一株马铃薯干腐病病原菌的鉴定与药剂筛选

一株马铃薯干腐病病原菌的鉴定与药剂筛选

公司）、15%三唑酮可湿性粉剂（四川省川东农药化工有限公司）、3%多抗霉素可湿性粉剂（延边春雷生物药业有限公司）、40%多菌灵悬浮剂（江苏剑牌农化股份有限公司）、2%春雷霉素可湿性粉剂（延边春雷生物药业有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 病菌分离与培养取病薯洗净表面，晾干，去掉病部腐蚀变质的部分，取1 cm×1 cm×0.5 cm病块，在体积分数为75%乙醇中来回摆动3～4次消毒，洗净乙醇，放入铺有滤纸的培养皿中，28 ℃恒温保湿培养，待长出白色菌丝时挑取菌丝接种于燕麦片琼脂培养基中28 ℃暗光培养，待菌丝长满培养皿后进行转接备用。

1.2.2 病原菌ITS扩增及序列分析、鉴定采用CTAB法提取病原菌DNA，通用引物ITS4、ITS5扩增，凝胶成像系统拍照，扩增产物送到上海生工生物工程有限公司双向测序，测序后利用DNAstar lasergene7.1和BioEdit7.0软件进行拼接和人工校正，GenBank在线Blast。

1.2.3 药剂筛选①悬浮孢子液配制：用灭菌水配制悬浮孢子液后稀释至一定的浓度（100倍的显微镜观察每个视野30～40个孢子）。②接种：用250 mL容量手压喷雾器将准备好的孢子悬浮液喷至薯块表面，边喷边翻动使得整个薯块表面全部湿润。③药剂筛选：接种后3 d喷施药剂。药剂有70%甲基硫菌灵可湿性粉剂、15%三唑酮可湿性粉剂、3%多抗霉素可湿性粉剂、40%多菌灵悬浮剂、2%春雷霉素可湿性粉剂分别稀释1 600、500、150、500、500倍，以喷清水为CK，每个处理薯块30块，各重复间用小木箱相隔，小木箱内用报纸隔开，3次重复，室温下置于钢架上进行观察统计。

1.2.4 调查方法薯块表面按有无病斑及病班大小和损失程度进行分级。分级标准：0级，无病；1级，个别病斑，损失1%左右；2级，少数病斑，损失5%左右；3级，薯块坏死腐烂占10%～30%，损失20%左右；4级，薯块坏死腐烂占30%～70%，损失50%左右；5级，薯块坏死腐烂占70%～100%，损失100%。

2 结果与分析

2.1 马铃薯干腐病病原菌鉴定

经燕麦片培养基培养3 d后，置于100倍的显微镜下观察，发现有幼龄孢子和成熟孢子出现，比例为10∶2，孢子镰刀状，12 d后菌落呈黄色，幼龄孢子和成熟孢子的比例为10∶1，初步判断为镰刀菌。通过ITS序列测序，扩增序列长568 bp，Blast比对分析结果如图1所示，发现其与尖刀镰孢菌（Fusarium oxysporum）相似度高达99%，仅在第381位和第393位有2个碱基不同，因此断定其为尖刀镰孢菌。

2.2 防治马铃薯干腐病药剂筛选

对接种干腐病菌的薯块喷施5种药剂进行防治，薯块损失率及药剂防效见表1。由表1可知，70%多菌灵悬浮剂500倍液的防效最好，防效达72.49%，其损失率仅为8.93%；3%多抗霉素可湿性粉剂150倍液和70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1 600倍液相当，防效分别为51.43%、51.40%，损失率分别为16.47%、16.49%；2%春雷霉素可湿性粉剂500倍液防效为44.77%，损失率为18.73%；15%三唑酮可湿性粉剂500倍液效果最差，防效为41.08%，损失率为19.98%。经方差分析，各处理的损失率及防效差异均不显著。

3 小结与讨论

通过对菌株分离和ITS序列鉴定，证实该菌株为尖刀镰孢菌。通过药剂筛选，发现5种药剂对储藏期间干腐病均有一定的防治效果，但差异不显著，本试验以40%多菌灵悬浮液稀释

500倍液的防效最好。为有效防治干腐病的危害，有必要进一步进行药剂筛选试验，以期筛选出防效更好的药剂。

引起马铃薯干腐病病原菌的种类较多，本研究获得的菌株尖刀镰孢菌同时可引起马铃薯枯萎病的发生，而马铃薯枯萎病属土传和种传病害，全生育期均可发生，因此加大了防治难度[10]。尖刀镰孢菌是否为恩施地区马铃薯干腐病优势菌种，还有待于进一步研究。

在生产中，马铃薯干腐病很可能是由多个镰孢菌复合感染引起，任何一种单一的防治方法都很难奏效。因此，应采用以抗性品种为主的综合防治策略，收获运输时要尽量避免块茎受伤，减少伤口，降低病害的侵染几率；入窖前对仓贮设施进行通风和消毒，剔除病、伤和虫咬的薯块，在通风阴凉处晾晒3 d左右，并用40%多菌灵悬浮液500倍液进行处理；贮藏期间应勤检查，发现有异味或烂薯时及时剔除，深埋处理，切不可随意乱丢，避免形成新的传染源。

参考文献：

[1] 刘在东，徐凤花，于德才，等.黑龙江省马铃薯产业发展现状及对策[J].黑龙江农业科学，2008（4）：124-126.

[2] 魏周全，张廷义，杜玺.马铃薯块茎干腐病发生危害及防治[J].植物保护，2006，32（2）：103-105.

[3] 张廷义，魏周全.马铃薯贮藏期块茎干腐病药剂防治试验[J].中国马铃薯，2006，20（6）：348-349.

[4] 张杰，张廷义.定西市马铃薯贮藏期主要病害及成因分析[J].中国马铃薯，2008，22（1）：55-56.

[5] 彭学文，朱杰华.河北省马铃薯真菌病害种类及分布[J].中国马铃薯，2008，22（1）：31-33.

[6] 叶琪明，王拱辰.浙江马铃薯干腐病病原研究初报[J].植物病理学报，1994，25（2）：148.

[7] 何苏琴，金秀琳，魏周全，等.甘肃省定西地区马铃薯块茎干腐病病原真菌的分离鉴定[J].云南农业大学学报，2004，19（5）：550-552.

[8] 魏巍.河北和内蒙古马铃薯干腐病菌种类鉴定及优势病原菌的分子检测[D].河北保定：河北农业大学，2013.

[9] 闵凡祥，王晓丹，胡林双，等.黑龙江省马铃薯干腐病菌种类鉴定及致病性[J].植物保护，2010，36（4）：112-115.

[10] 薛玉凤.马铃薯枯萎病病原菌学初步研究[D].呼和浩特：内蒙古农业大学，2012.

（责任编辑丁艳红）

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