生物学——毕业答辩

36株菌株对植物促生/抑生活性初步筛选
早熟禾根长化感效应指数（RI）
菌株 XI20 XI25 XI5 XI17 XI11 XI38 XI8 XI29 XI13 XI48 XI23 XI10 XI1 10μ g/ml 平均根长 RI 1.62 1.90 1.95 2.39 2.63 2.68 4.78 4.74 4.59 3.19 4.50 4.40 -0.58 -0.51 -0.49 -0.38 -0.32 -0.30 0.24 0.23 0.19 -0.17 0.17 0.14 RI 绝对值 0.58 0.51 0.49 0.38 0.32 0.30 0.24 0.23 0.19 0.17 0.17 0.14 菌株 XI25 XI5 XI10 XI18 XI14 XI46 XI11 XI31 XI28 XI32 XI38 XI36 200μ g/ml 平均根长 RI 0.00 0.01 0.10 0.14 0.16 0.25 0.26 0.27 2.24 2.68 2.87 2.90 -1.00 -1.00 -0.97 -0.96 -0.96 -0.94 -0.93 -0.93 -0.42 -0.30 -0.25 -0.25 RI 绝对值 1.00 1.00 0.97 0.96 0.96 0.94 0.93 0.93 0.42 0.30 0.25 0.25
研究背景
土壤微生物对入侵种和本土种的反馈作用是多 种植物入侵成功的原因之一。 目前对于意大利苍耳的研究报道主要集中在关 于其生物学特性及危害性等方面的描述，对于 其根际分泌物对土壤微生物多样性的影响，尤 其是根际微生物所产生的次生代谢产物的活性 研究尚未见报道。
研究目的
探讨意大利苍耳根际效应是否改变根际微生物 的群落结构和功能，并辅助自身的生长和扩张。 分离纯化意大利苍耳根际真菌及其活性物质， 以期得到对意大利苍耳或伴生植物有促生/抑生 的活性化合物。
表示化感作用强弱。 XI7 3.37 -0.13
XI34 4.33 0.12
XI43 4.37 0.14 0.14 2.97 -0.23 0.23 RI>0 表示促进作用， RI<0表示抑制作用，其绝对值大小 XI2 4.35 0.13 0.13 XI48 3.04 -0.21 0.21 0.13 0.12 XI23 XI34 4.46 3.29 0.16 -0.15 0.16 0.15
蓝状菌 XI40(KX00866Βιβλιοθήκη Baidu)
XI7(KX008632) XI46(KX008672)
Talaromyces verruculosus(KP059103) 100%
帚霉 XI50(KX008670)
Talaromyces purpureogenus(KP055602) 100% 子囊菌 XI18(KX008644)
明德正行 博学多能
意大利苍耳入侵地土壤真菌多 样性及其化感作用的研究
答 辩 人：王 悦 专 业：生物技术 指导教师：邵华（副研究员）黄先忠（教授）
生命科学学院2016届本科毕业答辩
汇报内容
研究背景及目的 研究内容及方法 结果与讨论 结论 致谢
1.研究背景及目的
研究背景
意大利苍耳
根际微生物
研究背景
参考物种(登录号)
Fusarium sp. (DQ657851) Fusarium solani(KM873045) Fusarium phaseoli(KF717534) Aspergillus ustus (JN545824) Aspergillus tubingensis(KP994290) Aspergillus aff.(KF986800) Aspergillus niger(KT852982) Aspergillus terreus(JF738047) Aspergillus parasiticus(HQ340102) Aspergillus sojae(JQ812709) Aspergillus flavipes(KT803071) Aspergillus ochraceus(KT803068) Aspergillus fumigatus(KT192295) Talaromyces flavus(EU273527) Talaromyces funiculosus(KC254067) Talaromyces verruculos(KP059103)
样品 Samples 细菌数量 Quantity of bacteria CK 根际土 1.04×106 2.67×106 增长率 rate of increase _ 1.57 放线菌数量 Quantity of actinomyces 1.1×105 2.26×105 增长率 rate of increase _ 1.05 真菌数量 Quantity of fungi 0.79×104 2.82×104 增长率 rate of increase _ 2.57 微生物总数 total of microor ganism 115.79×104 292.42×104
2.研究内容与方法
研究内容
意大利苍耳入侵对根际土壤微生物多样性的影响
意大利苍耳根际土壤真菌次生代谢产物的化感活 性研究
研究方法
3.实验结果与讨论
3.1意大利苍耳根际真菌的分离、鉴 定以及多样性研究
土壤微生物的分离与计数 土壤微生物的分离计数
对意大利苍耳根际土和对照土的土壤微生物数量进行分析, 结果如下：
根际土壤中的微生物均有明显增长，其中真菌的增长率最高，故 选其作为后续实验研究对象。
根际真菌的分离纯化
运用稀释平板法分得66株真菌，现将部分真菌菌落形态图 片整理如下：
根际真菌的分离纯化
真菌的ITS-rDNA 序列分析和系统发育树构建
真菌属 菌株编号
XI3(KX008628)
菌株数
1 1 1 3 1 1 1 4 1 1 3 2 1 2 2 2 1 1
100% 弯孢菌 XI33(KX008659) 100% 100% 99% 99%
赭霉
XI17(KX008643) XI28(KX008655)
未知菌 XI10(KX008631) 虫草 XI44(KX008674)
100% 链格孢 XI30(KX008656) 100% 毛壳菌 XI5(KX008629) 100% 漆斑菌 XI25(KX008654)
真菌的ITS-rDNA 序列分析和系统发育树构建
真菌的ITS-rDNA 序列分析和系统发育树构建
种群多样性分析
定义ITS-rDNA 序列相似性低于97%时作为不同的分 类单元进行多样性计算：
Shannon-Wiener多样性指数为2.12
均匀度指数为0.80 根据种群划分原则，算出各菌株占群落总菌株的百分比。
的分类鉴定正在进行。
3.2部分根际真菌的化感作用的初步探讨
菌株的液体发酵培养
挑取单菌落于摇瓶中，120 rpm、28℃恒温培养5-7日后取 出，菌液用乙酸乙酯萃取。
菌株代谢产物粗提物的获取
部分菌株发酵产物粗提物干重情况：
菌株编号 XI59 XI30 XI36 XI18 XI35 XI32 XI8 XI38 XI9 XI14 XI45 XI43 XI50 XI28 XI21 XI34 XI3 XI31 发酵液产物粗提物干重（mg） 菌株编号 185.5 170.1 166.1 155.4 108.7 91.6 82.4 71.3 68.9 60.2 49.9 48.5 45.9 41.9 39.4 39.0 37.4 37.2 XI23 XI2 XI20 XI46 XI40 XI11 XI29 XI1 XI6 XI48 XI10 XI41 XI5 XI25 XI44 XI24 XI13 XI7 发酵液产物粗提物干重 （mg） 36.3 30.3 21.2 18.3 16.2 15.8 14.2 14.1 11.3 11.0 10.4 10.2 9.4 9.4 9.3 8.0 7.6 6.6
真菌的ITS-rDNA 序列分析和系统发育树构建
结论：
意大利苍耳根际土壤分离的真菌，鉴定分析为35个分类单元，分
属于半知菌亚门和子囊菌亚门，共12个属；其中曲霉（36%）、
蓝状菌（26%）、木霉（10%）为优势属。 菌株XI18和XI17与Genbank 中已经报道的基因序列相似性仅为 93％ 和92%，极有可能为潜在的新种资源。目前对这两种菌株
木霉
XI9(KX008635) XI20(KX008646) XI42(KX008671) XI8(KX008633)
青霉
XI23(KX008649) XI26(KX008642) XI19(KX008645)
曲霉
XI34(KX008659) XI35(KX008661) XI37(KX008660) XI38(KX008662) XI43(KX008666) XI45(KX008673) XI11(KX008636) XI31(KX008657)
相似性
100% 99% 100% 99% 99% 99% 100% 99% 100% 92% 100% 100% 100% 99% 99% 100% 99% 93%
镰刀菌 XI15(KX008639)
XI22(KX008640) XI1(KX008625) XI21(KX008647) XI24(KX008651) XI29(KX008650)
36株菌株对植物促生/抑生活性初步筛选
反枝苋根长化感效应指数（RI）
菌株 XI25 XI5 XI21 XI28 XI14 XI35 XI45 XI29 XI9 XI43 XI30 XI50 XI3 XI23 XI36 XI13 XI41 XI38 XI40 XI24 XI11 XI32 XI7 XI2 XI8 XI1 10μg/ml 平均根长 RI 0.32 0.35 2.91 2.85 2.79 2.77 2.63 2.59 2.57 2.56 2.56 2.55 2.46 2.43 2.40 2.37 2.36 2.34 2.32 2.23 2.16 1.17 2.12 2.07 2.04 1.95 -0.81 -0.79 0.74 0.71 0.67 0.66 0.57 0.55 0.54 0.53 0.53 0.53 0.47 0.45 0.44 0.42 0.41 0.40 0.39 0.33 0.29 -0.30 0.27 0.24 0.22 0.17 RI 绝对值 0.81 0.79 0.74 0.71 0.67 0.66 0.57 0.55 0.54 0.53 0.53 0.53 0.47 0.45 0.44 0.42 0.41 0.40 0.39 0.33 0.29 0.30 0.27 0.24 0.22 0.17 菌株 XI25 XI29 XI28 XI6 XI5 XI44 XI18 XI11 XI14 XI34 XI32 XI23 XI31 XI46 XI36 XI30 XI9 XI17 XI45 XI10 XI50 XI13 XI43 XI2 XI8 XI21 200μg/ml 平均根长 RI 0.00 3.22 0.10 0.10 0.15 2.98 0.35 0.38 0.38 0.41 0.43 2.85 0.48 0.50 0.67 2.63 2.61 2.47 2.34 2.25 1.09 2.23 2.17 2.16 2.12 2.08 -1.00 0.93 -0.94 -0.94 -0.91 0.78 -0.79 -0.78 -0.77 -0.75 -0.74 0.71 -0.72 -0.70 -0.60 0.57 0.56 0.48 0.40 0.34 -0.35 0.33 0.30 0.30 0.27 0.24 RI 绝对值 1.00 0.93 0.94 0.94 0.91 0.78 0.79 0.78 0.77 0.75 0.74 0.71 0.72 0.70 0.60 0.57 0.56 0.48 0.40 0.34 0.35 0.33 0.30 0.30 0.27 0.24
相似性 真菌属
99% 99% 100% 99% 100% 100% 99% 100%
菌株编号
XI6(KX008630)
菌株数
2 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 2 1 1 1 1 1 1
参考物种(登录号)
Trichoderma harzianum(KC576660) Trichoderma atroviride(EF442080) Trichoderma viride(LC092110) Trichoderma aureoviride(HQ596956) Penicillium halotolerans(NR111812) Penicillium pinophilum(AB606412) Penicillium sp.(FJ571462) Penicillium janthinellum(KM268686) Curvularia lunata（KU232956） Ochroconis tshawytschae(HQ667562) Aspergillus ochraceus(EU273559) Fungal endophyte (KF673689) Cordyceps japonica(AY245645) Alternaria alternata(KP684928) Chaetomium sp. (JF311919) Myrothecium verrucaria(KT803061) Clonostachys rosea(KJ619987) Ascomycota sp. (HQ607971)