盘和脐带中的血液，以往被作为医学废物而丢弃。
近十几年的研究发现，人脐带中存在大量间充质干细胞，间充质干细胞（mesenchymal sterncells，MSCs）是成体干细胞的一种，具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能，可以重建人体造血和免疫系统的造血干/祖细胞，可用于造血干细胞移植，治疗多种疾病。
一、试验方法1.1脐带血造血干细胞分离利用离心沉降法和自然沉降法分离脐带血有核细胞，计算有核细胞回收率和红细胞回收率，比较两种分离方法的分离效果。
离心沉降法：将6%的羟乙基淀粉注射液和脐带血按照1∶5的比例混合，慢速摇匀10min，以50g、10℃离心7min，收集上层富白细胞血浆，再以400g、10℃离心15min，去除血浆。
自然沉降法：将6%的羟乙基淀粉注射液和脐带血按照1：5的比例混合，慢速摇匀10min，悬挂让其内细胞自然沉降1h后，收集上层富白细胞血浆，同样以400g、10℃离心15min，去除血浆。
1.2脐带血造血干细胞冻存将分离后的脐带血分别与4种不同的冷冻保护剂混合，脐带血与冷冻保护剂的体积比为4∶1，混合时应将冷冻保护剂缓慢注入脐带血中，边注入边晃动。
用程控降温仪按以下程序降温，4℃保持10min，以-1℃/min的速率降温至-40℃，再以-10℃/min的速率降温至-80℃，完成后将脐带血混合物放入液氮罐中储存。
多种分离方法分离脐血造血细胞效率的比较
多种分离方法分离脐血造血细胞效率的比较目的：比较多种分离方法分离脐血造血细胞的效率。
方法：依据随机方法将133例脐血标本分为3组，A组选择HES法，B组选择Ficoll法，C组选择明胶法。
所有标本均进行CD34+细胞检测，同时进行造血祖细胞体外培养。
结果：A 组CD34+细胞产率明显高于B组，C组CD34+细胞产率明显高于B组，A组CD34+细胞产率明显C组，组间两两比较差异有统計学意义（P＜0.05）；A组CFCs产率明显高于B组，C组CFCs产率明显高于B组，A组CFCs产率明显C 组，组间两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论：在分离脐血造血细胞过程中，HES法的分离效率高于HES法、明胶法。
标签：脐血造血细胞；HES法；Ficoll法；明胶法；效率脐血造血细胞分离是脐血移植过程中的重要环节，也是脐血库建立的关键性步骤，对血液病患者的疾病治疗有着重要的作用。
目前，最常见的脐血造血细胞分离方法为HES法、Ficoll法、明胶法，其中HES法的分离效率较高，其体积浓缩效果较好。
本研究将133例脐血标本分为3组，3组分别应用HES法、Ficoll 法及明胶法，比较3组的分离效果，现报道如下。
1 材料与方法1.1 材料本研究共133例脐血标本，均由我市某医院妇产科提供，脐血标本采集量50.2-140.5ml，平均81.7ml。
标本采集后保存于4℃的温度条件下，保存时间控制在24h之内。
依据随机方法，将133例脐血标本分为3组，A组45例，B组44例，C组44例。
1.2 方法1.2.1 HES法A组45例标本选择HES法，即在整份脐血中加入25%的羟乙基淀粉60g/L，混合均匀后进行500r/min离心处理，时间控制在5min，之后去掉红细胞，再进行1200r/min离心处理，时间控制在13min，将部分血浆去掉，确保体积浓缩至25ml左右，最后将白细胞重悬在剩余的血浆中。
1.2.2 Ficoll法B组44例标本选择Ficoll法，即选择Ficoll 10ml，相对密度为1.077，将其置于离心管（50ml）中。
脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较
脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较李昕;张勇;陈方平;张国平【期刊名称】《中南大学学报（医学版）》【年(卷),期】2002(027)006【摘要】目的:比较程控降温和-70℃冰箱直接保存脐血造血细胞对细胞活性的影响及免疫磁珠分离法对细胞生物学活性的影响. 方法: 用密度梯度离心法分离出脐血中单个核细胞后,采用联合冷冻保护剂经程控降温后存放于液氮和直接存放于-70℃冰箱两种方法冷冻保存一个月,从细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率等方面比较这两种冷冻方法的优劣.另外,用免疫磁珠分离法正性分选脐带血中CD34+细胞,流式细胞仪计数分选前后的CD34+细胞的纯度及回收率,并分别进行分选前后的细胞培养.结果:细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率在冷冻的两组间差异不显著.用免疫磁珠分选后CD34+细胞纯度达88.3%, 回收率为46.2%,分选后的CD34+细胞比分选后CD34-细胞的细胞活力及集落形成能力明显要高.结论:两种方法均可对脐血造血细胞进行保存.免疫磁珠分选法能够提供高纯度的造血干细胞,其分选过程不会影响细胞的活力及集落形成能力, 为CD34+细胞分选和移植的临床应用提供实验依据.【总页数】4页(P563-566)【作者】李昕;张勇;陈方平;张国平【作者单位】中南大学湘雅医院血液科,长沙,410008;中南大学湘雅医院血液科,长沙,410008;中南大学湘雅医院血液科,长沙,410008;中南大学湘雅医院血液科,长沙,410008【正文语种】中文【中图分类】R331.14【相关文献】1.脐血内皮细胞对脐血早期造血细胞的体外扩增作用 [J], 尹利明;程腊梅;王绮如;谭孟群2.脐血采集方式对脐血造血细胞含量的影响 [J], 许遵鹏;廖灿;陈劲松;辜少玲;吴洁莹;白雪3.脐血造血细胞培养与脐血治疗再生障碍性贫血的疗效 [J], 李敬兰;李玉明;谢景荣;曹金霓4.人脐血贴壁层细胞对脐血造血细胞体外扩增的作用 [J], 鞠晓红;赵珍谊;方芳;马爱新5.当归多糖对脐血造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究 [J], 杨慧;吴宏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脐带血造血干细胞的分离和冷冻保存研究
脐带血造血干细胞的分离和冷冻保存研究韩俊领;赵英新;武文杰;伍盛举;杨俊晔;邱录贵【期刊名称】《生物医学工程与临床》【年(卷),期】2005(9)5【摘要】目的探讨为临床移植有效地分离和冷冻保存无关供者脐带血中的造血干细胞的方法。
方法将由普通或改进的两种不同采集袋采集的脐带血,用两步离心法分离、浓缩脐带血中的有核细胞,用BioArchive System(生物档案系统)或常规的程控降温系统将之冷冻,保存在-196℃液氮中。
用流式细胞术和细胞培养法检测脐带血中的CD34+细胞和造血祖细胞含量。
结果脐带血用改进的采集袋分离后,有核细胞和红细胞的回收率分别为86.4%±4.6%和44.2%±9.6%,而普通采集袋的回收率为78.4%±7.9%和49.8%±11.7%;将富含有核细胞悬液的体积浓缩到20 ml时,有核细胞和红细胞的回收率分别为74.62±9.3%和34.9%±19.1%,浓缩体积为32 ml 回收率为86.4%±4.6%和45.1%±7.8%/但两者的CD34+细胞和造血祖细胞的回收率无统计学意义;冷冻脐带血融化后有核细胞、CD34+细胞和CFU-C回收率分别为84.2%±10.1%、96.0%±21.8%和115.1%±23.3%。
苔盼蓝拒染率93.8%±4.4%。
结论改进的采集袋能够明显提高有核细胞回收率。
采用两步离心法和两种冻存方法能够有效地富集和冻存脐带血中的造血干细胞。
【总页数】4页(P301-304)【关键词】脐带血;造血干细胞;分离;冷冻保存【作者】韩俊领;赵英新;武文杰;伍盛举;杨俊晔;邱录贵【作者单位】中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所天津市脐带血造血干细胞库【正文语种】中文【中图分类】R318.12【相关文献】1.脐带血造血干细胞采集、分离和冷冻保存研究 [J], 刘忠;孙自敏;吕蓉;李敏;郭晓睫;方勤;周学勇;刘会兰;丁利;杨红友2.脐带血造血干细胞的采集、浓缩与低温冷冻保存 [J], 刘开彦;高志勇;姜永军;董文川;李丹;王逸兰;黄宁伟;陆道培3.移植有效地分离和冷冻保存脐带血中的造血干细胞 [J], 杨俊晔;张亚斌;王福喜4.不同分离方法对脐带血造血干细胞分离及冷冻保存效果的影响 [J], 郭丽玮5.脐带血造血干细胞的分离和冷冻保存研究 [J], 韩俊领;赵英新;武文杰;伍盛举;杨俊晔;邱录贵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
干细胞提取与保存的技巧与方法
干细胞提取与保存的技巧与方法干细胞是一类具有自我更新和分化为多种细胞类型的细胞，具有巨大的潜力在医学和生物学领域中应用。
干细胞的提取和保存是关键的步骤，本文将介绍干细胞提取和保存的技巧与方法。
一、干细胞提取的技巧与方法1. 骨髓提取法：这是一种常用的干细胞提取方法。
通过无痛穿刺骨髓髓腔，将骨髓液抽取出来。
在抽取骨髓液之前，患者通常接受麻醉以减轻不适感。
骨髓液中富含造血干细胞，是一种常见且具有较高干细胞含量的来源。
2. 脐带血提取法：脐带血也是一种常见的干细胞来源。
在新生儿出生后，由医生采集脐带血样本。
脐带血中的干细胞数量较多且易于提取，因此被广泛应用于临床治疗。
这种方法对于新生儿和脐带血样本的采集具有一定要求，需要专业的医生或护士进行操作。
3. 脂肪组织提取法：越来越多的研究表明，脂肪组织中也存在干细胞。
通过脂肪吸取手术，可以从脂肪组织中提取干细胞。
脂肪组织中的干细胞具有较高的分化潜能和自我更新能力，因此被广泛研究和应用于再生医学。
4. 神经组织提取法：对于神经组织相关的疾病研究，干细胞的提取通常需要从神经组织中进行。
这种方法通常需要进行手术操作，因此对于患者和医生来说都具有一定的风险与挑战。
但是，神经组织中的干细胞对于神经系统疾病的治疗具有重要意义。
二、干细胞保存的技巧与方法1. 冷冻保存：这是最常用的干细胞保存方法之一。
在提取干细胞后，将其以低温冷冻储存。
一般情况下，干细胞在-196℃的液氮中冷冻保存，以确保其长期保存和保持其功能。
在冷冻保存过程中，需要特殊的冷冻冻存液和冷冻设备，操作时需小心谨慎，避免细胞损伤。
2. 固体冻干法：这是一种相对较新的干细胞保存方法。
干细胞在低温下冷冻后，通过冻干设备将水分从细胞中去除，然后将细胞以固体形式保存。
这种方法可以避免细胞在冷冻和解冻过程中的冰晶损伤，并能够长期保存细胞的活性。
3. 混合保存法：有些干细胞存储公司提供混合保存的方法，即将干细胞保存在液氮中冷冻，并同时保存一小部分细胞的活体状态。
脐血单个核细胞分离方法的比较及形态学改变
脐血单个核细胞分离方法的比较及形态学改变作者：李敏,张季红,徐佩茹作者单位：新疆医科大学第一附属医院，新疆乌鲁木齐830011【摘要】目的:探索一种简便、高效的脐血单个核细胞分离方法。
方法:以Ficoll密度梯度离心法与羟乙基淀粉(HES)分离法进行对比,比较两种分离方法分离脐血所得的单个核细胞(MNC)细胞数，并观察两组单个核细胞不同培养时间下形态学变化。
结果:两种分离方法在分离脐血MNC方面存在着显著性差异,其中以HES法效果较好,但HES法所得细胞培养后生长状态欠佳。
结论：HES法是一种高效的脐血单个核细胞分离方法,但该法所得细胞的生长状态欠佳，需进一步实验证实。
【关键词】脐血/胎血;单个核细胞;分离Comparison the differences of two isolation methods of mononuclear cells derived from human cord blood and observation of morphology changesLI Min，ZHANG Ji-hong,XU Pei-ru(Department of Pediatrics,First Affiliated Hospital,Xinjiang MedicalUniversity,Urumqi830011,China)Abstract:Objective:To explore an convenient and high-performance isolation method of mononuclear cells derived from human cord blood.Methods:The isolation methods including the hespan isolation and Ficoll isolation were analyzed by mononuclear cells amount.The morphology changes of cells in different isolation methods were observed. Results:The hespan isolation was better than Ficoll isolation in isolation of mononuclear cells derived from human cord blood.But mononuclear cells growth condition was below the mark from the hespan isolation.Conclusion:The hespan isolation was ahigh-performance isolation method of mononuclear cells derived from human cord blood. But mononuclear cells growth condition was below the mark and need further confirm by experiment.Key words:Human cord blood;mononuclear cell;isolation近年来,脐血（umbilical cord blood,UCB）已成为除骨髓以外的重要间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)来源,具有来源更为充足、免疫原性更弱、供者无痛苦、不涉及伦理问题、传播疾病的几率低、含有的干细胞丰富等优点。
脐血采集和保存的实用问题
脐血采集和保存的实用问题
李聪;漆洪波
【期刊名称】《实用妇产科杂志》
【年(卷),期】2009(025)004
【摘要】脐血含有大量的造血干细胞,在特定的条件下,经刺激诱导,可分化为特定的细胞。
目前干细胞是基因治疗法最理想的靶向细胞,一旦干细胞被导人异源基因,这种基因就会随着干细胞的自我复制和分化而终生表达。
脐血干细胞移植可弥补骨髓及外周血造血干细胞移植的不足,脐血可替代骨髓及外周血进行干细胞移植。
1988年,世界首例脐血干细胞移植在法国成功实施,开始了脐血干细胞移植临床应用的新纪元。
欧美许多国家已经建立了庞大的脐血库用于保存脐血,为了统一认识和规范化操作,美国妇产科医师协会（ACOG,2008年）和加拿大妇产科医师协会（SOGC,2005年）相继发布了脐血保存的建议或指南。
【总页数】3页(P207-209)
【作者】李聪;漆洪波
【作者单位】重庆医科大学附属第一医院,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院,重庆,400016
【正文语种】中文
【中图分类】R714
【相关文献】
1.脐血采集方式对脐血造血细胞含量的影响 [J], 许遵鹏;廖灿;陈劲松;辜少玲;吴洁莹;白雪
2.密闭式采血法采集脐血应注意的问题 [J], 李茹;张桂婷;邱莉
3.脐血造血干细胞的采集、分离、保存及输入 [J], 钟卫一;牛威林
4.骨髓、脐血、外周血干细胞-80℃保存研究 [J], 范华骅;马庆;柏乃庆
5.脐血的液态保存、运输和低温保存 [J], 赵国胜
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移植有效地分离和冷冻保存脐带血中的造血干细胞
移植有效地分离和冷冻保存脐带血中的造血干细胞摘要】目的：探讨临床移植有效冷冻保存和分离造血干细胞方法。
方法：采取普通、改进两种不同采血袋，采取两步离心法将脐带血的有核细胞分离、浓缩，采取常规程控降温进行冷冻，温度为-196℃的液氮之中，使用细胞培养法、流式细胞术对脐带血里CD34+细胞、造血组织分别进行检测。
结果：使用改进采集方法分离，红细胞、有核细胞的回收率为86.6%、45.2%，普通采集袋中为78.5%、50.2%；可见其方法可有效提高红细胞、有核细胞回收率。
结论：改进采集袋可有效将有核细胞的回收率提高。
两步离心法、两种冷冻保存方法，可有效将保存脐带血的造血干细胞。
【关键词】脐带血分离冷冻保存【中图分类号】R329.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）36-0218-02目前，脐带血中造血干细胞的移植已经成功。
然而，无关供者得造血干细胞移植，必须要有保存规模的血库，并将其有效的保持和分离[1]。
采集脐带血未实施分离，便直接冷冻保存，会增加存在成本与空间，在融化后会出现较多红细胞溶解后产物，在注输时，会对患者的身体造成严重的损害。
为了能够有效的保持脐带血，并节约成本与存储空间，借鉴于其他成功经验，本院也建立了脐带血中造血干细胞血库，实施有效分离、保存方法。
1 资料与方法1.1脐带血标本符合本市脐带血血库标准的共有4865分脐带血，使用二联采集袋，采集袋中含28mlCPDA。
1.2方法脐带血的浓缩、分离，皆采用基本按方法进行。
在解决条件下，将脐带血均匀取样，用于对其中血型、细胞计数、CD34+细胞等各种检测。
将采集的脐带血按照5:1的比例，加入浓度为5%的HES，摇匀后10min，离心8min。
从而对包细胞富含部分手机，以HES加入量，收集15～30g红细胞。
将包细胞血浆放入离心杯，756g，离心14min。
将过量上层血浆去除，降温系统中留31ml包细胞血浆，生物档案留20ml即可。
脐血造血干细胞分离方法
脐血造血干细胞分离方法说实话脐血造血干细胞分离这事，我一开始也是瞎摸索。
我试过好多方法呢，走了不少弯路。
我最早的时候啊，就按照一些书上那种很粗略的说法去做，感觉像是在黑暗里摸东西，根本找不着北。
那时候我想当然地觉得先把脐血收集起来，然后就开始用离心法，我想着这就跟淘米似的，把轻的杂质甩掉，重的干细胞就留下来呗。
结果啊，大错特错，根本不是那么回事。
这样做出来的东西杂质特别多，干细胞的纯度低得可怜。
后来我才知道，收集来的脐血里面成分复杂着呢，不是简单一离心就能搞定的。
再后来我就学乖了。
我在离心之前先进行了一定的预处理，这就好比给菜洗菜似的，先得把表面那些脏东西清理干净。
我会先往脐血里面加一些试剂，这些试剂呢就像是小刷子，能把那些可能影响分离的东西先给标记出来或者中和掉。
比如说，有些蛋白之类的东西会干扰干细胞分离，那这些试剂就能和它们起反应。
然后再进行离心操作就比之前好一点了。
但是这个离心也有讲究。
离心的速度和时间就像煮饭的火候一样，掌握不好可不行。
我试过不同的速度和时间组合。
速度快了时间长了，干细胞虽然能和大部分杂质分开，可是干细胞自身也会受到一定损伤。
速度慢了时间短了呢，又分不开。
我小心翼翼地调整，慢慢找到一个相对合适的范围，但是这个范围也不是固定死的，不同的脐血样本可能在这个基础上还需要微调。
还有一个我不断尝试的地方是过滤。
过滤就像是筛沙子，想把那些颗粒特别大的杂质筛出去。
开始我用的过滤装置孔径选择不好，不是把干细胞挡住了，就是让一些杂质也通过了。
后来经过各种尝试，才确定了比较合适的孔径大小。
不过呢，这个也不是对所有脐血都完全适用，还得根据具体情况来看。
另外，在整个分离过程中，环境因素也很重要。
温度就像给细胞盖的被子一样，如果不合适，细胞也会闹情绪。
我试过如果温度偏低一点或者偏高一点，最后得到的干细胞质量就是会有差别。
我现在明白了，做脐血造血干细胞分离啊，就得像照顾小孩子一样，方方面面都得考虑周到，一个小环节没做好就可能前功尽弃。
将脐带血存储起来,就是为你的家人存储一份生命资源
将脐带血存储起来，就是为你的家人存储一份生命资源
干细胞就好比一颗生命的种子，在一定条件下，能发育成人体各种组织细胞。
而脐带血是一种高质量的造血干细胞来源，越来越多的准父母选择将脐带血存储起来以备不时之需。
脐带血在宝宝出生时采集，存储机会只有一次。
脐带血会被通过一定的冷冻方法保存起来，保证其中的干细胞的功能和活性不受明显的影响。
将新生儿健康的干细胞储存起来，可以在自身或亲属患病时启用，为未来健康提供保障。
存储脐带血不仅可以保障孩子自己的健康，还可以福泽家人。
因为亲属之间组织抗原吻合度较高，所以存储宝宝的干细胞，整个家族也因此受益。
由于干细胞的功能强大，用途广泛，所以被专家们形象地称作“干什么都行的细胞”。
干细胞作为具有复制和多向分化功能的机体起源细胞，对人体发育、衰老和疾病的医治具有巨大作用，干细胞技术成为当今科学领域的研究热点之一。
越来越多的临床证据显示：很多传统医学医治方式无法控制的疾病，比如，神经系统损伤、免疫系统疾病、心脑血管疾病等，药物及手术医治有一定的局限性，需要寻找新的医治方法。
随着科学技术发展，细胞医治作为一种新型的医治方法被赋予无限的希望，其中以干细胞及免疫细胞为主的医治方法，是将健康的干细胞移植到病人体内，让这些健康的干细胞修复病变的细胞，使其恢复正常水平。
经反复研究，其安全性及有效性得到了验证。
随着脐带血造血干细胞移植技术的成熟，在用于恶性疾病方面有了很大进展，一些疑难杂症可以得到不错的治疗效果。
所以，现在很多的家庭存储脐带血就是为了应对未来可能发生的恶性疾病危害，为家人保留一份脐带血即是保留一次生存机会。
父母常问的脐带血储存问题都在这里,准父母应该了解
父母常问的脐带血储存问题都在这里，准父母应该了解
现在为孩子保存脐带血的家庭不断增多，也让我们对于脐带血有了更多的关注，尤其是正在怀孕的准妈妈们，为宝宝存一份脐带血毕竟是件大事，所以很多问题需要在储存之前搞清楚。
脐带血是怎样保存的?
回答：脐带血被采集后经过一系列的检验检测过程最终是被保存在-196℃深低温液氮中进行长期冻存，安全有保障。
冻存脐带血造血干细胞是一项看似简单却极具技术含量的系统工程，脐带血放入液氮正式储存前，为了防止造血干细胞在低温环境中被破损，需要对脐带血加入冷冻保护剂，进行降温处理。
在降温的过程中，要利用专业的计算机程序逐步缓慢降低温度，直至-90℃后才可以转入-196℃深低温液氮中进行长期冻存，方能保证和不影响干细胞的活性。
采集的时候对宝宝和母亲有影响吗?
回答：脐带血的收集是在生产完毕，脐带脱离宝宝后再从中采集的，整个过程对母亲及胎儿都没有任何伤害，是很安全的。
脐带血只有在胎儿出生那一刻才能采集的新鲜血液，无任何辐射和污染。
现代最新的保存技术已与以往的保存技术不能够同日而语，最新的保存技术已用程控降温，添加细胞内、外保护剂等技术克服了以往冷冻时对细胞损伤的情况，从保存技术上说，脐带血造血干细胞能够在脐血库长期保存。
世界范围内，目前脐带血已经用于治疗各种类型白血病、再生障碍性贫血、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、粘多糖病、地中海贫血、骨髓发育不良症候群、原发性免疫缺陷病、慢性肉芽肿等80 多种疾病。
脐血造血干细胞分离方法的实验研究_刘献志
脐血造血干细胞分离方法的实验研究刘献志,刘紫辉1,杨波郑州大学第一附属医院神经外科 郑州市 450052 摘要 目的 优化脐血造血干细胞/祖细胞的分离方法。
方法 脐血按体积比1∶5与含有树脂海绵筛(筛孔直径约12μm )的6%羟乙基淀粉混合,静置60m i n ,提取界面有核细胞。
倒置显微镜下计数有核细胞数,集落培养记数C F U-G M 数,流式细胞仪检测C D 34+细胞数,并与按照标准的羟乙基淀粉沉淀法和淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离的脐血相对照。
结果 采用本实验方法分离脐血获得的有核细胞数、C F U-G M 数和C D 34+细胞数分别为(96.82±25.78)×105/m l ,(66.70±12.47)×105,(1.33±0.57)×105/m l ,明显高于由羟乙基淀粉沉淀法(70.72±20.93)×105/m l ,(28.79±10.25)×105,(1.01±0.36)×105/m l 和淋巴细胞分离液密度梯度离心法(25.33±7.27)×105/m l ,(20.13±7.55)×105,(0.34±0.01)×105/m l 分离的脐血(P <0.05)。
结论 本实验方法可由脐血中分离出大量的造血干/祖细胞,是一种分离脐血造血干/祖细胞的理想方法。
关键词 脐血;造血干细胞;细胞分离 中图分类号:R 458+.8 文献标识码:A 文章编号:1672-3422(2007)05-0052-03O p t i m i z a t i o no f I s o l a t i o no f H e m a t o p o i e t i c S t e m/P r o g e n i t o rC e l l s f r o m U m b i l i c a l C o r dB l o o dL I UX i a n z h i ,L I UZ i h u i ,Y A N GB oT h e F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f Z h e n g z h o u U n i v e r s i t y ,Z h e n g z h o u 450052,C h i n aA B S T R A C T O b j e c t i v e T o o p t i m i z e t h e p r o t o c o l s f o r i s o l a t i n g h e m a t o p o i e t i c s t e m /p r o g e n i t o r c e l l s (H S P C )f r o mu m b i l i c a l c o r d b l o o d (U C B ).M e t h o d s N u c l e a t e d c e l l s (N C )d e r i v e d f r o mU C Bw e r e s e p a r a t e d b y h y d r o x y e t h y l s t a r c h (6%H E S )w h i c h m i x e d w i t h r e s i n s p o n g e (p o r e 12u m ).T h e n u m b e r o f N C ,C F U-G M a n dC D 34+c e l l s w e r ede t e c t e d b y e n u m e r i n g ,c o l o n y c u t u r e a n df l o wc y -t o m e t e r y ,a n dc o m p e r e dw i t h t h a t f r o m U C Bs e p e r a t e db y s t a n d a r d h y d r o x y e t h y l s t a r c h(6%H E S )s e d i m e n t a t i o n o r d e n s i t y g r a d i e n t c e n t r i f u g a t i o n(F i c o l l -H y p a q u e ,1.007g /L ).R e s u l t s T h e n u m -b e r o f N C ,C F U -G M a n d C D 34+c e l l s i s o l a t ed b y o u r me d t h o dw e r e (96.82±25.78)×105/m l ,(66.70±12.47)×105a n d (1.33±0.57)×105/m l r e s p e c t i v e l y ,w h i c h w e r e h i g h e r t h a nt h a t f r o m U C Bi s o l a t e d b y s t a n d a r dh y d r o x y e t h y s t a r c hs e d i m e n t a t i o n(70.72±20.93)×105/m l ,(28.79±10.25)×105,(1.01±0.36)×105/m l o r d e n s i t y g r a d i e n t c e n t r i f u g a t i o n (25.33±7.27)×105/m l ,(20.13±7.55)×105,(0.34±0.01)×105/m l (P <0.05).C o n c l u s i o n I t i s c o n c l u d e d t h a t t h e p r o t o c o l s e s t a b l i s h e d h e r e c a n a c q u i r e H S P Cw i t hh i g ha b u n d a n c e ,e n r i c h m e n t a n dv i a b i l i t y a n dm a y b e a o p t i m a l m e t h o d f o r i s o l a t i n g h e m a t o p o i e t i c s t e m /p r o g e n i t o r c e l l s f r o mu m b i l i c a l c o r d b l o o d .K E Y WO R D S U m b i l i c a l c o r d b l o o d ;H e m a t o p o i e t i c s t e mc e l l ;C e l l s e p a r a t i o n 脐血造血干/祖细胞是造血干细胞移植的一种形式,广泛地应用于治疗血液系统肿瘤性疾病、自身免疫性疾病和某些实体肿瘤等。
脐带血造血干细胞的采集、浓缩与低温冷冻保存
脐带血造血干细胞的采集、浓缩与低温冷冻保存背景：日期：2010-5-11 作者：佚名编辑：exiber 点击次数：15 销售价格：免费论文论文编号：lw201005111438582963论文字数：8000论文属性：职称论文论文地区：中国论文语种：中文收藏： google书签雅虎搜藏百度搜藏新浪vivi 和讯网摘poco网摘天极网摘qq书签饭否mister-wong365网摘LiveDiggDiglog关键词：胎血低温保藏造血干细胞中国论文职称论文P>随着CBT的临床应用推动了CBB的建立。
截止到1998年,美国纽约中心冻存CB已超过8 000份,提供临床应用600余份[2]。
CB已成为骨髓和外周血后的第3种造血干细胞来源,日益受到人们的重视,CBB在全世界范围内广泛建立起来。
成为近十年来造血干细胞移植领域中的重要进展之一。
CBB的建立涉及到脐血的采集、分离、冷冻、复苏、检测、建库等诸多环节。
1997年至2000年5月,我们已冻存经HLA检测的CB 3 744份。
CB采集量是CBB的重要指标之一。
CBB量多,造血干细胞含量多,移植效果好。
伦敦CBB 1998年采集量为1 000份样本,平均666份CB采集量为(70±23) ml(40~181 ml)[3]。
本研究根据国内外文献建立了一套CB采集的分离技术。
通常CB的采集分为胎盘娩出本论文由无忧论文网整理提供前和娩出后采集,有文献报道胎盘娩出后所采集的CB有核细胞数低于胎盘娩前所采集到的有核细胞数[4]。
本研究采用的是胎盘娩前采集的方法,平均采集量为(93±22) ml(45~198 ml),平均采集到的有核细胞数为11.2×108,且采集过程对母亲和新生儿均无影响。
同时我们也观察到采集的CB中的有核细胞数与CB量之间存在线性相关,r=0.67,P<0.01。
因此,尽可能多的采集CB量可增加采集到的有核细胞数。
脐带血有什么用途 脐带血公捐与自存有什么不同
脐带血有什么用途脐带血公捐与自存有什么不同大家都听过脐带血，但在决定储存前，相信仍有许多疑问有待厘清，本文搜集准妈妈的困惑，帮助了解脐带血的储存意义。
至于「储存脐带血」的用意，是将脐带血中的干细胞储存起来，作为日后移植或修复受损时使用。
至于采集时间，则为胎儿娩出断脐后，在胎盘还未从母体排出前的一小段时间。
下面八宝网的小编为大家分享脐带血有什么用途，脐带血公捐与自存有什么不同大家一起来看吧。
脐带血是什么?脐带血简单来说就是胎儿的血液，经由脐带中的血管流到胎盘，在胎盘中和妈妈交换氧气和养分。
在连接妈妈与胎儿间的脐带上，有3条血管，最大一条为脐静脉，一般所谓的脐带血采集就是从这条血管中取血。
脐带血有什么用途?孕期的胎儿造血功能是一生中最强的阶段，而其所制造的脐带血中，所含有的干细胞浓度，又比日后从周边血所采集到的，高出约10～100倍，且为尚未受到任何病原污染、初始的万能干细胞。
干细胞是什么?所谓的「干细胞」，就是具有「增生」及「分化」能力的初始细胞。
张南骥教授指出，干细胞的分化程度有其阶段性(可分成4类，愈早分化的干细胞，其功能也愈完整：第一阶段为在受精卵分化成4～8个细胞前;脐带血干细胞属于第二阶段;骨髓、周边血干细胞则为第三阶段;至于第四阶段则只能制造红血球等单一功能。
干细胞的功能?由于骨髓、周边血属于比较后期的细胞，只有免疫和造血的功能，但脐带血中的干细胞则是尚未分化的「初始」细胞，因此有机会发展成各种细胞，可调节与治疗的范围较广。
而脐带血干细胞中的造血干细胞，也可在经过癌症化疗或放射线治疗后，帮助病人造血系统的再生。
目前已被证实能用来治疗如白血病、淋巴瘤、地中海型贫血、黏多醣症、先天性免疫不全及自体免疫疾病等超过七、八十种疾病。
为什么要储存?从事干细胞、分子生物、基因工程研究长达数十年的张南骥教授，谈起为何要储存脐带血，简单一句「为下一代准备翅膀」，道出储存脐带血的重要性。
他指出，从人类基因译码后，医学的进步让人类对生命的蓝图愈来愈清楚，生物科技专家只须追随此蓝图来修补、维系人类的生命，而医学的突飞猛进是必然的，可以预见未来10年、20年后，干细胞的研究会有更大的突破;且目前脐带血移植的成功案例已愈来愈多，因此，储存脐带血，确实有其必要。
存储脐带血造血干细胞,为宝宝生命备份
存储脐带血造血干细胞，为宝宝生命备份“自存脐带血到底有没有用?”最近网络上和朋友圈里对这个话题讨论的非常多，也是妈妈们经常问起的，因为我在陕西省细胞组织库经过3个月的实习，对于脐带血造血干细胞再熟悉不过了，看到现在网络上信息纷杂，信息洪流泛滥，着实给妈妈们带来了很多困扰，所以在这里给大家做个深入全面的分析，一是普及一下目前最热门的前沿医学知识，最主要的是希望通过本文的释疑和讲解，能够让妈妈们做出科学的判断，希望能够真正帮助到大家的。
一．脐带血储存的背景概述脐带血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液，脐带血中含有可以重建人体造血和免疫系统的造血干细胞，可用于造血干细胞移植，治疗多种疾病。
且脐带血造血干细胞是0岁时的细胞，原始性高、活跃性好、纯净度高、免疫反应小、移植效果好。
近十几年的研究发现，脐带血中含有可以重建人体造血和免疫系统的造血干细胞，可用于造血干细胞移植，治疗白血病、再生障碍性贫血等疾病。
因此，脐带血已成为造血干细胞的重要来源，即使是无血缘关系造血干细胞的来源，也是一种非常重要的人类生物资源。
众所周知，当我们人体的造血系统和免疫系统受到损坏的时候，这时候人就会面临死亡。
但是，我们可以通过造血干细胞移植，从而重建人体的造血系统和免疫系统。
二．脐带血造血干细胞的特点及利弊其主要特点包括：免疫原性低；排斥反应小；再生能力强，速度快；专能细胞，不可在体外扩增，仅供一次使用；需要配型。
而其价值分析如下：（一）对母婴无不良影响。
采集是在胎儿娩出，断脐之后的五分钟之内进行。
而且，在孕妇分娩过程中，一旦出现任何突发状况，我们都是先保证大人和小孩的安全和健康，不会强行进行采集的；（二）病毒感染风险小脐带血造血干细胞的采集，都是在胎儿娩出的五分钟之内进行采集的，这时的新生儿免疫原性最低，所以病毒感染的风险小，而且因为剖腹产全程都是无菌操作，所以比顺产的病毒感染风险更小（三）匹配度高脐带血造血干细胞自体移植配型成功几率100%，父母移植配型成功几率50%，兄弟姐妹移植配型成功几率25%，爷爷奶奶外公外婆移植配型成功几率1/8而无关人群移植配型成功几率只有15~20万分之一（四）发生排斥反应的危险性小。
脐血保存：捐赠优于自留
脐血保存：捐赠优于自留脐血：脐血，是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液。
其最主要的有效成分为其中的造血干细胞（HSCs）。
造血干细胞是机体所有血细胞和免疫细胞的原始细胞，主要存在于骨髓中。
应用脐血进行异基因移植治疗，可重建患者的造血功能。
脐血保存后，作为冷冻保存的HSC资源，可随时使用，不用等待长时间寻找适当供者，有利于根据患者的病情而不是考虑供者的可行性来安排移植计划。
脐血库：基于脐血的医疗价值，出现了一批脐血保存机构。
我国的脐血库分公共库和自体库两种模式。
公共库主要面向需要移植但自体干细胞没有被保存的病人；自体库则是在出生时将脐血干细胞采集并予以保存，用于未来自己或亲属患病时治疗。
两者区别在于，公共库的存血靠“捐赠”免费储存，自体库则为自费储存。
自1988年新英格兰医学杂志报道法国成功进行第一例异基因脐血移植以来，关于脐血的研究、保存及移植等领域蓬勃发展。
脐血作为一种医疗资源，该自存还是捐赠，成为许多家庭困惑的一个问题。
如下我们从脐血的一些特性给出指导建议。
（1）临床需求概率很难估计一个健康新生儿出生时采集的脐血用到自己身上的可能性。
美国血液与移植学会（American Society for Blood and Marrow Transplantation ，ASBMT）采用肿瘤发生、移植需求及缺乏异体供者的概率，估计自存脐血应用概率大致介于0.04%（1:2500）和0.0005%（1:200000）。
以我国国内最大的北京脐血库为例，截至2012年，在自存的十二万余份脐血中，自体（包括亲缘）移植的案例仅有7例。
这些数据表明，脐血保存自体使用到的几率微乎其微。
（2）适用疾病对于许多疾病如淋巴瘤、骨髓瘤、神经纤维瘤等，可以自体骨髓或外周血移植，也可选用脐血移植。
但对于患有遗传性的骨髓衰竭、免疫缺陷综合症、代谢贮积症及血红蛋白病的患者，需要进行异基因供者来进行移植，即：自体脐血无法治疗这类遗传性疾病。
脐带血储存cd34标准
脐带血储存cd34标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：脐带血干细胞特点之一为其富含CD34阳性干细胞。
CD34是一种细胞表面标记分子，被广泛认为是造血干细胞的标志。
脐带血中的CD34阳性细胞具有重建造血系统的潜力，可以重建患者的免疫系统，促进血液的再生。
脐带血中CD34阳性细胞的含量对于干细胞移植的成功率起着至关重要的作用。
目前，国际上对于脐带血中CD34阳性细胞的计数和储存有着一定的标准。
根据世界卫生组织的要求，脐带血单位中至少含有CD34阳性细胞的数量应达到1×10^6/kg。
这一标准是保证脐带血具备治疗作用所必须的关键指标之一，也是干细胞移植成功率的重要指标之一。
具备符合CD34标准的脐带血单位才能被认可为适合干细胞移植的供体。
为了确保脐带血中CD34阳性细胞的准确计数和储存，目前的主要做法是采用流式细胞术进行计数，并采取适当的储存方法保存脐带血单位。
流式细胞术是一种用于细胞表面标记物的定量和鉴定的技术，通过荧光共振技术测定细胞中的CD34阳性细胞数量。
这种方法具有高灵敏度、高准确性和高重复性，能够准确计数脐带血中CD34阳性细胞的数量，确保脐带血单位的质量标准。
在脐带血单位的储存方面，通常采用冷冻保存的方法。
在采集后，将脐带血样本迅速送至实验室，进行流式细胞术计数后，加入适量的冷冻保护剂，然后分装成小份装冻存管，通过快速冷冻的方式保存于液氮槽中。
冷冻保存可以有效保护脐带血中的CD34阳性细胞，延长其存储时间，为后续的干细胞移植提供保障。
除了单纯的计数和储存外，对于脐带血中CD34阳性细胞，还需要进行其功能性评估。
通过体外实验和动物实验等方法，可以评估脐带血中CD34阳性细胞的再生及增殖潜能，以确保其在移植后能够有效地重建患者的造血系统。
脐带血中CD34阳性细胞的计数和储存标准是干细胞移植治疗成功的关键因素之一。
严格遵守国际标准，采用科学的计数和储存方法，保证脐带血单位的质量和有效性，对于提高干细胞移植的成功率，减少患者的并发症，具有重要的意义。
脐带血保存
脐带血保存生活有很多问题都是需要了解的，这样在问题出现后，才会知道该如何做最佳，那不同问题在解决上，都是有着不同方式，那脐带血保存如何进行呢，对这个也是很多人不知道该怎么做，在对它保存上，也是有着很好的方法，而且保持的时候，对环境、温度，都是需要正确进行。
那脐带血保存方法具体该怎么做呢，下面就详细的介绍下，使得对它也是有着很好的认识，在对它进行保存的时候，也是可以正确进行，使得保存会更好。
★脐带血保存：★保存方法脐带血采集后应暂时保存于4-24℃环境，应在24小时内由脐血库取血人员送至脐带血库。
脐带血可以保存在脐带血造血干细胞库里。
在脐带血库里脐带血经过检测、分离、制备等多道医学工序，冷冻在-196℃的深低温液氮中，并能长期保存。
★保存好处脐带血的造血干细胞具有如下优点：脐带血造血干细胞，未受到放射、药物、毒物、病菌或其他环境污染。
脐带血造血干细胞的增殖能力较骨髓内的强。
脐带血的采集较容易、不具伤害性，不会对产妇及新生儿产生不良影响。
脐带血于出生即可存放在-198℃液氮中储存，可随时取用。
以脐带血做异基因移植时，较少有排斥反应，发生移植物抗宿主疾病的程度亦较骨髓轻。
★保存期限现有的实验数据资料表明，脐带血造血干细胞冻存十余年后仍有较好的活性，脐带血的保存历史也有近二十年，从理论上讲可以长期保存。
现代最新的保存技术已与以往的保存技术不能同日而语，在以往的保存技术下，造血干细胞已有40余年的保存历史，普通组织细胞的保存历史也有百余年，最新的保存技术已用程控降温，添加细胞内、外保护剂等技术克服了以往冷冻时对细胞损伤的问题，北京市脐带血造血干细胞库采用的是目前世界上最先进的干细胞保存技术，所以从保存技术上说，脐带血造血干细胞可以在全国七家正规合法脐血库长期保存。
通过以上介绍，脐带血保存方法可以按照以上方法进行，不过要注意的是，在保存脐带血的时候，对保存期限也是要进行了解，这样使得保存的时候，才不会有任何问题，而且对它各方面也是要进行认识。
脐带血从采集到制备最佳保存条件及保存时间的研究
脐带血从采集到制备最佳保存条件及保存时间的研究郭锐;杨俊晔;张亚斌;贺雪萍;张勇;韩俊领;杨文玲;邱录贵【期刊名称】《中国实验血液学杂志》【年(卷),期】2024(32)2【摘要】目的:探讨脐带血从采集到制备的最佳保存条件和保存时间。
方法:选择30例健康新生儿的脐带血标本,将每例脐带血平均分为两份,一份置于冷藏(4℃)保存,一份置于室温(20-24℃)保存,分别在24、36、48、60和72 h取样,分析有核细胞计数、有核细胞活率,流式细胞术检测活的CD34^(+)细胞占活的CD45+细胞的百分比及CD34^(+)细胞活率,并通过造血祖细胞集落培养进行CFU-GM计数。
观察随时间延长各指标的变化趋势,比较相同保存时间不同条件(冷藏和室温)下各指标的差异。
结果:冷藏(4℃)、室温(20-24℃)条件下保存的脐带血随保存时间延长,有核细胞计数(r_(冷藏)=-0.9588,r_(室温)=-0.9790)、有核细胞活率(r_(冷藏)=-0.9941,r_(室温)=-0.9970)、CD34^(+)细胞活率(r_(冷藏)=-0.9932,r_(室温)=-0.9828)均呈现出一致性下降趋势,活的CD34^(+)细胞百分率(r_(冷藏)=0.9169,r_(室温)=0.7470)和CFU-GM计数(r_(冷藏)=-0.2537,r_(室温)=-0.8098)未呈现出一致性变化趋势。
当保存时间相同时,冷藏保存较室温保存的脐带血有核细胞计数、有核细胞活率、CD34^(+)细胞活率和CFU-GM计数均更高,且当保存时间同为24、36、48、60和72 h时,室温保存较冷藏保存有核细胞活率均显著降低(P<0.001),有核细胞计数、活的CD34^(+)细胞百分率和CFU-GM计数均无显著差异;当保存时间同为24和36 h时,室温保存较冷藏保存CD34^(+)细胞活率显著降低(P<0.001、P<0.01),保存时间同为48、60、72 h时,室温保存较冷藏保存CD34^(+)细胞活率无显著差异。
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１２ 方法 ．
１ ２ １ 脐 带血 有核 细胞（ Ｂ ．． Ｃ ＮＣ） 离提取 分 ① １ 甲基 纤维
表 １ 不同方法分离 ５ 脐血 有核细胞 数（ ０， ｍｌ ×ｉ。 ± ）
分离方法
Ｆｃ ｌＰ ｑ ｅ分 离 液 ｉ ｌ ａｕ ｏ—
５ 脐血获得的有核细胞数 ｍｌ
８ ３ 士 １ ０ ．５ ．６ ２ ． ３ ２ １ ７４士 ．７
ｌ ｔ ａ ｙ ｃ ｔ ｒ ｍ ｏ ｄ ｂ ｏ ｄ ａ ｄ ｓ ｏ ａ ｅ ｗｉｈ ｈ ｍａ ｅ ｕ ｆ ｏ ｃ ｒ ｌ ｏ ｓ ｇ ｏ ｙ ｆ ｒ Ｃ ａ ｅ ｋ ｒ ｏ ｙ ｅ ｆ ｏ ｃ ｒ ｌ ｏ ｎ ｔ ｒ ｇ ｔ ｕ ｎ ｓ ｒ ｍ ｒ ｍ ｏ ｄ ｂ ｏ ｄ ｉ ｏ ｄ ｗａ ｏ ＢＮＣ ｏ ｌｃ ｉ ｎ， ｃ ｌ ｔｏ ｅ
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关键词 ： 带血 ； 核细胞 ； 胞分离 ｝ 脐 单 细 细胞 冻存 与复 苏
中囝分类号 ： ３８Ｒ ３．４ Ｒ １ ； ３１１
文献标识码 ： Ａ
文章 编号 ： ０８Ｚ０ （０８０—６６０ １０－４９Ｚ０）４００—３
Ｓ ｕ ｙｏ ｏａｉｎ， ｒ ｅ ｅ ｔ ａ ｎ ｔ ｒ ｇ ｆｎ ｃｅ ｒｃ ｌ ｒ ｍ ｃ ｒ ｌｏ Ｌ ｎ －ｈ ， Ｎ Ｓ ｅ ｇ ｈ ａ Ｑ Ａ ｔｄ ｆ ｓ ｌｔ ｉ ｏ ｆｅ ｚ ， ｈ ｗ ａ ｄ ｓ ａ ｅｏ ｕ ｌａ ｅｌ ｆｏ ｏ ｄ ｂ ｏ ｄ／ Ｉ ｏ ｓ Ｋａ ｇｚ ｉ ＱＩ ｈ ｎ － ｕ ， Ｉ Ｏ
提取 、 储存和 运输方法的研 究具 有十分重要的意义 。目前 有 关如何 系统地 有效提 取、 存和复 苏脐血 有核 细胞 的报道 甚 保
少。
干 细胞替代骨髓 移植 ， 能成功 地恢复强力 化疗后的骨髓抑 制 ，
恢 复 再 障 患 者 的 骨 髓 造 血 ； 用 造 血 干 细 胞 的 移 植 还 可 以 用 应 来 治 疗 很 多 重 大 疾 病 ［ 。脐 带 血 有 核 细 胞 的 开 发 利 用 具 有 非 ３ ］
力 观 察 发 现 ， ４Ｃ和 ２ ￣ 件 下 存 放 ２ｈ 不 同 温 度 下 细 胞 活 力 没 有 明 显 改 变 。 人 脐 血 血 清 － Ｄ Ｏ 为 保 护液 在 液 在 ＂ ０ Ｃ条 ４， 以 Ｉ ＭＳ －
氮 储存Ｃ Ｎ 年 ， Ｂ Ｃ １ 复苏后仍有很强 的细胞集落形成 能力。结论 ： 应用红细胞裂解液分离提取Ｃ ＮＣ获得 的细胞 数量 Ｂ 和种类优于其他两种方法 。Ｃ ＮＣ冻存时适当加入人脐血清 ， Ｂ 复苏后克隆形成能力 明显增强 。
ＮＣ悬 液 。红 细 胞 裂 解 液 配 制 （ 升 溶 液 中： Ｈ４ Ｉ８ ９ ， 每 Ｎ Ｃ ． ｇ
ＫＨＣＯ３ １ ０ ． ｇ ＥＤＴＡ－ Ｎａ３ ｒｇ， ｝ 一 ７ ２ Ｄ ４ ７ ａ ｐ ｜ ． ）
３ 种分离方法所 获得的有核细胞数 ， 红细胞裂解液方法 获
得 最 多 ， 是 １ 甲基 纤 维 素 方 法 的 ２ ９倍 ， １ 倍 于 Ｆｃ ｌ 约 ％ ． 近 Ｏ ｉ ｌ ｏ— Ｐ ｑ ｅ细胞 分 离 液方 法 ， 见 表 １ ａｕ 详 。
至 ５ ｍ１混 匀 后 静 置 １ｒｉ 离 心 后 弃 上 清 ， 涤 ２次 ， 为 Ｃ － ０ ， ０ ｎ， ａ 洗 即 Ｂ
１ ％甲基纤维 素 红 细胞裂解 液
注 ： Ｆｃｌ Ｐ ｑ ｅ分离 液比较 ， Ｐ＜Ｏ ０ ； １ 甲基纤维素 比 与 ｉ ｌ ａｕ ｏ— 一 ．１与
较， Ｐ＜ Ｏ０ ．５
第２ １卷
２ 结果
２ １ 不 同方法对 Ｃ ＮＣ分离 效果的影响 ． Ｂ 不同方法对 Ｃ Ｎ Ｂ Ｃ分离效果 的影 响见表 １ ３ ～ 。
１ ％Ｆ Ｓ的 Ｒ ＭＩ ６０培 养 液、 Ｈ－ ｄ 冷 乙醇 、 ａ ｅＰ 、 ｏ Ｃ Ｐ １４ ３ Ｔ Ｒ、 ＲＮ ｓ ． Ｉ
Ｉ ＤＭ （ Ｂ ０ 公司 ） Ｍ ＧＩ ｅ 培养基等 。 １ １ ３ 仪器 ．． Ｃ Ｏ 培养箱 、 流式细胞仪 、 程控 降温仪 等 。
ｏ ｙ ｈ ｃ ｔ ｓ ｓ ｐ ｒ ｔｎ ｄ ｕ ａ ｄ ｍｅ ｈ ｌ ｅ ｌ ｌ ｓ ｅ ｐ ｃ ｉ ｅ ｙ ｔ ａ ｎ ｌ ｄ ｎ ｙ ｈ ｃ ｔ ， ｅ ｔｏ ｈ ｌ ｒ ｎ ｌ — ｆｌ ｍｐ ｏ ｙ ｅ ｅ ａ ａ ｉ ｇ ｍｅ ｉ ｍ ｎ ｔ ｙ ｃ ｌ ｏ ｅ ｒ ｓ ｅ ｔｖ ｌ ｈ ｔ ｉ ｃｕ ｉ ｇ ｌ ｍｐ ｏ ｙ ｅ ｎ ｕ ｒ ｐ ｉ ｃ ｇ ａ ｕ ｏ ｕ ｉ ｃ ｔ ｎ ｎ ｃ ｔ ． Ｉ ｅ ｌｓ ｏ ａ ｅ ｓ ｕ ｙ， ｏ ｄ ｆｅ ｅ ｃ ｆ ｎ ｃｅ ｔ ｄ ｃ ｌ ｃ ｉ ｉ ｓ ｆ ｕ ｄ ｉ － Ｒ ｕ ｉ ｇ ２ ｙ ｅ ａ ｄ ｍｏ ｏ ｙ ｅ ｎ ｃ ｌ ｔ ｒ ｇ ｔ ｄ ｎ ｉｆ ｒ ｎ ｅ ｏ ｕ ｌａ ｅ ｅ ｌ ａ ｔ ｔ ｗａ ｏ ｎ ｎ Ｈ。 Ｔｄ ｄ ｒｎ ４ ｓ ｖ ｙ ｈ ｕ ｓｂ ｔ ｅ ｏ ｒ ｅ ｗｅ ｎ ４℃ ａ ｄ ２ ￣ Ｉ ｏ ｌ ｅ ｒ ｓ ｓ ｉ ｔｏ ｎ ｕ ｔｖ ｔｏ ｏ ｍｉ ｇ ｃ ｌ ｎ ｂ ｉ ｕ ｌ ｖ ｎ ａ ｔ ｒ ｏ ｅ ｙ ａ ｎ ０ Ｃ． ｔｃ ｕ ｄ ｂ ｅ ｕ ｃｔ ｉ ｎ ａ ｄ ｃ ｌｉ ａ ｉｎ ｆ ｒ ｎ ｏ ｏ ｙ ｏ ｖ ｏ ｓ ｙ ｅ ｅ ｆｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｓ ｏ ｅ ｉ ｉ ｕ ｄ ｎ ｔｏ ｅ ａ ｉｔ ｒｗｉ ｕ ｎ ｓ ｒ ｍ ｒ ｍ ｏ ｄ ｂ ｏ ｄ ｔ ｒ ｎ ｌ ｉ ｉｒ ｇ ｎ ｃ ｎ ｓ ｅ ｔ ｈ ｍａ ｅ ｕ ｆ ｏ ｃ ｒ ｌ ｏ ．Ｃｏ ｃ ｕ ｉ ｎ：Ａｐ ｌｉ ｇ ｅ ｙ ｈｒ ｃ ｔ ｙ ａ ｅ ｔ ｓ — ｑ ｈ ｎ ｌ ｓｏ ｐ ｙ ｎ ｒ ｔ ｏ ｙ ｅ ｌ ｓ ｔ ｏ ｉｏ
（． １ 桂林 医学院 生物技 术 学院 ， 西 桂林 广
伟 冯乐平 ， ⑧
５１ ０） ４ ０ １
５ １ ０ ；． 林 医学院 附属 临床 学院 ， ４ ０４ ２桂 广西 桂林
摘要 ： 目的 ： 通过对 脐带 血有核细胞 （ Ｂ Ｃ） Ｃ Ｎ 的提取和保存方法探讨 ， 为脐带血 有核 细胞分离 、 储存和应用提供科 学依
第２ １卷第 ４期
２ ０ 年 ８月 ０８
＿ 叠 华 夏 医 ｔ －
丁 学
Ｖｏ ． １ Ｎｏ ４ １２ ． Ａｕ ． ０ ８ ｇ ２ ０
Ａｃａ Ｍ ｅ ｉｉ ａ Ｓ ｎ ｃ ｔ ｄ ｃｎ ｅ ｉｉａ
脐带 血 有 核 细 胞不 同提取 和 保 存 方 法 的比 较①
李康智 ， 秦胜花。乔 ，
１ 材 料 与方法
１ １ 材 料 试 剂 与 仪器 ．
常广阔的前景。 在脐带血有核细胞应用的过程中， 细胞的分离
１ １ １ 材料 ．．
脐带血 。
① 基金项 耳：广西科技厅 资助项 目（ 目编号：２ ９ ２） 项 ０４００ 。 ② 作者简介 ： 李康智（ ９ ９ ， ，０ ２年广西大学毕业 ， １ ７ 一） 女 ２ ０ 学士学位 ， 现任桂林 医学院 生物技 术实验教学 中心助理实验师。主要研究方 向： 脐带血
８ ． ２ ４ ６ ０１士 ．１
素法 ： １ 脐血５ （ 带血采集参 见文献 ） 加两倍体 积的 取 份 ｍｌ脐 。，
Ｒ ＭＩ６ ０稀 释 ， 后加入 １ 甲基纤维 素 ２ ， Ｐ １４ 然 ｍｌ充分 混 匀 （ 甲 基纤 维素终浓度０ １ ，Ｏ度倾斜 ， ． ％） ３ 室温静置 ３ｒｉ ， ０ ｎ 吸取 血浆 ａ 层， 洗涤 ２次 ， 即为脐血有核细胞悬液 ② 红细胞裂 解法 ： 取脐血５ ， ｍｌ加ＣＣ预冷的红细胞裂解 液
胎 盘 脐 带 血 含 有 多 种 有 核 细 胞 成 分 ， 中 造 血 干 细 胞 的 其 单 位 体 积 含 量 比骨 髓 和 外 周 血 含 量 还 高 ， 含 有 造 血 干 ／ 细 除 祖 胞外 ， 具有间充质干细胞 、 还 内皮 前 体 细 胞 等 ［２ １］ 用 脐 带 血 －。应
ｆ ｅ ｚｎｇ ａ ｔ ｒ ｇ ｒ ｅ ｉ ｎｄ ｓ ｏ ａ ｅ．
Ｋｅ ｒ ｓ ｃ ｒ ｌ ｏ ｙ ｗｏ ｄ ： ｏ ｄ ｂ ｏ ｄ；ｍｏ ｏ ｕ ｌａ ｅ ｌ ；ｅ ｌ ｉｏ ａ ｉｎ；ｅ ｌ ｆｅ ｚ ｎ ｈ ｗ ｎ ｎ ｃｅ ｒ ｃ ｌ ｓ ｅ ｌ ｓ ｌｔｏ ｅｌ ｒｅ ｅａ ｄ ｔ ａ
据。 方法 ： 用 ３种 方 法 （ ｉ ｌＰ ｑ ｅ分 离 液 法 、 甲基 纤 维 素 法 、 细 胞 裂 解 法 ） 采 Ｆｃ ｌ ａ ｕ ｏ— １ Ａ ０ 红 分离 Ｃ ＮＣ， 应 用 不 同储 存 液 在 不 Ｂ 并