自身抗体检测及临床应用价值

抗核抗体谱（ANAs）分类
根据细胞内靶抗原分子理化特性和分布部位将ANAs分类：
抗DNA抗体（anti-dsDNA，anti-ssDNA ）
抗组蛋白抗体（histons: H1 , H2A , H2B , H3 , H4 , H2A-H2B复合物）
抗ENA抗体（抗体: Sm , nRNP , SSA/Ro , SSB/La,
自身抗体检测及其临床应用
实验室：推广普及 检测质量 临床：检测项目合理选择 报告解读 临床与实验室：沟通﹑联系
That’s all，thank you.
北京协和医院风湿免疫科 李永哲 yongzhelipumch@yahoo.com.cn
谢谢
U3nRNP/Fibrillaria，4-6-S-RNA…）
抗其他细胞成分抗体（高尔基体，中心体，纺锤体，线粒体，溶酶
体，肌动蛋白，Vimentin，细胞角蛋白， Lamin…)
抗核抗体谱
¾ ANA筛选试验 ¾ 抗dsDNA抗体 ¾ 抗ENA抗体
抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%-30%） 抗nRNP抗体：MCTD 95 -100%（高滴度） 抗SSA抗体：PSS 60 -75%，其它CTD 抗SSB抗体： PSS 10 -40%，其它CTD 抗Scl-70抗体：SSc 25 -75%, 标记性抗体 抗Jo-1抗体：PM/DM 25%，标记性抗体 抗rRNP抗体： SLE特异性抗体（10%-30%）
自身抗体（autoantibidies）
¾ 自身抗体:是指抗自身细胞内、细胞表面和 细胞外抗原成分的免疫球蛋白
¾ 是自身免疫应答和AID最重要特征之一 ¾ 某些AID伴有特征性的自身抗体(谱) ¾ 自身抗体检测对AID诊断和鉴别诊断至关重要 ¾ 自身抗体检测已成为诊断AID的重要手段
自身抗体临床检测及应用
Anti- Jo-1 antibody ANA Anti- PL-7 antibody Anti- PL-12antibody Anti- Mi-2 antibody Anti- SRP antibody Anti-PM-Scl antibody Anti-EJ antibody Anti-OJ antibody
SLE中存在的自身抗体达百种以上
Yaniv S et al1.Semin ArthritiRheum,2004,34:501-537 .
检测项目的选择
SLE初筛（普通）
血常规﹑血沉 尿常规、沉渣、24小时尿蛋白 肝肾功能 补体、免疫球蛋白 ANA 、抗dsDNA 、抗ENA 、 ACL
SLE随访
血常规﹑血沉 尿常规、沉渣、24小时尿蛋白 肝肾功能 补体、免疫球蛋白 ANA 、抗dsDNA
自身免疫性肝病相关自身抗体谱
疾病类型
相关自身抗体
自身免疫性肝炎（ AIH ） Ⅰ型AIH Ⅱ型AIH
ANA/ASMA，anti-SLA anti-LKM-1 anti-LC-1
原发性胆汁性肝硬化（ PBC） AMA (M2/M4/M8/M9 ) ACA anti-gp210 sp100
原发性硬化性胆管炎（PSC） pANCA
SLE初筛（全套）
血常规﹑血沉 尿常规、沉渣、24小时尿蛋白 肝肾功能 补体、免疫球蛋白 ANA谱 、 ACL 、抗B2GPI、狼疮抗凝物 Coomb‘s试验
自身抗体检测结果的解释
疾病标记（志）性自身抗体 疾病特异性自身抗体 疾病相关性自身抗体 疾病非特异性自身抗体 生理性自身抗体 疾病前期存在 检测方法及检测程序局限性 检测质量:假阴性﹑假阳性
自身抗体检测及临床应用价值
北京协和医院风湿免疫科 李永哲
自身免疫性疾病(AID)诊断
特征性临床表现
相关实验室检查
疾病分类标准﹑诊断标准﹑专家共识
自身免疫性疾病(AID)诊断
相关实验室检查
体外诊断实验-实验室检查
¾临床检验常规检查 ¾临床免疫学常规检查 ¾特殊实验室检查
影像学检查 组织病理学检查
，具有较佳的检测特异性和灵敏度
自身抗体检测与临床应用进展
¾ 检测项目：靶抗原特异化
总抗体→特异性抗体 纯化、合成肽、重组抗原
¾ 检测方法：标准化、多元化、自动化 ¾ 检测质量：准确、稳定，质量保证 ¾ 应用临床 ：迅速，临床应用周期变短
自身抗体临床应用概况
¾ 过去
¾ 自建检测方法： ¾ 问题：稳定性 可比性 敏感性
抗核抗体谱检测方法
Sm
RNP +
2008年美国CAP报告显示
¾ anti-ENA： ELISA:53.8%(171/318) Multiplexed Bead:28.9%(92/318) ID:12.6%(40/318)
方法学选择：临床需求 与时俱进（多快好省）
悬浮微列阵技术检测自身抗体
整合了免疫微球、激光检测、流体动力学、数字信号 处理和计算机运算等功能，可进行“单孔多项”检测
抗杀菌/通透性增高蛋白（BPI） 抗人白细胞弹性蛋白酶（HLE） 抗组织蛋白酶G（CG） 抗溶菌酶（LYS） 抗乳铁蛋白（LF）
系统性血管炎 炎症性肠病 自身免疫性肝病 结缔组织病 药物性疾病 感染性疾病
类风湿关节炎相关自身抗体谱
类风湿因子（RF） 抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体） 抗角质蛋白抗体（AKA） 抗核周因子（APF）profilaggrin/filaggrin 抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA） 抗MCV（Sa） 抗RA33抗体 葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）抗原
World J Gastroenterol, 2010. 16(29): p. 3616-29.
N Engl J Med 2003;349:1526-33.
疾病预警
自身抗体在SLE发病前9.4年出现
AMA在PBC发病前10年出现
疾病预警
临床复杂性
抗CFra Baidu bibliotekP抗体在丙肝中8.5℅
临床复杂性
急性肝衰患者出现Ｍ2和PBC特异性抗体
各种自身抗体检测方法的优缺点
方法学局限性
Diagn Pathol, 2009. 4
方法学局限性
抗rRNP抗体三种检测方法诊断SLE的比较
检测方法
敏感型
特异性
ELISA ID IB
40.0 %
100 %
22.0 %
100 %
12.0 %
96.7 %
舒彗君等．中华微生物学和免疫学杂志， 2004，24：496-497.
¾ 国内:临床常规项目少，普及性低
自身抗体临床意义
诊断 鉴别诊断
病程转归 预后判断
自身抗体 临床意义
病情评估 治疗监测
预测、预防 个体化医疗
自身抗体临床价值分类
标记性自身抗体
特异性自身抗体
相关性自身抗体
自身抗体
非特异性自身抗体
生理性自身抗体
预警性自身抗体
风湿免疫病常见自身抗体谱
抗核抗体谱 抗磷脂抗体谱 抗中性粒细胞胞浆抗体谱 类风湿关节炎自身抗体谱 自身免疫性肝病自身抗体谱
自身抗体常用检测方法
总抗体检测 特异性抗体检测 提高临床应用价值
AMA
AMA-M2
anti- Sp100
ANCAs
anti-PR3 anti-MPO
ASMAs
anti- Factin
anti- gp210 anti- p62 anti-LBR
自身抗体检测标准化﹑高通量﹑自动化
Automation
自身免疫病自身抗体非常复杂
SLE患者中存在100多种自身抗体
APS患者中存在30种自身抗体
Semin Arthritis Rheum. 2004 Oct;34(2):501-37. J Autoimmun, 2008. 30(1-2): p. 74-83.
自身免疫病自身抗体非常复杂
PBC患者中存在60多种自身抗体
¾ 现在
¾ 检测方法：标准化 规范化 多元化 ¾ 问题：总抗体→特异性抗体 检测程序
Sm
RNP +
报告解释
¾ 将来
¾ 检测方法：自动化 高通量 ¾ 问题：检测程序 报告解释
快速 性价
自身抗体检测质量管理策略
自身抗体检测项目选择与实验结果解释
¾ 项目选择：疾病自身抗体(谱) ↑，分型↑ 临床意义?
¾ 国外临床常规自身抗体检测项目已达百种以上 ¾ 主要包括：
¾ 抗核抗体谱、抗中性粒细胞胞浆抗体谱、抗磷脂抗体谱、 类风湿因子、类风湿关节炎早期诊断自身抗体谱
¾ 自身免疫性肝病自身抗体谱、自身免疫性甲状腺疾病自身 抗体谱、1型自身免疫性糖尿病自身抗体谱、不孕/不育自 身抗体谱、炎症性肠病自身抗体谱、自身免疫性胃炎/恶性 贫血自身抗体谱、麦胶（麸质）敏感性肠病自身抗体谱、 副肿瘤综合征自身抗体谱和重症肌无力自身抗体谱等
rRNP , Scl-70 , Jo-1 , PCNA , RA33 ,
ANAs 抗非组蛋白抗体
Ku,RANA,Mi-1,Mi-2,PL-7,PL-12.…）
抗着丝点抗体（ anti-CENP -A , B , C ，D，F，G）
抗核仁抗体（抗体: RNA-polymerase-1 , PM-Scl/PM-1，Th/To,
¾ 结果解释:临床表现与实验室结果解释困惑 临床复杂性:没有绝对，只有相对 实验室检测局限性 假阳性 假阴性 可比性
自身抗体检测项目合理选择
自身抗体临床应用： 自身抗体(谱) ↑，分型↑
大撒网式筛查不是好医生 临床需求，基本项目
检测项目、检测程序合理选择
疾病诊疗临床路径
自身抗体检测项目的选择
¾ 抗DNP 抗核小体 抗组蛋白抗体
抗磷脂抗体谱
抗磷脂综合征（APS）﹑1/3 SLE（凝血危险） RA ﹑炎性疾病
狼疮抗凝物（LA） 抗心磷脂抗体（aCL） 抗β2糖蛋白-1（β2GP-1）抗体 抗磷脂酰丝氨酸抗体 抗磷脂酸抗体
抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）谱
pANCA ,cANCA ,xANCA 抗蛋白酶3（PR3），抗髓过氧化物酶（MPO） 其他：
器官特异性自身免疫病自身抗体谱
自身抗体临床应用概况
标准化、规范化、自动化
2000年代:特异性自身抗体 90年代末:商品试剂盒 90年代初:HEP-2;ANCA 80年代末:WB 、ICA 80年代初:抗ENA、AMA/ASM 、TE-IF 、TG/TM 1975:ANA IIF 50-70年代:LE
–鉴别诊断 合并感染 ：细菌 病毒 真菌
AID临床实验室检查特殊项目
口干燥征实验室检查
–唾液流率试验 唇腺活检 腮腺照影 唾液腺放射性核素扫描
干燥性角膜炎实验室检查
–泪液分泌试验 泪膜破碎时间检查 角膜染色检查 结膜活检
滑液检查 狼疮带试验 遗传标志物检查
–HLA-B27 HLA-B5 HLA-DR2、3、4
系统性硬化症（SSc）
Anti- Scl-70 antibody ACA ANA Anti-RNAP-Ⅲ antibodies Anti-U1RNP antibody Anti-PM-Scl antibody Anti-Ku antibody Anti-Th/To Anti-NOR-90
多发性肌炎/皮肤（PM/DM）
解读困难
自身抗体检测结果正确解读
¾ 检测方法局限性：假阳性，假阴性 ¾ 临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期
¾ 临床表现阳性，实验室检查阴性 ¾ 实验室检查阳性，临床表现阴性
自身抗体检测结果正确解读
¾ 总抗体与特异性抗体检测差异 ANAs ANCAs AMAs
¾ 不同实验室检测差异 ¾ 不同方法学检测差异
AID临床实验室检查常规项目
一般临床检验常规检查
–血常规﹑尿常规﹑脑脊液﹑胸水﹑腹水 –急性期反应物:ESR﹑CRP
生化常规检查
–肝功﹑肾功﹑甲功﹑蛋白电泳﹑肌酶谱﹑血尿酸
免疫学常规检查
–免疫分子，蛋白：Ig/亚类﹑补体﹑CIC﹑ASO﹑冷球 蛋白
–细胞免疫功能：免疫功能低下 –自身抗体
微生物常规检查
¾ 自身抗体临床应用：特异性抗体↑，分型↑ ¾ 临床医生：临床需求→有价值、准确、快速 ¾ 患者：经济，解决问题 ¾ 实验室:检测流程，报告时间
检测项目选择、检测程序合理选择
疾病诊疗临床路径
系统性红斑狼疮（SLE）
Antinuclear antibody(ANA) Anti-dsDNA antibody Anti-Sm antibody Anti-cardiolipin antibody Lupus anticoagulant（LA) Anti-Nucleosomes antibodies Anti-ribosomal RNP antibodies Anti-β2GPⅠantibody