_型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较
Ⅱ型胶原诱导关节炎小鼠和大鼠模型述评
基金项目：国家自然科学基金面上项目（２０１８ＹＦＣ１７０７４０７） 作者简介：陶宁，女，１９９２－１０生，在读硕士，住院医师，，Ｅ ｍａｉｌ：１９２２５３９２７８＠ｑｑ．ｃｏｍ 收稿日期：２０２０－０３－０５Ⅱ型胶原诱导关节炎小鼠和大鼠模型述评陶 宁１，张 杰２ （１中国医科大学第一临床学院中医科，沈阳 １１０００１；２中国医科大学附属第一医院中医科； 通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｊｉｅ９４５＠１２６．ｃｏｍ）关键词： 类风湿关节炎； Ⅱ型胶原； 小鼠； 大鼠中图分类号： Ｒ５９３．２２ 文献标志码： Ａ 文章编号： １００７－６６１１（２０２０）０６－０５９３－０６ ＤＯＩ：１０．１３７５３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－６６１１．２０２０．０６．０２２ 类风湿关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）是一种以关节滑膜长期慢性炎症为基本病理改变的系统性多关节炎，其临床多表现为对称性、侵袭性小关节炎症，可累及到关节外器官，导致关节畸形和强直，但发病机制尚不明确。
为深入研究ＲＡ的发病机制、病理变化、药物筛选以及免疫治疗等方面，选择合适的类风湿关节炎动物模型尤为重要。
Ⅱ胶原诱导的关节炎（ｃｏｌｌａｇｅｎ ｉｎｄｕｃｅｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＣＩＡ）模型是以慢性、多发性末端关节炎，甚至关节损伤等表现为主的免疫性炎症模型，其临床表现和病理改变等方面与ＲＡ有诸多相似之处，是研究ＲＡ的金标准模型［１］。
Ｔｒｅｎｔｈａｍ等［２］１９７７年首次报道了ＣＩＡ模型，该模型的发病机制包括体液免疫和细胞免疫两个方面。
在体液免疫中，异种动物Ⅱ型胶原蛋白（ｔｙｐｅⅡｃｏｌｌａｇｅｎ，ＣⅡ）注入动物体内后，活化Ｂ淋巴细胞产生的特异性胶原蛋白抗体在关节部位与胶原蛋白结合形成免疫复合物活化了补体系统从而产生免疫反应，其中Ｔｈ１型细胞因子通过增加ＭＨＣ Ⅱ和黏附分子的表达，促进抗原递呈活化巨噬细胞，在ＣＩＡ的发生发展中发挥着重要作用［３－５］。
弗氏完全佐剂致大鼠急性膝关节炎动物模型制备
１ ０ ０ ％， 肿胀百分率明显高于醋酸组 ， 造模第 ７ 、 １ ４天关节积 液检查显示 Ｉ Ｌ一１ Ｂ明显升高 ， ＨＡ含量降低 ， 与造模前及对 照组 、 醋酸
组 比较 ， 差异有统计学意义 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。佐 剂 组 膝 关 节 病 理 切 片 镜 检 炎 性 反 应 明 显 ， 关节腔 有大量 渗出液 ， 软 骨表面粗糙 ， 滑 膜 增 生、 粘连、 肥厚 ， 与典 型 的 膝关 节炎 临床 病理 学 改 变相 符 。 结 论 弗 氏 完 全佐 剂 可 成 功 建 立 大 鼠急 性 膝 关 节 炎 动 物 模 型 且 优 于
ｔ ｈ ｅ ｉ ｆ ｒ ｓ ｔ ｄ ａ ｙ（ ｄ ） ， ３ ｄ ， ７ ｄ ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｒ ｉ ｇ ｈ ｔ ｋ ｎ ｅ ｅ ｊ ｏ ｉ ｎ ｔ ｃ ａ ｖ ｉ ｔ ｙ ｉ ｎ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｓ ａ ｌ ｉ ｎ ｅ ， ａ ｃ ｅ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ａ ｎ ｄ Ｆ ｒ ｅ ｕ ｎ ｄ ｓ ｃ ｏ ｍ ｐ ｌ ｅ ｔ ｅ ｄ ａ ｄ ｊ ｕ ｖ ａ ｎ ｔ ０ ． ５ ｍＬ ／ ｄ ． Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｌ ｅ ｕ ｋ ｉ ｎ 一１ ｂ ｅ ｔ ａ（ Ｉ Ｌ一１ Ｂ ）ｉ ｎ ｋ ｎ ｅ ｅ ｊ ｏ ｉ ｎ ｔ ｌ ｆ ｕ ｉ ｄ ｗ ａ ｓ ｍｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｄ ｂ ｙ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍ ｅ— ｌ ｉ ｎ ｋ ｅ ｄ ｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｓ ｏ ｒ ｂ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ ｓ ａ ｙ （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） ， ａ ｎ ｄ ｈ ｙ ａ ｌ ｕ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ （ ＨＡ ）ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｗ ａ ｓ ｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｄ ｂ ｙ ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ｉ ｎ ７ ａ ｎ ｄ １ ４ ｄ ａ ｙ ｓ ｏ ｆ ｐ ｏ ｓ ｔ ｏ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ．Ｔ ｈ ｅ ｖ ｏ ｌ ｕ ｍ ｅ ｏ ｆ ｉ ｆ ｇ ｈ ｔ ｋ ｎ ｅ ｅ ｊ ｏ ｉ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ ｂ ｅ ｌ ｏ ｗ ｐ ａ ｔ ｒ ｓ ｗ ａ ｓ ｍｅ ａ ｓ —
常见自身免疫疾病及动物模型概述
常见自身免疫疾病及动物模型概述自身免疫性疾病〔Autoimmune disease,AID〕,指机体对自身抗原发生免疫反响而导致自身组织损害所引起之疾病,通常病程长、顽固且难以根治,对于患者生活质量有较大影响,严见之AID包括银屑病、类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、炎症性肠病、I型糖尿病等.经典之AID包括器官特异性和器官非特异性自身抗体贰大类导致机体免疫调节功能之紊乱,免疫系统无法区别自身细胞和组织,或识别自身或非己之免疫耐受机制被破坏而引起.AID确实切发病机制尚不明确,可能和多种因素有关,如免疫耐受之丧失、免疫反响调节异常,或由于遗传因素或病毒诱发.作为医药工业界研发热点,抗AID药物之临床前研发阶段需要借助实验动物模型评价候选化合物之优劣,对于临床阶段之疗效进行预测,并对于药物调控疾病之潜在机理进行说明.本文对于常见之AID及其较广泛使用之动物疾病模型进行简要介绍.银屑病及银屑病相关动物模型银屑病〔Psoriasis〕, 俗称"牛皮癣〞,就是最为常见之慢性AID,常发于青壮年人群,在世界范围内发病率约1-3%.银屑病发病顽固且持续,最显著特征为皮肤外表红肿及白色鳞屑之覆盖,其病因尚不明确,目前以为就是遗传和环境因素共同作用导致,如感染、压力、肥胖、吸烟等因素都可能对于疾病产生诱发临床上尚无根治银屑病之特效药物,故治疗银屑病主要以控制病症为主,如外用维生素D3类似物、糖皮质激素和维A酸,系统性使用糖皮质激素、甲氨蝶呤,以及免疫抑制剂如环孢素A药之开展,多种抗体类药物也对于银屑病具有较好疗效.科学研究中银屑病之实验动物模型主要分为自发形成、基因工程改造、病灶原位移植和直接诱发肆类,受限于模型建立难度和本钱,直接诱发类模型使用最为广泛,以下介绍两种基于小鼠之银屑病直接诱发模型.〔壹〕咪喹莫特诱导小鼠银屑病皮损模型咪喹莫特〔Imiquimod,IMQ〕就是Toll样受体7/8之抑制剂,临床上用来治疗IMQ乳膏在小鼠背部连续涂抹5~7天,会出现皮肤增厚、红斑、鳞屑等类银屑病样病症.该模型稳定、易建立、操作简单且应用广泛.a. PASI评分根据PASI评分标准对小鼠背部皮肤炎症情况评分〔包括银屑,红斑,肥厚〕,记录累积评分、体重和皮肤厚度变化.对照组空白乳膏处理未表现炎症特征,模型组IMQ处理之后,逐渐表现出皮肤炎症特征及厚度增加,第5天PASI评分到达最高值,体重在IMQ处理之第3天下降到最低点,而后逐渐恢复,阳性药抗体可降低PASI评分和皮肤厚度之增加.图1: 模型条件下小鼠背部皮肤PASI评分持续升高,体重下降,皮肤厚度增加；IL17A抗体可显著逆转皮肤病变a. 形态学检查IMQ连续处理5天后对于小鼠背部皮肤外观形态进行观察,并利用H&E染色分析组织病理学变化.图片中可见,小鼠皮肤出现红斑,鳞屑和厚度增加；H&E 染色结果显示IMQ处理促进了炎性细胞之浸润,表皮细胞之增生；免疫组化结果显示银屑病相关PD marker IL-6在皮肤中表达水平增加.对于上述病变,阳性药IL17A抗体具有明显之改善作用.图2: 模型条件下小鼠皮肤产生显著红斑、鳞屑和增厚病变,H&E染色结果可见组织增生和炎症细胞浸润,免疫组化结果可见银屑病生物标记物IL-6表达上升.IL17A抗体可以显著抑制上述病理变化c. Bio-marker检测IMQ处理5天后收集血浆,通过ELISA检测相关细胞因子之含量,收集皮肤组织通过qRT-PCR检测相关Marker基因之转录水平.结果说明,IMQ处理诱导了IL-6、IL-β和CXCL1等炎性细胞因子产生,阳性药抗体具有较强之抑制作用.图3:模型条件下血浆、皮肤中相关炎症生物标志物表达水平急剧上升,IL17A抗体可显著抑制其水平〔贰〕IL-23诱导小鼠耳廓银屑病样变模型研究证明,IL-23/Th17信号通路在银屑病之发生和开展中起关键作用,IL-23刺激并促进Th17细胞之分化,促进Th17细胞之开展以及细胞因子〔如IL-17A,IL-17F和IL-22〕之产生,从而产生类似银过向小鼠耳部皮肤内直接注射IL-23可诱导局部之银屑样病变,该模型就是常用之另壹个银屑病动物模型,且由于机制清晰,常被用于各类靶向药物之临床前药效评价中.重组IL-23蛋白于造模之第1、3、5、7日通过皮下给药注射于小鼠耳以建立模型耳廓,其间给予抗炎药物供试品或阳性药物.小鼠耳朵厚度变化以及病理检测结果显示,模型组小鼠耳厚度明显增加,而阳性药物地塞米松〔Dex〕产生了显著保护结果显示,给予IL-23造模之后小鼠耳厚增加,表皮增厚且炎细胞浸润明显,地塞米松对于上述病变具有显著改善作用.图4:耳内注射IL23细胞因子造模可造成耳部产生银屑病样病变,表现为耳厚显著增加,H&E染色结果显示造模产生银屑病相关之病理变药物地塞米松可以对于病变产生显著抑制类风湿性关节炎〔RA〕及动物模型类风湿性关节炎〔rheumatoid arthritis,RA〕就是壹种以关节病变为主之系统性自身免疫性疾病.以慢性、进行性、侵袭性关节部位炎症为主要表现,临床特征为关节红肿疼痛甚至僵直、破骨细胞之形成以及关节骨质受损等,严重可导致关节畸形乃至功能丧失,致残率高.RA多发于中老年女性人群,我国整体发病率约0.3-0.4%.发病机制尚不明确,可能由遗传、感染、环境等因素综合导致.目前临床治疗RA仍以非甾体抗炎药和抗风湿类药物如甲氨蝶呤、柳氮磺吡啶、羟氯喹类药物开展迅速,如TNF-α单抗〔Infliximab,Adalimumab〕、IL6受体单抗〔Tocilizumab〕、CD20抗体〔Rituximab〕等药物对于风湿性关节炎之治疗能够取得较为理想之疗效.目前类风湿性关节炎之动物模型主要分为佐剂诱导〔AIA〕和胶原〔CIA〕诱导两种,其间由于CIA模型通常可在小鼠上成模而使用范围更广.胶原诱导之类风湿性关节炎〔CIA〕模型应用DBA/1小鼠,第0天注射Ⅱ型胶原蛋白和弗氏完全佐剂〔CFA〕,第21天注射Ⅱ型胶原蛋白和非弗氏完全佐剂〔IFA〕,可诱导小鼠关节炎发生,小鼠发病程度、节点较为稳定,严重程度区分度较高,适用于抗自体免疫性疾病药物之评价.a. 临床评分和细胞因子检测Ⅱ型胶原蛋白免疫2次之后,DBA/1小鼠陆续发病且严重程度随时间严重程度进行评分可见,模型组病变较严重,而IL17抗体作为阳参试剂可显著控制疾病发生开展,并抑制发病率之持续增加.图5:注射CII胶原造模后28-42天内,关节炎评分和发病率持续增加,血浆炎症因子IL6水平激增；给予IL17A抗体后,发病和炎症因子水平皆受到抑制.实验终点收集小鼠血浆通过ELISA检测PD Marker IL-6之血浆浓度,可见模型组IL-6含量显著升高,抗体可抑制IL-6升高之趋势.图6:注射CII胶原造模后28-42天内,关节炎评分和发病率持续增加,血浆炎症因子IL6水平激增；给予IL17A抗体后,发病和炎症因子水平皆受到抑制.b. Micro-CT和病理学检查实验终点对小鼠脚趾、踝关节进行Micro-CT检查和病理学分析.Micro-CT检查显示,模型组小鼠关节骨质受到严重损伤,而抗体产生了显著保护作用.图7:Micro-CT结果显示,关节炎造模使小鼠骨关节受到显著破坏,产生骨质损伤；IL17A抗体可显著逆转骨关节损伤HE染色结果显示,CIA造模造成了小鼠踝关节之严重损伤和大量炎症细胞浸润,而IL17A抗体给药逆转了损伤和炎症反响；使用甲苯胺蓝染色分析踝关节软骨情况显示,模型组小鼠踝关节软骨局部缺失且密度不均,而抗体组小鼠软骨未见显著损伤.图8:H&E染色结果显示造模关节炎小鼠关节腔病变、异常增生严重,炎症细胞大量浸润；甲苯胺蓝染色结果显示小鼠关节软骨受到明显损伤；IL17A抗体可以显著之逆转上述关节炎相关之病理变化多发性硬化〔MS〕及动物模型多发性硬化〔multiple sclerosis, MS〕就是壹种以中枢系统炎性反响脱髓鞘疾病为其主要病理特征之罕见中枢神经类自身免疫性疾病,多发于20-40岁中年人群,女性患者较多,国内每十万人发病率约为.多发性硬化存在反复发病之特点,难以治愈,临床表现为肢体无力导致之偏瘫、截瘫或肆肢瘫痪,感觉异常,眼部异常,共济运动障碍等,严重影响患者生存质量并威胁临床尚无特效药物,常以皮质类固醇为主要治疗手段,辅以血浆置换等方式进行.科学研究中,常以实验性自身免疫性脑脊髓炎模型〔Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE〕进行多发性硬化机理及相关药物研发之研究.实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型在C57BL/6小鼠上,使用弗氏完全佐剂〔CFA〕乳化抗原肽MOG35-55,通过皮下注射诱导小鼠发生免疫反响,在注射MOG后2小时和48小时两次腹腔注射百日咳毒素〔PTX〕增加血脑屏障通透性,即可构建EAE模型.a. 临床评分通常免疫后9天小鼠出现尾部无力,后肢瘫痪,共济失调等中枢神经系统损伤引起之病症,于17-21天临床评分到达最大值.阳性药IL17A抗体可明显抑制发病病症,降低临床评分,改善小鼠发病造成之体重下降.图9:在使用MOG免疫小鼠之后,小鼠在9-21天内脑脊髓炎评分显著上升；随疾病进展体重也出现明显下降；IL17A抗体给药可逆转脑脊髓炎之开展b. 组织病理学检查实验终点收集脑和脊髓用于HE染色.结果显示,模型组脑组织有大量炎性细胞浸润,皮质区胶质细胞增生,海马区锥体细胞空泡变性；脊髓组织小胶质细胞增生,神经纤维脱髓鞘；而阳性药抗体可改善脑和脊髓之脱髓鞘和炎性细胞浸润.图10:H&E染色结果显示,造模小鼠之脊髓和脑组织中大量炎性细胞浸润,结构遭到破坏；IL17A抗体那么可逆转上述病理变化归纳总结自身免疫性疾病为危害人类健康之壹大类疾病,虽多数不具有直接致命性,但会对患者之生存质量产生严药物研发有赖于可靠之动物疾病模型模拟病症、探索机理以至于评价潜在药物之疗效.成都先导药物开发股份〔"成都先导〞〕内部管线致力于肿瘤、炎症/免疫等疾病领域之新药研发.依据内部研发需求,上述疾病模型都已成功建立并有力支持了内部工程IL-17A及JAK家族等免疫相关靶点之抑制剂药效评价,并伴随开展了作用机制和PD/PK相关研究工作,数个工程已经进入先导化合物优化阶段,有望不久将来获得临床候选化合物.除支撑公司内部管线外,这些模型筛选和药效评价也可通过各种合作形式,为外部伙伴提供药效评价效劳.除上述疾病和模型外,常见之自身免疫疾病模型如模拟炎症性肠病〔IBD〕之DSS诱导之小鼠溃疡性结肠炎模型,模拟支气管哮喘等疾病之小鼠/大鼠OVA哮喘模型等均在持续建立中,敬请关注和交流.。
Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎动物模型的研究
四川大学硕士学位论文Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎动物模型的研究姓名：王岩艳申请学位级别：硕士专业：内科学（风湿免疫）指导教师：刘钢20060401四川大学临床医学硕士专业学位论文用皮试针头紧贴表皮浅层刺入皮内，然后使针头向上挑起并再稍向前刺入，即可注射药液。
注射后可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。
（见图１）图ｌ皮内注射胶原的皮丘２．２．４灌胃：一只手拇指和食指捏紧大鼠头颈部皮肤，另外三指和掌内侧夹紧固定大鼠背部的皮肤，使口腔与食道成一直线。
另外一只手持灌胃器，将灌胃针从鼠的口腔插入，沿咽后壁慢慢插入食道，可感到轻微的阻力，此时可略改变一下灌胃针方向，以刺激引起吞咽动作，顺势将药液注入。
２．２．５动物的观察：密切观察大鼠的生命体征、活动和饮食等情况。
每天观察关节变化情况，每周称重一次，踝关节周长，踝关节直径，以自制的容积测量设备用容积法测量踝关节以下（包括踝关节）的容积。
于初次免疫第５０天左右评价关节炎指数。
２．３血清标本收集：２．３．１断尾取血：①固定：大鼠放入专门自制的小木盒中固定，仅露出尾②将大鼠尾放入４５℃左右的温水浸泡几分钟，并用酒精棉球涂拭尾，使尾部的血管充盈。
四川大学临床医学硕士专业学位论文Ｃａｂｄ图２空白组大鼠前肢Ｃａ）后肢（ｂ）表现，模型组大鼠前肢Ｃｏ）后肢（ｄ）红肿３．组织病理检查：ＨＥ染色，空白组滑膜细胞仅有１－－２层，无增生，滑膜下未见炎性细胞浸润，无血管增生，关节软骨表面光滑，关节软骨及软骨下骨质无破坏，关节间隙正常（见图３ａ，３ｂ）．与空白组相比，模璎组膝关节滑膜细胞水肿，明显增生有３—７层。
并且形成许多小绒毛状突起伸向关节腔。
滑膜下组织见大量炎性细胞浸润，纤维结缔组织和血管增生，取代正常的滑膜下脂肪组织，血管增生形成的血管翳破坏关节软骨及软骨下骨质，关节结构被破坏。
滑膜组织中还可见淋巴滤泡形成。
（见图３０－３０ａＸ１００倍ｂ×４００倍ｃ×１００倍ｄＸ４００倍ｅ×１００倍ｆＸ１００倍图３（ａ）（ｂ）空白组滑膜组织：（ｃ）（ｄ）模型组滑膜细胞增生；（ｅ）模型组滑膜组织大量炎性细胞浸润；（ｆ）模型组增生的滑膜细胞和增生扩张的血管形成血管翳。
口服牛II型胶原蛋白诱发类风湿关节炎大鼠模型的建立及评价
口服牛II型胶原蛋白诱发类风湿关节炎大鼠模型的建立及评价关丽;毋丹丹;胡东生;刘冬舟;刘志刚【期刊名称】《江西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(041)005【摘要】An RA animal model was developed by gavage feeding with bovine collagen type Ⅱ and aspirin,and tail vein injection with lipopolysaccharide. The diameter of ankle were measured and the score of the arthritis. The con-centration of IgE,IgG,IL-6,TNF-α and IFN-γ in serum by ELISA test. The inflammation in the ankle joints was evaluated by light microscopy and the ankle histopathological changes. The results show that Rats treated with high doses of aspirin(10 mg·kg-1 )can be successfully induced by oral bovine collagen type Ⅱ. The ankle of rat pres-ents obvious swelling and arthritis symptoms. High levels of proinflammatory cytokines and specific antibodies were detected in the sera. The histology showed an inflammatory feature in the ankle joints. Rats treated with high doses of aspirin(10 mg·kg-1 )can be successfully induced by oral bovine collagen type Ⅱ.%按照动物建模方案分别给不同组大鼠灌胃一定剂量的阿司匹林,再给大鼠灌胃牛Ⅱ型胶原蛋白诱导其产生类风湿关节炎;建模期间进行踝关节直径的测量及关节炎指数评分;然后ELISA实验检测大鼠血清中特异性抗体(IgE、IgG)和炎症因子(IL-6、TNF-α和IFN-γ);再进一步观察大鼠踝关节组织病理改变.结果表明:经过不同剂量阿司匹林(5、10 mg·kg-1)处理的大鼠,用牛Ⅱ型胶原蛋白灌胃后,大鼠踝关节呈现不同程度的肿胀及关节炎症状;10 mg·kg-1处理的大鼠炎症更明显,其血清中特异性抗体(IgE、IgG)和炎性细胞因子IL-6、TNF-a也显著增加,而细胞因子IFN-r显著降低,同时踝关节组织也发生明显炎症病变.这表明10 mg·kg-1处理的大鼠要比5 mg·kg-1处理大鼠更易用于口服食物抗原牛Ⅱ型胶原蛋白类风湿关节炎的建成.【总页数】5页(P516-520)【作者】关丽;毋丹丹;胡东生;刘冬舟;刘志刚【作者单位】深圳市罗湖区人民医院风湿免疫科,广东深圳518001;深圳大学过敏反应与免疫学研究所,广东深圳 518060;深圳大学过敏反应与免疫学研究所,广东深圳 518060;深圳市人民医院风湿免疫科,广东深圳 518020;深圳市罗湖区人民医院风湿免疫科,广东深圳518001;深圳大学过敏反应与免疫学研究所,广东深圳518060【正文语种】中文【中图分类】R593.22【相关文献】1.牛Ⅱ型胶原诱导SD大鼠类风湿关节炎模型的建立 [J], 韦日明;张丽华;刘健翔;郭亚芬;蒋林彬2.牛II型胶原诱导SD大鼠类风湿关节炎模型的建立 [J], 韦日明;张丽华;刘健翔;郭亚芬;蒋林彬;3.Ⅱ型胶原蛋白酶诱导 SD 大鼠膝骨关节炎模型的建立 [J], 黄永明;潘建科;郭达;刘军;杨济源;洪坤豪;杨伟毅;许树柴4.Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较 [J], 林红;贺永怀;黎燕;陆应麟;沈倍奋5.类风湿关节炎共病抑郁症大鼠模型的建立及评价 [J], 石磊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠CIA模型
Wistar大鼠CIA模型的建立将牛II型胶原溶液与等量的完全弗氏佐剂CFA于冰上混合，制备II型胶原终浓度为2.5mg/mL的混合物，然后用无菌注射器于无菌条件下抽吸，使混合物完全并充分乳化（乳化物滴入水中不松散）。
用10%的水合氯醛麻醉大鼠后，于大鼠尾根部皮下、背部皮下各注射0.1mL，共计0.2mL。
第14d再次按照上述步骤注射乳化物0.1mL，每个部位注射0.05mL。
于第28天各实验组动物腹腔注射LPS（文献中尚未找到CIA模型中注射LPS，需客户确定注射剂量）。
第二次免疫7d后，进行关节炎指数评分（通常动物的发病在免疫后的3-6周，若需要注射LPS，则需在注射后再进行关节炎指数评分），关节炎指数大于等于4分时，则模型建立成功[1-4]。
关节炎指数评分标准：0 分：无红斑或肿胀1 分：轻微的红斑和一个趾关节肿胀2 分：红斑和超过一个趾关节的肿胀3 分：红斑和踝部或腕部肿胀4 分：全部红斑以及脚趾和踝部或手指和腕部的肿胀，踝或腕不能弯曲References[1] Inglis JJ, Šimelyte E, Mccann FE, Criado G, Williams RO. Protocol for the induction ofarthritis in C57BL/6 mice. Nat Protoc. 2008. 3(4): 612-618.[2] 刘洋. 基于代谢组学方法研究清络饮治疗胶原诱导大鼠关节炎的机制及其与甲氨蝶呤的相互作用 ,2018.[3] 朱健. 湖北枫杨醇提物对CIA大鼠关节炎的作用及机制的初探 ,2018.[4] 马帅, 佟继铭, 梅爱敏, 祝晴晴, 刘永平. 赤雹根总皂苷对CIA模型大鼠的治疗作用及对CD4~+、CD8~+ T细胞表达的影响. 中药药理与临床. 2017. (04): 70-74.。
风湿类风湿类疾病动物模型造模方法
风湿类风湿类疾病动物模型造模方法类风湿性关节炎（RA）的病因与病理一直是医药工作者研究的热点，建立起理想的动物模型是十分必要的。
近年来报道较多的是Ⅱ型胶原(CⅡ)和不完全弗氏佐剂(IFA)混合注射所致的关节炎模型(CIA)及弗氏完全佐剂诱导的佐剂动物关节炎模型。
胶原关节炎模型比佐剂关节炎模型更接近人类RA的病理特征。
为了更有效地观察到关节骨破坏模型，对传统的方法进行改良后得到大鼠类风湿颞下颌关节炎动物模型。
1 材料实验动物：Wistar大鼠48只，雌性，5周龄，体重约（120±15）g，牛源性Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ)，弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund’s Adjuvant, IFA)，美国Sigma公司产品。
2 方法诱导产生大鼠类风湿颞下颌关节炎模型：剃除大鼠背部周围毛，取配置好的乳剂100μl，自鼠尾部开始,在脊柱两旁皮下多点注射，每只鼠注射1.0ml，1周后加强免疫1次,注射0.5ml/只。
建立胶原诱导的大鼠实验性关节炎动物模型。
对照组用生理盐水同期注射。
服务说明：动物模型实验涉及的试剂可由客户提供，也可查看公司的产品库，亦可由我们代购。
模型名称建模方法模式动物品系类风湿关节炎(RA)小鼠模型胶原诱导的关节炎Babl/c小鼠，SPF级，健康，雄性，体重：18g-22g类风湿关节炎(RA)大鼠模型胶原诱导的关节炎Wistar大鼠，SPF级，雄性，体重：180g~220g类风湿关节炎(RA)兔模型胶原诱导的关节炎大耳白兔，健康，雌雄不限，体重为1.5-2.5kg。
佐剂诱导的关节炎模式动物品系：Babl/c小鼠，SPF级，健康，雄性，体重：18g-22g实验分组：随机分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组(多个浓度梯度组)，15只每组实验周期：4 weeks建模方法：抓取小鼠，于右后足皮内注射0.1 mL CFA 致炎，从而建立小鼠佐剂性关节炎模型；对照组于右后足趾皮下注射0.01moL/L 冰醋酸 0. 1mL，以排除 CFA 中溶剂的致敏效应。
松果菊提取物对大鼠胶原性关节炎的作用
松果菊提取物对大鼠胶原性关节炎的作用目的研究松果菊提取物对胶原性关节炎（CIA）大鼠的作用及其可能机制。
方法用鸡胶原Ⅱ型和弗氏完全佐剂建立CIA大鼠模型。
观察CIA大鼠足肿胀度的变化并检测大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）和前列腺素E-2（PGE-2）的水平。
结果松果菊提取物可以显著抑制CIA大鼠的足肿胀度，并且能显著抑制CIA大鼠血清IL-1β和PGE-2水平。
结论松果菊提取物对CIA大鼠有明显的治疗作用，其机制可能是与降低血清IL-1β和PGE-2的表达以及促使炎性细胞因子网络趋向平衡有关。
标签：胶原诱导性关节炎；松果菊提取物；炎症因子松果菊（Echinacea purpurea L.），为菊科松果菊属多年生草本植物。
在临床上主要用作免疫促进剂和调节剂[1-2]。
松果菊的主要活性成分是多酚、咖啡酸衍生物和多糖[3]。
目前关于松果菊提取物对大鼠类风湿性关节炎的作用研究仍未见报道。
为此，本实验建立胶原性关节炎大鼠模型，观察松果菊提取物对胶原性关节炎大鼠的作用并探索其可能机制，为临床应用提供理论基础。
1资料与方法1.1一般资料原料松果菊花，自然干燥，粉碎。
药品与试剂地塞米松磷酸钠注射液；鸡胶原II型、弗氏完全佐剂；IL-1β、PGE-2酶联免疫试剂盒。
实验动物Sprague-Dawley（SD）大鼠，雌雄各半，体重（180±20）g，本单位实验动物中心提供。
样品制备称取松果菊原料，用质量15倍的70%乙醇水溶液在90℃下回流提取3次，1 h/次，减压蒸馏，真空干燥得淡黄色粉末。
1.2方法1.2.1 CIA大鼠模型的制备[4] 将20 mg鸡胶原Ⅱ型溶于10 mL预先配制好的0.1 mol/L醋酸溶液中，浓度为2 mg/Kg，4℃过夜使之充分溶解。
次日，将之与10 mL弗氏完全佐剂在冰浴下混合，充分乳化，制成稳定的乳化剂20 mL，置4℃冰箱保存备用。
除正常组外，在其他组大鼠的左后肢足跖皮内注射0.1 mL胶原乳剂致炎，第7 d在大鼠尾、背多点皮内注射0.1 mL胶原乳剂，作为激发注射。
两种佐剂制备CIA 大鼠模型的效果比较
[收稿日期]2019-06-05 修回日期2021-09-01[基金项目]安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2014A157);安徽省自然科学基金项目(11040606M163);安徽级质量工程项目(201810367017,201810367104)[作者单位]蚌埠医学院1.人体解剖学教研室,2.临床医学院,3.组织学与胚胎学教研室,安徽蚌埠233030[作者简介]郭 帅(1991-),男,硕士研究生.[通讯作者]陈传好,硕士研究生导师,教授.E⁃mail:cch711124@[文章编号]1000⁃2200(2022)03⁃0281⁃04㊃基础医学㊃两种佐剂制备CIA 大鼠模型的效果比较郭 帅1,褚小磊1,沈 桐2,李 季2,王浩淼2,朱毛妮2,朱盼盼2,陈一航2,吕樵岚2,胡玲莉2,田亚兰2,王元元3,陈传好1[摘要]目的:比较不完全弗氏佐剂(incomplete Freund′s adjuvant,IFA)和完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)分别与牛Ⅱ型胶原蛋白(calf Ⅱcollagen,CⅡ)构建的胶原诱导的类风湿性关节炎(collagen⁃induced rheumatoid arthritis,CIA)大鼠模型的效果㊂方法:选取30只8周龄SD 大鼠,随机分为0.9%氯化钠溶液组(对照组)㊁IFA +CⅡ组和CFA +CⅡ组,每组10只㊂将IFA /CFA 与CⅡ以等体积混匀,分别从鼠尾根部进行皮内注射,在第0天和第7天每只鼠分别注射200μL 和100μL㊂采用相同方法注射0.9%氯化钠溶液作为对照组㊂从初次免疫开始,每7天记录1次关节炎指数(arthritis index,AI)分值㊂在第14天分别从3组中取5只大鼠获取踝关节,做HE 染色并观察病理学变化㊂结果:造模第0天和第7天,3组AI 值为0;初次免疫后第14天,IFA +CⅡ组和CFA +CⅡ组的AI 均值分别为(6.5±0.5)和(7.4±0.4),2组差异有统计学意义(P <0.01);造模后第21天,IFA +CⅡ组和CFA +CⅡ组的AI 均值分别为(8.8±0.5)和(7.8±0.8),2组差异有统计学意义(P <0.01);造模后第14天和第21天,2组差异比较均无统计学意义(P >0.05)㊂踝关节HE 染色结果发现,IFA +CⅡ组踝关节软骨表面粗糙不平,轻微破坏;关节腔内可见炎性细胞浸润㊂CFA +CⅡ组关节软骨破坏明显,呈锯齿状,有明显的血管翳和大量的炎性细胞浸润㊂结论:使用IFA +C Ⅱ和CFA +C Ⅱ均可制备RA 模型,IFA +C Ⅱ的炎症反应较轻,为制备RA 模型的首选方案㊂[关键词]类风湿性关节炎;弗氏佐剂;牛Ⅱ型胶原蛋白;大鼠[中图法分类号]R 684.3 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2022.03.001Effect comparison of two adjuvants in the preparation of rat CIA modelGUO Shuai 1,CHU Xiao⁃lei 1,SHEN Tong 2,LI Ji 2,WANG Hao⁃miao 2,ZHU Mao⁃ni 2,ZHU Pan⁃pan 2,CHEN Yi⁃hang 2,LÜQiao⁃lan 2,HU Ling⁃li 2,TIAN Ya⁃lan 2,WANG Yuan⁃yuan 3,CHEN Chuan⁃hao 1(1.Department of Human Anatomy ,2.School of Clinical Medicine ,3.Department of Histologyand Embryology ,Bengbu Medical College ,Bengbu Anhui 233030,China )[Abstract ]Objective :To compare the effects of incomplete Freund′s adjuvant (IFA)and complete Freund′s adjuvant (CFA)combined with calf Ⅱcollagen(CⅡ)in establishing the collagen⁃induced rheumatoid arthritis(CIA)rat model.Methods :Thirty SD rats aged 8weeks were randomly divided into the 0.9%sodium chloride solution group(control group),IFA +CⅡgroup and CFA +C Ⅱgroup(10rats in each group).The IFA /CFA and CⅡwere blerding in equal volume,and intradermally injected into the root of rat tail.The 200μL and 100μL mixture were injected into rats in the model group on day 0and day 7,respectively.The same volume of 0.9%sodium chloride solution was injected into rats in the control group using the same method.The scores of arthritis index(AI)in three groups were recorded every 7days from the initial immunization.HE staining was performed in ankle joints of 5rats from three groups on day 14to observe the pathological changes.Results :On day 0and day 7after modeling,the AI values in three groups were 0.On day 14after initial immunization,the AI values in IFA +CⅡgroup and CFA +CⅡgroup were(6.5±0.5)and(7.4±0.4),respectively,and the difference of which was statistically significant(P <0.01).On day 21after modeling,the AI values in IFA +CⅡgroup and CFA +CⅡgroup were(8.8±0.5)and(7.8±0.8),respectively,and the difference of which was statistically significant(P <0.01).But the difference of AI values in IFA +CⅡgroup and CFA +CⅡgroup were not statistically significant on day 14and day 21after modeling (P >0.05).The results of HE staining of the ankle joint showed that the cartilage surface in ankle joint in the IFA +CⅡgroup was rough and slightly damaged,and inflammatory cell infiltration was observed in the articular cavity.In CFA +CⅡgroup,the articular cartilage was obviously damaged,presented saw tooth shape,and had obvious pannus and a large amount of inflammatory cell infiltration.Conclusions :Both IFA +CⅡand CFA +CⅡcan be used to prepare RA model,and the inflammatory response of IFA +CⅡis slight,which is the preferred methodfor preparing RA model.[Key words ]rheumatoid arthritis;Freund′s adjuvant;calf Ⅱcollagen;rat 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是由免疫㊁内分泌㊁感染㊁遗传㊁环境等多因素参与的全身性自身免疫性疾病,以关节滑膜炎症为特征,具有持久㊁反复发作的特性,通常引起关节软骨及骨质的破坏,最终导致关节畸形及功能障碍[1-2]㊂目前对于RA的病因与病理机制尚未确切明了,也无特效治疗手段㊂在研究RA的过程中,需要有效的RA动物模型[3-4],动物模型是研究该疾病的致病机制且用于药物新疗法测试的研究工具[5-6]㊂目前,已经建立了关节炎模型,包括CIA㊁佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)㊁降植烷诱导的关节炎(pristane⁃induced arthritis,PIA)等[4,7]㊂但制备RA 模型的方法,尚缺乏相对统一的标准㊂在研究RA 时,常选择不完全弗氏佐剂(incomplete Freund′s adjuvant,IFA)和完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)分别与牛Ⅱ型胶原蛋白(calfⅡcollagen,CⅡ)混合乳化,制备胶原诱导性关节炎(CIA)模型[8-10]㊂两种方案在制备RA模型时,对关节的滑膜层㊁关节软骨的影响程度是否有差异,目前尚未见报道㊂本研究采用两种方案制备CIA模型,比较两种造模方案对关节损害的程度㊂1 材料与方法1.1 实验动物 SD大鼠30只[8周龄,雌性,SPF 级,体质量(200±30)g]购买于蚌埠医学院实验动物中心㊂所有大鼠于同一环境(25℃)给予自由饮食㊂1.2 主要试剂 CⅡ(Chondrex20022);CFA (Chondrex7001);IFA(Chondrex7002);均为10mg㊂1.3 建立RA关节炎模型 将30只大鼠随机分为3组:0.9%氯化钠溶液组(对照组),IFA+CⅡ模型组,CFA+CⅡ模型组,每组10只㊂将CFA/IFA与C Ⅱ型胶原,以等体积在4℃(冰浴)无菌条件下混匀乳化;配制成质量浓度为1mg/mL的乳液㊂从大鼠尾根部开始,在多个位置,分少量多次皮内注射混悬乳液200μL;于初次免疫后7d注射100μL,以加强免疫㊂对照组在相同时间点注射等量的0.9%氯化钠溶液㊂1.4 关节炎评分 在初次免疫后第7㊁14㊁21天,参照David D Brand关节炎指数(AI)评价标准[8],对3组大鼠AI进行评价并记录分值(见表1)㊂对每肢足趾单独评分,将四肢评分相加作为关节炎评分,每只大鼠最高为16分㊂由3名实验者完成,以平均值作为AI评分㊂AI总分≥4分判定为造模成功㊂1.5 大鼠踝关节获取 在造模后第14天,每组取出5只大鼠麻醉处死,获取踝关节,并使用10%甲醛固定,用于HE染色㊂表1 AI评分标准等级关节表现特征0没有红斑和肿胀的迹象1红斑和轻度肿胀仅限于跗骨或踝关节2红斑和中度肿胀,从踝关节延伸至跖关节3红斑和重度肿胀,从跖关节延伸至脚趾4红斑和严重肿胀包括脚踝,脚面和足趾;或四肢强直1.6 HE染色 踝关节在甲醛中固定14d→HNO3 (10%)脱钙48h→流水冲洗过夜→乙醇逐级脱水→二甲苯透明→石蜡包埋㊁切片→常规HE染色㊂在光镜下观测RA模型大鼠踝关节的病理学变化㊂1.7 统计学方法 采用方差分析和q检验㊂2 结果2.1 一般情况观察 造模后,大鼠双后肢足爪第9天未见明显改变,第10天出现急性肿胀,呈对称性,第14天明显不能负重,直至实验结束㊂与对照组相比,模型组大鼠饮食减少;毛发光泽度下降,干枯容易脱落;精神状态欠佳,活动减少且行动迟缓㊂另外,对照组尾巴注射部位无点状感染,毛发正常㊂模型组在注射部位有点状感染,尾部略增粗,质地一般或者有一定硬度且注射部位形成小溃疡,多数可以结痂自愈;但IFA+CⅡ组注射部位出现感染的数量较CFA+CⅡ组明显减少㊂2.2 AI评分 在造模后第7天,3组AI值均为0㊂在14d时,两模型组AI值升高,IFA+CⅡ组和CFA +CⅡ组AI值比较差异有统计学意义(P<0.01);在21d时,AI值继续升高,IFA+CⅡ组和CFA+C Ⅱ组AI值比较差异有统计学意义(P<0.01)㊂在14d和21d,两模型组之间AI值差异无统计学意义(P>0.05)㊂对照组在造模后14d和21d的AI值均为0(见表2)㊂表2 3组大鼠在不同时间点AI值的变化趋势分组n7d14d21d F P MS组内对照组10000 IFA+CⅡ组100 6.5±0.58.8±0.5416.60<0.010.500 CFA+CⅡ组1007.4±0.47.8±0.8321.56<0.010.600F 346.88368.47P <0.01<0.01MS组内 0.4700.6302.3 3组大鼠在造模后第14天踝关节病理学变化 对照组踝关节腔内,关节软骨表面光滑且完整,关节软骨及软骨下骨质无破坏,关节间隙正常;且未见滑膜增生和血管翳形成(见图2)㊂IFA +CⅡ组踝关节滑膜软骨连续但关节软骨表面粗糙不平(见图3A);踝关节腔内可见少量血管翳㊁炎性细胞浸润,关节软骨轻微破坏(见图3B)㊂CFA +CⅡ组关节软骨明显破坏㊁不连续不完整且呈锯齿状(见图3C);形成明显的血管翳,滑膜细胞增生明显,排列紊乱,见大量的炎性细胞浸润(见图3D)㊂3 讨论 CIA 模型在临床症状和病理学特点及免疫学方面与RA 相似[11],一直是研究RA 的经典模型[4,8]㊂CIA 是一种用同源或异源性Ⅱ型胶原免疫动物而引发的一种慢性㊁多发性关节炎㊂通常在尾根部皮内注射佐剂乳化的CⅡ诱导动物,注射后可发生关节炎㊂许多研究者使用RA 模型进行转基因及免疫治疗等研究[10],佐剂的种类可能影响CIA 模型的病变情况,导致实验误差加大,从而影响结果的可靠性㊂本研究使用IFA 和CFA 分别与等体积CⅡ乳化制备RA 大鼠模型㊂比较大鼠一般情况㊁发病情况和病理学改变㊂从一般情况上看IFA +CⅡ组发病时感染较少,在造模后14d,2组大鼠AI 评分均超过4分,说明RA 大鼠模型制备成功㊂随着时间的延长,在造模后21d,2组的AI 值变化不大㊂在模型成功率上两模型组均为80%,这与大多数研究者的结果相似[12-13]㊂在造模后14d,2组踝关节HE 染色结果发现,模型组均可见炎性细胞㊁血管翳增生等㊂这一现象的可能机制为CⅡ可以诱导B 细胞产生特异性抗体;抗体沉积于关节部位,协同CⅡ激活补体系统,诱发炎症㊂这一炎症反应不断刺激滑膜组织,形成血管翳[11]㊂这些血管翳引起关节软骨破坏,最终导致RA 的发生[14]㊂IFA +C Ⅱ组比CFA +CⅡ组炎症反应稍轻,提示免疫反应较弱㊂而且IFA +CⅡ组在对关节软骨的破坏程度㊁炎症细胞的增多程度㊁血管翳的增生程度和浸润程度明显比CFA +CⅡ组轻㊂使用IFA +CⅡ制备RA 模型有利于减小实验误差,真实反映RA 的病变情况,保证RA 相关研究结果的可靠性㊂由于在造模后21d,模型组的AI 值变化不大,为此本课题组仅观察了造模后14d 的病理学变化㊂为了深入了解IFA +CⅡ造模的优越性,本课题组下一步实验将检测炎性因子肿瘤坏死因子α㊁白细胞介素1β和白细胞介素17在RA 中的表达变化,这将为RA 研究提供更为可靠的实验基础㊂综上所述,在制备大鼠RA 模型过程中,使用IFA +CⅡ和CFA +CⅡ有相似的病理学特点,并且IFA +CⅡ对动物的不良反应明显低于CFA +CⅡ㊂因此,IFA +CⅡ可作为制备CIA 模型的首选方案,以保障实验结果的可靠性㊂[参考文献][1] SMOLEN JS,ALETAHA D,MCINNES IB.Rheumatoid arthritis [J].Lancet,2016,388(10055):2023.[2] MCINNES IB,SCHETT G.Pathogenetic insights from the treatmentof rheumatoid arthritis[J].Lancet,2017,389(10086):2328.[3] 周夏娟,应旭旻.Ⅱ型胶原蛋白与弗氏佐剂诱导关节炎小鼠模型的建立[J].中国老年学杂志,2017,37(15):3689.[4] BENDELE A.Animal models of rheumatoid arthritis [J ].J Musculoskelet Neuronal Interact,2001,1(4):377.[5] TRENTHAM DE,TOWNES AS,KANG AH.Autoimmunity to typeⅡcollagen an experimental model of arthritis [J].J Exp Med,2017,146(3):857.[6] SHEN HB,HUO ZJ,BAI YJ,et al .Protective effect of norcantharidin on collagen⁃induced arthritis rats[J].Chin J IntegrMed,2018,24(4):278.[7] NIETO FR,CLARK AK,GRIST J,et al .Calcitonin gene⁃relatedpeptide⁃expressing sensory neurons and spinal microglial reactivity contribute to pain states in collagen⁃induced arthritis[J].Arthritis Rheumatol,2015,67(6):1668.[8] BRAND DD,LATHAM KA,ROSLONIEC EF.Collagen⁃inducedarthritis[J].Nat Protoc,2007,2(5):1269.[收稿日期]2020-08-11 [修回日期]2021-02-20[作者单位]湖北医药学院附属医院十堰市太和医院肿瘤科,湖北十堰442000[作者简介]梁 猛(1981-),男,主治医师.[文章编号]1000⁃2200(2022)03⁃0284⁃05㊃基础医学㊃XIAP 基因对TNF⁃α诱导的鼻咽癌细胞凋亡及VEGF 和COX⁃2表达的机制研究梁 猛[摘要]目的:探讨X 连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因对肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)诱导的鼻咽癌细胞凋亡及血管内皮生长因子(VEGF)和环氧化酶⁃2(COX⁃2)表达的影响㊂方法:将人鼻咽癌5⁃8F 细胞分为空白组㊁TNF⁃α组(10ng /mL 的外源性TNF⁃α处理5⁃8F 细胞12h)㊁si⁃XIAP 组(si⁃XIAP 转染5⁃8F 细胞48h)和TNF⁃α+si⁃XIAP(si⁃XIAP 转染5⁃8F 细胞48h 后,使用10ng /mL 的外源性TNF⁃α处理细胞12h)㊂Western blotting 检测XIAP㊁VEGF㊁COX⁃2㊁Cleaved caspase3㊁Bax㊁NF⁃κB p65和Ikkβ蛋白表达;MTT 法及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率㊂结果:转染si⁃XIAP 的5⁃8F 细胞XIAP 表达明显低于空白组(P <0.01)㊂TNF⁃α组和si⁃XIAP 组细胞活力低于空白组(P <0.05),细胞凋亡率及Cleaved caspase3和Bax 表达均高于空白组(P <0.05)㊂TNF⁃α组VEGF㊁COX⁃2㊁NF⁃κB p65和Ikkβ表达均高于空白组(P <0.05)㊂si⁃XIAP 组VEGF㊁COX⁃2㊁NF⁃κBp65和Ikkβ表达均低于空白组(P <0.05)㊂TNF⁃α+si⁃XIAP 组细胞活力低于TNF⁃α组和si⁃XIAP 组(P <0.05);VEGF㊁COX⁃2㊁NF⁃κB p65和Ikkβ表达均低于TNF⁃α组㊁高于si⁃XIAP 组(P <0.05);细胞凋亡率及Cleaved caspase3和Bax 表达均高于TNF⁃α组和si⁃XIAP 组(P <0.05)㊂结论:下调XIAP 基因表达增强TNF⁃α诱导的鼻咽癌5⁃8F 细胞凋亡及降低VEGF 和COX⁃2表达,机制与抑制NF⁃κB 信号通路有关㊂[关键词]鼻咽肿瘤;X 连锁凋亡抑制蛋白;肿瘤坏死因子α;细胞凋亡[中图法分类号]R 739.6 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2022.03.002Study on the mechanism of XIAP gene on TNF⁃α⁃induced apoptosis and expression of VEGF and COX⁃2in nasopharyngeal carcinoma cellsLIANG Meng(Department of Oncology ,Shiyan Taihe Hospital Affiliated to Hubei Medical College ,Shiyan Hubei 442000,China )[Abstract ]Objective :To investigate the effect of X⁃linked inhibitor of apoptosis protein(XIAP)gene on the tumor necrosis factor⁃α(TNF⁃α)⁃induced apoptosis,and expression of vascular endothelial growth factor (VEGF )and cyclooxygenase⁃2(COX⁃2)in nasopharyngeal carcinoma cells.Methods :Human nasopharyngeal carcinoma 5⁃8F cells were divided into blank group,TNF⁃αgroup (cells treated with 10ng /mL exogenous TNF⁃αfor 12h),si⁃XIAP group(cells transfected with si⁃XIAP for 48h)and TNF⁃α+si⁃XIAP(cells transfected with si⁃XIAP for 48h,then treated with 10ng /mL exogenous TNF⁃αfor 12h).Western blotting was used to detect the protein expression of XIAP,VEGF,COX⁃2,Cleaved caspase3,Bax,NF⁃κB p65and Ikkβ.MTT assay and flow cytometry were used to detect cell viability and apoptosis rate.Results :The expression of XIAP in 5⁃8F cells transfected with si⁃XIAP was significantly lower than that in blank group(P <0.01).The cell viability inTNF⁃αgroup and si⁃XIAP group was lower than that in blank group(P <0.05),and the apoptosis rate and the expression of Cleaved caspase3and Bax were higher than those in blankgroup(P <0.05).The expressions of VEGF,COX⁃2,NF⁃κB[9] MCNAMEE K,WILLIAMS R,SEED M.Animal models ofrheumatoid arthritis:how informative are they?[J ].Eur JPharmacol,2015,759:278.[10] ASQUITH DL,MILLER AM,MCINNES IB,et al .Animal models of rheumatoid arthritis[J].Eur J Immunol,2009,39(8):2040.[11] IKI C'MM,FLEGAR D,KOVA C ˇI C ˇN,et al .Increased chemotaxis and activity of circulatory myeloid progenitor cells may contribute to enhanced osteoclastogenesis and bone loss in the C57BL /6mouse model of collagen⁃induced arthritis [J ].Clin ExpImmunol,2016,186(3):321.[12] SONG HP,LI X,YU R,et al .Phenotypic characterization of typeⅡcollagen⁃induced arthritis in Wistar rats[J].Exp Ther Med,2015,10(4):1483.[13] 丁子桐,熊海霞,高琴琴,等.胶原诱导性关节炎病/证模型大鼠血清细胞因子表达谱的初步研究[J].中国比较医学杂志,2019,29(4):28.[14] CHEN YJ,CHANG WA,WU LY,et al .Systematic analysis ofdifferential expression profile in rheumatoid arthritis chondrocytes using next⁃generation sequencing and bioinformatics approaches [J].Int J Med Sci,2018,15(11):1129.(本文编辑 刘畅)。
大鼠关节炎建模方法
大鼠关节炎建模方法以大鼠关节炎建模方法为标题，本文将介绍大鼠关节炎建模的常用方法。
关节炎是一种关节组织的炎症性疾病，可以导致关节疼痛、肿胀和功能障碍。
为了研究关节炎的发病机制和寻找治疗方法，科研人员常常利用动物模型进行研究。
大鼠是常用的关节炎模型动物，下面将介绍几种常用的大鼠关节炎建模方法。
一、免疫学建模法免疫学建模法是最常见的大鼠关节炎建模方法之一。
该方法通过注射抗原物质，如胶原蛋白、关节滑膜细胞等，来诱导大鼠产生自身免疫反应，引发关节炎。
这种方法可以模拟人类风湿性关节炎的发病过程，具有较高的可重复性和稳定性。
二、化学建模法化学建模法是另一种常用的大鼠关节炎建模方法。
该方法通过给予大鼠特定的化学物质，如Freund佐剂、肯尼迪酸等，来引起关节炎。
这种方法可以模拟关节炎的炎症反应，但其机制与免疫学建模法有所不同。
三、机械建模法机械建模法是一种较少使用的大鼠关节炎建模方法。
该方法通过机械刺激或压迫大鼠关节，如关节固定、关节脱位等，来引起关节炎。
这种方法可以模拟关节炎的机械性损伤，但其建模过程较为复杂，需要较高的技术要求。
四、基因工程建模法基因工程建模法是一种较新的大鼠关节炎建模方法。
该方法通过基因敲除、基因过表达等技术手段，改变大鼠体内特定基因的表达水平，从而引发关节炎。
这种方法可以模拟特定基因突变导致的关节炎，有助于研究关节炎的遗传机制和信号通路。
在进行大鼠关节炎建模实验时，需要注意一些技术细节。
首先，选择适合的大鼠品系和年龄，一般选择健康成年大鼠进行实验。
其次，建模前需要对大鼠进行基础检查，确保其体质状况良好。
然后，进行建模操作时要注意无菌操作，避免感染引起其他并发症。
最后，在建模后要进行严密的观察和记录，包括关节炎程度、体重变化、行为活动等指标，以便对实验结果进行准确分析和比较。
大鼠关节炎建模方法是研究关节炎发病机制和寻找治疗方法的重要手段。
免疫学建模法、化学建模法、机械建模法和基因工程建模法是常用的大鼠关节炎建模方法。
口服Ⅱ型胶原对胶原诱发大鼠关节炎的抑制作用及其致病机制初探
３ ，模 型 组 １ 组 ２只 ，灌 胃组 ９只 ，正 ４级 ： 重 影 响 功 能 ． 有 关 节 畸 形 。 严 伴 计 算 关 节 炎 发 病 率 ， 节 炎 指 数 ：全 关
组 动 物 各 爪 病 变 分 级 总 和／ 动 物 数 ； 组 肢体 累及率 ：全组动 物肢 体受 累数／
方法 ：用 鸡 ＣⅡ ｓ 致 Ｄ大 鼠类风 湿性 关节 曼模 型 ．于致 关 节 炎前一 周 口 ＣⅡ， 续 ４ ，观察 大鼠 服 持 周
ＣＡ 的发 生率及 Ⅱ型胶 原抗体 产生 情 况。 Ｉ
结果 ： 与 实验 组 比较 ，给 予 Ｃｌ灌 胃的 Ｓ 大 鼠，其 ＣＡ 发病 率明显 降低 （ ４ ８＿ ， 关节 炎指 Ｉ Ｄ Ｉ ４ ％： ３ ４ ３ ％）
Ｋｅ ｒ ｓ ｔｐ １ ｏｌｇ ｎ ｃ ｌ ｇ ｎｉｄ ｃｄａｔｒｔｓ ｒｅ ｍ ａｏｄａｔｒｔ ｎｉｏ ｙ ｙｗｏ ｄ ： ｙ ｅ１ ｃ ｌ ｅ ｏｌ ｅ ｕ ｅ ｒ ｉ ｈ ｕ ｔｉ ｒｈｉｉ ａ ｔ ｄ ａ ａ ｎ ｈ ｉ ｓ ｂ
胶 原 免 疫 可 引 起 大 鼠产 生 胶 原 诱 雄 兼 用 ， 重 １０－０ ｇ 购 自实 验 动 体 ８ ２ Ｏ， 导 性 关 节 炎 （ ｌｇｎｎ ｕｅ ａｈｉ ， ｃ ｌ ｅ ｉ ｃｄ ｒ ｒｉ ｏａ ｄ ｔ ｔ ｓ Ｃ Ａ ： 而 口服 胶 原 可 以 明显 地 抑 制 Ｉ）１ １ ． ｃＡ．使 关 节 的病 理 损 伤 程 度 减 轻 和 Ｉ 多关 节 炎 的起 病 时 间延 迟 或 降低 发 病
ｉ ｅ ｅ ｄｉ ｎ ｏｖｄ ａ ｏｗ ｒ ａ ｏ ｏ （． ：． ，３８％ ：７９％） Ａ ｔＣ ｎｆ ｏｙｉｔ ｇｏ ｐ ｗ ｉｈ ｅ ｎ ｘ ｄ ｎ ｌ ｍｂｉ ｌ ｒｔ ｅｅ ｌ ｌｗ ０８ ５３ Ｉ．８ ４ １ ． ｎｉ Ｈｅｉ ｄ ｎ ｗｏ ｒｕ ｓ ｈｃ ｗ ｒ ｖ ｅ ｉ ｓ ８ ３ — ｂ ｅ
胶原诱导的关节炎和佐剂诱导的关节炎大鼠模型的制备
胶原诱导的关节炎和佐剂诱导的关节炎大鼠模型的制备李沙;傅颖媛;尧荣凤;涂丽娜;张海荣【期刊名称】《南昌大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(049)012【摘要】目的制备实用性的胶原诱导的关节炎(CIA)和佐剂诱导的关节炎(AA)动物模型.方法采用牛Ⅱ型胶原蛋白溶于0.5 mol/L醋酸中,加入等量弗氏不完全佐剂混匀乳化配成牛Ⅱ型胶原蛋白乳剂和灭活卡介苗溶于弗氏不完全佐剂中配成弗氏完全佐剂分别足跖皮内免疫Wistar大鼠,第21天加强免疫,利用YLS-7B足趾容积测量仪测量大鼠足部体积,利用PLANMECA TNTRAX线摄片机对大鼠足部拍摄,然后进行大鼠后足的近端趾间和跖趾关节病理观察.结果 CIA加强组和AA高剂量组大鼠免疫足出现明显的红肿,且肿胀足体积与正常对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01);X线和病理HE染色结果亦显示,关节组织呈现关节间隙狭窄、滑膜纤维组织增生、软骨及骨的破坏等病变.结论经改进的CIA和AA大鼠模型呈现典型的关节病变的特征,可为进一步研究人类类风湿性关节炎的发病机制和新药研发提供良好实用性动物模型.【总页数】6页(P17-19,26,封2,封3)【作者】李沙;傅颖媛;尧荣凤;涂丽娜;张海荣【作者单位】南昌大学,医学院免疫学教研室,南昌,330006;南昌大学,医学院免疫学教研室,南昌,330006;南昌大学,医学院免疫学教研室,南昌,330006;南昌大学,医学院免疫学教研室,南昌,330006;南昌大学,附属口腔医院放射科,南昌,330006【正文语种】中文【中图分类】R392.31;R-332【相关文献】1.大鼠胶原诱导性关节炎模型的制备及评价 [J], 石磊;李小峰;王彩虹;张莉芸;马丽辉;国华;杨艳;刘燕;周丽2.胶原诱导性和佐剂性大鼠关节炎模型的比较 [J], 潘磊;杜文喜;卢建华3.胶原诱导型大鼠类风湿关节炎模型的制备 [J], 陈彩娥;崔向军;郑可;王琴4.胶原诱导性类风湿关节炎大鼠模型制备及早期表现评价 [J], 苏云龙; 王雪梅5.胶原诱导性类风湿关节炎大鼠模型制备及早期表现评价 [J], 苏云龙;王雪梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
动物模型之关节炎模型的选择与建模实验要点肿胀大鼠胶原
动物模型之关节炎模型的选择与建模实验要点肿胀⼤⿏胶原 模型 关节炎是社会⽣活中常见的⼀种⾃⾝免疫性疾病，其发病机制复杂，病程长久且难治愈，是各⼤科研机构和药企研究的热门，在研究过程中常常需要符合临床的动物模型，今天⼩⾍就跟⼤家分享⼏种常⽤于评价治疗关节炎的动物模型。
⼀、佐剂诱导的⼤⿏关节炎模型（AIA）[1] 动物：SD⼤⿏、Wistar⼤⿏ 试剂：完全弗⽒佐剂（CFA）、液体⽯蜡 步骤：⼀⼈抓取⼤⿏，⼀⼈于⼤⿏后⾜或尾根部⽪内注射0.1mL CFA即可建⽴佐剂诱导的关节炎模型。
特点：SD⼤⿏造模成功率略低于Wistar⼤⿏，SD⼤⿏体重变化较⼤，测量⾜趾肿胀时会有⼤⿏本⾝原因产⽣较⼤误差。
本模型中T细胞较为活跃，早期会产⽣⼤量的炎症因⼦，例如：TNF-α、IL-17、IFN等，后期会有⼤量的IL-4、TGF-β等产⽣。
⼆、胶原诱导的⼤⿏关节炎模型（CIA）[1] 动物：SD⼤⿏、Wistar⼤⿏、Lewis⼤⿏ 试剂：II型胶原、不完全弗⽒佐剂（IFA） 步骤：胶原与不完全弗⽒佐剂（IFA）⾼速混匀乳化，⼤⿏⿇醉后尾根部⽪内注射0.4mL混匀的乳化胶原进⾏初次免疫，⼀周后再次进⾏免疫，⼆次免疫3-7天内即可得到模型。
特点：SD⼤⿏存在与AIA模型类似的缺点，体重增长过快影响动物实验结果，模型持续时间较短。
所选动物多在180±20g左右，7-8周龄，另外此模型⼤多⽤雌性动物进⾏造模。
在以上三种⼤⿏品系中，雌性Lewis模型最为稳定，评价化合物药效较为真实可靠，且该模型持续时间可长达50-60天。
本模型主要是Th细胞介导。
三、胶原诱导的⼩⿏关节炎模型（CIA）[2] 动物：DBA/1、B10Q、B10G、NFR/N、C57BL/6 试剂：完全弗⽒佐剂（CFA）、II型胶原（鸡、⽜、猪来源） 步骤：胶原乳化后，尾根部⽪内注射，21天后进⾏⼆次免疫（当然也可根据需要单次改⾼剂量胶原诱导）。
类风湿性关节炎（RA）及动物模型
类风湿性关节炎（RA）及动物模型类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以关节病变为主的系统性自身免疫性疾病。
以慢性、进行性、侵袭性关节部位炎症为主要表现，临床特征为关节红肿疼痛甚至僵直、破骨细胞的形成以及关节骨质受损等，严重可导致关节畸形乃至功能丧失，致残率高。
RA多发于中老年女性人群，我国整体发病率约0.3-0.4%。
发病机制尚不明确，可能由遗传、感染、环境等因素综合导致。
目前临床治疗RA仍以非甾体抗炎药和抗风湿类药物如甲氨蝶呤、柳氮磺吡啶、羟氯喹等。
近年来抗体类药物发展迅速，如TNF-α单抗（Infliximab，Adalimumab）、IL6受体单抗（T ocilizumab）、CD20抗体（Rituximab）等药物对于风湿性关节炎的治疗能够取得较为理想的疗效。
目前类风湿性关节炎的动物模型主要分为佐剂诱导（AIA）和胶原（CIA）诱导两种，其中由于CIA模型通常可在小鼠上成模而使用范围更广。
胶原诱导的类风湿性关节炎（CIA）模型应用DBA/1小鼠，第0天注射Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂（CFA），第21天注射Ⅱ型胶原蛋白与非弗氏完全佐剂（IFA），可诱导小鼠关节炎发生，小鼠发病程度、节点较为稳定，严重程度区分度较高，适用于抗自体免疫性疾病药物的评价。
a. 临床评分与细胞因子检测Ⅱ型胶原蛋白免疫2次之后，DBA/1小鼠陆续发病且严重程度随时间升高。
每日根据炎症严重程度进行评分可见，模型组病变较严重，而IL17抗体作为阳参试剂可显著控制疾病发生发展，并抑制发病率的持续增加。
图5：注射CII胶原造模后28-42天内，关节炎评分和发病率持续增加，血浆炎症因子IL6水平激增；给予IL17A抗体后，发病和炎症因子水平皆受到抑制。
实验终点收集小鼠血浆通过ELISA检测PD Marker IL-6的血浆浓度，可见模型组IL-6含量显著升高，抗体可抑制IL-6升高的趋势。
图6：注射CII胶原造模后28-42天内，关节炎评分和发病率持续增加，血浆炎症因子IL6水平激增；给予IL17A抗体后，发病和炎症因子水平皆受到抑制。
胶原诱导Wistar和Lewis大鼠类风湿关节炎模型病理特点的比较
胶原诱导Wistar和Lewis大鼠类风湿关节炎模型病理特点的比较施佳君;陈方明;马全鑫;陈诚;陈姣姣;郁晨;陈民利【摘要】目的探讨牛II型胶原(CII)诱导Wistar和Lewis大鼠类风湿关节炎(RA)模型的病症表现与病理特点的差异性.方法采用尾根部皮内注射与CFA混合液进行首次免疫,14 d时注射牛2型胶原(CII)与弗氏完全佐剂(IFA)混合液加强免疫,建立Wistar和Lewis大鼠RA模型,观察Wistar-RA组和Lewis-RA组发病情况,测定足肿胀度和血清抗CII抗体效价水平,在第12周进行足趾形态和组织的病理学检查,测定踝关节滑膜VEGF、IL-6、IL-10和IL-17A的表达.结果胶原诱导后,Wistar与Lewis大鼠分别在第10天和14天出现后足肿胀,第21天和24天达到高峰,血清抗CII抗体效价第3周后显著升高(P< 0.01),关节炎指数(AI)明显升高(P<0.01);Wistar-RA组的成模率80%,第5周足肿胀消退并进入平缓期,Lewis-RA组的成模率100%,第7周足肿胀消退并进入平缓期;在12周时两模型组均发现关节严重软骨侵蚀、滑膜增生以及炎症细胞浸润,关节滑膜血管新生和血管翳形成,后肢股骨和胫骨骨密度明显降低(P< 0.01),关节滑膜中VEGF、IL-6、IL-17A表达显著增加(P< 0.05,P<0.01),IL-10表达明显下降(P< 0.01).与Wistar-RA组比较,Lewis-RA组足容积和足掌厚度增长持续时间较长, AI高于Wistar-RA组,滑膜血管新生和血管翳形成更明显,踝关节滑膜 VEGF表达显著高于 Wistar-RA 组(P <0.05),而IL-17A表达显著低于Wistar-RA组(P< 0.05).结论 Wistar-RA模型和Lewis-RA模型均出现关节肿胀、变形、活动减少等症状,关节炎指数升高,关节滑膜中VEGF、IL-6、IL-17A的表达增加,IL-10表达下降,与临床相符.但Wistar-RA模型肿胀持续时间短,而Lewis-RA模型肿胀持续时间长,关节损伤也更为严重,血管新生和血管翳形成更明显;Wistar-RA模型IL-17A表达高,而Lewis-RA模型则VEGF高表达,这可能与其病理特点有关.%Objective To study the differences of symptoms and pathological features of Wistar and Lewis rat models of collagen-induced rheumatoid arthritis. Methods Wistar and Lewis rats were injected with intermixt ure of bovine TypeⅡ collage and complete Freund's adjuvant(CFA)for first immunization, then strengthen it after 14 days and observed the incidence of Wistar-RA group and Lewis-RA group. The degree of paws swelling and the titer of serum anti CII antibody were determined. The pathological changes in toe and joint tissues were examined at 12 weeks, and the expressions of VEGF, IL-6, IL-10 and IL-17A in the synovial membrane of ankle joint were detected. Results After collagen induction,the Wistar and Lewis rats showed paw swelling after 10 d and 14 d,and peaked at 21 d and 24 d,the titer of serum anti CII antibody was significantly increased at third week(P< 0.01), and arthritisindex(AI)was also significantly increased(P< 0.01). In the Wistar-RA rat group, the rate of molding was 80%, and at fifth weeks, the swelling of the paws subsided and went into a flat level. The molding rate of the Lewis-RA group was 100%,at the seventh week,the swelling of paws subsided and went into a flat level. At 12 weeks,the two model groups showed severe articular cartilage erosion, synovial hyperplasia and inflammatory cell infiltration, neovascularization and pannus formation in the joint synovium,and the bone mineral density of the femur and tibia of the hind limbs was significantly decreased(P<0.01). The expression of VEGF,IL-6 and IL-17A in synovium was significantly increased(P< 0.05,P< 0.01). The expression of IL-10 was obviously decreased(P< 0.01). Compared with theWistar-RA group,the paw volume and paw thickness were increased for a longer time in the Lewis-RA group,AI was higher than that of the Wistar-RA group,synovial angiogenesis and pannus formation were more distinct, the expression of VEGF in synovium was significantly higher than that of Wistar-RA group(P< 0.05), while the expression of IL-17A was significantly lower than that in the Wistar-RA group(P< 0.05). Conclusions Both the Wistar-RA rat model and Lewis-RA rat model show jointswelling,deformation and decreased activity. AI is increased,the expression of VEGF,IL-6 and IL-17A increased,and the expression of IL-10 decreased,which are consistent with the clinical manifestation. The Wistar-RA rat model has a short duration of swelling, while the Lewis-RA rat model has a longer swelling duration and more severe joint damages. The neovascularization and pannus formation are more obvious. The expression of IL-17A in the Wistar-RA rat model is higher, while the Lewis-RA model has a highly expressed VEGF,which may be related to its pathological characteristics.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2018(028)004【总页数】9页(P19-26,37)【关键词】类风湿关节炎;牛II型胶原;Wistar大鼠;Lewis大鼠;病理特点【作者】施佳君;陈方明;马全鑫;陈诚;陈姣姣;郁晨;陈民利【作者单位】浙江中医药大学比较医学研究所动物实验研究中心,杭州 310053;浙江中医药大学比较医学研究所动物实验研究中心,杭州 310053;浙江中医药大学比较医学研究所动物实验研究中心,杭州 310053;浙江中医药大学比较医学研究所动物实验研究中心,杭州 310053;浙江中医药大学比较医学研究所动物实验研究中心,杭州 310053;浙江中医药大学比较医学研究所动物实验研究中心,杭州 310053;浙江中医药大学比较医学研究所动物实验研究中心,杭州 310053【正文语种】中文【中图分类】R-33类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性、炎症性、系统性的自身免疫性疾病，其主要的病理学特征为关节滑膜组织增生以及骨、软骨等结构进行性病变，最终导致关节畸形，功能丧失，严重影响人们的生活质量[1]。
Ⅱ型胶原蛋白与弗氏佐剂诱导关节炎小鼠模型的建立
Ⅱ型胶原蛋白与弗氏佐剂诱导关节炎小鼠模型的建立周夏娟;应旭旻【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2017(37)15【摘要】目的探讨成功建立胶原诱导关节炎(CIA)小鼠模型及如何提高建模成功率.方法选择8周龄的雄性DBA/1J小鼠20只,随机分为正常组(n=10),CIA实验组(n=10),100 μg牛Ⅱ型胶原蛋白溶于完全弗氏佐剂,在尾根部皮下注射,第21天再次注射50~100 μg.免疫后观察小鼠的关节改变,按小鼠关节疾病严重程度评分.结果正常组均未发病,实验组约4 w后开始第一个足趾出现肿胀,第7周发病率为50%,平均关节炎指数(MAI)为2.1,10 w后CIA小鼠模型的发病率为90%,MAI为7.1.结论选择近交系雄性的DBA/1J小鼠,且选择小鼠尾根部皮下注射Ⅱ型胶原蛋白与弗氏佐剂相对发病率较高.【总页数】2页(P3689-3690)【作者】周夏娟;应旭旻【作者单位】浙江中医药大学附属第一医院,浙江杭州 310006;杭州市急救中心【正文语种】中文【中图分类】R392【相关文献】1.空肠弯曲杆菌与弗氏完全佐剂诱导系统性红斑狼疮样小鼠模型的建立 [J], 刘文斌;杨秀敏;周宁;王月华;张海霞;任德成;杜冠华2.Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较 [J], 林红;贺永怀;黎燕;陆应麟;沈倍奋3.骨髓间充质干细胞来源的外泌体对弗氏完全佐剂诱导类风湿性关节炎大鼠的治疗作用 [J], 范爱玉;谢卫勇;骆芳茗;范爱霞4.木樨草素对弗氏佐剂诱导大鼠关节炎的改善作用及其机制 [J], 施凤超;朱文峰;朱宇伟;王成;周敦5.薯蓣皂苷对弗氏佐剂诱导类风湿关节炎大鼠的影响 [J], 刘佳钰;李锐;周威;张光伟;倪丹红;刘丹;李娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠佐剂性关节炎模型的建立与评价
图 1 致炎组月国窝部淋巴结内淋巴细 胞 透 射 电 镜 照 片 可 见 淋 巴细胞含有丰富的细胞器，细胞线粒体和内质 网 肿 胀，溶 酶 体 增 多 > 6 000
CHEN Bai-song，XU Yu-dong，ZHONG Shu-gi，et al （ Department Of AnatOmy ，Harbin Medical Uniuersity ，Harbin 150086，China）
Abstract：Objective To estabiish adjuvant arthriti（s AA）modeis in rats induced by CFA and take a comprehensive evaiuation . Methods We injected CFA to the ieft foot of rats . The articuiar sweiiing degree was scored，the enzyme-iinked immunoabsorbent assa（y ELISA）was used to detect the contents of the Coiiage !antibody in serum，the transmission eiectron microscope（ TEM）was used to observe the uitramicrostructure of iymphoid node in fossa popiitea and synovium in joint . Results The ievei of the C! antibody in serum of modei group was remarkabiy increased after CFA injected，and it was confirmed typicai pathoiogicai changes of RA by TEM . Conclusion The AA modei is successfuiiy buiit in rats induced by CFA . It provides more satisfactory materiai for the study of the pathogenesis and therapeutic effect of drugs . Key words：CFA；adjuvant arthritis；uitramicrostructure；rats
改良弗氏完全佐剂制备大鼠类风湿性关节炎模型
改良弗氏完全佐剂制备大鼠类风湿性关节炎模型马玉琛;段斐;孟明;郭晓燕;寇素茹;马幼敏【期刊名称】《现代预防医学》【年(卷),期】2008(35)10【摘要】[目的]建立改良弗氏完全佐剂制备大鼠类风湿性关节炎模型。
[方法]将液体石蜡、Tween80按3︰1的比例混合均匀,高压灭菌后4℃保存,使用时加入卡介苗(10mg/ml)、Ⅱ型胶原纤维(5mg/ml)配制成弗氏完全佐剂(CFA),充分研磨混匀乳化后,取0.1ml注射于大鼠左后足垫皮内致敏。
[结果]AIA大鼠致炎后15h,致炎侧足肿胀达高峰,表现为早期的炎症反应,持续2～3d逐渐减轻,7～8d后再度肿胀,继发病变于致炎后10d左右出现,表现为对侧和前足肿胀,且进行性加重,大鼠行动不便,体重下降,表现类似人类RA,造模成功。
[结论]改良弗氏完全佐剂可成功制备大鼠类风湿性关节炎模型。
【总页数】2页(P1989-1989)【关键词】改良弗氏完全佐剂;佐剂诱导性关节炎;Ⅱ型胶原纤维【作者】马玉琛;段斐;孟明;郭晓燕;寇素茹;马幼敏【作者单位】保定市252医院中医科,保定071000;河北大学基础医学教研中心【正文语种】中文【中图分类】R593.22【相关文献】1.环瓜氨酸肽辅助完全弗氏佐剂致关节炎大鼠的模型研究 [J], 巨少华;胡勇;任香怡;代渊;陈欢;魏江平;徐世军2.抗炎口服液对改良弗氏完全佐剂诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响 [J], 马玉琛;段斐;孟明;郭晓燕;寇素茹;马幼敏3.弗氏完全佐剂致大鼠急性膝关节炎动物模型制备 [J], 陈德森;李莉;吴胜英;彭吉霞;李贤玉4.不同剂量弗氏完全佐剂对类风湿关节炎模型大鼠复制的影响 [J], 彭传玉;罗磊;胡玲;宋小鸽;唐照亮;吴子建;蔡荣林;郝峰;胡吴斌5.骨髓间充质干细胞来源的外泌体对弗氏完全佐剂诱导类风湿性关节炎大鼠的治疗作用 [J], 范爱玉;谢卫勇;骆芳茗;范爱霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎动物模型的建立及影响因素
Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎动物模型的建立及影响因素
周茹;杨以阜;左建平
【期刊名称】《中国药理学通报》
【年(卷),期】2006(22)12
【摘要】类风湿性关节炎(RA)是一种顽固性、致畸性自身免疫性疾病.Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎(CIA)表现为严重的多关节性炎,并能引起慢性、破坏性关节损伤,与RA有很多相似之处,目前国际上广泛用于RA发病机制的研究以及创新药物的研发.该文就CIA实验动物模型的建立以及CIA发生病变的主要影响因素进行综述.【总页数】4页(P1532-1535)
【作者】周茹;杨以阜;左建平
【作者单位】中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所免疫药理室,上海,201203;中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所免疫药理室,上
海,201203;中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所免疫药理室,上
海,201203
【正文语种】中文
【中图分类】R-05;R-332;R363-332;R593.22;R684.3
【相关文献】
1.颗粒蛋白前体缺陷型小鼠的鉴定及Ⅱ型胶原诱导颗粒蛋白前体缺陷型小鼠关节炎模型的建立 [J], 张鹏;韩晓凤;夏飞;李美玲;郭风劲
2.Ⅱ型胶原蛋白与弗氏佐剂诱导关节炎小鼠模型的建立 [J], 周夏娟;应旭旻
3.乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白调控胶原诱导性关节炎小鼠肠系膜淋巴结Treg/Th17平衡[J], 王浩;冯知涛;朱俊卿;李娟
4.改进型胶原诱导的小鼠关节炎动物模型的建立 [J], 刘家望;王宏伟;许江城;余锐萍
5.大鼠Ⅱ型胶原蛋白的提取及关节炎动物模型的诱导 [J], 陶培;朱文华;韩燕;宁启兰;张富军;孟列素;吕社民
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第7卷 第1期 中国实验动物学报 Vol.7No.1 1999年6月 Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica June,1999 型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较林 红 贺永怀* 黎 燕* 陆应麟* 沈倍奋*(中国协和医科大学 中国医学科学院药用植物研究所,北京)摘要 目的 对 型胶原蛋白(C -A)和弗氏完全佐剂(A-A)大鼠关节炎模型在大体外观和足部组织病理学切片等方面进行观察比较。
方法 分别采用 型胶原蛋白和弗氏完全佐剂诱导建立大鼠关节炎模型,利用排水法对大鼠足部体积进行测定,并将大鼠后足进行组织病理学切片观察。
结果 从大体外观和足部病理切片上两种大鼠模型均显示出有明显的病变,但C -A大鼠与A-A大鼠比较,滑膜增生及软骨破坏等继发性病变特征更为明显,关节炎持续时间也较长,更接近于人的类风湿性关节炎。
结论 C -A大鼠模型与A-A相比是研究RA较为理想的动物模型。
关键词 类风湿性关节炎 型胶原蛋白大鼠关节炎 弗氏完全佐剂大鼠关节炎类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以慢性多关节炎症为主要表现的全身性自身免疫性疾病,病因和发病机制尚未完全清楚。
在RA中,滑膜的持续性增生和软骨及骨的破坏是其重要的病理学特征。
RA的动物模型有多种,其中较为经典的是弗氏完全佐剂诱导的大鼠关节炎和 型胶原蛋白诱导的大鼠关节炎模型。
本文将对这两种大鼠关节炎模型的大体外观、足部肿胀程度以及组织病理学观察等方面进行比较研究,以选择更为理想的动物模型。
材料与方法1 实验动物 Wistar大鼠,雌性,4~6周龄,30只,由军事医学科学院动物中心提供。
2 主要试剂 牛源性 型胶原蛋白(C ollagen ,C ,from bovine nasal septum),酸可溶性,美国Sigma公司产品;弗氏不完全佐剂(Freund s Adjuvant Incomplete,FI A)美国Sigma公司产品;卡介苗(BCG)购于北京卫生部生物制品研究所。
3 大鼠关节炎的诱导方法型胶原蛋白诱导的大鼠关节炎模型的建立 参照文献!1∀的方法,将酸溶性 型胶原蛋白(collagen ,C )用弗氏不完全佐剂配成C 浓度为2 5mg ml的乳剂,按每只大鼠100 l乳剂含C 250 g,于左后足跖皮内注射致炎。
佐剂性关节炎的诱导按照常规方法!2∀:将卡介苗(B CG)于80#灭活1h,加入到弗氏不完全佐剂中(终浓度10mg ml),充分乳化混匀制成弗氏完全佐剂(FCA),每只大鼠注射100 l;用注射100 l生理盐水 只的大鼠作为正常对照组。
* 军事医学科学院基础医学研究所4 大鼠关节炎足体积的测定方法!3∀采用排水法测足部体积:在大鼠足部踝骨关节突出部位划一条线作为标记,用一特制量筒,灌满水后,将大鼠足部插入,使水面与踝骨上的标记处于同一界面,另用一个烧杯接从量筒侧口排出的水,测量排出水的体积,即为所测大鼠足部的体积,每只足每次测量重复5次。
5 大鼠足部病理切片制备乙醚麻醉引颈处死大鼠后,切取掌趾部,立即放入缓冲福尔马林溶液中固定,常规梯度乙醇脱水,石蜡包埋、切片,片厚约3~5 m,HE 染色观察。
结 果1 注射诱导后大鼠的外观变化随机将大鼠分成3组,每组10只,分别用于 型胶原蛋白诱导处理组(C -A)、弗氏完全佐剂诱导处理组(A-A)和正常对照组(Control)。
C 和FCA 注射诱导后第二天,大鼠注射足即有明显的肿胀,出现急性免疫反应。
第14~21d 后,C 诱导组大鼠对侧足出现红肿,至第35~45d 后,大鼠前足出现红肿,并有关节变形。
而A-A 大鼠则到注射后第18~25d 左右才出现对侧足的肿胀。
在两种关节炎大鼠中,C -A 大鼠关节炎的持续时间较长,到四个月后肿胀仍较明显。
A-A 大鼠至四个月后足部的肿胀则逐渐消退。
如图1~3。
图1 正常大鼠注射后第35天的外观图图2 A-A 关节炎大鼠注射后第35天的外观图2 中 国 实 验 动 物 学 报 第7卷图3 C 关节炎大鼠注射后第35天的外观图2 C 诱导关节炎的大鼠足体积改变用排水法测量大鼠足部体积,观察到注射后第14~21天C -A 大鼠后足体积有明显变化,C -A 大鼠的左后足和右后足体积大于正常对照组(P<0 05),至第35~45天后足的肿胀更为明显(P<0 01)。
(见表1)。
注射后第35天可以检测到C -A 大鼠的四足体积均显著大于正常对照组(P<0 01),(见表2),以上数据均用成组资料t 检验方法进行统计分析。
表1 不同时间C 大鼠左后足和右后足体积的变化足 体 积 (cm 3)注 射 后 天 数 (d)014 35 正常大鼠左后足1 19∃0 131 37∃0 051 64∃0 07正常大鼠右后足1 16∃0 041 33∃0 081 67∃0 06C 大鼠左后足(注射足)1 14∃0 162 59∃0 53*2 67∃0 42**C 大鼠右后足(对侧足)1 15∃0 101 86∃0 19*2 24∃0 38** * P<0 05 ** P<0 01 n=10表2 注射后35d C 大鼠四足体积的变化左后足(cm 3)右后足(cm 3) 左前足(cm 3) 右前足(c m 3) 正常大鼠1 67∃0 081 64∃0 070 59∃0 020 59∃0 01C 大鼠2 67∃0 42**2 24∃0 38**0 71∃0 06**0 73∃0 09****P<0 01 n=103 C -A 和A-A 发病情况的比较注射诱导后第2天两组大鼠的注射足均发生明显的肿胀,到第14~20天左右,C -A 组就出现对侧足的肿胀,而A-A 组则约在注射后第18~25天左右才出现对侧足的反应。
到注射后4个月,C -A 大鼠足部的红肿仍然维持,而A-A 大鼠足部的红肿则逐渐消退,说明具有一定的自限性。
C -A 与A-A 比较,肿胀关节比率、发病率等有明显差别(P<0 05),(见表3)。
表3 C 关节炎大鼠与佐剂性关节炎大鼠的比较组 别肿胀关节比率发病率C -A72 806 10A-A24 803 103第1期 型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较表中肿胀关节比率和发病率分别表示:肿胀关节比率= 每只大鼠四肢肿胀关节数每只大鼠四肢总关节数(=80)发病率= 出现对侧关节肿胀大鼠只数注射大鼠只数(=10)4 C -A 与A-A 大鼠足部病理切片的观察比较于注射后35d,引颈处死大鼠,切取四肢,置于缓冲福尔马林溶液中固定,石蜡包埋,切片,经HE 染色后,光镜下观察。
C -A 大鼠右后足(即对侧足)和前足病变关节中出现滑膜增生,可达6~8层,呈乳头状突起,细胞排列不规则,可见有淋巴细胞侵润,软骨面破坏呈锯齿状,有些软骨帽消失,严重的甚至炎性细胞已侵蚀到软骨中;在注射足(左后足)中则只观察到关节周围有大量的淋巴细胞侵润,分析可能左后足注射部位主要表现为注射免疫引起的炎性反应,而对侧足为继发性病变,呈现滑膜增生和软骨破坏等异常变化。
正常对照组大鼠足部切片未见炎性细胞侵润、滑膜增生和软骨破坏等异常改变如图4~8。
图4 正常大鼠后足病理切片,HE 染色,%25,无异常变化图5 A-A 大鼠左后足病理切片,HE 染色,%104 中 国 实 验 动 物 学 报 第7卷图6 A-A 大鼠右后足病理切片,HE 染色,%10图7 C -A 大鼠左后足病理切片,HE 染色,%25图8 C -A 大鼠右后足病理切片,HE 染色,%25,示滑膜增生5第1期 型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较6 中 国 实 验 动 物 学 报 第7卷讨 论临床上RA患者急性期病变出现急性炎症反应,关节肿胀,滑膜充血、水肿、组织疏松,慢性病变则表现为滑膜组织的不规则增厚,关节软骨破坏等,可以看出动物模型的病理改变与临床上的病变是相似的。
此外,我们在关节炎大鼠掌趾部的病理切片中观察到上述现象,这与RA多发于手足小关节,尤其是近侧指间关节、掌指关节、跖趾关节的特征是相一致的。
上述结果表明,我们所建立的C -A大鼠模型在病理学的变化上,接近人的类风湿性关节炎。
A-A 大鼠足部的病理切片中主要表现为大量炎性细胞侵润,而滑膜增生和软骨破坏则不如C -A 大鼠明显,这与文献的报道基本相同,佐剂性关节炎缺乏慢性病理过程,病变具有一定自限性。
参 考 文 献1 Seki N.J Immunol.1988,140(5)&14772 徐叔云,等 药理实验方法学 人民卫生出版社,第二版,1991:pp723-7253 马东来,等 中国实验动物学杂志,1995,7(3)&13Rheumatoid Arthritis Model in Rat Induced byType Collagen and Freund s Complete AdjuvantLin Hong,et al(Ins ti tute of Medicinal Plant Development Chi nese Academy of Medical Sciences,Beijing))Objective Type collagen-induced arthritis(C -A)in rats has been compared with Freund s complete adjuvant arthritis(A-A)about legs size and pathological examination.Methods The legs size in C -A and A-A rats was measured by water exclusion.The legs of the arthritis rats were taken and cut section for pathological exa mination.Results The legs size and pathological section showed tha t some aspects including duration of arthritis,synovial membrane proliferation and cartilage dama ge were more significant in rats with C -A than those with A-A.Conclusions Comparing with A-A arthri tis,C -A arthritis is a good animal model for rheumatoid arthritis.Key words Rheumatoid arthritis Animal model Type collagen。