紫花地丁化学成分及其抗炎活性研究

紫花地丁化学成分及其抗炎活性研究

紫花地丁（Viola yedoensis）系堇菜科（Violaceae）堇菜属（Viola L.）多年生草本植物,是中国传统中药之一,入药部分为干燥全草,发挥抗菌消炎、清热解毒、凉血消肿之功效。现代药理学研究发现紫花地丁具有较好的抗病毒、抗炎、抑菌及抗肿瘤等活性。

因目前紫花地丁提取物的抗炎活性研究较少,因此本试验从紫花地丁的成分分离检识、体内抗炎活性研究及其对脂多糖（LPS）诱导的宿主细胞体外抗炎活性的影响三部分展开实验研究紫花地丁化学成分及其抗炎活性。目的:研究紫花地丁不同溶剂提取物的化学成分组成;筛选出紫花地丁的最佳有抗炎作用的溶剂提取物;探究紫花地丁最佳体内抗炎溶剂提取物的体外抗炎作用。

方法:1.采用不同极性溶剂分别以浸提法和乙醇回旋冷凝法对紫花地丁全草的化学成分进行提取,试管法和圆形滤纸法检识不同溶剂提取物中的化学成分,减压浓缩制得各溶剂提取物的浸膏并称重、计算得膏率;2.给小鼠灌服回旋冷凝法提取的紫花地丁的不同提取物后,用二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀、1%冰乙酸改变小鼠腹腔毛细血管通透性、角叉菜胶诱导大鼠足跖肿胀进行急性炎症造模、ELISA 法检测炎性组织中PGE₂含量、硝酸还原酶法检测炎性组织中NO含量等试验,研究不同溶剂提取物的抗炎效果;3.以乙醇回旋冷凝法提取的乙酸乙酯提取物溶液干预脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞体外炎症模型,ELISA法检测其对RAW264.7细胞释放NO、肿瘤坏死因子（TNF-α）、IL-1β、IL-6的影响,荧光定量聚合酶链式反应检测其对炎性巨噬细胞中TNF-α、iNOS和C0X-2

相对表达水平的影响,研究分析紫花地丁乙酸乙酯提取物的体外抗炎活性。结果:1.通过检识得知紫花地丁中含有酚类和鞣质、生物碱、有机酸、油脂类、香

豆素和内酯类、黄酮类、皂苷类等成分;检识出回旋冷凝法制得的乙酸乙酯提取物主要含有黄酮类、有机酸等化合物成分;回旋冷凝提取法得各溶剂提取物的得膏率高于浸提法;2.给小鼠灌服适当浓度的回旋冷凝法提取的乙酸乙酯提取物溶液抑制二甲苯致耳廓炎效果与生理盐水组有显著性差异（P<0.05）;在整个监测小鼠足跖肿胀抑制率过程中乙酸乙酯提取物组与生理盐水组比较均差异极显

著（P<0.01）,石油醚提取物组及水相提取物组也有抑制小鼠足跖肿胀的趋势,但差异不明显,乙酸乙酯提取物能减少炎症组织中PGE₂含量,与生

理盐水组比较差异显著（P<0.05）;紫花地丁各溶剂提取物干预小鼠腹腔注射1%冰乙酸引起毛细血管通透性增加试验中,乙酸乙酯提取物组的光密度值（OD值）与生理盐水组比较差异显著（P<0.05）;紫花地丁的乙酸乙酯提取物组与生理盐水组比较显著减少了释放到炎性组织中的NO（P<0.05）;3.回旋冷凝法制

得的紫花地丁的乙酸乙酯提取物能显著抑制炎性细胞NO（P<0.05）的释放和显著降低了炎性细胞IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子含量及iNOS、TNF-α、COX-2 mRNA的表达量。

结论:摸清了紫花地丁的化学成分由酚类和鞣质、生物碱、有机酸、油脂类、香豆素和内酯类、黄酮类、皂苷类等组成,回旋冷凝法的得膏率优于浸提法;筛选出乙酸乙酯提取物是紫花地丁具有抗炎活性的提取物;回旋冷凝法提取的乙酸乙酯提取物能下调LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子的释放量和下调TNF-α、COX-2、iNOS mRNA的表达量。