蛋白质连接技术

叠氮化法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 甲酯衍生物
羧酸
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氯乙酸钠法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 羟基
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亚胺酸酯法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 氨基
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卤代硝基苯法：
蛋白质 连接分子
氨基、羟基、巯基
氨基、羟基、巯基
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Mannich反应法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 酮、酚类
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苯醌法：
重氮化法：
蛋白质
酚羟基的邻位、咪唑环、吲哚环
含芳香胺的化合物
副反应多，故一般限实于用文人档 工抗原的制备
戊二醛法：连接两个伯胺
最温和的交联反应之一，可在4~40℃温度范围，pH6.0~8.0 的缓冲水溶液中进行，但是缓冲组份中不得含有氨基化合 物，本交联方法易形成相同蛋白间的连接；产物的均二性 较差。因此，多用于酶标抗体的制备。
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过碘酸盐氧化法：
蛋白质 连接分子
氨基 邻二醇
比较温和，可在常温和中性pH的条件下进行
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混合酸酐法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 羧基
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碳二亚胺法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 羧基
由于碳二亚胺的缩合反应没有选择性；易形成蛋白分子间的自身 聚合，产生非均一性产物；先将含羧基的药物或半抗原分子与 EDC反应，活化羧基后，再加入蛋白反应物，可以减少蛋白分子 交联
蛋白质 连接分子
氨基、羟基、巯基
氨基、羟基、巯基
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E11man试剂法：
E11man试剂即5．5’—二硫—2，2’—双硝基苯甲酸(DTNB)，该试剂可以与巯基作用
两分子蛋白的连接
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马来酰亚胺基类活泼酯法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 巯基
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SPDP试剂法： 异型双功能交联剂N-羟基琥珀亚胺基-3— (2-吡啶基二硫)—丙酸酯(SPDP) 蛋白质 连接分子 伯氨基 巯基、氨基
蛋白质连接技术
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蛋白质交联系指将小分子物质（如 药物、半抗原等）或大分子物质 (如酶、蛋白毒素等)以共价键的方 式连接于蛋白质分子，以制备人工 抗原、酶标抗体、载体释放药物、 抗体导向药物和免疫毒素等。
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交联方法
游离氨基 游离羧基 苯基 酚基 巯基 羟基 咪唑基 吲哚基 胍基
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活泼酯法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 羧基
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多元酸酐法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 氨基、羟基
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二异氰酸酯法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 氨基
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偶氮苯甲酸法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 苯基
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O—羧甲基羟胺法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 酮基
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对-肼基苯甲酸法：
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苯丁酸氮芥衍生物法：
蛋白质 连பைடு நூலகம்分子
伯氨基 氨基
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卤代乙酰衍生物法：
连接基团：氨基、巯基
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双马来酰亚胺试剂法：
连接两个巯基
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三氯三嗪试剂法：
蛋白质 连接分子
伯氨基 羟基
必须注意，第一个分子中不能含有氨基及巯基等亲核性较 强的基团，否则，易形成自身聚合
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