酶解棕榈粕制备甘露寡糖及其组分的结构确定【VIP专享】
纤维素酶水解棕榈壳制取乙醇研究
纤维素酶水解棕榈壳制取乙醇研究张宇;许敬亮;王琼;徐明忠;庄新姝;李东;袁振宏【期刊名称】《农业工程学报》【年(卷),期】2008(24)10【摘要】先将棕榈壳置于多功能水解反应器中于200℃,4.0 MPa,液固比15:1,搅拌转速500 r/min条件下纯水预处理5 min,半纤维素和纤维素含量分别从21.74%,45.42%变为2.35%,47.63%,再以一定比例混合预处理液与棕榈壳残渣,研究液固比,温度,加酶量和时间对棕榈壳糖化工艺的影响,结果表明液固比为16:1最合适,低温37℃比高温50℃更有利于棕榈壳的糖化,从长时间看,加酶量并不完全与原料转化率成正相关,以小于10 FPU/g为宜.糖化效果取决于β-葡萄糖苷酶对葡萄糖的耐受性以及预处理效果.采用酿酒酵母对糖化液发酵,乙醇得率为77%.通过电镜扫描发现,预处理与酶解后的残渣的结构比原料明显疏松,长条状晶束结构有着不同的程度的破坏,但木质素结构破坏较小.【总页数】4页(P186-189)【作者】张宇;许敬亮;王琼;徐明忠;庄新姝;李东;袁振宏【作者单位】中国科学院广州能源研究所,中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室,广东省新能源和可再生能源研究开发与应用重点实验室,广州,510640;中国科学院研究生院,北京,100039;中国科学院广州能源研究所,中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室,广东省新能源和可再生能源研究开发与应用重点实验室,广州,510640;中国科学院广州能源研究所,中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室,广东省新能源和可再生能源研究开发与应用重点实验室,广州,510640;中国科学院研究生院,北京,100039;中国科学院广州能源研究所,中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室,广东省新能源和可再生能源研究开发与应用重点实验室,广州,510640;中国科学院研究生院,北京,100039;中国科学院广州能源研究所,中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室,广东省新能源和可再生能源研究开发与应用重点实验室,广州,510640;中国科学院广州能源研究所,中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室,广东省新能源和可再生能源研究开发与应用重点实验室,广州,510640;中国科学院研究生院,北京,100039;中国科学院广州能源研究所,中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室,广东省新能源和可再生能源研究开发与应用重点实验室,广州,510640【正文语种】中文【中图分类】TQ353.4;S216.2【相关文献】1.棕榈壳发酵制取燃料乙醇的研究 [J], 王琼;庄新姝;张宇;徐明忠;许敬亮;李东;袁振宏2.纤维素酶水解稻草纸浆制取乙醇的研究 [J], 杨洋;张玉苍;孙岩峰;何连芳;周长俊3.植物纤维原料酶水解制取燃料乙醇的研究 [J], 程荷芳;卫民4.木质纤维素原料酶水解产乙醇工艺的研究进展 [J], 王铎;常春5.纤维素酶水解及转化为乙醇的研究进展 [J], 余丽清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酶法制备甘露寡糖工厂放大工艺研究
酶法制备甘露寡糖工厂放大工艺研究
毕静
【期刊名称】《江苏调味副食品》
【年(卷),期】2010(027)002
【摘要】为了给我国食品级甘露寡糖的国产化开发提供技术支撑,以田菁胶为原料,通过25 L反应罐和5.0 m3反应罐进行工厂放大水解试验,并对水解产物分析寡糖组分.结果表明:当底物浓度为100~125 g/L、加酶量为40 U/g时进行水解,再用水解液体积0.2%的糖脱色专用活性炭进行脱色后板框过滤,用真空浓缩器将滤液进行浓缩,经离心式喷雾干燥,可得到较为理想的甘露寡糖,1～6糖组分高于60%.
【总页数】4页(P30-32,35)
【作者】毕静
【作者单位】江苏经贸职业技术学院,江苏,南京,211168
【正文语种】中文
【中图分类】TS202.3
【相关文献】
1.酶法制备魔芋甘露寡糖和产物分析 [J], 何丹;郭熊;杨双莲;李俊俊;黄遵锡;唐湘华
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一种高甘露寡糖棕榈粕发酵饲料的制备方法[发明专利]
![一种高甘露寡糖棕榈粕发酵饲料的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/baf1f9ebcf2f0066f5335a8102d276a201296076.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011292693.8(22)申请日 2020.11.18(71)申请人 天津云力之星生物科技有限公司地址 300000 天津市滨海新区滨海高新区塘沽海洋科技园海缘路199号海洋科技商务园东4-8号楼D1701室(72)发明人 雷晓青 香红星 陈婧 王智敏 鲍若男 孟阳 (74)专利代理机构 北京盛凡智荣知识产权代理有限公司 11616代理人 孙鑫(51)Int.Cl.A23K 10/12(2016.01)A23K 10/14(2016.01)A23K 50/75(2016.01)(54)发明名称一种高甘露寡糖棕榈粕发酵饲料的制备方法(57)摘要本发明提供了一种高甘露寡糖棕榈粕发酵饲料的制备方法，将酶制剂、发酵菌种、棕榈粕及水混合后厌氧发酵，得到发酵物料。
本发明所述的的制备方法操作简单，制得的棕榈粕发酵饲料，复合多种活性多糖，不同分子量分布的小肽以及大量的益生菌，其中甘露寡糖含量达18‑25％，小肽含量达16‑25％，乳酸含量在2.5‑3.5％，益生菌含量1.0×108cfu/g，是一种促进动物采食，能够有效提高动物免疫力，保证肠道健康，改善生产性能。
权利要求书1页 说明书3页 附图1页CN 112385737 A 2021.02.23C N 112385737A1.一种高甘露寡糖棕榈粕发酵饲料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a.将酶制剂、发酵菌种溶于温水中，得到菌液水；b.将菌液水、棕榈粕及水混合后装入发酵容器内进行厌氧发酵，得到发酵物料；c.将发酵物料烘干、粉碎、过筛后得到所需发酵饲料。
2.根据权利要求1所述的高甘露寡糖棕榈粕发酵饲料的制备方法，其特征在于：步骤a 中使用的酶制剂包括甘露聚糖酶、蛋白酶、纤维素酶及木聚糖酶。
3.根据权利要求2所述的高甘露寡糖棕榈粕发酵饲料的制备方法，其特征在于：所述甘露聚糖酶含量为40000-60000U/g，所述蛋白酶含量为50000-100000U/g，所述纤维素酶含量为10000-20000U/g，所述木聚糖酶含量为50000-100000U/g。
β-甘露聚糖酶异源表达及甘露寡糖制备研究
β-甘露聚糖酶异源表达及甘露寡糖制备研究
尹梦雅;康立新
【期刊名称】《湖北农业科学》
【年(卷),期】2016(55)1
【摘要】以产β-甘露聚糖酶(MAN)的枯草芽孢杆菌HD145为目的菌株,PCR扩增MAN基因片段,克隆到pHBM905A我体并转化至毕赤酵母,重组子利用甲醇进行
诱导.纯化的MAN酶解槐豆胶与瓜尔豆胶,质谱检测水解产物.SDS-PAGE结果表明,MAN基因实现了表达,摇瓶酶活性为3 200 U/mL,酶最适温度与pH分别为55℃与6.0,pH 4～7时稳定性较好,在40、50、60℃的半衰期分别为165、105、42 min,Zn2+、Ag+、Co2+对酶活性存在一定的抑制.槐豆胶与瓜尔胶经MAN酶解后得到二糖至十糖的寡糖.
【总页数】4页(P176-179)
【作者】尹梦雅;康立新
【作者单位】湖北大学生命科学学院,武汉430062;湖北大学生命科学学院,武汉430062
【正文语种】中文
【中图分类】Q939
【相关文献】
1.新型β-甘露聚糖酶制备葡甘寡糖工艺优化 [J], 成莉凤;冯湘沅;段盛文;郑科;刘正初
2.异源表达细菌β-甘露聚糖酶研究进展 [J], 那金;王瑶;郭尚旭;赵丹
3.异源表达细菌β-甘露聚糖酶研究进展 [J], 那金;王瑶;郭尚旭;赵丹;;;;;
4.异源表达细菌β-甘露聚糖酶研究进展 [J], 那金;王瑶;郭尚旭;赵丹;;;;;;;;
5.碱性β-甘露聚糖酶基因异源表达的研究 [J], 路志群;马延和;王正祥
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甘露寡糖
甘露寡糖甘露寡糖是一种寡聚糖,甘露寡糖是寡聚糖中最具前景的一个。
其作为一种安全有效的饲料添加剂在养殖生产上具有重要的作用。
1甘露寡糖的理化性质甘露寡糖(Mannose-oligosaccharides,MOS),又称甘露低聚糖或葡甘露寡聚糖。
甘露寡糖是寡聚糖中最具前景的一个,主链的连接方式为α-1,6糖苷键,侧链主要通过α-1,2和α-1,3糖苷键连接,一般在生理pH 值和通常饲料加工条件下较为稳定,易溶于水和其他极性溶剂。
当溶液中加入有机溶剂时会使其沉淀或结晶,甜度低于蔗糖。
甘露寡糖广泛存在于魔芋粉、瓜儿豆胶、田菁胶及多种微生物细胞壁内(葡萄糖甘露寡聚糖)。
目前商品用甘露寡糖主要通过酶解法进行生产。
饲料用甘露寡糖主要来源于酵母细胞壁提取物,多为二糖、三糖、四糖等结构的混合物。
甘露寡糖不为单胃动物消化道酶分解,而且由酵母细胞壁提取而来的甘露寡糖能承受饲料加工的高温处理(121 ℃,20 min)而保持其结构和功能的完整性不被破坏。
2甘露寡糖的作用机理甘露寡糖化学性质稳定,不被动物消化也不能被有害菌利用,只能被消化道有益菌群如双歧杆菌和乳酸菌利用,通过优化肠道微生物生态系对宿主起有益的保健功能。
改善肠道微生物组成、形成以双歧杆菌和乳酸杆菌为优势菌的肠道菌丛,抑制病原菌。
MOS对病原菌有识别、粘附和排除作用,同时有利于排除内毒素保持动物健康。
加速细菌从肠道排出,促进肠道正常微生物区系的平衡,增强动物非特异性免疫,提高动物抵抗力,从而提高动物日增重和饲料转化率,降低胃肠道疾病的发生率和死亡率。
马志红等[1]以甘露寡糖为饲料添加剂进行鲤鱼的对比饲喂试验,通过测定和比较对照组和试验组鲤鱼的生长性能和免疫功能指标,探讨甘露寡糖对鲤鱼生长及免疫功能的影响。
结果显示,试验组鲤鱼的饲料系数、相对增重率、白细胞吞噬率、吞噬指数、脾脏指数和血清溶血素活力较对照组均显著提高;周淑芹[2]研究了甘露寡糖对肉鸡后期(5～7周)大肠杆菌病的控制效果,结果表明饲粮中添加MOS显著降低了肉鸡感染大肠杆菌后的发病和死亡率。
棕榈仁粕饲粮中添加甘露聚糖酶对肉仔鸡生产性能的影响
棕榈仁粕饲粮中添加甘露聚糖酶对肉仔鸡生产性能的影响郭全奎;王璐菊【摘要】三种处理棕榈仁粕以30％比例添加到日粮中代替玉米,研究棕榈仁粕饲粮中添加甘露聚糖酶对肉仔鸡生产性能的影响.结果表明:试验前期,三种棕榈仁粕处理饲粮组平均采食量和平均体增重均显著低于对照组(P＜0.05),且料肉比显著高于对照组(P＜0.05).PKM-c组料肉比显著高于PKM-a组(P＜0.05).试验后期,三种棕榈仁粕处理饲粮组平均体增重显著低于对照组(P＜0.05),而料肉比显著高于对照组(P ＜0.05).PKM-c组体增重显著高于PKM-a组(P＜0.05),但其料肉比显著低于PKM-a组(P＜0.05).添加甘露聚糖酶后,前期料肉比有显著改善(P＜0.05).【期刊名称】《畜牧兽医杂志》【年(卷),期】2017(036)006【总页数】3页(P29-31)【关键词】棕榈仁粕;甘露聚糖酶;肉仔鸡;生产性能【作者】郭全奎;王璐菊【作者单位】甘肃畜牧工程职业技术学院,甘肃武威733006;甘肃畜牧工程职业技术学院,甘肃武威733006【正文语种】中文【中图分类】S815.2棕榈仁粕也即“油棕仁渣”，英文名为“Palm Kernel Cake”(简写PKC)，是由棕榈树上的棕果采用压榨或浸提方式去油之后的副产品。
大多数研究认为，棕榈仁粕含有抗营养因子，主要为β-甘露聚糖。
2010年，程时军等认为酶制剂是解决棕榈仁粕抗营养的有效手段。
在肉鸡饲粮中添加3%和5%的含有棕榈仁粕专用酶制剂的棕榈仁粕时不会影响肉鸡的生产性能。
2010年陈权军等研究也表明，甘露糖聚酶可提高蛋鸡的能量利用率，改善其饲料转化率和生长速度，提高蛋雏鸡增重和蛋白质消化率。
2011邬爱姬等在添加20%的棕榈仁粕日粮中添加酶，可改善棕榈仁粕对肉鸡前期和后期生产性能的不利影响。
在含10%的棕榈粕日粮中添加和美效素可改善蛋鸡的料蛋比、破畸率和经济效益。
2013年，毛宗林研究认为，在含5%棕榈粕的日粮中添加甘露聚糖酶，对提高育肥猪的消化能和营养物质的利用率有积极作用，而且可以提高其生长性能。
甘露寡糖的研究与应用
甘露寡糖的研究与应用贺丹艳1 罗永发21. 华南农业大学动物科学学院2. 广州博仕奥集团1 甘露寡糖的结构及理化性质甘露寡糖(MOS)又称甘露低聚糖或葡甘露寡聚糖，是寡糖的一类。
MOS是由几个甘露糖分子或甘露糖与葡萄糖通过α－1,2、α－1,3和α－1,6 糖苷键组成的寡聚糖。
一般在生理pH 和通常饲料加工条件下较为稳定，易溶于水和其他极性溶剂。
当溶液中加入有机溶剂时会使其沉淀或结晶，甜度低于蔗糖。
它的黏度随温度上升而逐渐下降，冷却后又回升。
当pH 为1.5~3时，黏度迅速上升；pH 为3~9时，黏度较为稳定。
此外，有些MOS，如：魔芋葡甘露寡糖还有独特的凝胶性能，在一定条件下可形成热可逆凝胶和热不可逆凝胶。
MOS性质稳定，能承受饲料加工制粒的高温处理，保持其结构和功能的完整性不被破坏。
2 MOS的来源和酶解法在MOS生产中的应用2.1 MOS的来源MOS主要是通过采用化学或生物方法降解MOS得到的。
MOS广泛存在于魔芋粉、瓜儿豆胶、田箐胶及多种微生物的细胞壁内。
目前，商品用MOS主要通过酶解法进行生产，是从富含MOS的酵母细胞壁中通过发酵法提取出来的葡甘露聚糖蛋白复合体，饲料用MOS也可来源于酵母细胞提取物。
目前提出了60多种不同的甘露糖蛋白复合物，而作为饲料添加剂用的MOS多为二糖、三糖、四糖的混合物（赵蕾等，2007）。
2.2 酶解法在MOS生产中的应用MOS类物质是自然界中半纤维素的第2大组分，在饲料原料中分布广泛，对畜禽是1种抗营养因子。
目前实验室及生产中获得葡甘露寡糖的方法有：1）从天然原料中提取。
2）利用转移酶和水解酶催化的糖基转移反应合成。
3）天然多糖的酶水解。
4）天然多糖的酸水解。
5）人工化学合成。
工业上主要还是采用酶转移法或酶水解法来生产低聚糖。
杨文傅等（1996）从生产角度出发，探索了利用β-甘露寡聚糖酶水解一些植物胶生产甘露寡聚糖的条件，为工业酶法制取MOS提供了基础工艺参数。
用酶降解棕榈粕、棕榈仁粕的方法
用酶降解棕桐粕、棕桐仁粕的方法摘要本发明涉及一种用酶降解棕桐粕!棕桐仁粕的方法,该方法主要是将干燥的棕桐粕和/或棕桐仁粕与含有甘露聚糖酶的酶溶液混合,其中每克干燥的棕桐粕和/或棕桐仁粕的甘露聚糖酶用量为5一120个单位,酶溶液的pH值控制在2一11,混合后物料的水分含量控制在30一70%;将上述混合后物料置于40一100e的温度下进行酶解反应,保持4一80个小时后,即可制得成品"本发明的工艺方法不产生大量的废弃物,营养价值较高,工艺过程简单!容易,成本低,产品稳定性好,经处理的产品作为动物饲料可部分替代玉米和豆粕一种用酶降解棕搁粕!棕搁仁粕的方法,包括以下步骤:(l)原料的配制!混合:将干燥的棕搁粕和/或棕桐仁粕与含有甘露聚糖酶的酶溶液混合均匀,其中每克干燥的棕搁粕和/或棕搁仁粕的甘露聚糖酶用量为5~120个单位,酶溶液的pH值控制在2~n,混合后物料的水分含量控制在30~70%;(2)酶解反应的控制:将上述混合后物料置于40~100e的温度下进行酶解反应,保持4~80小时后,得到混合产物"2!根据权利要求1所述的用酶降解棕桐粕!棕搁仁粕的方法,其特征在于所述干燥的棕搁粕和/或棕桐仁粕是指经干燥处理后其水分含量控制在巧%以下"3!根据权利要求2所述的用酶降解棕搁粕!棕搁仁粕的方法,其特征在于所述干燥的棕搁粕和/或棕搁仁粕是指经干燥处理后其水分含量控制在3~ro%"4!根据权利要求2或3所述的用酶降解棕搁粕!棕搁仁粕的方法,其特征在于所述干燥处理过程的温度控制在50~130e"5!根据权利要求1所述的用酶降解棕搁粕!棕搁仁粕的方法,其特征在于在所述原料的配制!混合阶段,每克干燥的棕搁粕和/或棕搁仁粕的甘露聚糖酶用量为7一18个单位,酶溶液的pH值控制在4.5~6.5,混合后物料的水分含量控制在45~65%"6!根据权利要求1所述的用酶降解棕搁粕!棕搁仁粕的方法,其特征在于在所述酶解反应的控制阶段,混合后物料酶解反应温度控制在55~80e"7!根据权利要求1所述的用酶降解棕搁粕!棕搁仁粕的方法,其特征在于将所述混合产物进行干燥!粉碎,得到作为饲料使用的粒状成品"200810030925.5说明书第1/5页用酶降解棕搁粕!棕搁仁粕的方法技术领域本发明涉及一种利用生物酶降解棕搁粕!棕搁仁粕的方法,通过该方法降解后能得到一种可作为饲料或饲料配方的混合物"背景技术棕搁粕!棕搁仁粕分别是棕搁果肉!棕搁仁提炼棕搁油的过程中所产生的一种残留物质,其粗纤维含量高,粗蛋白含量低(14~19%),赖氨酸!蛋氨酸及色氨酸均缺乏,脂肪酸属于饱和脂肪酸(主要成份分析见表1)"棕搁(仁)粕属于粗饲料,由于其价格低!无霉性!无副作用,所以特别适合于反自动物的饲养,如牛!羊!鹿等"表1:棕搁(仁)粕主要成份分析成成份份含量量蛋蛋白(Protein))))14%%%脂脂肪(011))))8%%%水水分(Moisture)))蕊9.5%%%杂杂质(Dirt&Shell)))毛15%%%棕搁仁粕的实验室抽样化验结果如下:粗蛋白16%粗纤维18%粗脂肪n%水分9.5%赖氨酸0.5%胧氨酸0.2%苏氨酸0.5%精氨酸2%蛋氨酸0.3%苯丙氨酸0.6%组氨酸0.26%色氨酸0.12%钙0.15%无氮浸出物40.9%粗灰分4.6%总能量4100MCL服G目前,作为传统饲料来源的玉米及饼粕类原料的国内市场价格在不断上涨,而使用棕搁(仁)粕作为饲料原料不仅价格低!成本小,而且原料来源丰富,由于棕搁(仁)粕可部分替代玉米和豆粕,其最直接的效果就是成本可大幅降低,而对饲喂效果影响甚微,从而使饲料企业!畜牧企业的经济效益显著提高,竞争力大大增强"但鉴于上述成份分析结果,在肉鸡和仔猪日粮中不宜使用棕搁(仁)粕,生长育肥猪可用到巧%以下,奶牛使用可提高奶酪质量,但大量使用会影响适口性"有报道显示,影响棕搁(仁)粕200810030925.说明书第2/5页作为饲料使用的原因不仅仅在于其粗纤维含量较高,更主要的是因为棕搁(仁)粕中含有大量抗营养因子)p一甘露聚糖,如何有效降解甘露聚糖,并使之转化为可饲喂动物的营养物质,就成为饲料行业一个鱼待解决的问题"利用生物酶降解聚糖类物质是一种有效的途径,但传统的方法是在待加工处理的物料上喷涂一层薄薄的酶溶液或是在待加工处理的物料泥浆中添加酶溶液,前一种方法限制了加工处理的速度,后一种方法因细胞已被水所饱和,酶溶液只能慢慢扩散到细胞间隙中,转化率太低"而针对棕搁(仁)粕中甘露聚糖的生物降解技术更是鲜有报道,降解所使用的酶溶液的配制以及酶解反应的温度!时间的控制都很难把握"发明内容本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足,提供一种营养价值较高!废弃物排放较少!转化效率高!工艺操作简单的用酶降解棕桐粕!棕搁仁粕的方法"为解决上述技术问题,本发明提出了一种用酶降解棕搁粕!棕搁仁粕的方法,包括以下步骤:(l)原料的配制!混合:将干燥的棕搁粕和/或棕搁仁粕与含有甘露聚糖酶的酶溶液混合均匀,其中每克干燥的棕搁粕和/或棕搁仁粕的甘露聚糖酶用量为5~120个单位,酶溶液的pH值控制在2~11,混合后物料的水分含量控制在30~70%;(2)酶解反应的控制:将上述混合后物料置于40~100e的温度下进行酶解反应,保持4一80小时后,得到混合产物"上述干燥的棕搁粕和/或棕搁仁粕是指经干燥处理后其水分含量控制在15%以下,最好能将水分含量控制在3~10%"上述干燥处理过程可以在干燥设备中进行,为了减少细菌的繁殖和有机质的腐烂,干燥过程中的温度可控制在50~130e,优选控制在75~1巧e"在上述方法原料的配制!混合阶段,每克干燥的棕搁粕和/或棕搁仁粕的甘露聚糖酶用量优选为7~18个单位,酶溶液的pH值最好控制在4.5~6.5,混合后物料的水分含量最好控制在45~65%"在配制!混合过程中,用来处理的酶溶液最好是慢慢地加入到大量的干燥的棕搁粕和/或棕搁仁粕中,在添加酶溶液的过程中对棕搁粕和/或棕桐仁粕进行不断地搅拌,使之与酶溶液充分!均匀地混合"考虑本发明的方法是在适宜的温度条件下以防止反应混合物感染而进行的轻微的!200810030925.说明书第3/5页限制酶活性并抑制微生物扩散的过程,因此在上述酶解反应的控制阶段,混合后物料酶解反应温度优选控制在55一80e;反应时间可以在所述控制范围内(4一80小时)因酶的用量及反应温度的不同而有所差异"通过上述方法对棕搁粕和/或棕搁仁粕进行降解后,得到的产物为含有较高水分的固一液混合物,该混合产物可以直接作为饲料饲喂动物或是作为饲料配方中的一种原料,也可以对上述成品进行干燥!粉碎后,得到粒状成品作为饲料产品使用"本发明是将酶溶液与干燥的棕搁(仁)粕充分!均匀地混合,而非如传统工艺所采用的与浆液混合,这样就提供了一个非常高效率的甘露聚糖的转化过程,干燥的棕搁(仁)粕能够快速地吸收酶溶液,甘露聚糖酶因此也能够更迅速地对细胞中的甘露聚糖产生作用"甘露聚糖酶是半纤维素酶的一种,是能够水解含p一1,4一甘露糖昔键的甘露寡糖和甘露多糖(包括甘露聚糖!半乳甘露聚糖!葡萄甘露聚糖等)的内切水解酶,能将广泛存在于豆类籽实中的甘露聚糖等多糖降解为甘露寡糖等低聚糖,这样不仅消除了甘露聚糖对单胃动物各种营养素的抗营养作用,同时所生成的甘露低聚糖在动物肠道中起着重要的调节作用"而本发明的方法正是利用甘露聚糖酶来降解棕搁(仁)粕中的抗营养因子,将其转化为动物可利用的营养物质(含甘露寡糖和/或甘露糖的混合物),这不仅充分利用了饲料资源,同时也显著提高了动物的生长性能和免疫力"此外,本发明的工艺方法产生的废弃物较少,工艺过程简单!容易控制,成本低,产物的营养价值较高,产品稳定性好,在很多情况下产品都是有用的动物性饲料或饲料成分"经过实验发现,在蛋鸭日粮中添加一定比例的本发明成品后,蛋鸭的产蛋率!个蛋重!料蛋比!破畸和蛋黄颜色与对照组没有差异,但每吨饲料的成本却可以大幅度降低"具体实施方式实施例1将水分含量为18.42%的棕搁仁粕放入干燥机中进行干燥,干燥时温度控制在100e左右,干燥时间设定为40分钟,干燥后水分测定为4.47%"称取180.09的棕搁仁粕样品两个,每个样品加入Zooml的含有甘露聚糖酶的酶溶液(pH值为5.3),并分别转移到两个具塞反应管中"再称取180.09棕搁仁粕作为第三个样品,加入Zooml含有柠檬酸钠的水缓冲液(pH值为5.3),并转移到另一个具塞反应管中"第一个样品立即与l000ml含有柠檬酸钠的水缓冲液(pH值 5.3)混合,用一过滤器过滤,不溶物用lo00ml含有柠200810030925.说明书第4/5页檬酸钠的水缓冲液(pH值5.3)冲洗,并将不溶物置于100e温度下干燥24小时后,称得干燥物的质量为153.609"其中200ml的含有甘露聚糖酶的酶溶液是由1.739的里氏木霉(Triehodermareesei)与200ml柠檬酸钠(SOnunol)缓冲溶液混合配制而成,该酶溶液中大约能产生1800~3600个单位的甘露聚糖酶"将第二个!第三个样品置于10转/分钟的自动调温孵育箱中,温度设定在52e士0.5e"经过24小时后,分别对第二个!第三个样品进行过滤!洗涤和干燥(方法同第一个样品),第二个样品干燥后的质量为116.49,第三个样品干燥后的质量为152.49"由以上对比试验可见,以初始的棕搁仁粕样品干重171.959来计算转化率,则非酶和酶介导孵育的转化率分别为n.4%和犯.3%"由于孵育过程的影响,使棕搁仁粕中的不溶性蛋白(以难溶干物质进行确定)从153.69减少到116.49:由于酶解作用的影响,使棕搁仁粕中的不溶性蛋白从152.49降低至116.49;由于两种因素的共同作用,使棕桐仁粕中的不溶性蛋白从171.959降低至116.49"以上结果说明:在适当的温度!时间控制下用甘露聚糖酶降解棕桐仁粕时,棕搁仁粕中的不溶性物质已有相当量转化为可溶性物质"实施例2取实施例1中干燥的棕桐仁粕160Kg,将其与340Kg含有醋酸钠的水缓冲液混合(PH值为5.2),并转移至反应釜中"另取第二个16OKg的样品,在该样品中加入340Kg的含有甘露聚糖酶的酶溶液(pH值为5.2),并转移至反应釜中"其中34OKg的含有甘露聚糖酶的酶溶液是由1.6Kg的里氏木霉(Trichodermareesei)与340Kg的醋酸钠缓冲溶液(PH值为5.2)混合配制而成,该酶溶液中大约能产生160~320万个单位的甘露聚糖酶"把上述两个样品同时置于温度为62e士0.1e的喷淋装置中摇动孵育42小时,得到产品" 从上述两个反应釜中各取109溶液置于试管中进行分析,剩余产品烘干后进行粉碎,用于蛋鸭等动物的饲喂试验"每个试管分析样中补充ZOml水,再用力摇晃3分钟后置于3200转的离心机上离心10分钟,将浮在表面的油层移除出试管"然后移取样品用气液联用色谱仪(GLC)和气质联用色谱仪(GC一MS)测得第一个反应釜样品中含有0.smg/ml的葡萄糖和<0.04mg/m1的甘露糖,第二个反应釜样品中含有1.4mg/m1葡萄糖和45.3mg/m1 的甘露糖"上述分析结果说明在棕搁仁粕中加入甘露聚糖酶后,棕搁仁粕中的抗营养因子)甘露聚糖已转化为或部分转化为营养性物质甘露糖"200810030925.说明书第5/5页饲喂试验结果表明第一个反应釜中得到的产品不宜作为蛋鸭的营养性物质,因为其营养价值太低,饲喂效果不理想;而在蛋鸭日粮中添加一定量的第二个反应釜中得到的产物后,蛋鸭的产蛋率!个蛋重!料蛋比!破畸和蛋黄颜色与按基础日粮饲喂的对照组没有差异,但却可以降低饲料成本24.25元/吨"实施例3将水分含量为17.5%的棕搁粕放入干燥机中进行干燥,干燥时温度控制在95e左右,干燥时间设定为50分钟,干燥后水分测定为4.25%"称取160.09的棕搁粕样品,将其与340耐含有醋酸钠的水缓冲液混合(PH值为5.2),并转移至具塞的反应管中"称取第二个16鲍的样品,在该样品中加入200ml的含有甘露聚糖酶的酶溶液(pH值为5.3), 并转移至具塞反应管中"其中ZO0ml的含有甘露聚糖酶的酶溶液是由1.639的里氏木霉(TriChodermareesei)与200ml的柠檬酸钠(50mmol)缓冲溶液混合配制而成,该酶溶液中大约能产生1630~3260个单位的甘露聚糖酶"把上述两个样品同时置于10转/分钟的自动调温孵育箱中,温度设定在55e士0.5e,孵育30小时,得到产品"从上述两支反应管中各取109溶液置于试管中进行分析,每个试管分析样中补充ZOml水,再用力摇晃3分钟后置于3200转的离心机上离心10分钟,将浮在表面的油层移除出试管"然后移取样品用气液联用色谱仪(GLC)和气质联用色谱仪(GC一MS)测得第一个反应管样品中含有0.7mg/m1的葡萄糖和<0.04mg/m1的甘露糖,第二个反应管样品中含有1.3mg/m1葡萄糖和46.smg/m1的甘露糖"上述分析结果说明在棕搁仁粕中加入酶后,棕搁仁粕中的抗营养因子)甘露聚糖已转化为或部分转化为营养性物质甘露糖"第一个样品立即与100Oml含有柠檬酸钠的水缓冲液(pH值5.3)混合,用一过滤器过滤,不溶物用100oml含有柠檬酸钠的水缓冲液(pH值5.3)冲洗,并将不溶物置于100e温度下干燥24小时后,称得干燥物的质量为137.119"第二个样品经与第一个样品相同的处理方式得到干物质101.429,由以上对比试验可见,以初始的棕桐粕样品干重153.29来计算转化率,则非酶和酶介导孵育的转化率分别为10.5%和33.8%"。
一种酶解魔芋粉制备甘露寡糖的方法[发明专利]
![一种酶解魔芋粉制备甘露寡糖的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/51e88d1cb5daa58da0116c175f0e7cd1842518ae.png)
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101508966A [43]公开日2009年8月19日[21]申请号200910014349.X [22]申请日2009.02.20[21]申请号200910014349.X[71]申请人山东大学地址250100山东省济南市历下区山大南路27号[72]发明人张玉忠 陈秀兰 张闵 孙彩云 周百成 [74]专利代理机构济南金迪知识产权代理有限公司代理人周慰曾[51]Int.CI.C12N 1/20 (2006.01)C12P 19/00 (2006.01)C12R 1/07 (2006.01)权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页[54]发明名称一种酶解魔芋粉制备甘露寡糖的方法[57]摘要本发明涉及一种酶解魔芋粉制备甘露寡糖的方法，属于食品生物技术领域。
本发明利用产β－甘露聚糖酶的菌株芽孢杆菌Bacillus sp.MSJ－5保藏号CCTCC NO：M208258，进行发酵制备β－甘露聚糖酶，再利用所制备的β－甘露聚糖酶酶解魔芋粉制备甘露寡糖，酶解条件50～55℃，50～70转/分钟搅拌，酶解20－30小时。
可方便低廉地实现甘露寡糖的工业化生产，满足市场对甘露寡糖的需求。
200910014349.X权 利 要 求 书第1/1页 1.产β-甘露聚糖酶的菌株，该菌株是芽孢杆菌Bacillussp.MSJ-5，保藏号CCTCC NO：M208258，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。
2.一种酶解魔芋粉制备甘露寡糖的方法，步骤如下：(1)菌株斜面培养产β-甘露聚糖酶的菌株芽孢杆菌Bacillus sp.MSJ-5，保藏号CCTCC NO：M208258，菌株斜面培养基：角豆胶1.0～1.2份，(NH4)2SO4 0.4～0.6份，K2HPO4·3H2O 0.8～1.0份，琼脂1.2～1.5份，水100份，均为重量份；(2)液体种子培养液体种子培养基：酵母粉2.0～2.5份、麸皮1.0～1.2份、K2HPO4·3H2O 0.8～1.0份、水100份，均为重量份，下同；灭菌，冷却，接种步骤(1)制得的芽孢杆菌Bacillus sp.MSJ-5的斜面菌种的菌悬液5～10份，28～30℃，摇瓶转速100～120转/分钟，培养20～24小时，得芽孢杆菌Bacillus sp.MSJ-5的液体种子，待用；(3)β-甘露聚糖酶液的发酵制备将步骤(2)制得的芽孢杆菌Bacillus sp.MSJ-5的液体种子按重量份5～8份加入到产酶培养基中进行发酵，发酵条件是30～32℃、27～34小时；产酶培养基是：魔芋粉2.0～2.5份、酵母粉1.3～1.5份、豆粕1.0～1.2份、K2HPO4·3H2O 0.4～0.5份，pH 7.0～7.2；发酵制得的β-甘露聚糖酶液中β-甘露聚糖酶酶活为651±37U/ml；(4)β-甘露聚糖酶酶解魔芋粉制备甘露寡糖用去离子水配制魔芋粉液使魔芋粉含量为10～15m g/m l，将步骤(3)制得的β-甘露聚糖酶液按β-甘露聚糖酶10～15U/mg魔芋粉加入魔芋粉液中，pH7.0，50～70转/分钟搅拌，50～55℃，酶解20-30小时；酶解完毕，加温至100℃，保温5～10min使酶灭活，冷却后，10000rpm、室温离心5～10min，上清即为甘露寡糖液。
甘露寡糖
甘露寡糖(Mannose-oligosaccharides,MOS)1.范围本标准规定了甘露寡糖的术语和定义、产品分类要求、实验方法、检测规则、标准包装、运输和贮存等。
本标准适用于从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活物性物质的生产、检验和销售。
2．规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备(GB/T602-2002,ISO63531:1982,NEQ)GB/T603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备(GB/T603-2002,ISO6353-1:1982,NEQ)GB/T5917.1 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB10648 饲料标签GB/T14699.1饲料采样(GB/T14699.1-2005,ISO6497:2002,IDT)3. 术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1甘露寡糖(Mannose-oligosaccharides,MOS)甘露寡糖又称为甘露低聚糖，是从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活性物质，广泛存在于魔芋粉、瓜儿豆胶、田菁胶及多种微生物细胞壁内。
与β-葡聚糖为同一工艺开发的一种新的产品，其来源于新鲜的食品啤酒酵母。
它是一种多糖，主要化学结构β-1，3葡聚糖和β-1，6葡聚糖，其中前者具有抗肿瘤性质，而且能够极大地提高人体自然免疫力。
3.2甘露寡糖含量甘露寡糖含量为≥15%4. 产品分子量甘露寡糖结构分子示意图5. 要求5.1 感官要求粉状低聚木糖颜色为浅黄色，具有特有的甜味、香气，无异味，无正常视力可见异常。
6. 检测方法6.1 原理甘露寡糖经酸水解后形成甘露糖，甘露糖经衍生化后注入高效液相色谱柱进行色谱分离，在245nm波长处用紫外检测器检测甘露糖的含量。
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酶解棕榈粕制备甘露寡糖及其组分的结构确定摘要:以棕榈粕为底物,用中性B-甘露聚糖酶降解得到甘露寡糖粗品,并对其采用纸层析法分离纯化其中的各组分,最终得到甘露二糖、甘露三糖和甘露四糖三种寡糖组分。
通过气相色谱(GC)检测可知,这三种寡糖中只含有甘露糖和葡萄糖,且甘露糖和葡萄糖的比例依次为119B1、318B1和318B1。
采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定分离得到的三种寡糖的结构。
关键词:棕榈粕,甘露寡糖,制备,结构Study on manna-oligosaccharides prepared frompaml mealby enzyme and the determ ination of their structuresAbstrac:tThe sample ofmanno-oligosaccharides(MOS)was prepared from paml mealby neutralB-mannanase1The components ofmanno-oligosaccharides were separated and purified by paper chromatography, and threedifferent degree of polymerization (DP ) of oligosaccharides were obtained: mannobiose, mannotriose andmannotetraose1The structures of them were determ ined by matrix-assisted laser desorption/ionization-tmi e-of-flightmass spectrometry(MALD I-TOF MS) and gas chromatography(GC)1The results ofGC showed that theywere allcomposed ofmannose and glucose, and the ratio ofmannose and glucose were119B1,318B1and318B1,respectively1While the results of MS showed that the three oligosaccharides DP were DP2, DP3and DP4,respectively1Key words:paml mea;l manna-oligosaccharides; preparation; structure棕榈粕是棕榈的果实和种子榨油后所产生的饼粕,主要用作反刍动物的饲料。
甘露聚糖是棕榈粕的重要组成成分之一,其含量达36%[1],是除酵母细胞壁以外制备甘露寡糖的最佳原料。
甘露寡糖属于功能性低聚糖,具有一定的免疫原性,能刺激机体免疫应答,增强动物体的细胞和体液免疫反应。
Kazuto[2]等人通过小鼠实验发现甘露寡糖可明显降低白细胞介素-10的产生,并能抑制血清中特异性卵清蛋白IgE,从而起到抑制过敏症状的作用。
甘露寡糖还能促进有益菌增殖,改善肠道微生态,提高机体免疫力。
Ichiro[3]等人通过体外实验发现,甘露寡糖在人体消化系统中是无法被消化的,而是被大肠中的微生物转化为以乙酸、丙酸和丁酸为主的短链脂肪酸,而这些脂肪酸被认为是可以改善肠道微生物85 环境,还可被肠道微生物吸收利用以作能量来源。
此外,一些研究还表明甘露寡糖具有抗氧化、降血糖、降血脂及抗肿瘤的作用。
王芳[4]等通过体外实验证明甘露寡糖可以有效地清除羟自由基(#OH),给小鼠适量添加甘露寡糖有助于提高肝脏组织的抗氧化能力,保护肝脏免受各种氧化应激和损伤。
Izumi[5]等人给小鼠饲喂含1%的甘露寡糖和不含甘露寡糖的高脂食物,通过对照发现, 12周后发现饲喂含有甘露寡糖食物的小鼠的脂肪百分含量和肝脏中甘油三酸脂水平明显低于对照组,血清中的甘油三酸脂水平也有降低趋势,而排泄物中的甘油三酸脂水平则有明显增加,从而说明甘露寡糖可以有效抑制脂肪的积累和大肠对高脂食品中脂肪的吸收。
本文以棕榈粕为底物,采用中性B-甘露聚糖酶酶解,纸层析法分离纯化,以及气相色谱和质谱测定组分组成及结构,从而实现甘露寡糖的制备、分离纯化和化学结构测定研究,进而摸索出利用棕榈粕制备甘露寡糖单一组分的条件和方法。
1 材料与方法111 材料与仪器棕榈粕马来西亚;中性B-甘露聚糖酶酶活\20万U/g,北京博仕奥生物技术有限公司;层析用纸板 20cm@20cm,Whatman,英国;甘露糖分析纯,国药集团化学试剂有限公司;葡萄糖含量9915%, Sigma公司;甘露寡糖标准品含量\98%,聚合度DP 2~5,本实验室自制;对氨基苯甲醚盐酸盐含量99%,百灵威公司;其它试剂均为国产分析纯。
旋转蒸发仪 RE-3000,上海亚荣生化仪器厂;AXIMA CFR型基质辅助激光解析电离质谱仪、岛津GC2010气相色谱仪日本岛津公司;平头微型进样器(50LL),玻璃柱(215cm@30cm)。
112 甘露寡糖粗品的制备称取100g棕榈粕置于1L的烧杯中,加入5%NaOH溶液450mL,于室温下保持3d,水洗至pH7左右,过滤得到滤饼。
取出滤饼置于500mL烧杯中,加入350mL蒸馏水和10mL 0105mol/L pH610磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液,混匀,加热至40e,再加入5gB-中性甘露聚糖酶,搅拌, 40e下恒温反应11h。
反应结束后,过滤得到滤液,将滤液真空浓缩至约25mL,即得到甘露寡糖粗品溶液,并取1、2、5LL样品溶液用纸层析法初步检测其中的组分。
113 甘露寡糖的分离纯化及结构测定选择纸层析法进行甘露寡糖单一组分的分离纯化。
即取层析用纸板,每隔015cm用微型进样器均匀点上2LL甘露寡糖粗品溶液样品,置于展开剂中上行展开一次,晾干。
从每张纸板中延展开方向切下两个窄条(每个窄条均包含一个样品点)显色。
显色完后,再与各自的纸板对应放好,压实,切下未显色部分中与显色后的斑点对应的位置,按照聚合度的不同将切下来的部分分别收集在一起,绞碎,分别装入玻璃柱中,用蒸馏水洗脱。
每支玻璃柱的洗脱用水为200mL。
将洗脱液分别在45e真空浓缩至约5mL,进行组分的纯度和结构测定。
11311 纸层析条件展开剂为正丁醇B吡啶B水=6B4B3 (v/v/v),显色剂为1%对氨基苯甲醚盐酸盐正丁醇溶液,于130e下保持5min显色。
11312 气相色谱条件色谱柱为rtx-50(3010m@0125mm@0125Lm)毛细管柱;程序升温条件为: 180e保持2min,以6e/min升至210e,再以013e/min升至215e,最后以6e/min升至240e,保持30min;进样口温度270e,检测器温度280e;分流比为19B1;载气为氮气。
11313 质谱条件正离子检测方式,N2激光波长为337nm,加速电压为80keV,基质为2, 5-二羟基苯甲酸水溶液(DHB,10mg/mL),用标准混合肽作质量校正。
2 结果与讨论211 甘露寡糖粗品及分离纯化后单一组分的纸层析结果图1为甘露寡糖粗品的纸层析图谱,通过与标准品的对比可以看出,粗品中含有单糖和聚合度为2、3、4、5的甘露寡糖,同时还含有一些聚合度更高的甘露寡糖。
其中,单糖和前三种寡糖彼此之间的比迁移值差别较大,可以用纸层析法分离得到,五糖及聚合度更高的寡糖彼此间的比迁移值差别很小,无法采用纸层析法进行分离。
故本实验用纸层析法分离甘露寡糖粗品中的甘露二糖、甘露三糖和甘露四糖。
图1 甘露寡糖粗品的纸层析图谱M:甘露糖和甘露寡糖标准品;M1:甘露糖;M2:甘露二糖;M3:甘露三糖;M4:甘露四糖;M5:甘露五糖; 1: 1LL甘露寡糖粗品溶液;2: 2LL甘露寡糖粗品溶液; 3: 5LL甘露寡糖粗品溶液图2 甘露寡糖分离后组分的纸层析图谱M:甘露糖和甘露寡糖标准品;M1:甘露糖;M2:甘露二糖;M3:甘露三糖;M4:甘露四糖;M5:甘露五糖;A:组分A;B:组分B;C:组分C甘露寡糖粗品用纸层析法分离得到A、B、C三种组分,图2为其纸层析图谱。
通过与标准品的对照可以看出,A、B、C分别对应于甘露二糖、甘露三糖、甘露四糖,而且各组分不含有其他杂质,纯度比较86高,初步说明了采用纸层析法分离聚合度较低的甘露寡糖是可行的。
212 单一组分的结构测定为了确定A、B、C的单糖组成,采用GS对样品进行检测。
图4~图6分别为A、B、C三种组分的气相色谱图,对照图3可以看出,A、B、C均由甘露糖和葡萄糖组成。
通过计算可知,A、B、C三种组分中甘露糖和葡萄糖的比例依次为119B1、318B1和318B1。
图3 单糖标准品的气相色谱图1:鼠李糖; 2:果糖; 3:阿拉伯糖; 4:木糖;5:甘露糖; 6:葡萄糖; 7:半乳糖图4 组分A的气相色谱图1:甘露糖; 2:葡萄糖图5 组分B的气相色谱图1:甘露糖; 21葡萄糖图6 组分C的气相色谱图1:甘露糖; 2:葡萄糖为了进一步确定分离得到的A、B、C三种组分的结构,采用MALDI-TOFMS测定样品结构。
图7~图9分别是纸层析分离得到的A、B、C三种组分的MALDI-TOFMS图谱,从中可以推测出,A、B、C分别对应于甘露二糖、甘露三糖、甘露四糖。
图7 组分A的MALDI-TOFMS图谱图8 组分B的MALDI-TOFMS图谱图9 组分C的MALDI-TOFMS图谱3 结论采用内切型中性B-甘露聚糖酶对棕榈粕进行酶解可得到以聚合度二、三、四、五为主的甘露寡糖,制备型纸层析法可以较好地分离出其中的甘露二糖、甘露三糖以及甘露四糖, GC和MS测定结果表明甘露二糖、甘露三糖、甘露四糖均是由甘露糖和葡萄糖组成。
本实验研究表明,制备型纸层析法在制备甘露寡糖单一组分方面,具有快速、简便的优点。
参考文献[1]森腰俊亨,横沟太(不二制油株式会社)1含有B-1, 4-甘露二糖的组合物[P]1中国:中华人民共和国国家知识产权局20038010413219, 2006-01-041[2] Kazuto Ozak,i Shigeyoshi Fuji,i Masahiko Hayashi1Effect of dietarymannooligosaccharides on the immune system ofovalbumin -sensitizedmice [J]1Journal ofHealth Science, 2007, 53(6):766-7701[3] Ichiro Asano, Kengo Hamaguch,i Shigeyoshi Fuji,i et al1In vitro digestibility and fermentation ofmannooligosaccharides from coffeemannan [J]1Food Science andTechnologyResearch, 2003,9(1): 62-661[4]王芳,乐国伟,施用晖,等1甘露寡糖对小鼠肝脏中自由基的清除及抗氧化酶活性的影响[J]1营养学报, 2007, 29(5):466-4691[5] Izumi Takao, Shigeyoshi Fuji,i Asako Ishi,i et al1Effects of mannooligosaccharides from coffeemannan on fat storage in mice fed a high fat diet [J]1Journal ofHealth Science, 2006, 52(3): 333-3371。