小鼠胚胎的收集教学教材
小鼠胚胎操作实验手册
小鼠胚胎操作实验手册小鼠胚胎操作实验手册目录1. 引言1.1 胚胎操作实验的意义1.2 实验前的准备工作2. 实验器材和试剂准备2.1 实验器材清单2.2 试剂准备和储存要点3. 小鼠胚胎操作步骤3.1 小鼠交配和胚胎收集3.2 胚胎培养和处理3.3 胚胎移植和植入3.4 胚胎标记和观察4. 数据记录和结果分析4.1 数据记录要点和格式4.2 结果分析和统计方法5. 安全注意事项和实验规范5.1 生物安全操作要求5.2 实验规范和伦理要求6. 实验故障排除和常见问题解决6.1 常见操作问题和解决方案6.2 实验故障排除建议7. 参考文献和扩展阅读7.1 相关研究文献推荐7.2 扩展阅读和资源推荐引言1.1 胚胎操作实验的意义胚胎操作实验是研究胚胎发育和基因功能的重要手段，通过对小鼠胚胎的操作和处理，可以揭示胚胎发育的机制和影响因素。
1.2 实验前的准备工作在进行胚胎操作实验之前，需要进行充分的准备工作，包括实验器材和试剂的准备、实验操作流程的熟悉、实验动物的选取和饲养等。
实验器材和试剂准备2.1 实验器材清单列举常用的器材和仪器，并说明其用途、规格和供应商信息，包括显微镜、离心机、培养皿、吸管、移液器等。
2.2 试剂准备和储存要点介绍常用的试剂，包括培养基、胚胎染色剂、抗体等，说明其配制方法、储存条件和稳定性要求。
小鼠胚胎操作步骤3.1 小鼠交配和胚胎收集阐述小鼠交配的方法和时间安排，以及胚胎的收集和处理步骤，包括解剖、体外培养和胚胎筛选等。
3.2 胚胎培养和处理详细描述胚胎的培养方法和处理步骤，如细胞培养、转染、基因敲除、基因表达等实验操作。
3.3 胚胎移植和植入介绍胚胎移植和植入的方法和注意事项，包括手术操作、不同器官的移植方式和移植成功率的评估等。
3.4 胚胎标记和观察说明如何对胚胎进行标记和观察，包括荧光染料标记、显微镜观察和胚胎发育阶段的划分等。
数据记录和结果分析4.1 数据记录要点和格式指导实验者如何记录实验过程中的数据和结果，包括实验条件、样本信息、实验数据和观察结果等，并规范化数据记录格式。
发育生物学试验
发育生物学实验Experiments of Development Biology【课程编号】 【课程类别】限选课程【学分数】 3 学分 【适用专业】 生物科学【学时数】 96 学时 【编写日期】2009年9月15日一、教学目标通过本实验教学，使学生能掌握基本的发育生物学实验操作方法、正确使用仪器、准确取得实验数据，学会实验数据处理和科学表达实验结果的方法。
在确保基础实验训练的基础上，强化综合性实验技能训练，注重学生创新思维的培养和综合技能训练。
使学生对自己所学的解剖学, 生物化学，分子生物学等实验技术充分的实践, 学会用传统生物学方法和现代生物学方法验证动植物发育过程中的生物学现象，学会在科学实验中进行协作和配合；提高学生的科研能力，培养良好的科研素质。
二、教学内容和学时分配实验一、鸡胚培养和发育过程观察层次基础性主要内容：学习和掌握鸡胚胎发育所需要的条件，观察鸡胚胎发育的外部形态变化，掌握器官形成的基本规律。
明确环境因素对胚胎发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚发育的大体阶段以及各阶段的形态特征；了解实验室鸡胚胎孵化的基本条件，明确环境对胚胎发育和健康胚胎的重要性。
实验二、鸡胚血管发生的阻断实验层次综合性主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，利用血管阻断剂，通过鸡胚操作，观察药物对血管发育的影响。
明确环境因素对胚胎血管发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚血管发育的基本规律和形态特征；掌握实验室鸡胚血管阻断实验的基本方法，明确药物对胚胎血管发育和健康胚胎的重要性。
实验三、小鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养与发育观察层次综合性主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，在小鸡出壳后24小时， 分离培养肌肉组织的卫星细胞，观察骨骼肌卫星细胞的增殖分化能力。
并对分离得到的鸡骨骼肌卫星细胞表达卫星细胞特异的标志基因Desmin 和 Pax7 进行表达分析。
教学要求：了解鸡胚骨骼肌卫星细胞在发育中的作用，掌握鸡胚骨骼肌卫星细胞分离培养的基本方法。
高中生物(选择性必修第三册 人教版)教案讲义：胚胎工程的理论基础含答案
胚胎工程（含答案）第1课时胚胎工程的理论基础[学习目标] 1.简述受精前精子和卵子的准备以及受精的过程。
2.简述胚胎早期发育的过程及其主要特点。
一、受精1．胚胎工程的概念(1)操作对象：动物生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞。
(2)技术基础：如体外受精、胚胎移植、胚胎分割等。
(3)特点：经过多种显微操作和处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。
(4)理论基础：哺乳动物受精和早期胚胎发育的规律。
(5)实质：在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。
2．受精(1)概念：精子与卵子结合形成合子(即受精卵)的过程。
(2)场所：哺乳动物的输卵管内。
(3)过程精子获能：在雌性动物的生殖道内完成准备阶段MⅡ期才具备受精能力|↓受精阶段获能后的精子与卵子相遇(精子释放多种酶，以溶解卵细胞膜外的一些结构)精子触及卵细胞膜(透明带发生生理反应，阻止后来的精子进入透明带)(卵细胞膜发生生理反应，拒绝其他精子再进入卵内)的核膜破裂并形成一个新的核膜，最后形成雄原核成减数分裂Ⅱ，排出第二极体后，形成雌原核|↓雌、雄原核结合(受精完成的标志)受精卵判断正误(1)精子和卵子相遇结合形成受精卵的部位是输卵管()(2)精子和卵子都需要经过获能才能进行受精作用()(3)受精的标志是观察到两个极体；受精完成的标志是雌、雄原核融合形成合子()(4)动物排出的卵子成熟程度不同，都要在卵巢中进一步发育到M Ⅱ期才具备受精能力()答案(1)√(2)×(3)√(4)×解析(2)精子需要经过获能处理才能完成受精过程，而卵子需要在输卵管中经过进一步发育才能与获能的精子完成受精作用。
(4)动物排出的卵子成熟程度不同，都要在输卵管中进一步发育到M Ⅱ期才具备受精能力。
任务一：受精过程1．受精过程中卵子的哪些结构发生生理反应可以防止多精入卵？这有什么意义？提示阻止多精入卵有两道屏障：第一道屏障是透明带发生生理反应，第二道屏障是卵细胞膜发生生理反应。
小鼠胚胎获得实验报告
一、实验目的1. 掌握小鼠胚胎的采集方法。
2. 了解小鼠胚胎的发育过程。
3. 培养实验操作技能。
二、实验原理小鼠胚胎的获得是通过人工操作，将雌鼠的受精卵取出，进行体外培养，直至发育成胚胎。
该实验旨在研究小鼠胚胎的发育过程，为后续的胚胎移植、基因编辑等研究提供基础。
三、实验材料1. 实验动物：雌性小鼠、雄性小鼠2. 实验仪器：显微镜、解剖显微镜、培养箱、离心机、培养皿、手术器械等3. 实验试剂：生理盐水、DEPC水、培养液、抗凝剂、消毒剂等四、实验步骤1. 实验动物处理（1）将雌性小鼠和雄性小鼠分别饲养于清洁、通风的动物房中，保持适宜的饲养条件。
（2）雌性小鼠和雄性小鼠分别进行交配，交配后观察雌性小鼠的阴道涂片，确认受精情况。
2. 胚胎采集（1）雌性小鼠交配后第2天，用解剖显微镜观察雌性小鼠的阴道涂片，确认受精情况。
（2）雌性小鼠交配后第3天，将雌性小鼠麻醉，固定于解剖显微镜下。
（3）用手术器械取出雌性小鼠的子宫，置于培养皿中。
（4）在解剖显微镜下，用镊子取出受精卵，置于培养皿中。
3. 胚胎培养（1）将受精卵放入培养箱中，在37℃、5%CO2、95%空气的条件下培养。
（2）观察受精卵的发育过程，记录胚胎的形态变化。
4. 实验结果分析（1）观察胚胎的发育过程，记录胚胎的形态变化。
（2）分析胚胎发育过程中各阶段的形态特征。
五、实验结果1. 胚胎发育过程（1）受精卵在培养箱中培养24小时后，可见胚胎开始分裂。
（2）培养24小时后，胚胎发育至桑椹胚阶段。
（3）培养48小时后，胚胎发育至囊胚阶段。
（4）培养72小时后，胚胎发育至原肠胚阶段。
2. 胚胎形态特征（1）受精卵：透明、圆形，直径约100μm。
（2）桑椹胚：细胞数目增多，排列紧密，形成桑椹状。
（3）囊胚：细胞分化明显，形成囊胚腔。
（4）原肠胚：细胞分化更加明显，形成原肠。
六、实验结论1. 通过人工操作，成功获得小鼠胚胎。
2. 小鼠胚胎在体外培养过程中，经历了受精卵、桑椹胚、囊胚、原肠胚等阶段。
小鼠胚胎发育实验设计 ppt课件
记（合笼时间 年/月/日/时 合笼地点）。 2. 每隔三到四天，以组为单位到实验室来观察公鼠和母鼠，内容包
括：保证小鼠有水有食；称重母鼠重量并记录。 3. 每次上课选取孕鼠解剖并确定鼠胚龄。 注意事项：解剖后的胚胎如前图那样放在培养皿中，并通过标尺来确
离乳仔鼠性别鉴定主要以生殖器与肛门之间的距离长短及肛门与生殖器有无被毛为标志。
成熟后，雄性可见阴囊,雌性乳头明显而p易pt于课件区分。
5
小鼠解剖图
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小鼠胚胎发育过程——从成熟卵子(E0)到植入期(E4.5)
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受精卵
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卵裂(2细胞期）
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4细胞期
8细胞期
定大小、时期以及胚胎个数。 四．实验结果与讨论
结果：对鼠胚形态进行详细描述。 讨论：通过不同时期鼠胚的形态观察，讨论鼠胚正处于什么发育
时期。
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小鼠的性别鉴定
识别要点是：
①雄性的生殖器与肛门之 间的距离较远，雌鼠较近；
②雄性的生殖器与肛门之间有毛；
③雄性的生殖器突起较雌鼠大；
④雌鼠乳头较雄鼠明显。
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小鼠的致密桑椹胚
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小鼠各阶段囊胚
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小鼠原肠胚的 发育过程
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小鼠各胚胎发育时期的形态变化
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新生鼠
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E11.5
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E12.5
高中生物选择性必修三 2 3 2 胚胎工程技术及其应用(导学案)
第3节胚胎工程第2课时胚胎工程技术及其应用学习目标1.概述胚胎工程技术的主要内容及原理2.简述胚胎工程在生产实践中的应用课前自主探究一、体外受精1．试管动物：通过人工操作使卵子在受精，经培养发育为后，再进行移植产生的个体。
2．体外受精技术的主要步骤：、和。
3.过程卵母细胞的采集(培养至期)↓精子的获取(要在体外进行处理)↓受精4.体外受精的意义（1）提高动物的有效措施。
（2）为胚胎移植提供可用的提醒试管动物和克隆动物的不同(1)生殖方式不同：试管动物属于有性生殖；克隆动物属于无性生殖。
(2)培育的技术手段不同：试管动物需采用体外受精、胚胎移植等技术；克隆动物需采用核移植、胚胎移植技术。
体外受精技术并非胚胎自始至终都在体外发育，而是胚胎发育的初期在培养皿或试管中，培养一段时间后需移植到母体内继续发育。
(3)是否遵循遗传定律：试管动物遵循遗传定律；克隆动物不遵循遗传定律。
二、胚胎移植1．概念：是指将通过及其他方式得到的胚胎，移植到、的雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。
2．步骤：胚胎移植主要包括供体、受体的，配种或人工授精，胚胎的收集、培养或保存，胚胎的，以及移植后的检查等步骤。
3.过程(以牛的胚胎移植为例)4．意义(1)充分发挥雌性优良个体的。
(2) 了供体本身的繁殖周期。
(3)对供体施行处理后，增加后代数量。
教材中的隐性知识(1)源于选择性必修3 P62“相关信息”：超数排卵是指应用外源促性腺激素，诱发卵巢排出比自然情况下更多的成熟卵子。
(2)源于选择性必修3 P62“思考·讨论”：胚胎移植的生理学基础三、胚胎分割1．概念：采用将早期胚胎切割成等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。
2．所需主要仪器设备：和。
3．操作对象及要求：选择发育良好、形态正常的，将它移入盛有操作液的培养皿中，在显微镜下用或分割。
在分割囊胚阶段的胚胎时，要注意。
4．胚胎分割的意义(1)促进优良动物品种的繁殖，产生相同的后代用于遗传学研究。
教学设计4：3.2体外受精和早期胚胎培养
专题3 胚胎工程3.2 体外受精和早期胚胎培养『课标解读』1、知识方面简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。
简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。
2、情感态度与价值观方面认同体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。
3、能力方面能够使用通俗语言介绍体外受精何早期胚胎培养技术。
『网络构建』答案：体外受精采集促性腺激素输卵管超声波探测仪腹腔镜活体卵巢假阴道法获能化学诱导血清『重难点归纳』一、卵母细胞采集的方法和操作的要领是什么？方法一：对实验动物小鼠、兔和小家畜猪、羊等卵母细胞采集时，可先用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后在适当的时间从输卵管冲取卵子，并使其直接与获能的精子在体外受精。
方法二：从刚屠宰的雌性动物体内摘取卵巢，再从卵巢中采集卵母细胞。
方法三：直接从活体动物的卵巢中采集卵母细胞，叫活体采卵。
需借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜，直接从活的动物卵巢中吸取卵母细胞。
后两种方法适用于大家畜和大动物。
注意：采集的卵母细胞需在体外培养成熟后才能与获能的精子受精。
二、如何选择用于体外培养的卵母细胞？在选择卵母细胞时，无论用哪种方法采集到的卵母细胞，外围一般都应该有数层卵丘细胞所包围，形成一个叫卵丘复合体的结构（COC）。
这种结构对于卵母细胞在体外条件下的成熟是十分重要的。
在对家畜体外受精的操作中，一般把未成熟的卵母细胞分成A、B、C、D四级。
对A级卵母细胞要求是有3层以上的卵丘细胞包围，卵母细胞的细胞质均匀；B级是少于3层卵丘细胞，但卵母细胞质要均匀；C级为没有卵丘细胞包围的卵母细胞，又称裸卵，培养效果很差；D级是退化或死亡的卵母细胞，应淘汰。
A、B两类卵母细胞培养效果较好。
三、采集精子的方法有几种？各有什么具体要求？主要分为假阴道法、手握法和电刺激法。
假阴道法是用特制的假阴道，满足雄性动物交配时对压力、温度和润滑度的要求。
同时要配备有与供精动物相适应的台畜，训练动物爬跨台畜，借假阴道收集精液。
手握法是通过徒手或戴乳胶手套的手，直接把握雄性动物阴茎，施以适当压力和刺激即可引起射精，并可收集富含精子部分的精液。
新教材高中生物第2章第3节胚胎工程二胚胎工程技术及其应用pptx课件新人教版选择性必修3
胚胎分割技术的生殖方式是什么？ _____________________________________。 【答案】无性生殖
用机械方法对早期胚胎进行分割，其主要目的是
()
A．切掉不符合要求的胚胎 B．对胚胎进行定向改造
C．提高胚胎的利用率
D．改变早期胚胎的遗传特性
【答案】C
【解析】胚胎分割是指用机械方法将早期胚胎切割成多份，以获得
可以与获能精子进行体外受精的卵母细胞需要培养到什
么时期？
()
A．MⅠ期
B．MⅡ期
C．桑葚胚期
D．囊胚期
【答案】B
【解析】 卵母细胞培养到MⅡ期时就可以受精了，因为MⅡ期卵母
细胞细胞核、细胞质已成熟，而MⅠ期卵母细胞细胞核、细胞质尚未成
熟，其细胞质不能支持胚胎的全程发育。
胚胎移植
1．胚胎移植的概念 将通过__体__外__受__精___及_其__他__方__式____得到的胚胎，移植到__同__种__的__、 _生__理__状__态___相同的雌性动物体内，使之继续发育为_新__个__体___的技术。其 中提供胚胎的个体称为“__供__体__”，接受胚胎的个体称为“__受__体__”。
多个胚胎，其目的是提高胚胎的利用率，A、B错误，C正确；经胚胎分 割技术获得的多个胚胎的遗传物质相同，D错误。
课堂·重难探究
试管动物技术与体外受精
[知识归纳] 1．试管动物技术分析 (1)操作对象：配子和动物早期胚胎。 (2)应用技术：体外受精、早期胚胎发育、胚胎移植。 (3)生殖方式：有性生殖。 (4)意义：加快良种动物的繁殖速度。 (5)注意：试管动物技术并非指胚胎始终在试管中发育，而是胚胎发 育的早期在培养皿和试管中，胚胎发育的绝大多数时间在母体中。
高二生物人教版选择性必修3 第2章 第3节 胚胎工程 教材分析和单元教学设计
精子必须在雌性动物的生殖道中发生相应的生理变化后，才能获得受精能力。
精子顶体表面的糖蛋白被生殖道分泌物中的酶降解，同时顶体膜结 构中胆固醇与卵磷脂比率和膜电位发生变化，降低顶体膜稳定性的 过程。使精子具有真正的受精能力，这就是精子获能的过程。
第1小节教学设计
20
1 第1课时教学重难点
精子头
随着精子的获能，氧耗量增加，精子 运动加速，并且线粒体松散化，为抛 弃尾部和线粒体做好准备，并迅速游 向卵子，最终使精卵结合。
单元课时安排
12
第1小节 “胚胎工程理论基础”中，教材先用几句简短的引言点明 了胚胎工程与本节内容的关系，即阐明了为什么要先学习哺乳动物受 精和胚胎早期发育的规律；然后简要介绍了受精前的准备阶段——精 子的获能准备和卵子的成熟准备；在此基础上再介绍受精阶段。但是 本节内容中精子的产生和卵细胞的成熟涉及到必修二的减数分裂内容， 而且必修二学习期间是网课学习，学生的学习效果不是太好，所以在 学习这一小节之前，我们安排了1课时复习减数分裂，这一小节内容 设计为2课时。
4细胞 8细胞
囊胚腔 内细胞 滋养层
透明带
桑葚胚
哺乳动物胚胎的早期发育示意图
第1小节教学设计
1 第1课时教学重难点不同动物受精卵发育的比较
动物 种类
2细胞
受精卵发育的时间 / h
4细胞 8细胞 16细胞
桑葚期
进入子宫时受精卵 的发育天数和发育
阶段
天 发育阶段
小鼠 绵羊 猪 马 牛
24~38 36~38 21~51
第1小节教学设计
13
2018年3月，世界上最后一头北方雄性白犀牛苏丹死亡！北方 白犀牛仅剩两头雌性，已无法通过自然孕育产生后代。
小鼠胚胎操作手册第三章
小鼠胚胎操作手册第三章第三章小鼠胚胎操作手册第一节注射操作在小鼠胚胎培养和研究中，注射是一项关键操作。
正确的注射技术可以确保研究的准确性和成功率。
本节将介绍小鼠胚胎注射的步骤和技巧。
1. 准备工作在进行注射前，确保实验室环境整洁，并准备好所需的实验材料。
这些材料包括显微镜、注射器、胚胎培养培养皿、胚胎移植工具等。
2. 胚胎准备将小鼠产下的胚胎收集到含有去离子水的培养皿中。
使用显微镜观察胚胎的形态和发育情况，并选择符合实验需求的胚胎进行注射。
3. 注射剂准备根据实验需求制备相应的注射剂。
注射剂可以是基因编辑工具，如CRISPR/Cas9系统，也可以是药物或其他化合物。
确保注射剂的浓度和质量符合实验要求。
4. 注射操作将胚胎取出，并放置在培养盐水中以保持湿润。
使用显微镜和细注射器将注射剂缓慢注入胚胎内。
注射时要注意避免损伤胚胎，注入的剂量要准确控制。
5. 胚胎移植完成注射后，将胚胎移植回培养皿中，并放入孵化箱或恒温箱中进行进一步的培养。
确保温度、湿度和氧气供应的稳定。
第二节胚胎培养和观察胚胎培养和观察是小鼠胚胎实验研究中的核心步骤。
本节将介绍胚胎的培养条件和观察方法。
1. 培养条件将注射后的胚胎放置在含有培养基的培养皿中。
培养基应包含足够的养分和生长因子，以满足胚胎的发育需求。
培养皿要保持无菌，并放置在恒温箱中维持稳定的温度。
2. 观察方法使用显微镜观察胚胎的发育情况，并记录下重要的观察结果。
观察胚胎的细胞分裂情况、胚胎囊胚的形成和融合等发育进程。
记录这些数据对于后续的实验分析非常重要。
3. 胚胎存储如果需要长期保存胚胎，可以使用液氮冷冻保存的方法。
在胚胎培养过程中，将胚胎收集到冷冻培养基中，然后放入液氮中冷冻保存。
这样可以保持胚胎的完整性和生理活性。
第三节数据分析和结果解读在小鼠胚胎操作过程中，数据分析和结果解读是至关重要的。
本节将介绍常用的数据分析方法和结果解读的注意事项。
1. 数据分析方法对于进行注射和观察的胚胎数据，可以使用统计学方法进行分析。
《动物细胞工程学》实验课教学大纲
《动物细胞工程学》实验课程教学大纲实验名称：动物细胞工程学实验课程编码：0141014学时：32学分：2适用专业：生物工程执笔人：唐业刚审订人：郭云贵一、课程的性质与任务动物细胞培养技术是动物胚胎工程技术的基础和核心技术，开设该门实验课的最大任务和任务就是让学生掌握动物细胞培养技术的原理和基本方法，锻炼学生的专业素养。
应此，在教学过程中应着重培养和锻炼学生自己寻找感兴趣的小课题并能运用理论和实验操作知识独立进行实验设计、实验可行性等这种提出问题、分析问题和解决问题的能力。
二、教学目标与基本要求：了解动物细胞培养实验室的设计和基本设备。
理解动物细胞培养的实验原理和常用基本仪器设备的作用。
掌握常见大型仪器的使用方法和原代细胞培养、传代培养的流程和方法。
三、实验项目与类型：四、实验教学内容及学时分配：实验一、动物细胞一般培养过程教学录像观摩………………………………………（4学时）1.目的要求：了解动物细胞培养实验室组成、仪器及细胞培养的一般过程。
2.方法原理：通过观看教学录像，以及参观实验室，加深对动物细胞培养条件的理解；通过学习教学录像内容，认识到无菌操作技术在整个细胞培养实验中的重要作用。
3.掌握要点：熟悉动物细胞培养的总体流程；掌握实验所需的关键仪器设备的使用方法；认识到动物细胞培养比其他实验要求更高、更严。
4.实验内容：讲述动物细胞培养的发展历史。
观看录像，利用PPT多媒体教学手段观看细胞培养教学录像。
参观实验室的仪器设备及实验室设计，讲解仪器使用方法及实验室设计思路。
简要介绍该课程整体实验项目，课程考核方式及成绩评定办法等事宜说明。
实验二、实验室组成设计及实验容器具的洗涤、包扎和灭菌………………………（4学时）1.目的要求：掌握清洁液的配置方法；掌握动物细胞培养所用器皿的种类、作用及清洗灭菌方法；掌握滤器的使用方法2.方法原理：体外培养的动物细胞对微量有害物质十分敏感，了获得较好培养效果，对培养容器具的无害化处理是十分重要的。
2024届高考一轮复习生物教案(新教材人教版鲁湘辽)：胚胎工程
第5课时胚胎工程课标要求 1.简述胚胎形成经过了受精及早期胚胎发育等过程。
2.简述胚胎工程包括体外受精、胚胎移植和胚胎分割等技术。
考点一胚胎工程的理论基础1．胚胎工程的概念2．受精(1)概念：精子与卵子结合形成合子(即受精卵)的过程。
(2)场所：哺乳动物的受精在输卵管内完成。
(3)过程(1)源于选择性必修3 P56“相关信息”：使精子获能的方法有直接利用雌性动物的生殖道使精子获能；将精子培养在人工配制的获能液中使其获能等。
获能液的成分因动物种类不同而有所差异，常见的有效成分有肝素、Ca2＋载体等。
(2)源于选择性必修3 P58“相关信息”：多数哺乳动物的第一极体不进行减数分裂Ⅱ，因而不会形成两个第二极体。
在实际胚胎工程操作中，常以观察到两个极体或者雌、雄原核作为受精的标志。
3．胚胎早期发育4．孵化(1)概念：囊胚进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来的过程。
(2)意义：如果不能正常孵化，胚胎就无法继续发育。
源于选择性必修3 P59“思考·讨论”：将体外培养的胚胎移植到子宫时，应选择至少发育到什么阶段的胚胎：小鼠：桑葚胚；绵羊：16细胞；猪：4～6细胞；马：囊胚；牛：8～16细胞。
1．受精是精子和卵子结合形成受精卵的过程，包括受精前的准备阶段和受精阶段；受精卵形成后进行有丝分裂，通过细胞分裂和分化，形成新个体。
(1)刚采集到的精子是否能与卵子立即结合完成受精作用？为什么？提示不能。
刚采集到的精子还没有受精能力，必须先对精子进行获能处理，才能进一步受精。
(2)刚排出的卵子具有受精能力吗？为什么？提示不具有。
卵子在受精前也要经历类似精子获能的过程，要在输卵管内进一步成熟，到MⅡ期时，才具备与精子受精的能力。
(3)防止多精入卵受精的生理反应有哪些？有什么意义？提示两道屏障，一是透明带发生生理反应，二是卵细胞膜发生生理反应。
防止多精入卵，保证受精卵中遗传物质与亲代体细胞一致，从而保证遗传的稳定性。
1动物胚胎工程实验教程小鼠卵的体外成熟与体外受精材料与方法
《动物胚胎工程实验教程》王子玉自编南京农业大学动科院2005年8月实验一小鼠卵母细胞的体外成熟实验一、实验目的 熟悉雌鼠的生殖器官的结构特点；掌握小鼠的超数排卵方案；掌握从卵巢上扎取未成熟卵母细胞的方法、卵母细胞的分类方法、体外成熟培养方法及核成熟情况和卵丘扩展程度的观察。
二、实验器材和材料1. 器材及药品体视显微镜，手术器械（眼科剪，眼科镊），1mL注射器，胶头滴管，口吸管，CO2培养箱，水浴锅，移液器，枪头，塑料培养皿，记号笔。
操作液（M2），成熟培养液（M－199），激素（PMSG和HCG），石蜡油。
2．实验动物：3-4周龄昆明系雌性小白鼠，自由采食饮水。
三、实验内容1.小鼠的超数排卵注射剂量皮下或腹腔注射PMSG 10 IU/只小鼠。
注射方法皮下注射：用手指捏住小鼠的头及尾部固定（图1-1），以酒精棉球消毒其背部，提起皮肤，将注射针头平插刺入皮下，将针头微向上挑起不露出针尖时，再注入药物。
随着药物的推入，在皮下可看到鼓起一个小泡，即证实药物确已注入皮下部位。
皮下注射时防止药液从针孔处逸出。
腹腔注射：针头刚进入腹腔后向上挑，防止损伤小鼠腹腔内器官。
注射针头宜选用小号细针头。
注射药物后的小鼠自由饮水、采饲，自然光照。
2.卵巢的采集方法在注射PMSG后46h利用颈椎脱臼法处死小鼠（将供体鼠置于饲养笼上，鼠爪自然抓紧笼上铁支架，此时一只手拉紧鼠尾，另一只手食指与拇指压紧鼠颈部，或用镊子压紧颈部即可致死，此为引颈法。
用75%酒精喷湿鼠全身以消毒并防止毛发飞扬）。
将小鼠头部固定，用力牵拉鼠尾，可感到颈椎部位脱臼的振动；也可用食指和拇指直接掐断颈椎致死。
然后用图钉将小鼠呈仰卧姿势固定于小木板上或鼠解剖台上。
图1－1 小鼠的固定将处死并固定好的小鼠，在下腹部中间剪开1个小口，一只手抓住鼠尾，另一只手抓住切开的皮肤向头部牵拉直至充分暴露腹部（图1-2）。
剪开腹膜，向前方揭去肠胃内脏，即暴露出生殖器官，可在肾脏后方看到两侧呈乳白色的卵巢及与输尿管相平行的两子宫角（图1-3）。
小鼠胚胎的收集教学教材
背景知识介绍：
哺乳动物的受精过程发生在输卵管内，大多数动 物的合子于排卵后的3~5天由输卵管进入子宫， 而小鼠胚胎进入子宫着床时间约为4天左右。
从供体收集胚胎就是在配种后或受精后的适当时 间，从超排供体回收其胚胎，以备给受体移植， 亦称胚胎回收或胚胎采集，简称采胚。采胚的数 量与采集时间、方法和检胚技术均有关系。
腹腔注射10IU PMSG（孕马血清促性腺 激素）
48小时后注射10IU HCG（人绒毛膜促性 腺激素） Nhomakorabea检栓
实验采用年龄体重相似的小鼠１２只，随机分为３组， 每组３只，分别为０.５天组 １.５天组 ２.５天组
胚胎的采集（手术法）：处死老鼠，在0.5天从 输卵管膨大部受精胚胎，1.5天和2.5天从输卵 管和部分子宫冲洗胚胎。
小鼠附植前胚胎的收集与观察
——兽医产科学研究性学习
胚胎收集的目的及其意义
小鼠是生命科学研究中最常用的实验动物 ,小鼠 胚胎的收集、培养和移植已成为实验室进行胚胎 工程研究要掌握的基本技术。
胚胎的收集、培养技术可进一步挖掘动物的繁殖 潜力，为优良牲畜的大量繁殖，稀有动物的种族 延续提供有效的解决办法。在畜牧业和制药业等 领域发挥重要的作用，具有光明的应用前景。
０.５天组 １.５天组 ２.５天组
２０ｘ
桑葚胚
结论
0.5天输卵管膨大部明显，可清晰得看到多个受精 卵，所以撕开膨大部就能够较集中得收集受精卵
1.5天输卵管膨大部消失，胚胎散在输卵管中，所 以选择从输卵管伞部用HTF培养液进行冲洗，将 胚胎冲出收集并观察
2.5天时，部分胚胎可能进入子宫，所以截取输卵 管及部分子宫，并用HTF培养液按1.5天冲洗步骤 进行冲洗收集，并观察
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背景知识介绍：
哺乳动物的受精过程发生在输卵管内，大多数动 物的合子于排卵后的3~5天由输卵管进入子宫， 而小鼠胚胎进入子宫着床时间约为4天左右。
从供体收集胚胎就是在配种后或受精后的适当时 间，从超排供体回收其胚胎，以备给受体移植， 亦称胚胎回收或胚胎采集，简称采胚。采胚的数 量与采集时间、方法和检胚技术均有关系。
小鼠附植前胚胎的收集与观察
——兽医产科学研究性学习
胚胎收集的目的及其意义
小鼠是生命科学研究中最常用的实验动物 ,小鼠 胚胎的收集、培养和移植已成为实验室进行胚胎 工程研究要掌握的基本技术。
胚胎的收集、培养技术可进一步挖掘动物的繁殖 潜力，为优良牲畜的大量繁殖，稀有动物的种族 延续提供有效的解决办法。在畜牧业和制药业等 领域发挥重要的作用，具有光明的应用前景。
腹腔注射10IU PMSG（孕马血清促性腺 激素）
48小时后注射10IU HCG（人绒毛膜促性 腺激素）
检栓
实验采用年龄体重相似的小鼠１２只，随机分为３组， 每组３只，分别为０.５天组 １.５天组 ２.５天组
胚胎的采集（手术法）：处死老鼠，在0.5天从 输卵管膨大部受精胚胎，1.5天和2.5天从输卵 管和部分子宫冲洗胚胎。
０.５天组 １.５天组 ２.５天组
２０ｘ
桑葚胚
结论
0.5天输卵管膨大部明显，可清晰得看到多个受精 卵，所以撕开膨大部就能够较集中得收集受精卵
1.5天输卵管膨大部消失，胚胎散在输卵管中，所 以选择输卵管伞部用HTF培养液进行冲洗，将 胚胎冲出收集并观察
2.5天时，部分胚胎可能进入子宫，所以截取输卵 管及部分子宫，并用HTF培养液按1.5天冲洗步骤 进行冲洗收集，并观察