E-钙粘蛋白在大肠良恶性肿瘤中的表达和其意义
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中国医科大学 硕士学位论文 E-钙粘蛋白在大肠良恶性肿瘤中的表达及其意义 姓名：顾金歌 申请学位级别：硕士 专业：内科学 指导教师：郑长青
20030401
中文摘要
衙飞．∥一
ｒ１、ｌ———————／
，∞决
／上皮型钙粘蛋白（Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｃａｄｈｅｒｉｎ，Ｅ—ｃａｄ）是维持上皮细 胞及上皮组织形态结构的完整性及极性的重要分子。实验证明， 肿瘤细胞间的粘附下降是导致肿瘤发生、发展的重要原因之一，而
膜组织中的表达及其对大肠癌分化，浸润转移等生物学行为的影 响。探讨Ｅ—ｃａｄ在大肠良恶性肿瘤中的表达特点及其与大肠癌 临床病理因素的关系。
Ｉ／
／材料和方法
ｆ
采用免疫组织化学的方法检测４０例大肠癌、３０例大肠腺瘤 及２０例正常大肠粘膜组织标本中Ｅ—ｃａｄ的表达情况，ＰＢＳ代替 一抗作阴性对照，用正常大肠粘膜组织作阳性对照。其中大肠癌 组按Ｄｕｃｋｓ分期分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ四期。按组织分化程度分为高、 中、低三组。按病理类型分为管状腺癌、乳头状腺癌、粘液腺癌及 印戒细胞癌四组。连续切片，厚度为Ｓｐｌｎ。Ｅ—ｃａｄ抗体及相关试 剂购自北京中山生物技术有限公司。具体方法：①脱腊、水化组织 切片。②Ｂ％过氧化氢孵育５ｍｉｎ，以阻断内源性过氧化氢酶。③ 微波热抗原修复。④滴加Ｅ—ｃａｄ抗体，对照组滴加ＰＢｓ，３７℃孵 育６０ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗，２ｍｉｎ×３。⑤滴加二抗，３７０Ｃ孵育１０ｒａｉｎ，ＰＢＳ 冲洗２ｍｉｎ×３。⑥应用ＤＡＢ溶液显色。⑦蒸馏水冲洗、复染、脱
Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ——ｃａｄ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｉｎ ４０ ｅｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｅａｒｃｉｎｏ．
ｍａｓ，３０ ｅｏｌｏｒｅｃｔａｌ ａｄｅｎｏｍａｓ ａｎｄ ２０ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｍｕ．
Ｅ—ｃａｄ主要存在于人和动物的上皮细胞，是维护上皮细胞形 态和结构的完整性和极性的重要分子，体外细胞培养实验已充分
．２．
证明Ｅ—ｃａｄ可抑制肿瘤细胞侵袭和转移的能力。大量临床研究 资料也证明多种肿瘤Ｅ—ｃａｄ表达减弱，且与肿瘤的转移性显著相 关。
本研究发现，Ｅ—ｃａｄ在大肠癌中表达降低率为４７．５％，其与 大肠癌临床Ｄｕｃｋｓ分期、肿瘤的分化程度及组织学类型等均有关， 即分期越晚、分化越低的患者其Ｅ—ｃａｄ表达降低率愈高。产生这 种差异的原因可能是由于随着细胞癌变程度的加剧，肿瘤部位的 蛋白酶活性升高，将肿瘤细胞表面的Ｅ—ｃａｄ降解而释放到外周血 中。已证实癌变病人血清中Ｅ—ｃａｄ含量升高，检测到的片段相当 于Ｅ—ｃａｄ蛋白的膜外肽段８０，０００部分。
／
结
论、
Ｅ—ｃａｄ在大肠良恶性肿瘤中的表达有显著性差异（Ｐ＜０． ０１），有助于良恶性肿瘤的鉴别。Ｅ—ｃａｄ的表达与大肠癌的临床 Ｄｕｃｋｓ分期、组织学分化程度及病理类型有显著相关性（Ｐ＜０． ０５），大肠癌组织Ｅ—ｃａｄ表达降低是其获得浸润转移能力的因素 之一。Ｅ—ｃａｄ可作为一种新的大肠癌标志物，其表达对判断预后 有一定价值。
Ｔｕｔｏｒ：
Ｚｈｅｎｇ Ｃｈａｎｇｑｉｎｇ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ａｉｍｓ
Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｒ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ａｄｅｎｏｍａ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ｅｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏ． ｍａ．
讨
论
大肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，肿瘤的浸润和转移严 重威胁着人类生命，它是肿瘤患者死亡的主要原因。恶性肿瘤侵 袭转移是一个十分复杂的生物学现象，它包括肿瘤细胞粘附于基
质——蛋白水解酶降解基质——肿瘤细胞移行等过程。细胞粘附
是其中一个重要环节。Ｅ—Βιβλιοθήκη Baiduａｄ在肿瘤侵袭转移中的作用令人瞩 目，是目前研究的一个热点。
水、封片。显微镜下观察Ｅ—ｃａｄ在组织切片中的表达。结果判定 标准：肿瘤细胞染色与正常粘膜细胞相同者为阳性（＋）；称之为 保留表达，全部肿瘤细胞染色普遍降低，灶性降低者为异质性 （±）；肿瘤细胞染色完全消失者为阴性（一）；异质性和阴性为表 达降低。统计学分析：数据处理采用Ｘ２检验，以Ｐ＜０．０５为有显 著差异。
结
果
Ｅ—ｃａｄ在正常大肠粘膜上皮组织均保留表达；在大肠腺瘤组 织中的保留表达率为９６．７％（２９／３０）；在大肠癌标本中的保留表 达率为５２．５％（２１／４０）。在大肠癌中，Ｄｕｃｋｓ分期为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ期 的Ｅ—ｃａｄ保留表达率分别为８０％（４／５）；７５％（１２／１６）；２５％（２／ ８）和２７．３％（３／１１）。在组织分化程度分组中，高、中、低分化组的 Ｅ—ｃａｄ保留表达率分别为８６．７％（１３／１５）；４５．５％（５／１１）和２１． ２％（３１１４）。在病理类型分组中，Ｅ—ｃａｄ保留表达率为：管状腺癌 ７０％（１４／２０）；乳头状腺癌６６．７％（４／６）；粘液腺癌２５％（２／８）；印 戒细胞癌１６．７％（１／６）。
Ｅ—ｃａｄ不仅是一种肿瘤细胞侵袭转移抑制剂，也是一种主要 的正常细胞生长接触抑制剂，Ｅ—ｃａｄ在多数恶性肿瘤组织表达降 低，甚至消失，但在正常组织及良性病变中表达很高。大肠癌与大 肠腺瘤Ｅ—ｃａｄ表达有显著性差异，这有助于良恶性肿瘤的鉴别。
有人用单克隆抗体离体阻断Ｅ—ｃａｄ受体，能增强瘤细胞的侵 袭和转移，另有人用表达Ｅ—ｃａｄ的ｅＤＮＡ转染瘤细胞能抑制瘤转 移，这表明Ｅ—ｃａｄ是浸润抑制因子，并有可能成为肿瘤治疗的新 靶点。Ｌ’’”
。
关键词：Ｅ一钙粘蛋白；结直肠肿瘤；免疫组织化筝
·３·
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｒ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ａｄｅｎｏｍａ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ：Ｇｕ．ｈｎｇｅ
20030401
中文摘要
衙飞．∥一
ｒ１、ｌ———————／
，∞决
／上皮型钙粘蛋白（Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｃａｄｈｅｒｉｎ，Ｅ—ｃａｄ）是维持上皮细 胞及上皮组织形态结构的完整性及极性的重要分子。实验证明， 肿瘤细胞间的粘附下降是导致肿瘤发生、发展的重要原因之一，而
膜组织中的表达及其对大肠癌分化，浸润转移等生物学行为的影 响。探讨Ｅ—ｃａｄ在大肠良恶性肿瘤中的表达特点及其与大肠癌 临床病理因素的关系。
Ｉ／
／材料和方法
ｆ
采用免疫组织化学的方法检测４０例大肠癌、３０例大肠腺瘤 及２０例正常大肠粘膜组织标本中Ｅ—ｃａｄ的表达情况，ＰＢＳ代替 一抗作阴性对照，用正常大肠粘膜组织作阳性对照。其中大肠癌 组按Ｄｕｃｋｓ分期分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ四期。按组织分化程度分为高、 中、低三组。按病理类型分为管状腺癌、乳头状腺癌、粘液腺癌及 印戒细胞癌四组。连续切片，厚度为Ｓｐｌｎ。Ｅ—ｃａｄ抗体及相关试 剂购自北京中山生物技术有限公司。具体方法：①脱腊、水化组织 切片。②Ｂ％过氧化氢孵育５ｍｉｎ，以阻断内源性过氧化氢酶。③ 微波热抗原修复。④滴加Ｅ—ｃａｄ抗体，对照组滴加ＰＢｓ，３７℃孵 育６０ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗，２ｍｉｎ×３。⑤滴加二抗，３７０Ｃ孵育１０ｒａｉｎ，ＰＢＳ 冲洗２ｍｉｎ×３。⑥应用ＤＡＢ溶液显色。⑦蒸馏水冲洗、复染、脱
Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ——ｃａｄ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｉｎ ４０ ｅｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｅａｒｃｉｎｏ．
ｍａｓ，３０ ｅｏｌｏｒｅｃｔａｌ ａｄｅｎｏｍａｓ ａｎｄ ２０ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｍｕ．
Ｅ—ｃａｄ主要存在于人和动物的上皮细胞，是维护上皮细胞形 态和结构的完整性和极性的重要分子，体外细胞培养实验已充分
．２．
证明Ｅ—ｃａｄ可抑制肿瘤细胞侵袭和转移的能力。大量临床研究 资料也证明多种肿瘤Ｅ—ｃａｄ表达减弱，且与肿瘤的转移性显著相 关。
本研究发现，Ｅ—ｃａｄ在大肠癌中表达降低率为４７．５％，其与 大肠癌临床Ｄｕｃｋｓ分期、肿瘤的分化程度及组织学类型等均有关， 即分期越晚、分化越低的患者其Ｅ—ｃａｄ表达降低率愈高。产生这 种差异的原因可能是由于随着细胞癌变程度的加剧，肿瘤部位的 蛋白酶活性升高，将肿瘤细胞表面的Ｅ—ｃａｄ降解而释放到外周血 中。已证实癌变病人血清中Ｅ—ｃａｄ含量升高，检测到的片段相当 于Ｅ—ｃａｄ蛋白的膜外肽段８０，０００部分。
／
结
论、
Ｅ—ｃａｄ在大肠良恶性肿瘤中的表达有显著性差异（Ｐ＜０． ０１），有助于良恶性肿瘤的鉴别。Ｅ—ｃａｄ的表达与大肠癌的临床 Ｄｕｃｋｓ分期、组织学分化程度及病理类型有显著相关性（Ｐ＜０． ０５），大肠癌组织Ｅ—ｃａｄ表达降低是其获得浸润转移能力的因素 之一。Ｅ—ｃａｄ可作为一种新的大肠癌标志物，其表达对判断预后 有一定价值。
Ｔｕｔｏｒ：
Ｚｈｅｎｇ Ｃｈａｎｇｑｉｎｇ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ａｉｍｓ
Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｒ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ａｄｅｎｏｍａ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ｅｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏ． ｍａ．
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大肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，肿瘤的浸润和转移严 重威胁着人类生命，它是肿瘤患者死亡的主要原因。恶性肿瘤侵 袭转移是一个十分复杂的生物学现象，它包括肿瘤细胞粘附于基
质——蛋白水解酶降解基质——肿瘤细胞移行等过程。细胞粘附
是其中一个重要环节。Ｅ—Βιβλιοθήκη Baiduａｄ在肿瘤侵袭转移中的作用令人瞩 目，是目前研究的一个热点。
水、封片。显微镜下观察Ｅ—ｃａｄ在组织切片中的表达。结果判定 标准：肿瘤细胞染色与正常粘膜细胞相同者为阳性（＋）；称之为 保留表达，全部肿瘤细胞染色普遍降低，灶性降低者为异质性 （±）；肿瘤细胞染色完全消失者为阴性（一）；异质性和阴性为表 达降低。统计学分析：数据处理采用Ｘ２检验，以Ｐ＜０．０５为有显 著差异。
结
果
Ｅ—ｃａｄ在正常大肠粘膜上皮组织均保留表达；在大肠腺瘤组 织中的保留表达率为９６．７％（２９／３０）；在大肠癌标本中的保留表 达率为５２．５％（２１／４０）。在大肠癌中，Ｄｕｃｋｓ分期为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ期 的Ｅ—ｃａｄ保留表达率分别为８０％（４／５）；７５％（１２／１６）；２５％（２／ ８）和２７．３％（３／１１）。在组织分化程度分组中，高、中、低分化组的 Ｅ—ｃａｄ保留表达率分别为８６．７％（１３／１５）；４５．５％（５／１１）和２１． ２％（３１１４）。在病理类型分组中，Ｅ—ｃａｄ保留表达率为：管状腺癌 ７０％（１４／２０）；乳头状腺癌６６．７％（４／６）；粘液腺癌２５％（２／８）；印 戒细胞癌１６．７％（１／６）。
Ｅ—ｃａｄ不仅是一种肿瘤细胞侵袭转移抑制剂，也是一种主要 的正常细胞生长接触抑制剂，Ｅ—ｃａｄ在多数恶性肿瘤组织表达降 低，甚至消失，但在正常组织及良性病变中表达很高。大肠癌与大 肠腺瘤Ｅ—ｃａｄ表达有显著性差异，这有助于良恶性肿瘤的鉴别。
有人用单克隆抗体离体阻断Ｅ—ｃａｄ受体，能增强瘤细胞的侵 袭和转移，另有人用表达Ｅ—ｃａｄ的ｅＤＮＡ转染瘤细胞能抑制瘤转 移，这表明Ｅ—ｃａｄ是浸润抑制因子，并有可能成为肿瘤治疗的新 靶点。Ｌ’’”
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关键词：Ｅ一钙粘蛋白；结直肠肿瘤；免疫组织化筝
·３·
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｒ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ａｄｅｎｏｍａ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ：Ｇｕ．ｈｎｇｅ