糖肟三甲基硅醚衍生物制备方法的改进――气相色谱法分离甘露糖、半乳糖、葡萄糖
半纤维素
2
4-O-Me 1
--D-GlcpA
3 1 2 -L-Araf 5
聚阿拉伯糖半乳糖
-3--D-Galp1-3--D-Galp1-3--D-Galp1-3--D-Galp1-3--D-Galp1-
6 1 -D-Galp 6 1
6 1 -D-Galp 6 1
6 1 -D-Galp 6 1
聚阿拉伯糖基 4 - 0 - 甲基 - 葡萄 糖醛酸木糖 聚阿拉伯糖基4-0-甲基-葡萄 糖醛酸木糖 聚阿拉伯糖基4-0-甲基-葡萄 糖醛酸木糖
玉 米 杆 芦 苇
1→4 1→2 I→3 1→4 1→2 1→3 1→4 1→2 1→3)
竹 杆 印 度
4 半纤维素的组成1
半纤维素的组成2
三 、半纤维素化学结构的研究
2 结构表达式
哈瓦斯式
-4--D-Glcp-1-4--D-Manp-1-4--D-Manp-1-4--D-Manp-16 1 -D-Galp AC 2,3
结构简式
3 半纤维素的命名
（1）命名： 主链糖基法
只命名主链糖基,前面加一聚字，此法不常用
列出各种糖基 先枝后主，先少后多，前面加一聚字，此法 常用
6 1 R
6 1 -L-Araf 3 1
-D-Galp
-D-Galp
-D-Galp
-L-Arap
R可为 -D-Galp或较少情况是 -L-Araf 或 -D-GlcpA
(2) 阔叶材的半纤维素以聚木糖为主
-4--D-Xylp1-4--D-Xylp1-4--D-Xylp1-4--D-Xylp1-
(3) 高碘酸盐氧化法
此法基于聚糖经高碘酸盐氧化后，某些糖基上的 C-C键断裂，形成一CHO基，并生成甲酸 根据高碘酸盐的消耗量，产生的甲酸量，可以测 定聚糖还原性末端基和支链的数量 氧化作用视糖基不同而异，聚糖上的还原末端基 形成两个醛基，并生成两分子甲酸
多糖含量测定的几种不同方法比较
多糖含量测定的几种不同方法比较系别:信息学院专业:生物工程学号:姓名:指导教师:指导教师职称: 讲师多糖含量测定的几种不同方法比较摘要：本文综述了多糖含量测定的几种常用方法，主要有苯酚-硫酸法、3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)、蒽酮-硫酸法、色谱法、红外光谱定量分析多糖法等。
并对这些方法的优缺点进行了分析和比较。
这些方法可为多糖含量测定提供一定的参考，并为多糖含量测定的更深入研究提供一定的理论基础。
关键词：多糖；含量；测定；方法A review of different methodsto the determination of polysaccharidesAbstract: Paper reviewed some different methods to the determination of polysaccharides, in it phenol-vitriol method, 3, 5-two nitro salicylic acid (DNS) method, anthrone-vitriol method, chromatography, infrared spectrum quantitative analysis and etc had been dealed with. And the advantages and disadvantages of these methods are analyzed and compared. It provided some related information and based theories to the determination of polysaccharides content.Key words：polysaccharides; content; determination; methods目录中文摘要 (I)英文摘要 (II)1前言 (1)2化学法测定多糖含量 (1)2.1苯酚-硫酸法 (1)2.2 3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法) (2)2.3蒽酮-硫酸法 (2)3色谱法测定多糖含量的研究 (3)3.1气相色谱法(GC) (3)3.2 液相色谱法(HPLC) (3)3.3薄层色谱法(TLC) (4)4其他方法 (4)4.1红外光谱定量分析多糖法 (4)4.2生物传感器法 (5)5结论 (5)6展望 (6)参考文献 (6)致谢 (9)1前言多糖(polysaccharides，PS)是由10个以上的单糖聚合而成的生物高分子[1]。
单糖及氨基糖的毛细柱气相色谱分析
表 １
单 糖 及 乙酰 氨 基 糖 的 定 量 测 定 结 果
表 ２ 蓖麻凝集素中糖组分测定
结果讨论 （一） 甲醇解反应的稳 定性问题： 由于 单糖的结构不 同，在反应中活性各不相同， 对酸度和温度敏感性不 同［３］，我们选用较为 激 烈的条件，以保证 甲醇解完全。 （二）ＴＭＳ衍 生 物 的完全性和稳定性 问题：我们做了乙酰氨基糖的 ＴＭＳ衍生物
的红外光谱图，无－ＯＨ峰吸收，但有－ＯＳｉ （ＣＨ３），吸收，证明糖的 ＴＭＳ是基本完全的。 另外，该衍生物在潮湿空气 中易水解，故对 该类化合物进行衍生化 反应时须注意容器及
试剂的干燥。 （三） 定量 方法的误差来源：１．样品纯
度问题：我们选用的标准糖及 内标物均为生 化试剂 ，其纯度不高，给方法带来一定的系 统误差。２．糖的ＴＭＳ衍生物对 ＦＩＤ响应普 遍较小［４］，我们得到了与文献报道相同的结 果。３．峰面积采用半峰宽的人工测量是影响 方法精度和准确度的主要 因素之一。
单糖及氨基糖的毛细柱气相色谱分析
蒋秀瑛 陈明灿
顾新 孙册
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（中国科学院上海有机化学研究所） （中国科学院上海生物 化学研究所）
本文报道了一组单糖 （岩藻糖、阿拉伯 糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖）以及乙酰 氨基己糖 （Ｎ－乙酰氨基半乳糖与 Ｎ－乙酰氨 基葡萄糖）的毛细柱ＧＣ分 析 方 法。此 方 法已初步应用于测定蓖麻凝集素 （Ｌｅｃｔｉｎ一 种糖蛋 白） 中糖的组成，结果表明其主要成 分为甘露糖及氨基葡萄糖等，含 糖 量 约 为 １０％左右。本方法也为其他动植物糖蛋 白的 糖成分测定与结构分析提供了一 种 有 效手 段。本文还对甲醇解反应的 稳 定 性、ＴＭＳ 衍生化的完全性 以及定量误差的来源等问题 进行了讨论。
第二讲糖分析方法
第二讲糖的分析方法一、中性糖的测定1．还原糖的次亚碘酸盐定量法适用：各种醛糖；适用于测定淀粉酶解时糖苷键水解的百分率，也可测定淀粉酶产物的寡聚糖链长。
基本反应：CH2OH(CHOH)n CHO+I2+3NaOH→CH2OH(CHOH)nCOONa+2NaI+2H2O (氧化)I2+2Na2S2O3→Na2S4O6+ NaI (滴定) 2．3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法原理：在碱性溶液中，3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
注意：该法不是化学计量反应，戊糖、已糖和双糖与DNS反应的生色度A500/μmol糖的值分别是：戊糖（木糖、阿拉伯糖）：0.42；已糖（葡萄糖、半乳糖、甘露糖）：0.46；双糖（麦芽糖、乳糖）：0.65。
有人认为还原糖的醛基被氧化为羧基，但当量不准确，不同的糖类产生不等等量的色度，表明它的化学反应是较复杂的。
3．Somogyi-Nelson法还原糖将铜试剂还原成氧化亚铜，在浓硫酸存在下与砷钼酸生成蓝色溶液，在560nm下的光密度与还原糖浓度呈比例关系。
注意：比方法重复性较好，产物稳定，测定范围10-180μg/mL。
4．苯酚-硫酸法苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的已糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起显色反应，已糖在490nm处，戊糖及糖醛酸在480nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
注意：（1）该法颜色持久，较稳定；（2）每种糖的显色值不同，故不宜直接用于杂多糖的定量测定；分析杂多糖时，可根据各种单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。
（3）有颜色的样品，测定值偏高；（4）此法较适于检测凝胶柱部分收集样品中相对糖量的分析。
5．蒽酮-硫酸法糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm处有最大吸收，显色与多糖含量呈线性关系。
气相色谱法同时测定多糖中的中性糖、糖醛酸、氨基糖和唾液酸
气相色谱法同时测定多糖中的中性糖、糖醛酸、氨基糖和唾液酸李波;芦菲;田素玉【摘要】Neutral sugar, uronic acid, amino sugar and sialic acid were effectively determined simultaneously by gas chromatography after methanolysis and trimethylsilylation. Three standard monosaccharide mixtures （including Ara, Rha, Fuc, Xyl, Man, Gal, Gle, GlcA, GalA, GalNAc, GlcNAc, Neu5Ac） and two polysaccharide samples （okara polysaccharide DFP, Coprinus comatus polysaccharide F32） were methanolysis by 1 mol/L HC1/methanol at 85 ℃ for 18 -24 h, neutralized with Ag2CO3 and re-N-acetylated by adding acetic anhydride for 24 h in the dark. After removing the silver salts, the dried residue was trimethylsilylated by adding silylation reagent（pyridine/hexamethyldisilazane/chlorotrimethylsilane = 5： 1：1 ） for 30 min at room temperature. Then the final products were analyzed by gas chromatography. This method needs fewer amount of sample, and has higher sensitivity and resolution. It can simultaneous detect kinds of monosaccharides. It will have a great potential for application.%采用甲醇解和硅烷衍生化，用气相色谱法同时测定样品中的中性糖、糖醛酸、N-乙酰氨基糖和唾液酸，取得了很好的效果。
硅烷化衍生化-气相色谱法测定不同品种莜麦的非淀粉多糖
糖类物质的衍生化分离分析方法研究
The use of PMP method in reducing disaccharides gave good results．The present method，
which combined PMP derivatization—HPLC with ESI—MS，could be used as a research
method to study the structural units—specific monosaccharides of polysaccharides．
品常规分析的要求。结合建立的衍生化方法与高效液相色谱HPLC，优化分离条件，
并选择紫外(UV)和电喷雾一离子阱质谱(ESI—MS)两种检测模式对实际样品中所
含的单糖进行分离分析，建立了5种单糖的常规定性定量方法。也采用毛细管胶束电
动力学色谱(MEKC)分离单糖衍生物，与HPLC分离的结果加以比较，说明了MEKC
简单寡糖，再通过对降解产物的定性、定量测定，来确定其结构[12,13]。水解是比较常 是色谱技术用来确定多糖、寡糖
中各种单糖组分构成的前提。使用无机、有机酸在适当的条件下能使多糖、寡糖达到
完全水解，定量转变成相应的单糖。酸水解可以使用盐酸、硫酸或者醋酸、三氟乙酸
II
堡主丝塞塑耋塑堕竺塑皇些坌查坌堑查鎏竺窒——
Further，the PMP method was also well-suited for micellar electrokinetic chromatograph3,
植物纤维素原料化学成分分析
植物纤维素原料化学成分分析植物纤维素原料化学成分分析摘要： 概述了光谱分析法、色谱分析法和核磁共振等现代仪器分析技术在植物纤维原料化学分析方面的应用。
分析技术在植物纤维原料化学分析方面的应用。
关键词：植物纤维原料：植物纤维原料;;仪器分析技术仪器分析技术植物纤维原料的化学组成复杂植物纤维原料的化学组成复杂,,除了纤维素、半纤维素和木素这三种构成了植物体骨架的主要成分素这三种构成了植物体骨架的主要成分((总质量的总质量的80 %80 %80 %～～95 %) 外,还含有诸如单宁、果胶质、树脂、脂肪、腊以及不可皂化物等少量组分。
等少量组分。
纤维原料成分分析对指导生产有着十分重要的意义,传统的分析方法过程繁杂、时间长时间长,,随着科技的发展随着科技的发展,,现代测试技术的应用范围日益广泛。
仪器分析方法越来越多地应用于物质量的分析仪器分析方法越来越多地应用于物质量的分析,,如光谱分析如光谱分析((紫外光谱、红外光谱、原子吸收与原子发射光谱等) ) 、色谱分析、色谱分析、色谱分析((气相色谱、高压液相色谱、凝胶渗透色谱、离子色谱等子色谱等) ) ) 、质谱、核磁共振、电子自旋共振、、质谱、核磁共振、电子自旋共振、、质谱、核磁共振、电子自旋共振、X2X2X2衍射能谱、电衍射能谱、电子显微镜分析、电化学分析子显微镜分析、电化学分析((电位分析和电导分析电位分析和电导分析) ) ) 等等。
本文等等。
本文就主要的仪器分析技术在植物纤维原料化学分析中的应用进行介绍。
介绍。
1 1 光谱分析法光谱分析法1.11.1紫外光谱法紫外光谱法紫外光谱法1.1.11.1.1木素的测定木素的测定木素的测定木素作为芳香族化合物木素作为芳香族化合物( ( ( 苯基丙烷结构苯基丙烷结构苯基丙烷结构) ) ) 和它的各种发色和它的各种发色基团基团, , , 对紫外光有强烈吸收对紫外光有强烈吸收对紫外光有强烈吸收, , , 而碳水化合物而碳水化合物而碳水化合物UV UV UV 光谱在此波长范光谱在此波长范围内则几乎没有吸收围内则几乎没有吸收,,所以可以在碳水化合物存在的情况下选择适当的条件适当的条件, , , 用紫外光吸收光谱来鉴定木素的结构和性质。
气相色谱质谱法用于糖类物质结构分析的新方法研究
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｅｘｃｅｐｔ ｆｏｒ ２，５·Ｍｅ２Ｇａｌ．Ｔｈｅｓｅ ＰＭＡＡｓ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ＧＣ－ＭＳ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｌａｃｔｏｆｕｒａｎｏｉｃ ｕｎｉｔｓ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ，
气相色谱质谱法用于糖类物质结构分析的新方法研究
摘要
气相色谱一质谱法（ＧＣ—ＭＳ）在糖类结构分析中具有重要作用，利用气相色 谱一质谱技术可以得到有关单糖残基的类型、糖的序列、糖环形式和羟基的取代 情况等多种结构信息，本研究开发了两种分甲基化的呋喃半乳糖醇乙酸酯标准（ＰＭＡＡｓ）——半乳糖 在无水氯化氢的催化下，与一分子甲醇作用，生成甲基半乳糖苷混合物，该混合 物经硅醚化衍生后，用气相色谱（Ｇｃ）、气相色谱一质谱研究了氯化氢浓度、反应 时间、反应温度对甲基呋喃半乳糖苷产率的影响。当氯化氢的浓度为Ｏ．００４ｍｏｌ／Ｌ， 反应温度为７０℃，反应时间为４ ｈ时，甲基呋喃半乳糖苷得率为７９．９％。在 ＢａＯ／Ｂａ（ＯＨ）２＂８Ｈ２０的催化下，甲基呋哺半乳糖苷与碘甲烷反应生成部分甲基化 的糖苷混合物，该混合物用ＴＬＣ检测（ＣＨＣｌ２：ＭｅＯＨ １０：１），结果表明：随着 反应时间的延长，甲基化程度越来越高，当反应４ ｈ后，生成了由一甲基、二 甲基、三甲基及四甲基半乳糖苷组成的混合物。该产物经水解、还原、乙酰化后， 得到部分甲基化的糖醇乙酸酯衍生物。经ＧＣ—ＭＳ分析后，根据保留时间与质谱 碎片可以确定我们合成了除２，５一Ｍｅ２Ｇａｌ外其它的部分甲基化的呋喃半乳糖醇乙 酸酯衍生物标准。该标准可用于ＧＣ．ＭＳ分析含呋喃半乳糖结构的糖复合物结构 分析的标准。
多糖的结构解析方法研究进展
基金项目：国家自然科学基金资助项目（８１８７２９６２）；国家重点研发计划项目（２０１９ＹＦＣ１７１０８００）；山西省重点研发计划重点项目（２０１６０３Ｄ３１１１０１）；山西省优秀人才科技创新项目（２０１６０５Ｄ２１１０３０，２０１７０５Ｄ２１１０２０） 作者简介：李雪琴，女，１９９５－０７生，在读硕士，Ｅ ｍａｉｌ：２４１７６０９５６７＠ｑｑ．ｃｏｍ 收稿日期：２０２０－１１－１１多糖的结构解析方法研究进展李雪琴１，２，李 科１，２，３ ，秦雪梅１，２，李震宇１，２，范信晖１，２，崔连杰１，２（１山西大学中医药现代研究中心，太原 ０３０００６；２山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室；３中国科学院过程工程研究所； 通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｋｅ＠ｓｘｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）关键词： 中药； 多糖； 结构解析； 纯度； 单糖组成； 单糖连接方式； 糖苷键构型； 构象中图分类号： Ｒ２８４ 文献标志码： Ａ 文章编号： １００７－６６１１（２０２１）０３－０３８０－０８ ＤＯＩ：１０．１３７５３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－６６１１．２０２１．０３．０２３ 中医药是我国的国粹，是中国人民几千年来与疾病作斗争的经验总结，新冠肺炎疫情发生以来，中西医结合的救治方案在全程中均发挥不可替代的作用。
中药成分复杂，多糖是中药的活性成分之一，研究表明，多糖是柴胡生物活性的基础［１］，黄芪多糖在抗肿瘤［２］、抗衰老［３］、抗氧化［４］等方面发挥着重要作用，大枣多糖具有抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等多种药理活性，是大枣中重要的活性成分［５］。
与基因组学和蛋白质组学相比，糖组学的研究进展较为缓慢，其主要发展瓶颈在于糖的树形结构增加了糖结构解析的难度［６］，尤其是多糖的分支结构尚未有效的方法准确测定，因此多糖的构效关系并不明确。
研究具有活性的中药多糖结构，以便更好地开发利用中药资源是亟待开展的重要工作。
目前缺乏可以对大部分多糖进行结构解析的普遍适用的方法，因此很难实现对多糖结构的快速准确解析，从而制约了对多糖进一步深入的研究。
多糖化学结构鉴定方案总结
多糖化学结构鉴定⽅案总结经过分级纯化的多糖在测定结构前须检查其纯度及测定分⼦量。
检查纯度最常⽤的判断⽅法：（1）⽤G C 、HPLC测定组成多糖的单糖的摩尔⽐是否恒定。
⽤不同的柱型测定结果更为可靠。
（2）电泳只出现⼀条带。
如可⽤聚丙烯酰胺凝胶电泳、⼄酸纤维素薄膜电泳及玻璃纤维纸电泳。
对于中性多糖可采⽤⾼压电泳，以硼酸盐为缓冲液，可增⼤其迁移速度。
（3）凝胶柱层析图呈现对称的单峰。
若有“拖尾”现象，说明其均⼀性不够好。
阴离⼦交换层析纯化⽤DEAE⼀纤维素52(2.6x100cm)柱层析,0.lmol/LNaCl洗脱,流速6ml/h,按2ml⼀管分部收集,苯酚⼀硫酸法逐管检测,绘制收集体积与糖含量之间的关系曲线。
看是否有单⼀对称峰。
按照Ye等报道,采⽤DEAE⼀52⼀纤维素交换柱层析法(2.6x30cm)对鲍⽒层孔菌菌丝体粗多糖进⾏初步分离。
DEAE⼀纤维素凝胶预处理:称取DEAE⼀52⼀纤维素凝胶⼲粉,加⼊约10倍体积质量⽐(ml/g)的0.5mol/LNa0H溶液浸泡30分钟,倒出上清液,⽤⼤量去离⼦⽔反复浸洗⾄pH值近中性;再⽤相同体积的0.5mol/LHCI溶液浸泡30分钟,倒出上清液,⽤⼤量去离⼦⽔反复浸洗⾄pH值近中性;最后⽤相同体积的0.5mol/lNaOH溶液再浸泡30分钟,⽤⼤量去离⼦⽔反复浸洗⾄pH值中性。
处理完毕后,进⾏湿法装柱,⽤去离⼦⽔0.5mol/LNaCl溶液,去离⼦⽔依次分别平衡(流速1.0ml/min)2⼀3个柱体积备⽤.糖样100mg溶于5ml的去离⼦⽔中,离⼼除去不溶物,上样于DEAE⼀52⼀纤维素阴离⼦层析柱(2.6x30cm,Cl-1型),分别采⽤去离⼦⽔0.1和0.3mol/LNaCI溶液进⾏分段梯度洗脱,流速1.0ml/min,⾃动收集器分部收集(10ml/管),每梯度20管。
⽤硫酸⼀苯酚法跟踪检测各管多糖含量(490nm处吸收值),以收集的管数为横坐标。
巴戟天多糖的分级纯化及结构分析
采用高效凝胶渗透色谱法 [ 5 ]测定 ,仪器为 W a2 ters 515 HPLC Pump ,W aters 717 p lus Autosamp le,外 加 W aters 2410 示 差折 光检 测器 ; 分析 柱为 U ltra2 hydrogelTM 2000, U ltrahydrogelTM 120 和 U ltrahydro2 gelTM 2500 ( 7. 8 mm I. D ×300 mm ) 三 柱 串 联 ; 0. 1mol/L的磷酸盐缓冲液为流动相 ,流速 1mL /m in; 柱温 35 ℃,多糖标准品为 Fluka 的 Dextran standard 系列 ,由标准多糖的分子质量对数与保留时间的标 准曲线 ,通过 M illennium32 数据处理软件求得样品 的数均和重均分子质量.
称取一定量的 MOHP,溶于 pH 值为 8. 4的 Tris2 HCl缓 冲 液 后 [3, 4 ] , 上 DEAE2Sepharose CL - 6B 柱 (2. 6 cm I. D ×40 cm )分离 ,依次用不同摩尔浓度的 NaC l, pH值为 8. 4 的 Tris2HCl缓冲液以及 1 mol/L 的 NaOH溶液进行洗脱 , 1. 5mL /m in流速 , 5m in /管分 部收集 , 采用硫酸 - 苯酚法检测 490 nm处的吸光值 , 同时测量各馏分 260 nm 的吸光值 ,分别绘制多糖洗 脱曲线及蛋白吸收曲线. 1. 2. 3 巴戟天多糖的凝胶层析纯化
1. 4 巴戟天多糖的结构分析
1. 4. 1 巴戟天多糖的红外光谱表征 多糖样品于 120 ℃彻底干燥 2 h,与 KB r研磨混
合后压片 ,扫描分析 ,扫描范围 400～4 000 cm - 1. 1. 4. 2 气相色谱分析
烟草中糖类物质分析的研究进展
烟草中糖类物质分析的研究进展苏鑫;姬厚伟;刘剑;蔡元青;赖东辉【摘要】Sugar is considered one of critical components intobacco.Multiple products of a series of complicated chemical reactions during the burning process of cigarettes,affect the sensory quality directly or indirectly.In order to deeply explore the studying on sugars in tobacco,a review was conducted,thus to provide references for similar studies,from the following aspects:influence of sugars on quality and sensory quality of tobacco,application of sugars in cigarettes production and analytical methods of sugars in tobacco.%糖类物质是烟草的重要化合物,通常在卷烟燃烧过程中发生一系列复杂的化学反应,生成多种产物,直接或间接地影响卷烟的感官品质.为深入了解烟草产业对糖类物质的研究情况,从糖类物质对烟草品质和感官质量影响、糖类物质在卷烟生产中的应用以及烟草中糖类物质的分析方法等方面进行综述,旨在为同类研究提供借鉴.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2017(045)003【总页数】6页(P44-49)【关键词】烟草;糖类物质;烟草品质;卷烟;分析方法【作者】苏鑫;姬厚伟;刘剑;蔡元青;赖东辉【作者单位】贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳550009【正文语种】中文【中图分类】S572糖类物质是烟草中一类重要的化合物，占烟草干重的25%～50%［1］，主要包括单糖（如葡萄糖、果糖等）、低聚糖（如麦芽糖、蔗糖等）和多糖（淀粉、纤维素等）。
GC-MS在中药研究中的应用
GC-MS在中药研究中的应用GC-MS技术检测灵敏度高,分离效能好,使之在中药研究领域的应用越来越受到重视。
在化学成分分析方面广泛应用于挥发油、生物碱、糖类、脂肪酸类、甾类化合物分析, 在未知成分的鉴定、有效成分分析测定、药效及药动等方面也多有研究。
GC-MS是优化生产工艺、建立中药质量控制标准、提高中药复方的质量水平的有效手段之一。
标签：GC-MS;中药;质量控制气相色谱法(Gas chromatography,GC)是近年来应用日趋广泛的分析技术,特别适用于具有挥发性的复杂组分的分离、分析,由于是以气体作为流动相,所以传质速度快,一般的样品分析可在20-30s左右完成,具有分离效能高,灵敏度高的特点,在有对照品的条件下,可作定性、定量分析,但对重大事件或有争议的样品不能做出肯定鉴定报告,必须连接如质谱的检测器。
另外对于不能气化的样品则需要作衍生化处理后再分析。
质谱(Mass Spectrnum,MS)是强有力的结构解析工具,能为结构定性提供较多的信息,是理想的色谱检测器。
气相色谱-质谱(GC-MS)联用利用了色谱的高分离能力和质谱的高鉴别特性,可对复杂的混合样品进行分离、定性、定量分析的一次完成,是一种完美的现代分析方法。
GC-MS的常用测定方法:总离子流色谱法(total ionization chromatography,TIC)——类似于GC 图谱,用于定量。
反复扫描法(repetitive scanning method,RSM)——按一定间隔时间反复扫描,自动测量、运算,制得各个组分的质谱图,可进行定性。
质量色谱法(mass chromatography,MC)——记录具有某质荷比的离子强度随时间变化图谱。
在选定的质量范围内,任何一个质量数都有与总离子流色谱图相似的质量色谱图。
GC-MS技术随着仪器的不断完善与发展,检测技术的成熟与推广,其应用范围越来越广。
由于GC-MS技术检测灵敏度高,分离效能好,使之在中药研究领域的应用越来越受到重视。
糖种类和构型的确定-2013 沈阳药科大学..
单糖结构的表示方法
单糖的绝对构型和相对构型
单糖及其构型的鉴定
1
一、单糖结构的表示方法
以D-葡萄糖（D-glucose）为例：
CHO H HO H H OH
HO
H
CH2 OH
H OH H OH O
H OH OH CH2OH
H OH OH H
O OH H H OH
O
O
HO H H
CH2OH
C2-H
都约为60o (双面角）
无法通过J值来判定
19
b -D-甘露糖 C1-H
α-D-甘露糖
都约为60o (双面角）
C2-H
所以无法通过J值来判断构型
呋喃型糖偶合常数变化不大,不能用端基质子偶 合常数判断苷键构型
20
•偶合常数1JC1-H1:
•吡喃糖:(优势构象1C 或C1式)
ａ-L-鼠李糖苷
21
(二) 糖的13C-NMR 1. 化学位移及偶合常数 • 端基碳： 95-105; CH-OH (C2、C3、C4) －－ 70~85 CH2-OH (C6) 62 左右 CH3 < 20
22
2.苷化位移(Glycosylation shift, GS) 定义：糖与苷元成苷后, 苷元的-C, b-C和糖的 端基碳的化学位移值发生了变化, 这种变化称 苷化位移. 应用: 推测糖与苷元 ,糖与糖的连接位置 , 苷元 被苷化碳的绝对构型及碳氢信号归属.
30
2. 实验方法
1mg 标准单糖加入1 mL 无水吡啶和2 mg L-半胱 氨酸甲酯盐酸盐，混合均匀，60℃加热2 h, 反应
产物吹干，干燥，加入0.2 mL三甲基硅烷咪唑，
60℃加热2 h后，将反应液转移至2 mL 水中，用 等体积环己烷萃取三次，合并萃取液浓缩，制成 单糖的糖噻唑三甲基硅醚衍生物，取0.5mL 环己 烷溶解，即可用于气相分析。
一般糖苷中葡萄糖绝对构型的确定方法是
一般糖苷中葡萄糖绝对构型的确定方法是：先把糖苷在酸性条件下水解，用极性有机溶剂萃取其中的苷元，再将水溶液用1-三甲基硅烷基咪唑进行三甲基硅烷基化后，对烷基化产物进行GC分析，并与标准的D-和L-葡萄糖三甲基硅烷基化产物的保留时间进行比较，确定葡萄糖的绝对构型。
但我在审稿时，遇到如下问题，不知如何解决？对于下面这一类结构，葡萄糖通过醚键与一烷基相连，这一醚键在酸性条件下不易水解。
请问如何确定的葡萄糖绝对构型。
OR21答：我想R2上仍为半缩醛结构，在酸性条件下是可以分解的，不影响所述方法对构型的测定。
如果R1的结构不是很大，其它位的羟基硅醚化后，整体上应当具有好的挥发性，但会影响GC上的保留时间。
有时从糖的1-位H和2-位H的偶合常数J1,2，可推断六碳吡喃糖端基碳的立体结构属α-构型还是β-构型。
如葡萄糖或半乳糖，β-构型由于1-位H和2-位H间的二面角近于180°，其J1,2较大，为8 Hz左右，而α-构型二面角近于60°，J1,2为4 Hz左右。
由此可以区分苷键的α-和β-构型。
而甘露糖和鼠李糖的C2构型与葡萄糖的相反，2-位H在平伏键上，无论在α-或β-异构体中，与端基碳上质子间的二面角相近，约在60°左右，所以α-构型J1,2为1.6Hz 左右，β-构型为0.8 Hz左右，二者相差不大，难以区分羰基碳的构型。
六碳呋喃糖的J1,2在0~5 Hz，也缺乏测定端基碳构型的特征。
端基碳（C1或C2）的因形成半缩醛（酮），其共振峰的化学位移较大，在98~110ppm 之间。
在此区域内有几个信号表示可能有几种不同的单糖存在于糖链的重复单位之中。
端基碳上的半缩醛（酮）羟基在竖立键时该碳的化学位移较小于羟基在平伏键时的化学位移，以此可以区分该单糖为α-构型还是β-构型。
通过端基碳与氢的一键偶合常数1J H,C也可推断六碳吡喃糖端基碳的立体结构属α-构型还是β-构型，前者1J H,C为170~175Hz，后者1J H,C为160~165Hz。
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醚衍生物主要以单肟存在，这样三种己糖的构型就
不 同，就可 以得到 分离。
实
验
部
分
（ 一）仪器 与试 剂
（ 三）气相色谱条件 用３ Ｖ－７ ％Ｏ １涂在６－０ ｈｏ ｏｏｂ ＡＷ ０８目Ｃ ｒｍ ｓｒＧ－ － ＩＳ ＤＡＣ 担体上作固定相， 填装长３ ｍ，内径３ ｍ的 ｍ 不锈钢色谱柱， 柱温１０ ； ９ 检测器温 度２０ ； ３ 汽 化室温度２０ ； Ｆ气２ｍ／ ｉ； ４ 载气氮 ０ ｌｍｎ 进样量０ — ． ２ ０３１ ． ． 结 果 与 讨 论
（ 回收率 测定 三） 舛
称取３ 带皮国光苹果，每次分别加入二种农 ｇ
经验交流
糖肟三甲基硅醚衍生物制备方法的改进 — 气相色谱法分离甘露糖、半乳糖、葡萄糖
李筱华 常凤眉
（ 科学院广州化学研究所） 中国 采用 气相色谱法测定糖类，具有灵敏 、快速、
选择性高等优点。但因糖在受热时没有足够的挥发 性，必须在气相色谱法分析之前预先制 备成易挥 发、对热稳定的衍生物。对不同的样品可以制备不 同的衍生物［－］ １３，由于糖肟三甲基硅醚衍生物 有 其特点，对糖浆或非结晶糖样品都可以进行测定， 同时可以减少衍生物异构体的生成，使多数单糖都 能得到单一的色谱峰。关键的问题是色谱 分离Ｄ－ 甘露糖、 半乳糖和Ｄ－葡萄糖情况较差，因而影 Ｄ－ 响定性、定量分析。针对这个问题，我们对制备糖
（ 收稿日 ：１ ７ 月２日 期 ９ 年２ ４ ）。 ８ Ａ Ｉｐ ｖ Ｍ ｔ ｄ Ｐｅ ｒｇ ｍ ｔ ｌｌａ ｄ ｎ ｒ ｅ ｅ ｏ ｆ ｒ ａｉ Ｔｉｅ ｙｉｌｅ ｍ ｏ ｄ ｈ ｏ ｒ ｐ ｎ ｒ ｈ ｓｙ ｔ Ｏｉｅ ｘ — ｍ Ｓｐｒ ｉ ｏ Ｍ ｎ ｓ Ｇ ｌ ｔ ｅ ｄ ｅａ ｔｎ ａｎ ｅ ａ ｃ ｓ ａ ａｏ ｆ ｏ ， ａ ｏ ｎ Ｇｕｏ ｂ Ｇｓ ｏ ａ ｇ ｐ Ｌ Ｘ ａｈａ ｄ ｌ ｓ ｙ Ｃｒ ｔ ｒ ｈ ｉ ｉｏ ａ ｃ ｅ ａ ｈ ｍ ｏ ａ ｙ ｕ ｎ Ｃ ａｇ ｎ ｍｉＧ ａｇｈｕ ｓ ｔｔ ｏ Ｃｅ ｉ ｈｎ Ｆ ｇ ｅ ｕ ｎｚ Ｉ ｔ ｕｅ ｈ － ｅ ， ｏ ｎｉ ｍ
按照常规方法制备的糖肟三甲基硅醚衍生物 ［］ ３ Ｏ －７ ４在 ％ Ｖ １柱上分析得到图１ 从分析结果来 。
加 ０ｍ吡ぁ再 １ｍ六 基 胺 和０ｍ 上 ． ｌ 啶 加 ． ｌ 甲 二硅 烷 ． ｌ ５ 拎。 ０ １
三氟乙酸， 振荡３秒， ０ 在室温下放置１分钟，过滤， ５ 滤液加到固休糖样中，在７—７℃水浴中振荡反应 ０ ５ １分钟，反应产物可直接进行气相色谱分析。 ５
２ 溶剂为丙酮 、甲醇、二氯甲烷 、 己 等， 烷 分析纯 ，重蒸 。
３ ．吸附剂 混合吸附剂：活性炭加硅藻土 为１４ ：。活性炭，层析用２—４ 目，上海 活性炭 ０ ０ 厂， 经酸处理过；Ｃ ｌｅ４， ｅ ｔ５５ 层析用，２ ５ ｉ ７—８目，英
国 Ｎ ｒｏ ；硅镁吸附剂 ，层析用 ，０ ０ 目，北 ｏｆｌ ｋ ６—１０
测定 。
以３ Ｏ ％ Ｖ＋３ ＡＣ ２作固定液，担体为Ｃ ｒ－ ％Ｌ ７８ ｈｏ ｍｏｏｂ Ａ ＤＭＣ ８－１０ ｓｒ Ｗ． Ｗ Ｓ ０目，色谱柱为长 ０ ２ ｍ，内径２ ｍ的蛇形玻璃柱。操作条件如下： ｍ 柱 温 度 ２２ １ 氮气流量 ３ｍ／ ｉ ０ １ｍｎ 检测温度 ２０ ２ 氢气流量 ７ ｌｍｎ ｍ／ ｉ 汽化温度 ２５ ２℃ 空气流量 ８ｍ／ ｉ ０ １ｍｎ ２ ．定性及定量 于上述操作条件下，分别 测得七种农药的保留时间、最小检出量与相对标准 坑
ｌｒ ｅ ｍ ｘｄ ｔ ｈｘ ｍｅ ｙｄｓ ａａｅ ＨＭ－ ｏｉ ｉ ｉｅ ｗ ｈ ａ ｔ ｌｉｌｚｎ （ ｄ ｓ ｉ ｅ ｈ ｉ
ｔｇａｈ” ｅａｔｅｔ Ｏ ｇｎ Ｃ ｅ ｏｒ ｙ，Ｄ ｐｒ ｎ ｏ ｒ ｉ ｈ－ ｐ ｍ ｆ ａ ｃ ｍｓ ｙ ｉ ｒｔ ｏ Ｃ ｐ Ｔ ｗ ， ｅｕｌ ｉｒ Ｕ ｖ ｓｙ ａｅ ｎ Ｒ ｐｂｉ ｔ ｎ ｅ ｉ ｆ ｏ ｃ
偏差，见 表 １ 。 表 １ ７ 种农药的 保留时 间与最小检出量
实 验 部
（ 一）仪器和试剂
分
１ ．北 京分析仪 器厂Ｓ － ３５ 气相色谱仪 ， Ｐ２０型
旅顺仪表厂铷珠加热器及氮磷检测器；高速电动组 织捣碎机 （ 美国），Ｓ Ｔ １１， ００ 分；旋 Ｄ －８０ ２ ０转／ ０ 转蒸发器；层析柱 （ １０ ｍ ；微型玻璃仪器。 ５ ５ｍ ） 筒
ｃｎｅｔｎｌ ｔ ｄ ｐｅａ ｎ ｔｍ ｔｙ ｉ － ｏｖ ｉ ａ ｍ ｈ ｏ ｒ ｒ ｇ ｉｅ ｌｌ ｎｏ ｅ ｏ ｆ ｐ ｉ ｒ ｈ ｓｙ ｌ ｅ Ｔ Ｓ ｏｉｅ ｕ ｅ ｉ ｕｒ ｏ ｅ ｐａｓ ａ ｄ（Ｍ ） ｘ ｒ ｌｄ ｎ ｓ ｖ ｅ ． ｔ ｍ ｅ ｔ ｎ ｅ ｌ ｄ ｋ ｓ Ｔ ｅ ｃ ｕｅ ｔ ｒｏｅ ｎ ｄ ｂ ｍ ｄ ｉ ｈ ｐｏｅ ｒ ｉ ｈ ｅ ｒ ｅ ｔ ｅ ｏｉ ｄ ｒ ｄ ｓ ｆ ， ｅ ｏ ｅ ｆ ｅ ｔ ｏｔｎ ａ ｓ ａ ｔ ｎ ｈ ｏ ｓＴ ｅ ｓ ｔ ｏ ａ ｃ ｒ ｒ ｉ ｏ ｅ ｓ ． ｈ ｐ ｅ ｂ ｉ ｌ ｅ ａ ｏ ｆ ｅ ｅ ｐ ｘ ｒ ｎ ｅ ｐｏ ｄｒ ｉａ ｆｌ ｗ ： ｙｒｘａ ｉ ｈｄｏ － ｒｃ ｕｅ ｓ ｌ ｓ ｈｄｏｙｍｎ ｙｒｃ ｅ ｓ ｏ ｏ ｅ ｈ
京亦中化工厂，６０ ５℃活化过。 （ 二）气相色谱测定 １ ．色谱操作条件 选用氮磷检测器及铷珠 ㄖ
加热 器， 极化 电压为 —１０ ８Ｖ直流电压， 电 ３ Ａ； 流 ． ２
苹果中残留量的测定， 如以丙酮［３或甲醇［］ ２］ ， ４ 提取农药，对水分及水溶性提取物如糖分、色素等 可用二氯甲烷分配除去，再通过活性炭、硅藻土及 硅镁吸附剂的混合层析柱进行净化；也可不净化直 接进行色谱测定。 作者根据文献对上述二种方法进 行了改进及研究，采用ＧＣ 狽 Ｄ选择性检测器、 —ＮＰ 外标峰高法，对七种农药在苹果中的残留量进行了
ｄｓ ｎｔ ｋ． ｉ ｉｃ ｐａ ｓ ｔ ｅ
微 量 的 残 留 量 分 析 方 法 研 究 — 苹果中有机磷及粉锈宁等农药的残留量测定
陈端美 王琴孙
（ 南开大学元素有 机化学研究所，天津）
微 量的残 留量分 析方 法为采用系 列小 型仪 器及
微量技术［ １，较之常量法省工作面、省 时间、省
劳力、省试剂 。
型不同，而Ｃ，４ ５ ３Ｃ， 具有相同的构型，这两种己糖 Ｃ
形成相同的二肟 。因此这两种糖的二肟三甲基硅醚 得到 同一个峰 。如反应式Ａ。
Ｄ－ 葡萄糖和Ｄ－ 半乳糖虽是异构体，它们也可
以形成二肟 ，但 由于Ｃ 上的构型不 同。所 以它们的 ４
糖肟三甲基硅醚衍生物就不同。如反应ห้องสมุดไป่ตู้Ｂ。因此
三种 己糖得到两个峰 。
１， １１７ ） ９５ （９ １． ５
Ｔ ｅ ａｙｉｏ ｓ ｎ ａｄ ｘ ｓ ｂ ＧＣ ｔ ｈ ａ ｌｓ ｆ ｄ ｈ ｏｅ ｙ ｗ ｈ ｎ ｓ ｔ ａ ｎ ｅ ｓ ｉ
［ ］ ３ 李筱华、何兰 芳、 常凤眉、高洁， 谱，（） 色 ５１， ４
（９７． １８） ［ ４］ ．． ｈ ｒ ｓ“ Ｒ Ｈａｄ ｏｋ Ｃ ｒｍ － ＳＣ Ｃ ｕｍ ， Ｃ Ｃ ｎ ｂ ｏ ｏ ｈｏ ａ ｆ
ｏ Ｓ ｕｈ ｆｉ ， ． ５１８． ｆ ｔ Ａ ｒ ａ Ｐ２ ， １ ｏ ｃ ２ ９
Ｄ ）ｎ ｒ ｉ ａｄ ｍｘｕｅ ｔ ｎ ｅ ｄ Ｓ ｉ ｐ ｉｎ ｎ ｔ ｉｔｒ ｉ ｈ ｆｔ ｅ． ｙ ｄ ｅ ｈ ｅ ｓ ｉ ｒ ｅ ｌ
Ｔ ｅ ｔ ｔ ｉ ａ ｄｄ ａ ａｄ ｒ ｈｘ ｓ ｃｎ ｈ ｆ ｒ ｅ ｄ ｅ ｔ ｓ ｎ ａｄ ｏｅ ｏ－ ｉ ａ ｓ ｌ ｏ ｔ ｅ
改进 后的反应 式：
看， 三种己糖二肟仅得到二个峰。 这些峰在本实验条
件下不能都被鉴定。由于醛 己糖或酮 己糖与盐酸羟 胺反应过程 中，如果盐酸 羟胺过量，可 能反应产物 大多数是二肟 。由于二肟 的形成可能破坏醛糖Ｃ上 的构型 。 众所周知，Ｄ－ 葡萄糖和Ｄ－ 甘露糖由于Ｃ 上构 ２
反应式Ａ ：
对于改进制备方法后的反应历程，至今还没有 弄清，还准备通 过色质 联用和核磁共振进 一 步研 究，这还有待 日 后的工作进一步完善。 参 考 文 献
［ ］ ．．ｕｒｎ ＣＷ．Ｍ ｓ ｎｌ ｈｍ， １ ＧＯＧ ｅ ｔ ． ａ， ｏ ，Ａ ａ ｓ ，Ｃ ｅ ．
５（）６３１８） ６４， ３（９４． ［ ］ Ｍ ｓ ， ．． ｌ ｅ Ｊ ｇ ｃ ｏｄＣ ｅ ． ２ Ｓ ａ ｎ ＨＴ Ｓ ｖ ， Ａ ｒ． ｏ． ｈｍ， ． ｏ ｏ ｒ ． ｉＦ
本实验通过对制备糖肟三甲基硅醚衍生物方法 作了改进。结果三种己糖全部分开，见图２。这可 能是当Ｎ Ｏ ＨＣ混合硅烷化试剂后，对Ｃ上 Ｈ Ｈ・ Ｉ ２ Ｈ的活性产生了影响，这样避免糖的混合物形成二 苊 肟，使整个反应主要以生成单肟形式存在。由于这
三种 己糖的构型不同，所 以利用气相色谱法就可以
将它们全部分开。
ｓ ｙ ｔ ，Ａｃ ｄ ｍｉ Ｓ ｎｃ ａ ｅ ａ ｉｉａ
ｔｉｎ Ｄ ｍ ｎｏ ， －ａ ｃ ｓａｄ ｇｕ ｓ Ｉ ａ ｉ － ａｎｓ Ｄ ｇｌ ｔ ｅ Ｄ ｌ ｏ ． ｎ ｇ ｅ ａ ｏ ｎ － ｃｅ ｎ ｔｉｗ ｙ ｔ ｃｎｅｔｎｌ ｔ ｄ ｐｅａｎ ｈ ａ，ｈ ｏｖ ｉ ａ ｍ ｈ ｏ ｒ ｒ ｇ ｓ ｅ ｎ ｏ ｅ ｏ ｆ ｐ ｉ Ｔ Ｓ ｉｅ ｍ ｒ ｅ ａｄ ｍｘｕ ｉ ｔ ｎ Ｍ ｏ ｍ ｉｉｐｏ ｄ ｔ ｉｔ ｅ ｈ ｘ ｓ ｖ ｎ ｈ ｅ ｒ ｓ ｅ ａａ ｓ ｂ ｇ ｃｒｍ ｔ ｒｐｙ ｔ Ｏ －７ ｎｌ ｅ ｙ ｈｏ ａ ｇａｈ ｗ ｈ １ ａ ｙ ｄ ａ ｓ ｏ ｉ Ｖ ｓ ｔ ｓ ｔ ｎｒ ｐａ ｒ ｕ ｉ ｉ ｔ ｔ ｅ ｈ ｔｉ ａ ｅ ａｏ ｙ ｈｓ ｅ ｌｎ ｎ ｅ ｒ ｅ ｓ ｔ ｇ ｈ ｈ ｅ
四川分析仪器厂 Ｓ － 气相色谱仪，氢火焰离 Ｃ６ 子化检测器；上海大华仪表厂ＸＷＴ ２０ －０ 型台式双
笔 自动平衡记录仪 。