医疗器械微生物检验PPT课件
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医疗器械微生物检验
24
供试液制备
液体供试品、固体、半固体或黏稠液供试品
取10ml或10g用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml， 混匀，作为1：10的供试液。油剂可加入适量的无菌吐温80使供 试品分散均匀; 水溶性液体亦可用混合供试品原液作为供试液；
非水溶性供试品 ：乳化或萃取; 膜剂供试品 ：取供试品100cm2，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋
用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物
学特性。
19
计数培养基适用性检查
菌液制备 取细菌新鲜培养物（一般18h~24h，白念 24h~48h ，黑曲霉 5~7天 ），用0.9%无菌氯化 钠溶液制成每1ml 含菌数50cfu~100cfu的菌悬液 （黑曲霉用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化 钠溶液）；
培养48h，菌落平均数应小于1cfu/φ90mm。
10
实验器具
仪器 超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压力蒸 汽灭菌器、薄膜过滤装置、比浊仪等。
用具 试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精 密PH试纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊子、无菌服、 牛皮纸等。
11
实验准备
实验环境保证 实验试液 培养基 灭菌方法
干热：160 ℃~ 170 ℃ ，2h 适于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭 菌。
灭菌程序需要经过验证。
17
计数培养基适用性检查
细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行 培养基的适用性检查，成品培养基、由脱 水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
18
计数培养基适用性检查
菌种
• 大肠埃希菌
［CMCC（B）44 102］
• 金黄色葡萄球菌 ［CMCC（B） 26 003］
供试液制备
液体供试品、固体、半固体或黏稠液供试品
取10ml或10g用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml， 混匀，作为1：10的供试液。油剂可加入适量的无菌吐温80使供 试品分散均匀; 水溶性液体亦可用混合供试品原液作为供试液；
非水溶性供试品 ：乳化或萃取; 膜剂供试品 ：取供试品100cm2，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋
用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物
学特性。
19
计数培养基适用性检查
菌液制备 取细菌新鲜培养物（一般18h~24h，白念 24h~48h ，黑曲霉 5~7天 ），用0.9%无菌氯化 钠溶液制成每1ml 含菌数50cfu~100cfu的菌悬液 （黑曲霉用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化 钠溶液）；
培养48h，菌落平均数应小于1cfu/φ90mm。
10
实验器具
仪器 超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压力蒸 汽灭菌器、薄膜过滤装置、比浊仪等。
用具 试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精 密PH试纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊子、无菌服、 牛皮纸等。
11
实验准备
实验环境保证 实验试液 培养基 灭菌方法
干热：160 ℃~ 170 ℃ ，2h 适于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭 菌。
灭菌程序需要经过验证。
17
计数培养基适用性检查
细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行 培养基的适用性检查，成品培养基、由脱 水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
18
计数培养基适用性检查
菌种
• 大肠埃希菌
［CMCC（B）44 102］
• 金黄色葡萄球菌 ［CMCC（B） 26 003］
《微生物检验基础知识》PPT
采样
根据检验目的和要求，选择适当的采 样方法和采样点，确保采集的样品具 有代表性。
计数与测定
对目标微生物进行计数和测定，得到 样品中微生物的数量和活性等指标。
01
02
样品处理
对采集的样品进行预处理，包括稀释、 均质化等，以便后续的检验操作。
03
微生物分离与纯化
通过培养基和培养条件的选择，将目 标微生物从样品中分离出来并进行纯 化，得到单一物进行快速检测和鉴定。
微生物检验技术的发展趋势
自动化与智能化
随着技术的发展，微生物检验将越来 越依赖于自动化和智能化的设备和技 术，提高检验效率和准确性。
快速检测技术
发展快速、简便的检测方法，缩短检 验时间，提高检验效率。
高通量检测技术
采用高通量技术，一次处理大量样品， 提高检测的通量和效率。
《微生物检验基础知识》
目录
• 微生物检验概述 • 微生物基本知识 • 微生物检验技术 • 微生物检验在食品安全中的应用 • 微生物检验在医疗领域的应用 • 微生物检验的注意事项与伦理规
范
01
微生物检验概述
微生物检验的定义和目的
微生物检验的定义
微生物检验是对微生物进行观察、分析和检测，以获得有关微生物种类、数量、 形态、生化特性等方面的数据，从而判断其与人类健康、环境安全等方面的关 系。
按照应用领域分类
微生物检验可以根据应用领域的不同，分为医学微生物检验、食品 微生物检验、环境微生物检验等。
微生物检验的应用领域
医学领域
食品工业
微生物检验在医学领域中有着广泛的应用 ，如诊断疾病、监测传染病、研究病原菌 的特性等。
微生物检验在食品工业中是必不可少的环 节，通过对食品中的微生物进行检测，可 以确保食品的安全性和卫生质量。
医疗器械的无菌和初始污染菌检验ppt课件
操作步骤：
斜面制备
接种
培养 保藏
39
接种
40
培养基应符合无菌性检查及灵敏度检查的要求。检查可在供试品的无菌检查前
或与供试品的无菌检查同时进行。
灵敏度检查所用菌种
硫乙醇酸盐流体 培养基（12mL）
（药典2010版规定）
9支：分别接种
分别接种各菌 小于100cfu的金
金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌
假阳性：实际阴性的无菌试验结果被变成了阳性。
需氧菌：在代谢中，有氧条件下才能生存的微生物。
厌氧菌：在代谢中，没有氧的条件下才能生存的微生物。
无菌保证水平（SAL）:灭菌后产品上存在单个活微生物 的概率。
8
细菌：为单细胞微生物,其细胞分化不完善，无完
整细胞核及核膜、核仁，直径一般为1μm ~ 10μm。
5
灭菌: 杀灭或除去特定环境或物品中一切微生物的过 程。目前国际上规定，灭菌过程必须使灭菌物品污染的微 生物存活率减少到10-6及以下。
微生物: 必须用光学显微镜或电子显微镜才能观察到 的微小生物。微生物具有一定的形态与结构,并能在适宜的 环境中迅速地生长和繁殖,如细菌、病毒、真菌等。
无菌：是指某一物体或某一环境中不含有活的微生物。
种新鲜培养物 至相应培养基 中培养，将培 养物用0.9%无 菌氯化钠溶液
制成菌悬液 （浓度小于 100cfu/mL）
葡、铜绿、枯草、 生孢各2支，另 一支不接种做空 白对照，培养3 天
改良马丁培养基 （9mL） 5支： 分别接种小于
逐日观察结果：
空白对照管应 无菌生长，若 加菌的培养基 管均生长良好， 则灵敏度符合
[CMCC(F) 98 001]
医疗器械微生物检验
白胨缓冲液100ml浸泡，振摇，作为1：10的供试液; 肠溶及结肠溶制剂供试品：取供试品10g ，加pH6.8无菌磷酸盐
缓冲液(用于肠溶制剂)PH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制 剂）至100ml，置45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1：10的供 试液; 气雾剂、喷雾剂供试品 ，经处理后同第一项制备供试液; 贴剂供试品
医疗器械微生物限度检验
1
概述
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂 及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
微生物限度检查
细菌、真菌菌落数 控制菌
2
概述
微生物：形体微小，结构简单，通常要用光学显 微镜和电子显微镜才能看清楚的生物
特点： 1、个体微小，一般<0.1mm 2、构造简单，有单细胞的，简单多细胞 的，非细胞的 3、进化地位低
干热：160 ℃~ 170 ℃ ，2h 适于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭 菌。
灭菌程序需要经过验证。
17
计数培养基适用性检查
细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行 培养基的适用性检查，成品培养基、由脱 水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
18
计数培养基适用性检查
菌种
• 大肠埃希菌
培养48h，菌落平均数应小于1cfu/φ90mm。
10
实验器具
仪器 超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压力蒸 汽灭菌器、薄膜过滤装置、比浊仪等。
用具 试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精 密PH试纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊子、无菌服、 牛皮纸等。
11
实验准备
实验环境保证 实验试液 培养基 灭菌方法
数，按菌数报告规则报告菌数
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细菌、霉菌及酵母菌计数
缓冲液(用于肠溶制剂)PH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制 剂）至100ml，置45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1：10的供 试液; 气雾剂、喷雾剂供试品 ，经处理后同第一项制备供试液; 贴剂供试品
医疗器械微生物限度检验
1
概述
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂 及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
微生物限度检查
细菌、真菌菌落数 控制菌
2
概述
微生物：形体微小，结构简单，通常要用光学显 微镜和电子显微镜才能看清楚的生物
特点： 1、个体微小，一般<0.1mm 2、构造简单，有单细胞的，简单多细胞 的，非细胞的 3、进化地位低
干热：160 ℃~ 170 ℃ ，2h 适于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭 菌。
灭菌程序需要经过验证。
17
计数培养基适用性检查
细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行 培养基的适用性检查，成品培养基、由脱 水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
18
计数培养基适用性检查
菌种
• 大肠埃希菌
培养48h，菌落平均数应小于1cfu/φ90mm。
10
实验器具
仪器 超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压力蒸 汽灭菌器、薄膜过滤装置、比浊仪等。
用具 试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精 密PH试纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊子、无菌服、 牛皮纸等。
11
实验准备
实验环境保证 实验试液 培养基 灭菌方法
数，按菌数报告规则报告菌数
27
细菌、霉菌及酵母菌计数
医疗器械微生物检验
表面活性剂、中和剂或灭活剂 鉴定用试剂
1.靛基质试液 2.1%二盐酸二甲基对苯二胺试液（氧化酶试液） 3.三氯甲烷 4.1mol/l盐酸试液
14
培养基
标准菌株处理及增菌用培养基 选择性培养基 鉴别培养基
15
培养基
培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应 按各种培养基要求准确测定调节pH值。多 数细菌生长的适宜pH值为7.2～7.6。酵母 菌霉菌（6.0～6.5）。调节可用1N HCl或 NaOH。
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供试液制备
液体供试品、固体、半固体或黏稠液供试品
取10ml或10g用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml， 混匀，作为1：10的供试液。油剂可加入适量的无菌吐温80使供 试品分散均匀; 水溶性液体亦可用混合供试品原液作为供试液；
非水溶性供试品 ：乳化或萃取; 膜剂供试品 ：取供试品100cm2，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋
［CMCC（B）44 102］
• 金黄色葡萄球菌 ［CMCC（B） 26 003］
• 枯草芽孢杆菌 ［CMCC（B） 63 501］
• 白色念珠菌
[CMCC(F) 98 001]
• 黑曲霉
[CMCC(F) 98 003]
验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌 种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采
具抑菌活性的供试品 ：培养基稀释法 、离心沉淀法 、薄膜过滤 法 、中和法;
25
细菌、霉菌及酵母菌计数
实验方法 倾注平皿法 薄膜过滤法 培养基 细菌总数：营养琼脂培养基 霉菌及酵母菌计数：玫瑰红钠琼脂培养基、
酵母浸出粉胨葡萄琼脂培养基
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细菌、霉菌及酵母菌计数
1.靛基质试液 2.1%二盐酸二甲基对苯二胺试液（氧化酶试液） 3.三氯甲烷 4.1mol/l盐酸试液
14
培养基
标准菌株处理及增菌用培养基 选择性培养基 鉴别培养基
15
培养基
培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应 按各种培养基要求准确测定调节pH值。多 数细菌生长的适宜pH值为7.2～7.6。酵母 菌霉菌（6.0～6.5）。调节可用1N HCl或 NaOH。
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供试液制备
液体供试品、固体、半固体或黏稠液供试品
取10ml或10g用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml， 混匀，作为1：10的供试液。油剂可加入适量的无菌吐温80使供 试品分散均匀; 水溶性液体亦可用混合供试品原液作为供试液；
非水溶性供试品 ：乳化或萃取; 膜剂供试品 ：取供试品100cm2，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋
［CMCC（B）44 102］
• 金黄色葡萄球菌 ［CMCC（B） 26 003］
• 枯草芽孢杆菌 ［CMCC（B） 63 501］
• 白色念珠菌
[CMCC(F) 98 001]
• 黑曲霉
[CMCC(F) 98 003]
验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌 种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采
具抑菌活性的供试品 ：培养基稀释法 、离心沉淀法 、薄膜过滤 法 、中和法;
25
细菌、霉菌及酵母菌计数
实验方法 倾注平皿法 薄膜过滤法 培养基 细菌总数：营养琼脂培养基 霉菌及酵母菌计数：玫瑰红钠琼脂培养基、
酵母浸出粉胨葡萄琼脂培养基
26
细菌、霉菌及酵母菌计数
医疗器械微生物基础知识及操作ppt课件
第三节细菌的生长条件、代谢与营养
(三)温度 温度是细菌生长的重要因素之一，各种 细菌的适宜温度范围相差很大，据此而有嗜 热(52℃)、嗜温及嗜冷菌之分。大多为嗜温 菌(15～40℃)，一般细菌的培养采用37℃。 各国药典规定需氧、厌氧菌30-35 ℃;霉菌 20-25 ℃ 。我国药典2015版终于与国际接 轨。 (四)气体 与细菌生长繁殖有关的气体主要有氧气 和二氧化碳。
第二节 细菌的形态和基本结构
一、细菌的形态与大小
细菌在一定的条件下，可分为球菌、杆菌、弧菌或螺形菌， 见图1。其体积微小，但大小不一。通常以μ m作为测量单位。一 般球菌的直径约为0.8～1.2μ m，大球菌的直径可达2μ m；杆菌 长约2～3μ m，宽0.3～0.5μ m；螺形菌长1～50μ m，宽0.3-1μ m。 能产生芽胞的菌比一般不产芽胞菌要大些。
(二)细胞膜 细胞膜又称细胞质膜, 位于胞壁之内，紧包于细胞质，它 由双层磷脂和蛋白质镶嵌排列而成。其化学组成主要为脂类、 蛋白质和核糖核酸。它具有半透性，与细胞壁一起维持细胞的 通透性，具有物质转运与营养、调节菌体内外环境平衡的功能。
(三)细胞质
细胞质是细菌的基础物质，呈溶胶状态，为细菌进行新陈 代谢的重要场所。基本成分为水(细菌质量70%是水)、蛋白质、 核酸（核糖核酸及去氧核糖核酸）和脂类，也含有少量的糖和 无机盐。并含有一系列的酶系统。进行合成、分解、氧化、还 原反应，更新细胞内部结构和成分，维持菌体的生长、代谢等 活动。
第四节 细菌的人工培养
按培养基状态可分为下列3类。
1、固体培养基(solid medium) 在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态即为固体培养基。 固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏等。 2、半固体培养基(semisolid medium) 半固体培养基中凝固剂的含量比固体培养基少，培养基中琼脂含量一般为 0.2%～0.7%。半固体培养基常用来观察微生物的运动特征、分类鉴定 及噬菌体效价滴定等。 3、液体培养基(liquid medium) 液体培养基中未加任何凝固剂。在用液体培养基培养微生物时，通过振荡 或搅拌可以增加培养基的通气量，同时使营养物质分布均匀。液体培 养基常用于大规模工业生产以及在实验室进行微生物的基础理论和应 用方面的研究。
医疗器械微生物检验
细菌、霉菌及酵母菌计数1用培养基应进行培养基 的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按 处方配制的培养基均应检查。
18
菌种 #2022
• 大肠埃希菌
［CMCC（B）44 102］
• 金黄色葡萄球菌 ［CMCC（B） 26 003］
• 枯草芽孢杆菌 ［CMCC（B） 63 501］
计数培养基 • 白色念珠菌
大肠埃希菌2个平皿
枯草芽孢杆菌2个平皿
计数培养基适用 玫瑰红钠琼脂培养基
白色念珠菌2个平皿
性检查
黑典霉2个平皿
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基：白色念珠菌2个平皿 用相同的对照培养基替代被检培养基做对照
21
计数培养基适用性检查
结果判定
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落 平均数的70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落 一致，判该培养基的适用性检查符合规定。
14
培养基
标准菌株处理及增菌用培养基
选择性培养基
鉴别培养基
15
培养基
培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效 果及不损失培养基的必需营养成分。
制成的培养基应透明 ，以便观察细菌生长 性状以及其他代谢活 动所产生的变化。
培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应按各种 培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长 的适宜pH值为7.2～7.6。酵母菌霉菌（6.0～ 6.5）。调节可用1N HCl或NaOH。
显微镜、 恒温培养箱、压力蒸汽灭菌 器、薄膜过滤装置、比浊仪
等。
仪器 用具
试管、注射器、三角瓶、刻 度吸管、移液器、精密PH试 纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊 子、无菌服、牛皮纸等。
11
实验准备
18
菌种 #2022
• 大肠埃希菌
［CMCC（B）44 102］
• 金黄色葡萄球菌 ［CMCC（B） 26 003］
• 枯草芽孢杆菌 ［CMCC（B） 63 501］
计数培养基 • 白色念珠菌
大肠埃希菌2个平皿
枯草芽孢杆菌2个平皿
计数培养基适用 玫瑰红钠琼脂培养基
白色念珠菌2个平皿
性检查
黑典霉2个平皿
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基：白色念珠菌2个平皿 用相同的对照培养基替代被检培养基做对照
21
计数培养基适用性检查
结果判定
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落 平均数的70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落 一致，判该培养基的适用性检查符合规定。
14
培养基
标准菌株处理及增菌用培养基
选择性培养基
鉴别培养基
15
培养基
培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效 果及不损失培养基的必需营养成分。
制成的培养基应透明 ，以便观察细菌生长 性状以及其他代谢活 动所产生的变化。
培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应按各种 培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长 的适宜pH值为7.2～7.6。酵母菌霉菌（6.0～ 6.5）。调节可用1N HCl或NaOH。
显微镜、 恒温培养箱、压力蒸汽灭菌 器、薄膜过滤装置、比浊仪
等。
仪器 用具
试管、注射器、三角瓶、刻 度吸管、移液器、精密PH试 纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊 子、无菌服、牛皮纸等。
11
实验准备
《微生物限度检验》PPT课件
PTP课件25
可以接受的标准 — 平板法
1、重现性良好 - 三批不同批次的样品/产品 - 三次独立的试验
2、验证数据合理有效（微生物的回收率） - 阴性对照：无污染事件发生 - 样品组（ 回收率）： A = C ± 30% （ 偏差≤ 30%）
3、样品的处理方法和检验方法与检验规程相符
PTP课件26
改良马丁培养基 20-25℃ 1824h
改良马丁斜面培养基 20-25℃ 5-7天
PTP课件17
微生物计数方法验证用菌株：
USP29版
菌株名称
ATCC编号
大肠埃希氏菌(Escherichia coli)
ATCC 8739
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ATCC 6538
大肠杆菌
10g (10ml)样品
90ml TSB 35-37 ℃,1848h
沙门菌
10g (10ml)样品
90ml TSB 35-37 ℃,1824h
铜绿假单胞菌
10g (10ml)样 品 90ml 缓冲蛋白 胨水
金黄色葡萄球 菌
10g (10ml)样 品
90ml 缓冲蛋 白胨水
梭菌
10g (10ml)样品
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
PTP课件14
稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 （3） pH7.6无菌磷酸盐缓冲液
固体：10g 供试品+稀释剂至100ml 液体：10ml供试品+稀释剂至100ml
可以接受的标准 — 平板法
1、重现性良好 - 三批不同批次的样品/产品 - 三次独立的试验
2、验证数据合理有效（微生物的回收率） - 阴性对照：无污染事件发生 - 样品组（ 回收率）： A = C ± 30% （ 偏差≤ 30%）
3、样品的处理方法和检验方法与检验规程相符
PTP课件26
改良马丁培养基 20-25℃ 1824h
改良马丁斜面培养基 20-25℃ 5-7天
PTP课件17
微生物计数方法验证用菌株：
USP29版
菌株名称
ATCC编号
大肠埃希氏菌(Escherichia coli)
ATCC 8739
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ATCC 6538
大肠杆菌
10g (10ml)样品
90ml TSB 35-37 ℃,1848h
沙门菌
10g (10ml)样品
90ml TSB 35-37 ℃,1824h
铜绿假单胞菌
10g (10ml)样 品 90ml 缓冲蛋白 胨水
金黄色葡萄球 菌
10g (10ml)样 品
90ml 缓冲蛋 白胨水
梭菌
10g (10ml)样品
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
PTP课件14
稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 （3） pH7.6无菌磷酸盐缓冲液
固体：10g 供试品+稀释剂至100ml 液体：10ml供试品+稀释剂至100ml
微生物限度检验PPT课件
- 表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及 对微生物的生长和存活无影响。
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
13
稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
6
验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
7
验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
13
稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
6
验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
7
验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件
无菌医疗器械生化检验课件
生化检验的流程和方法
总结词
生化检验的流程包括样本采集、处理、检测和结果分析。常用的生化检验方法有比色法、 滴定法、酶法等，不同方法具有不同的优缺点和应用范围。
详细描述
生化检验的流程始于样本采集，采集体液如血液、尿液等作为检测对象。采集后的样本 经过处理，如离心分离、稀释等，以去除杂质和干扰因素。检测方法根据不同指标而选 择，如比色法适用于检测含有色素的物质，滴定法适用于检测电解质和酸碱度等。最后，
步骤
取样、制备样品、检测、结果判定、 记录和报告。
无菌医疗器械生化检验的质量控制
设备要求
使用符合要求的仪器和设备， 定期进行校准和维护。
操作过程要求
严格遵守操作规程，确保检验 结果的准确性和可靠性。
人员要求
检验人员需具备相关资质和经 验，熟悉操作规程和标准。
试剂和材料要求
选用合格供应商提供的试剂和 材料，确保质量和纯度。
无菌医疗器械的生产和使用必须符合 国家相关法规和标准，以确保安全性 和有效性。
无菌医疗器械必须保证无任何微生物 污染，包括细菌、病毒、真菌等。
无菌医疗器械的分类
一次性使用无菌医疗器械
如注射器、输液器、输血器等，使用后即废弃。
可重复使用无菌医疗器械
如手术器械、呼吸机管道等，使用后需经过清洗、消毒、灭菌等处 理方可再次使用。
对已经上市的无菌医疗器 械进行生化检验，监测其 在使用过程中的性能和安 全性。
生化检验在无菌医疗器械监管中的应用
质量标准制定
通过生化检验制定无菌医疗器械 的质量标准，确保产品的安全性
和有效性。
市场监督
对市场上销售的无菌医疗器械进行 生化检验，确保产品的合规性和安 全性。
不良事件调查
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埃希菌 曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基
大肠 菌群
胆盐乳糖发酵培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康 乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、乳糖发酵培
凯琼脂培养基 、乳糖发酵培养基
养基
沙门菌
营养肉汤 、四硫酸钠亮绿培养基 、胆盐硫乳琼脂（或 / 沙门、志贺菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红 亚蓝琼脂）培养基 、三糖铁琼脂培养基
干热：160 ℃~ 170 ℃ ，2h
适于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭 菌。
灭菌程序需要经过验证。
2021
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计数培养基适用性检查
细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行 培养基的适用性检查，成品培养基、由脱 水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
2021
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计数培养基适用性检查
菌种
• 大肠埃希菌
培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培 养基的规定进行，以保证灭菌效果及不损 失培养基的必需营养成分。
制成的培养基应透明，以便观察细菌生长 性状以及其他代谢活动所产生的变化。
2021
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灭菌方式
湿热：115 ℃ ~121 ℃，15mi菌物品内蒸气冷凝造成负压，以致染 菌。
表面活性剂、中和剂或灭活剂 鉴定用试剂
1.靛基质试液 2.1%二盐酸二甲基对苯二胺试液（氧化酶试液） 3.三氯甲烷 4.1mol/l盐酸试液
2021
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培养基
标准菌株处理及增菌用培养基 选择性培养基 鉴别培养基
2021
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培养基
培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应 按各种培养基要求准确测定调节pH值。多 数细菌生长的适宜pH值为7.2～7.6。酵母 菌霉菌（6.0～6.5）。调节可用1N HCl或 NaOH。
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芽管试验
实验条件
无菌操作技术 实验环境 实验器材
2021
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无菌操作技术
微生物学基础 微生物实践基础 无菌操作意识
2021
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实验环境
洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空 气区域或隔离系统；
定期按GB/T16292-16294：2010《医药工业洁净 室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》 的现行国家标准进行洁净度验证；
［CMCC（B）44 102］
• 金黄色葡萄球菌 ［CMCC（B） 26 003］
• 枯草芽孢杆菌 ［CMCC（B） 63 501］
• 白色念珠菌
[CMCC(F) 98 001]
• 黑曲霉
[CMCC(F) 98 003]
验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌 种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采 用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物 学特性。
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实验准备
实验环境保证 实验试液 培养基 灭菌方法
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实验环境保证
环境清洁，表面消毒（ 75%(V/V)乙醇、新 洁尔灭(1:1000)溶液或其他适宜消毒溶液）
空气过滤系统，紫外灯或臭氧空气消毒仪
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实验试液
稀释剂 1.0.9%氯化钠溶液 2.pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、pH7.6无菌磷酸盐缓冲液 3.pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液：调解pH至近中性，其中蛋 白胨对细菌细胞有保护作用有利于菌落数及控制菌测定。
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项目 《药典》2010
GB15979-2002
细菌 真菌
定量：营养琼脂培养基 2个平皿
定量：玫瑰红钠琼脂培养基 至少2个平皿 72h 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基
定量：营养琼脂培养基 5个平皿
定量：沙氏琼脂培养基 5个平皿 7天 定性：沙氏液体培养基 7天
大肠 胆盐乳糖培养基 、MUG培养基
固酶试验
SCDLP培养基、血琼脂培养基、甘露醇发酵试 验、血浆凝固酶试验
梭菌
庖肉培养基、含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基 、过 / 氧化氢酶试验
溶血性链 / 球菌
葡萄糖肉汤、血琼脂培养基、链球菌试验、杆 菌肽敏感试验
白色念珠 沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、念 /
菌
珠菌显色培养基、1%聚山黎脂80-玉米琼脂培20养21基、
铜绿假单 胆盐乳糖 、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基 、氧化酶 SCDLP培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养
胞菌 试验 、绿脓菌素试验、
基 、氧化酶试验 、绿脓菌素试验、硝酸盐还原
产气试验、明胶液化试验42℃生长试验
金黄色 亚碲酸钠（钾）肉汤（或营养肉汤）培养基 、卵黄氯 葡萄球菌 化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基 、血浆凝
实验中监控：实验时将制备好的营养琼脂平板打 开放于实验台上，至实验结束收起，30 ℃ ~35℃
培养48h，菌落平均数应小于1cfu/φ90mm。
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实验器具
仪器 超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压力蒸 汽灭菌器、薄膜过滤装置、比浊仪等。
用具 试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精 密PH试纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊子、无菌服、 牛皮纸等。
以及接触破损皮肤和粘膜的医疗 用品
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常用检测标准
《中华人民共和国药典》 2010年版二部附录XI J “微生物限度检查法”
GB 15979-2002 《一次性卫生用品卫生标准》附 录B
ISO11737-1:2006 Sterilization of medical devices– Microbiological methods—Part1: Determination of a population of microorganisms on products
医疗器械微生物限度检验
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概述
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂 及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
微生物限度检查
细菌、真菌菌落数 控制菌
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概述
微生物：形体微小，结构简单，通常要用光学显 微镜和电子显微镜才能看清楚的生物
特点： 1、个体微小，一般<0.1mm 2、构造简单，有单细胞的，简单多细胞
的，非细胞的
3、进化地位低
分类：原核类：二菌，四体（细菌、放线菌、螺旋体、 支原体、立克次氏体、衣原体）
真核类：真菌，原生动物，显微藻类 非细胞类：病毒，亚病毒
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2021
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概述
医疗用品的分类 按医疗用品与人体接触的性质以及对人体使用安全
性要求分三类： a)Ⅰ 类医疗用品：接触人体完整皮肤的医疗用品 b) Ⅱ类医疗用品：接触人体未破损粘膜的医疗用品 c) Ⅲ类医疗用品：进入人体无菌组织、器官和血液