菌种保藏方法

仍有一定的活动条件，一般4～6 个月必须传代一次。
只能求助于传代培养保存法。传代培 养就是要定期地进行菌种转接、培养 后再保存，它是最基本的微生物保存
法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
优点：方便，不受条件限制，各类微生物均可
。 缺点：时间短、传代多、易退化。
液体石蜡覆盖保藏法
穿刺培养
采用以下两种方式进行灭菌:
①121℃湿热灭菌30 min， 置 40℃恒温箱中蒸发水分,
经无菌检查后备用。
载体保藏法
方法
把液体石蜡注入 已长好菌的斜面 上并高出斜面顶 端1 cm，使菌种 与空气隔绝。将 试管直立，置低
温(4～6℃)干燥 处或室温下保存。 保藏期间应定期
检查
②160℃干热灭菌2 h，冷却 后，经无菌检查后备用。
糖液保存法：
• 适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10% 的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长 达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食 盐水等进行保存。
冷冻干燥保藏法
冷冻干燥保藏法
方法：
• 先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，
然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。 需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分 不断升华对细胞的损害。保保护剂有牛乳、血清、糖 类、甘油、二甲亚砜等。
载体保藏 法
液体石蜡 覆盖保藏
法
悬液保藏 法
冷冻干燥 保藏法
分类 斜面培养、穿刺培养、
疱肉培养基培养
方法
将菌种接种在斜面、液体或 穿刺培养基上，待生长完全后，
置普通冰箱4℃保藏，湿度50 ％～70％以下，棉塞换成不通气
橡皮塞更好。
传代培养法
（Subculture
method)
适用情况
时间
有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理
•
沙土培养法
沙和土用酸浸泡去除其中的有机质，洗涤 中和，干燥，分装于安瓶管内，加塞灭菌， 把健壮的孢子悬液滴于砂土中搅拌均匀，真 空干燥后封口，置于冰箱或干燥器中。
此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、 放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广， 效果亦好，可保存2年左右，但应用于营养细 胞效果不佳。
菌种保藏方法（Methods of strain preservation ）
一种良好的菌种保藏方法： 保持原菌的优良性状长期稳定 方法的通用性 操作的简便性 设备的普及性
菌种保藏方法的分类
菌种保藏方法（Methods of strain preservation ）
液氮保藏 法
传代培养 保藏法
液体石蜡覆盖保藏法
斜面低温保藏法
将菌种接种在适宜的斜面培养基上， 待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰 箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再 转接至新的斜面培养基上，生长后继续 保藏，如此连续不断。 ▪ 此法广泛适用于各大类微生物菌种 的短期保藏 ▪ 此法的主要保藏措施是低温。一般 可保存1～6个月左右。 ▪ 优点:简便易行，容易推广，存活率 高； ▪ 缺点:菌株仍有一定程度的代谢活动 能力，保藏期短，传代次数多，菌 种较容易发生变异和被污染。
液氮保藏法
液氮保藏法பைடு நூலகம்
操作方法： 液氮温度可达－196℃。把菌悬 液密封于安瓶中，置液氮罐内保 藏。
优点：保藏效果好。 缺点：价格昂贵。
液体石蜡 覆盖保藏
法
适用情况 可用于丝状真菌、酵母、 细菌和放线菌的保藏。特 别对难于冷冻干燥的丝状 真菌和难以在固体培养基 上形成孢子的担子菌等的
保藏更为有效。
保藏时间 此方法简便有 效，保藏时间
2～10年
优点：方法简便。 缺点：必须直立存放，占 空间大，不便携带。
载体保藏法
悬液保藏法
沙土保存法
适用条件及保藏时间：
• 此法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般 生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，即使 对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球菌与淋病球菌等 亦能保存。适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十 余年，但设备和操作都比较复杂。
优点：低温、干燥、无氧、有保护剂，可保藏各大类微生物，保藏时间可达几十 年，是目前使用最广、最有效的保藏方法。一般专业机构大都使用此法保藏。
1.保持菌种原有性状和活力的稳定。 2.确保菌种不死亡、不变异、不被污染。
原理(theory)：
DNA复制时自发突变导致菌种退化，因此要创造代谢 不活泼的状态。
休眠态（孢子、芽孢) 代谢不活泼的状态
环境（干燥、低温、缺氧、缺营养）
学习的重点：
菌种保藏的目的、原理及任务
常用的菌种保藏方法
• 分类 • 方法 • 保藏时间 • 适用情况
低温可减缓生长速度，单细胞 时，会很快死亡，因此在这种情况下，
仍有一定的活动条件，一般4～6 个月必须传代一次。
只能求助于传代培养保存法。传代培 养就是要定期地进行菌种转接、培养 后再保存，它是最基本的微生物保存
法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
优点：方便，不受条件限制，各类微生物均可
。 缺点：时间短、传代多、易退化。
纸片保存法
将灭菌纸片浸入培养液或菌悬液中，常压或减 压干燥后，置于装有干燥剂的容器内进行保存。
细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前 两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏 14—17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便， 不需要特殊设备。
悬液保藏法
蒸馏水保存法：
• 适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌， 将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保 存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
• 沙和土用酸浸泡去除其中的有机质，洗 涤中和，干燥，分装于安瓶管内，加塞灭菌， 把健壮的孢子悬液滴于砂土中搅拌均匀，真
空干燥后封口，置于冰箱或干燥器中。
• 此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、 放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广，
效果亦好，可保存2年左右，但应用于营养 细胞效果不佳。
• 将灭菌纸片浸入培养液或菌悬液中，常
大连民族学院
生物工程083班 Made by lyq
学习的重点：
菌种保藏的目的、原理及任务
常用的菌种保藏方法
• 分类 • 方法 • 保藏时间 • 适用情况
菌种的保藏（ Strain preservation）
菌种是重要的生物资源，研究和选择良好的菌种保藏方 法具有重要的意义。
目的(objective):
分类 斜面培养、穿刺培养、
疱肉培养基培养
方法
将菌种接种在斜面、液体或 穿刺培养基上，待生长完全后，
置普通冰箱4℃保藏，湿度50 ％～70％以下，棉塞换成不通气
橡皮塞更好。
传代培养法
（Subculture
method)
适用情况
时间
有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理
低温可减缓生长速度，单细胞 时，会很快死亡，因此在这种情况下，
纸片（滤纸） 压或减压干燥后，置于装有干燥剂的容器内 进行保存。
保存法
• 细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏， 前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至 可保藏14—17年之久。此法较液氮、冷冻干 燥法简便，不需要特殊设备。
硅胶保存法
• 以6～16目的无色硅胶代替砂子，干热灭 菌后，加入菌液。加菌液时，由于硅胶的吸 附热常使温度升高，因而需设法加以冷却。