肥大细胞对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇分配和流出的影响课件
油酸对THP_1巨噬细胞源性泡沫_省略_转运体A1表达和胆固醇流出的影响_唐朝克
Dec ., 2003
唐朝克等 :油酸对 THP-1 巨噬细胞源性泡沫细胞 ABCA1 表达和胆固醇流出的影响
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应产物 10 μL 进行 1 .5 % 琼脂糖凝胶电泳 , 溴化乙 锭染色 , UVP 型凝胶图像分析系统摄图 , 并分析各 组目的基因及 GAPDH 基因灰度值 , 以二者的比值 代表 ABCA1 的表达 。 1 .9 Western 印迹检测 ABCA1 蛋白表达
胆固醇流出检测 按文献[ 8] 描述的 方法进行 。 THP-1 巨噬细胞用 0 .2 mCi L [ 3H] 胆固醇和50 mg L ox-LDL 及含有 10 %小牛血清 RPMI 1640 培养液共同 培育 48 h 之后 , 用 PBS 液洗涤细胞 , 加 200 mmol L 油酸和含 2 g L 牛血清白蛋白 RPMI 1640 培养液培 育细胞不同时间 。再用 PBS 液洗涤细胞 , 在无血清 含 10 mg L 载脂蛋白 A-I 新培养液中培育细胞 12 h , 用闪烁计数法检测培养液和细胞的[ 3H] 胆固醇 。胆 固醇流出率 =(培养液 cpm 值 ÷ 总 cpm 值)×100 %, 其中总 cpm 值 =(培养液 cpm 值 +细胞 cpm 值)。 1 .5 油红 O 染色和脂质染色的半定量分析
THP-1 单 核 细 胞 用含 有 10 %小 牛 血清 RPMI 1640 培养液 , 37 ℃、 5 % CO2 培养箱中静置培养 。 培养液中加青霉素和链霉素各 1 .0 ×105 IU L , 在每 次实验前用 160 nmol L 佛波酯培 育 THP-1 细胞 24 h , 诱导使其分化成巨噬细胞 。巨噬细胞在 50 mg L 氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein , ox-LDL)中培育 48 h , 使细胞转变成泡沫细胞 。 1 .4 胆固醇流出
肥大细胞增生症ppt课件
• 肿瘤性与反应性肥大细胞增生的鉴别： 类胰蛋白酶、CD117免疫组化标记可以确认肥大细胞浸润， 检测CD25可以鉴别肿瘤性与反应性增生的肥大细胞。
诱发介质释放的因素
• 昆虫叮咬、搔抓、感染、辛辣食物、水生贝壳类 动物、摄入酒精和某些干酪、温度过高或过低、 身体疲劳、精神紧张、侵袭性操作、某些药物： 如非甾体类抗炎药、阿片镇痛药、水杨酸盐、普 鲁卡因、维生素B、奎宁、东莨菪碱、阿托品、 多粘菌素B等。
症； • ASM侵袭性系统性肥大细胞增生症； • SSM冒烟型系统性肥大细胞增生症 • MDS骨髓增生异常综合征； • MPD骨髓增殖性疾病； • ANC中性粒细胞绝对值
鉴别诊断
• 系统性肥大细胞增生症应与肥大细胞活化和介质释放有相 似临床表现的疾病相鉴别，如血管性水肿、类癌综合征、 嗜铬细胞瘤、血管活性肠肽瘤、骨转移瘤、胃泌瘤。
系统性肥大细胞增生症脏器受累的表现
• 皮肤表现：色素性荨麻疹最常见，也可为播散性皮肤肥大 细胞瘤
• 造血系统：贫血、血小板减少 • 肝脾增大、门脉高压 • 淋巴结肿大 • 消化道吸收不良 • 溶骨性病变、病理性骨折
皮肤型肥大细胞增生症（CM）
• 常见于儿童 • 1岁内起病 • 病变仅局限于皮肤 • 有自发缓解趋势
肥大细胞增生症的治疗
• 目前对于肥大细胞增生症没有特效治疗，主要是对症处理。 避免上述诱发因素，以免诱发肥大细胞释放炎性介质，引 起一系列的症状。
• H1、H2受体拮抗剂：雷尼替丁、酮替芬、西替利嗪 • 白三烯抑制剂：孟鲁司特可缓解潮红、瘙痒、胃肠痉挛性
疼痛 • 色苷酸钠可减轻胃肠道症状 • 介质引起的过敏反应，首选肾上腺素。发生低血压、晕厥
肥大细胞的结构和功能特点_张文学
肥大细胞的结构和功能特点张文学(河南师范大学生命科学学院新乡453007)摘要本文对肥大细胞的起源、分布、形态结构和功能等的特点进行了概述。
关键词肥大细胞免疫细胞防御功能肥大细胞是动物和人体内一种正常的细胞成分。
1878年德国学者Paul Ehrlich首次在大鼠的结缔组织中发现了肥大细胞,并在他的博士论文中对肥大细胞胞质所含的具有独特染色特点的颗粒作了较为详细的描述。
通过约130年的研究,对肥大细胞的认识不断加深,发现肥大细胞在起源、分布、形态结构和功能等方面都有独特之处,且具有重要的防御功能。
1肥大细胞的起源众所周知,骨髓是造血器官,血液中各种血细胞都来自骨髓中的造血干细胞。
研究发现:肥大细胞也是骨髓造血干细胞的后代,但它不像血细胞位于血液中,而是常驻在皮肤真皮、消化管管壁、呼吸道管壁等全身各处的结缔组织中;来源于骨髓的血细胞一般是在骨髓中发育成熟后再离开骨髓进入血液,而来源于骨髓的肥大细胞则是没有发育成熟就离开了骨髓,即是以肥大细胞前体的形式离开骨髓,随血流迁移至结缔组织,并在那里增殖分化为形态上特异的成熟肥大细胞;大多数来源于骨髓的细胞成熟后不再具有分裂增殖的潜能,而成熟的肥大细胞则仍然具有分裂增殖的能力[1,2]。
2肥大细胞的分布肥大细胞的分布有两个特点:¹肥大细胞广泛分布于全身结缔组织中,但不是均匀分布,常常有规律地排列在各组织器官的小血管、毛细血管、神经末梢、神经丛周围。
肥大细胞的这种分布方式有利于该细胞分泌的物质被神经、血管的细胞所利用,或进入血管之中,也有利于神经细胞、血管细胞与肥大细胞的相互作用[2,3]。
又有新的证据表明肥大细胞和神经细胞可相互作用:接触肥大细胞的神经纤维内常有神经肽,此肽可刺激肥大细胞,接触神经纤维的肥大细胞表面有神经肽受体。
因此,当神经兴奋时可导致与其紧密相邻的肥大细胞活化;另一方面,肥大细胞合成释放的类胰蛋白酶能与神经细胞膜上蛋白酶活化受体结合,可刺激神经细胞,肥大细胞分泌的TNF-A(肿瘤坏死因子-A)和神经生长因子可降低神经细胞兴奋的阈值。
巨噬细胞PPT课件
肉芽肿的主要细胞成分：
①上皮样细胞（epitheloid cell） ：胞质呈淡粉色，略呈颗粒状，界限不清，细胞 核呈圆形或长圆形，有时核膜折叠，染色浅淡，核内可有1～2个核仁。上皮样细胞 核内常染色质增多；核仁增大并靠近核膜；线粒体、滑面内质网和溶酶体增多；粗 面内质网、核蛋白体和高尔基复合体增多；细胞膜的Fc和C3b受体明显减少，说明 上皮样细胞具有向细胞外分泌的功能，而吞噬功能降低。（上皮样细胞来源于巨噬 细胞）
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3．慢性肉芽肿性炎 inflaCmhmroantiicongranulomatous
概念 慢性肉芽肿性炎：是一种特殊的慢性炎症，以肉芽 肿形成为特点。 肉芽肿（granuloma） ：是以巨噬细胞结节状增生 为主形成的境界清楚的结节状病灶。中央还可见淋 巴细胞、浆细胞、中性粒细胞及中心坏死。
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上皮样细胞(epithelioid cell)
• 上皮样细胞(epithelioid cell)：上皮样细胞胞 体较大，胞浆丰富，细胞之间境界不清， 多分布于干酪样坏死灶周围，其胞核呈圆 形或卵圆形，染色质少，呈空泡状，可见 核仁，因这种细胞形态与上皮细胞类似， 故有上皮样细胞之称。上皮样细胞是因巨 噬细胞吞噬一些不能被消化的细菌或受到 其它抗原物质的长期刺激转化而来的。
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（四）溃疡（Ulcer）
概念：组织和器官表面局部的缺损或空洞，常由 炎性坏死组织脱落或排出所致。
溃疡早期有显著中性白细胞浸润，伴血管扩张，在反复发生的慢性溃疡周 围成纤维细胞增生，疤痕形成伴慢性炎细胞聚集。
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（五）炎性息肉 （Inflammatory Poly）
是粘膜和间质增生明显形成的向外突起、底部 有蒂的肿物，如鼻息肉、肠息肉、宫颈息肉等。
THP_1巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定
稳定可靠的泡沫细胞模型，对研究 =A 及筛选抗 =A 药物有重要的意义 B ! C 。目前实验研究中通常用氧化型 低 密 度 脂 蛋 白 ’ 8DEFE ) 或 乙 酰 化 低 密 度 脂 蛋 白 ’ ,7EFE ) 孵育单核 % 巨噬细胞或平滑肌细胞来复制泡 沫 细 胞 模 型 ， 可 用 的 细 胞 有 9GH % #、 I(:&、 J=K!5<6 &、鼠腹腔巨噬细胞、动物主动脉平滑肌细 胞 ， 其 中 较 多 文 献 报 道 运 用 9GH % # 细 胞 B : % < C 。 9GH % # 为人类单核细胞株，需经佛波酯 ’ H?8@L8. %
UCV
"N X 丙二醇冲洗 N 7’*，再用 6FI 洗三次，置显微镜 下观察并摄像。 !" ( *+,- . /0 测定胆固醇的条件 ’1 ) !" (" ! 色谱条件 色谱柱： \8^.$/’+ ,B" 柱 R !> B 77 ] BN: 77， @ !7 S ； 流 动 相 ： 甲 醇 M 水 R ;: _ B: S ； 流 速：:> N 7K Z 7’*；柱温：室温；进样量：B: !K。 !" (" # 质 谱 条 件 离 子 源 为 大 气 压 化 学 电 离 源 R O6,A S ；放电电流 N !O；气化温度 @N: W ；离子传输 毛细管温度 !N: W ；鞘气 R ?! S 流速 @: %$‘’($%$8 1*’(/； 辅助气 R ?! S 流速 N %$‘’($%$8 1*’(/；正离子方式检测；扫 描方式为选择性离子检测 R IA< S ；检测离子：胆固醇， U < a \ V a ，7 Z b @C;，豆甾醇， U < a \ V a ，7 Z b @;N。 !" 2 标准曲线的制备 取胆固醇对照品适量，精密称 定，加无水乙醇制成每毫升含 @:: !2 的储备溶液。 分别精密量取 N，B:，!:，@:，D:，N:，B:: !K 胆固 醇储备液至 B: 7K 量瓶中，各加 B:: !K 浓度为 !:: !2 Z 7K 的豆甾醇内标储备液，用甲醇稀释至刻度， 摇 匀 ， 得 质 量 浓 度 为 :> B@"N， :> !H;， :> NN"， :> "@H，B> BBC， B> @;N， !> H;: !2 Z 7K 的胆固醇对照 品系列溶液，将上述对照品系列溶液分别注入液质联 用仪，进样量为 B: !K，按前述色谱、质谱条件记录 图谱。以胆固醇的质量浓度为横坐标 R ! S ，其峰面积 与内标峰面积的比值为纵坐标 R " S ，绘制标准曲线。 !" 1 细胞内胆固醇的提取 ’1 ) 细胞接种于 C 孔培养板 内，培养结束后，吸去上清液，冰冻 6FI 洗三次， 用细胞刮刀刮取细胞，加 B 7K 冰冻 :> ; X 生理盐水 重悬细胞，反复冻融三次，冰浴中超声破碎 N 7’*， 得细胞裂解液，分装，每份 !:: !K， M D: W 贮存， 用于测定总胆固醇和游离胆固醇。 总胆固醇的提取：取 BC: !K 上述细胞裂解液，加 @:: !K BN X cG\ 乙醇溶液，N: W 水解 ! -，加正己烷 M 异丙醇 R D _ B S N:: !K 涡漩 @: /， D W 下 @C:: $ Z 7’* 离心 N 7’*，取上层。继用正己烷 M 异丙醇 R D _ B S 如 上法抽提两次，合并三次抽提的有机相，减压真空干 燥，加 !: !K 内标储备液，用甲醇并定容至 ! 7K， 摇匀，作为总胆固醇供试品溶液。 游离胆固醇的提取：取 BC: !K 上述细胞裂解液， 加 @:: !K 乙醇，加正己烷 M 异丙醇 R D _ B S N:: !K 涡漩 @: /，D W 下 @C:: $ Z 7’* 离心 N 7’*，取上层。继用正 己烷 M 异丙醇 R D _ B S 如上法抽提两次，合并三次抽提 的有机相，减压真空干燥，加 !: !K 内标储备溶解并 定容至 ! 7K，摇匀，作为游离胆固醇供试品溶液。 !" 3 *+,- . /0 分析细胞内胆固醇与胆固醇酯的含 量 将正常组和模型组细胞分别用上述方法制得样品
脂联素对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1及胆固醇含量的影响及机制
脂联素对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1及胆固醇含量的影响及机制郭晓红;边云飞;梁斌;白瑞;肖传实【摘要】Objective Effects of adiponectin on RAW264.7 macrophage derived foam cells and cholesterol content to ABCA1) objective and its possible mechanisms.Methods RAW264.7 cells cultured in vitro, joined the 20mg/L oxidized low density lipoprotein(ox-LDL) were incubated for 48 h, the induced into foam cells, with different concentrations(0,1,5,10 μg/mL)of adiponectin 24h expression of RT-PCR ABCA1 mRNA, determination, HPLC determination of intracellular cholesterol content. To observe the effects of adiponectin on the expression of ABCA1 in foam cells.ResultsThe expression of adiponectin was significantly increased in RAW264.7 macrophage derived foam cells in ABCA1 mRNA(P<0.05), and increased cellular cholesterol content, in a dose-dependentmanner(P<0.05).Conclusion Adiponectin can increase the macrophage derived foam cell ABCA1 transcription level, promote cholesterol efflux, delay the occurrence and development of AS.%目的：探讨脂联素对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1及胆固醇含量的影响及其可能的机制。
中链脂肪酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响
中链脂肪酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响张新胜;杨雪艳;王觐;张永;刘英华;徐庆;于晓明;刘钊;薛长勇【摘要】目的观察中链脂肪酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响.方法采用WST-1试剂检测200μmmol/L浓度的不同脂肪酸:辛酸(C8∶0)、癸酸(C10∶0)、豆蔻酸(C14∶0)、棕榈酸(C16∶0)、硬脂酸(C18∶0)、油酸(C18∶1)、亚油酸(C18∶2)、α-亚麻酸(C18∶3)对THP-1细胞活性的影响;建立ApoA1介导的胆固醇流出细胞模型;不同浓度脂肪酸(0μmmol/L、100μmmol/L、200μmmol/L)干预富集3H-胆固醇的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24h后,用液体闪烁计数仪检测并计算胆固醇的流出率.结果不同脂肪酸在200μmmo l/L浓度时,对THP-1细胞无细胞毒性作用(P＞0.05);与空白组比较,ApoA1介导的细胞胆固醇流出明显增加(P＜0.05);随着脂肪酸浓度的增加,C8∶0、C18∶0、C18∶1和C18∶3脂肪酸对细胞胆固醇流出影响差异有统计学意义(P＜0.05);在200μmmol/L浓度时,C8∶0和C18∶3脂肪酸与对照组比较更能促进细胞胆固醇的流出(P＜0.05),且C8∶0脂肪酸对促进胆固醇流出的影响明显高于C10∶0、C14∶0、C16∶0、C18∶0、C18∶1、C18∶2脂肪酸(P＜0.05).结论中链脂肪酸C8∶0能够促进THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇的流出,且在200μmmol/L浓度时明显优于其他脂肪酸.【期刊名称】《解放军医学院学报》【年(卷),期】2014(035)012【总页数】4页(P1245-1248)【关键词】中链脂肪酸;脂肪酸;巨噬细胞;胆固醇流出【作者】张新胜;杨雪艳;王觐;张永;刘英华;徐庆;于晓明;刘钊;薛长勇【作者单位】解放军总医院营养科,北京100853;解放军总医院营养科,北京100853;解放军总医院营养科,北京100853;解放军总医院营养科,北京100853;解放军总医院营养科,北京100853;解放军总医院营养科,北京100853;解放军总医院营养科,北京100853;解放军总医院营养科,北京100853;解放军总医院营养科,北京100853【正文语种】中文【中图分类】R589.21 细胞及材料 THP-1细胞株由北京协和医科大学细胞库提供；RPMI-1640培养基(改良型)、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)均购自Gibco公司；佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA)、载脂蛋白A1(apolipoprotein，ApoA1)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)均购自Sigma公司；低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)购自上海生工生物工程有限公司；3H-胆固醇购自Perkin Elmer公司；6孔板、24孔板、96孔板及培养瓶购自Corning公司；WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒购自凯基生物公司；C8∶0、C10∶0、C14∶0、C16∶0、C18∶0、C18∶1、C18∶2、C18∶3脂肪酸均购自Sigma公司。
NF-κB途径介导Chemerin 抑制THP-1源性巨噬泡沫细胞ABCAl表达和降低胆固醇外流
NF-κB途径介导Chemerin 抑制THP-1源性巨噬泡沫细胞ABCAl表达和降低胆固醇外流谢霆;陈新忠;董念国;夏东升;杨文凯;刘海峰【摘要】目的观察脂肪因子Chemerin是否调节胆固醇流出和巨噬泡沫细胞脂滴蓄积,以及对巨噬泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase-1,ACAT1)表达和NF-κB活化的影响.方法佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,随后加入胆固醇和ox-LDL培养促进巨噬细胞转化为巨噬泡沫细胞,免疫荧光染色检测巨噬细胞表面抗原CD68的表达,油红O染色后观察泡沫细胞形态,脂肪因子Chemerin干预巨噬泡沫细胞,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出变化,油红O染色观察细胞内脂滴变化,实时PCR和Western blot检测ABCA1及 ACAT1 mRNA和蛋白表达水平.Sandwich ELISA法检测巨噬泡沫细胞NF-κB活化情况.实时PCR检测NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)预处理后,Chemerin再干预时ABCA1表达的变化.结果 Chemerin抑制巨噬细胞内胆固醇流出,促进脂滴蓄积,下调ABCA1 mRNA和蛋白的表达,增加NF-κB活化,差异有统计学意义(均P＜0.05),且ABCA1 mRNA表达与Chemerin浓度呈负相关,r=-0.936(P＜0.05),NF-κB活化程度与ABCA1 mRNA表达呈负相关,r=-0.917(P＜0.05),但Chemerin对ACAT1 mRNA和蛋白的表达无明显影响,PDTC预处理能够逆转ABCA1 mRNA表达抑制.结论 Chemerin下调ABCA1 mRNA和蛋白的表达,抑制THP-1巨噬泡沫细胞内胆固醇外流,增加细胞内脂滴蓄积,NF-κB活化可能是Chemerin抑制ABCA1 mRNA表达的信号通路之一.%Objective To investigate the regulatory effects of Chemerin on cholesterol efflux and lipid dropletaccumulation in macrophage foam cells ,and explore its effects on ABCA1 and ACAT1 expression and activation of nuclear factor-Κb(NF-Κb) in macrophage foam cells. Methods Phorbol ester (phorbol myristate acetate ,PMA)was used to induce the differentiation of THP-1 monocytes into macrophages ,and subsequently the cholesterol and ox-LDL were added to promote transduction of mac-rophages into macrophage foam cells. Immunofluorescence staining was carried out to test the CD 68 antigen on the surface of macrophages ,and macrophage foam cells were subjected to oil red 0 staining. After the macrophage foam cells were treated with Chemerin,the liquid scintillation counter was used to test the changes in cholesterol effloux ,the changes in intracellular lipid droplets were observed by using oil red 0 staining ,and real-time PCR and Western blot were used to detect the expression of ABCA1 and ACAT1 Mrna and protein. Sandwich ELISA was used to measure the NF-Κb activation in macrophage foam cells. After pretreatment with NF-Κb inhibitor PDTC,the changes in ABCA1 expression and NF-Κb activation were examined. Results Chemerin inhibited the cholesterol efflux in macrophges ,promoted the accumulation of lipid droplets ,down-regulated the expression of ABCA1 Mrna and protein ,and increased NF-Κb activation with the difference being statistically signifi-cant(P<0. 05). ABCA1 Mrna expression was negatively correlated with Chemerin concentration (r=-0. 936 ,P<0. 05),and NF-Κb activation was negatively correlate d with the ABCA 1 Mrna expression(r= -0. 917 ,P<0. 05). There were no significant changes in ACAT1 Mrna and protein expression. Pretreatment with PDTC couldreverse the Chemerin-induced inhibition of ABCA1 Mrna expression. Conclusion The Chemerin can down-regulate the expression of ABCA1 Mrna and protein ,sup-press cholesterol efflux from THP-1-derived macrophage foam cells ,and increase intracellular lipid droplet accumulation. NF-Κb activation may be one of the signaling pathways by which Chemerin inhibits the ABCA 1 mRNA expression.【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(041)004【总页数】6页(P389-394)【关键词】Chemerin;胆固醇酰基转移酶1;ATP结合盒转运子A1;泡沫细胞;核因子κB【作者】谢霆;陈新忠;董念国;夏东升;杨文凯;刘海峰【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院,心血管外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院,心血管外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院,心血管外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院,心血管外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院,心血管外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院,生物医学工程研究室,武汉,430022【正文语种】中文【中图分类】R589.2近年来发现的脂肪因子Chemerin调节脂肪细胞分化，影响糖代谢和脂肪代谢，与代谢综合征相关［1］，但对泡沫细胞的作用尚不清楚。
Omentin-1对巨噬细胞ABCA1介导胆固醇流出及抗动脉粥样硬化的作用及机制
Omentin-1对巨噬细胞ABCA1介导胆固醇流出及抗动脉粥样硬化的作用及机制动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)在全球的罹患率以及致死率都名居前列,严重危害人类的健康。
在动脉粥样硬化早期,其标志性病理特征是血管内皮下大量的巨噬细胞内脂质蓄积以及泡沫细胞的形成。
泡沫细胞最终坏死崩解,释放出细胞内的胆固醇,是构成动脉粥样硬化斑块的最主要成分,促进动脉粥样硬化的进一步进展。
因此,促进巨噬细胞内胆固醇流出及体内胆固醇逆向转运(reverse cholesterol transport,RCT),从而抑制泡沫细胞形成和血管壁内脂质沉积,对动脉粥样硬化性的防治具有重要意义。
三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)是一个膜整合蛋白,其以ATP作为能源将胞内游离的胆固醇及磷脂转运至胞膜的外侧面,最终与贴附在细胞表面的载脂蛋白AI(apoprotein AI,apoAI)结合,从而形成新生的高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)。
这是HDL生成所必需的过程,也是促进巨噬细胞内过多的胆固醇外流以及rct的关键步骤。
abca1在巨噬细胞中的表达以及其活性往往受到转录及转录后水平的精细调控。
网膜素(omentin)是一类新发现的脂肪细胞因子,主要由网膜脂肪组织表达和释放。
值得注意的是,研究发现这种基因可调节葡萄糖摄取。
肥胖或肥胖相关疾病患者,包括2型糖尿病、内皮功能障碍、颈动脉粥样硬化和冠状动脉疾病,发现其血浆omentin-1水平降低了。
研究证明,omentin-1与高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)呈正相关,与葡萄糖和甘油三酸酯水平呈负相关。
代谢综合征(mets)初期患者循环omentin-1水平异常者其罹患糖尿病和心血管疾病的风险更高。
因此,omentin-1与代谢综合征密切相关,在代谢综合征患者的动脉粥样硬化发生发展中产生重要作用。
肥大细胞
细胞发育
肥大细胞来源于造血干细胞，但是实际上，由骨髓刚进入外周血液循环系统的肥大细胞仍处于未成熟状态， 只有当它们的前体细胞迁移到最终定居的地方，即血管组织或浆膜腔中才能完成分化和(或)成熟。在哺乳类以及 其他脊椎动物中，肥大细胞广泛分布于整个血管组织，尤其是皮下或皮肤内，以及接近血管、神经、平滑肌、分 泌黏液的腺体和发囊部位。肥大细胞主要分布于机体与外界环境相通的地方，如皮肤、气道和消化道，这些部位 经常可以接触到病原体、变应原以及其他环境中的物质。因此，肥大细胞在体内的分布特点，使得它与DC一起成 为造血-免疫系统中首先与环境中变应原、其他抗原以及入侵病原体相互作用的细胞群。
血象
(1)常见轻～中度贫血，为正常细胞正常色素性。
病情诊断
形态学诊断主要通过瑞—姬氏染色的骨髓片查找肥大细胞。用甲苯胺蓝染色可进一步证实肥大细胞，其特点 为胞质中充满甲苯胺蓝染色阳性的玫瑰红色颗粒。特别有助于不典型肥大细胞的诊断。
生化学诊断血中及尿中组胺含量明显增高为确诊本症之佐证。
影像学诊断通过X线平片发现骨骼的成骨性或溶骨性破坏，胃肠道X线造影可见消化性溃疡及肠道粘膜粗糙水 肿等现象。
肥大细胞具有较长的生存期，在适当的刺激条件下，可以再次进入细胞周期并增殖；肥大细胞前体也可大量 募集、停留，并在局部成熟，使得肥大细胞群得以扩大。在下列情况下，肥大细胞的数量、局部组织分布以及表 型特征可发生变化，例如对各种感染尤其是对寄生虫蠕虫感染出现应答时，在多种适应性免疫应答特别是慢性应 答的过程中，以及发生持续性炎症及组织重建的状态下。
相关疾病
肥大细胞增生症是一种皮肤、骨骼、淋巴结、内脏及单核-巨噬细胞系统中以肥大细胞异常增生为特征的较为 少见的疾病。根据肥大细胞侧重侵犯器官的不同，临床上可分为以下数型：(一)皮肤受累型 (二)皮肤及骨骼受 累型 (三)骨髓、肝、脾、淋巴结受累型 (四)肥大细胞增生症合并肥大细胞性白血病。
Hcy对巨噬细胞胆固醇流出的影响及内质网应激机制的研究
Hcy对巨噬细胞胆固醇流出的影响及内质网应激机制的研究目的探讨同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）对巨噬细胞胆固醇流出的影响及内质网应激的作用机制。
方法培养THP-1单核细胞源性巨噬细胞后，分别用不同浓度的Hcy（50、100、200、500 M）处理24h，以未加Hcy的细胞作为对照组，以100 M Hcy+叶酸+维生素B12（VB12）作为干预组。
结果Hcy 可以减少巨噬细胞内胆固醇的流出，与对照组相比有统计学意义（P＜0.05），但并不呈量效关系。
干预组与100 M Hcy 组相比TC含量降低，ox-LDL及GRP78、XBP-1、CHOP含量下降，差异有显著性（P＜0.05）。
结论Hcy使巨噬细胞内胆固醇的流出受阻，并通过上调ox-LDL含量诱导内质网应激参与了动脉粥样硬化的发生发展。
标签：同型半胱氨酸；THP-1单核细胞源性巨噬细胞；内质网应激；动脉粥样硬化动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是一类以脂代谢异常和炎症反应为主的复杂性病变，其与脂质沉积、炎性细胞浸润、局部血栓形成及氧自由基产生增多有关。
本研究以THP-1单核细胞源性的巨噬细胞为研究对象，用不同浓度的Hcy干预后观察胆固醇流出和ox-LDL的含量，并檢测ERS相关蛋白的表达，为进一步揭示Hcy在动脉粥样硬化中的作用提供理论基础。
1 资料与方法1.1 一般资料THP-1单核细胞株由本实验室保存；RPMI1640培养基、胎牛血清为Hyclone公司产品；总胆固醇检测试剂盒为北京北化康泰临床试剂有限公司产品；GRP78、CHOP、XBP-1 及ox-LDL检测试剂盒为Groundwork Biotechnology Diagnosticate 公司产品；Hcy、佛波酯（PMA）为Sigma公司产品，其余试剂为国产分析纯[1]。
1.2 方法1.2.1 细胞培养及分组取本实验室液氮中冻存的THP-1单核细胞株复苏后，用含15%小牛血清的RPMI-1640培养基，置37℃、5%CO2孵育箱培养。
姜黄素对泡沫细胞胆固醇流出及 ABCA1表达的影响
姜黄素对泡沫细胞胆固醇流出及 ABCA1表达的影响周娟;张大棣;蔡恒玲【摘要】目的：探讨姜黄素对T H P1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响及机制。
方法：采用体外培养的THP1巨噬细胞作为研究对象，用PMA诱导为巨噬细胞，加入 ox-LDL （50mg/L）诱导泡沫细胞，同时加入不同浓度的姜黄素（1×10-6、1×10-5、1×10-4mol/L）处理，油红O观察细胞的脂质蓄积情况，高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯变化，液体闪烁计数仪测定胆固醇流出率，采用实时定量 PCR和蛋白印迹法分别检测细胞中ABCA1表达变化。
结果：泡沫细胞模型组脂质蓄积远多于正常组。
而姜黄素处理组（1×10-5、1×10-4 mol/L ）与泡沫细胞模型组相比，脂质蓄积明显减少，并可以显著的减少细胞内TC、FC、CE及CE/TC ，同时显著提高细胞的胆固醇流出率、细胞AB-CA1表达。
结论：姜黄素通过促进ABCA1表达，调节T HP1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇的流出，减少细胞内胆固醇蓄积，抑制泡沫细胞形成。
【期刊名称】《长江大学学报（自科版）医学卷》【年(卷),期】2014(000)009【总页数】5页(P1-5)【关键词】姜黄素;胆固醇流出;动脉粥样硬化;泡沫细胞【作者】周娟;张大棣;蔡恒玲【作者单位】南华大学医学院，湖南衡阳421001;岳阳市第一人民医院，湖南岳阳415900;南华大学医学院，湖南衡阳421001【正文语种】中文【中图分类】R965动脉粥样硬化（atherosclerosis，As）是冠心病发生及严重并发症发生的主要原因。
泡沫细胞的形成作为As发生的关键环节和典型的病理特征，其贯穿于形成的动脉粥样斑块整个过程，直接关系AS的发生发展［1－2］。
蓄积于血管内皮下的氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox－LDL）被巨噬细胞或者平滑肌细胞吞噬是形成泡沫细胞的主要阶段［3］。
FABP4对THP-1单核源性泡沫细胞内胆固醇的影响
FABP4对THP-1单核源性泡沫细胞内胆固醇的影响目的观察并分析脂肪酸结合蛋白4(Fatty acid binding protein, FABP4)对THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇的影响。
方法将THP-1单核细胞与佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培养，复制泡沫细胞模型，油红O染色检测泡沫细胞的形成。
运用FABP4腺病毒质粒(Ad-FABP4)感染泡沫细胞，设立空病毒对照组(Ad-GFP)和正常对照组(control)，采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测泡沫细胞感染Ad-FABP4后其mRNA表达变化；采用酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量变化，观察FABP4对THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇的影响。
结果油红O染色检测泡沫细胞模型建立成功，qRT-PCR检测发现泡沫细胞感染Ad-FABP4后FABP4 mRNA水平较Ad-GFP组升高了10.37倍(P＜0.05)，差异有统计学意义。
采用酶法测定TC、FC、CE含量的变化，发现与正常对照组比较，Ad-FABP4组泡沫细胞内TC和CE含量分别升高0.69倍和4.06倍，差异有统计学意义(P＜0.05)，FC含量无明显改变。
结论FABP4可能参与THP-1单核源性泡沫细胞内胆固醇沉积过程。
标签：泡沫细胞；脂肪酸结合蛋白4；总胆固醇；游离胆固醇；胆固醇酯动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一类以脂代谢紊乱为主的多基因复杂性疾病，发病率高，危害性大，目前尚无有效的治疗方法[1]。
泡沫细胞是动脉粥样斑块的主要成分，也是早期AS的一个典型病理特征[2]。
脂肪酸结合蛋白4(Fatty acid binding protein，FABP4)是一类分子量较小且对脂肪酸有高亲和力的可溶性载体蛋白，广泛参与脂肪酸的吸收、转运和代谢[3]。
研究发现，在ApoE-/-鼠同时敲除FABP4基因能明显减少AS形成，提示FABP4与AS密切相关[4]。
肥大细胞增多症演示ppt课件
实验室检查
外周血肥大细胞计数增多，血 清类胰蛋白酶水平升高。
组织病理学检查
皮肤或骨髓活检可见肥大细胞 浸润。
诊断流程
结合患者病史、临床表现、实 验室检查和组织病理学检查进
行综合分析，作出诊断。
鉴别诊断相关疾病
荨麻疹
荨麻疹是一种常见的皮肤病，与肥大细胞增多症有相似的 皮肤症状，但荨麻疹患者外周血肥大细胞计数正常，且无 全身症状。
非药物治疗方法
光疗
紫外线照射等光疗方法可用于缓 解皮肤瘙痒、红肿等症状。
手术治疗
对于严重病例或药物治疗无效的患 者，可考虑手术治疗，如脾切除等 。
其他治疗方法
如生物制剂、血浆置换等，可用于 特定病例的治疗。
01
并发症预防与处理 措施
常见并发症类型及危害
骨髓增生异常综合征
可能导致贫血、感染、出血等症状，严重影响患者生活质量。
放炎性介质的风险。
定期随访与监测
对确诊患者进行定期随访和监测 ，及时发现并处理并发症。
处理方法指导
对症治疗
01
针对患者出现的具体症状，如贫血、感染等，采取相应的治疗
措施。
抗肿瘤治疗
02
对继发肿瘤的患者，根据肿瘤类型和分期，选择合适的抗肿瘤
治疗方法。
器官功能支持
03
对出现器官功能障碍的患者，给予相应的器官功能支持治疗，
继发性肿瘤
肥大细胞增多症患者易发生淋巴瘤、白血病等恶性肿瘤，危及生命 。
器ห้องสมุดไป่ตู้浸润与功能障碍
肥大细胞可浸润肝、脾、淋巴结等器官，引起相应器官功能障碍。
预防措施建议
早期诊断与治疗
对疑似肥大细胞增多症患者进行 早期筛查和诊断，及时采取治疗
EGCG对THP-1源性泡沫细胞ABCA1的影响及其机制
EGCG对THP-1源性泡沫细胞ABCA1的影响及其机制1 湖南省永州职业技术学院湖南永州 425000；2 湖南省新田县中医医院湖南永州 425000【摘要】目的：探究EGCG对THP-1源性泡沫细胞ABCA1的影响及其机制。
方法：本研究于2017年4月～2018年4月在我院实验室展开试验，采用不同浓度的EGCG对泡沫细胞进行处理，然后对其进行收集和实验，采用TNF-α对THP-1源性泡沫细胞进行处理，然后观察EGCG 对THP-1源性泡沫细胞ABCA1的影响。
结果：EGCG预处理通过抑制NF-B起到衰减TNF-α对ABCA1的抑制作用。
EGCG能够激活Nrf2和Keap1起到抑制NF-B的作用。
结论：对于THP-1源性泡沫细胞而言，EGCG主要通过Nrf2和Keap1两种途径抑制NF-B激活，然后促使ABCA1上调，进而促进细胞内的胆固醇流出。
【关键词】EGCG；THP-1源性泡沫细胞；ABCA1EGCG是从绿茶中提取出来的一种物质，由于具有调节脂代谢以及抗炎等作用，其在促进胆固醇逆向运转以及抗动脉粥样硬化方面起到重要的价值[1-2]。
通过对已有文献的检索，发现关于EGCG对ABCA1的影响以及相应的机制还不是十分分的明确[3]。
因此，本研究采用TNF-α对THP-1源性泡沫细胞进行处理，以观察EGCG对ABCA1的影响及其机制，现报道如下。
1资料与方法1.1试验材料以及仪器本研究于2017年4月～2018年4月在我院实验室展开试验。
在进行实验的过程中，采用的实验材料主要有THP-1源性泡沫细胞，生产厂家是上海细胞生物所。
ABCA1兔抗认、Nrf2兔抗人、Keap1兔抗人，生产厂家是Novus公司。
在实验中，使用的仪器主要有CO2培养箱，生产厂家是Shelodon公司。
倒置生物显微镜，生产厂家是日本的Olympus公司。
高速离心机（型号为5804）、PCR仪器，生产厂家是德国的EP公司。
其他试验材料以及仪器主要来自我国。
肥大细胞增多症PPT课件
流行病学
本病约有1/2病人是6个月前的婴儿，1/4发生在青春期年龄。 目前无其他相关内容描述。
第6页/共26页
病因
病因尚不明。
第7页/共26页
发病机制
发病机制还不清楚。
第8页/共26页
临床表现
本病约1/2患者在生后6个月前发病，1/4发生于青春期前。皮 肤损害包括斑疹、丘疹、结节、斑块、水疱或大疱。偶见毛细 血管扩张，瘀点或瘀斑。初起时类似荨麻疹，但不消退，皮损 持久存在，并逐渐呈鹿皮色或石板色。用力划或摩擦皮肤时常 发生风团和风团周围红斑(Darier征)。
7.持久性发疹性斑状毛细血管扩张(telangietasia macularis eruptiva perstans) 为持久性色素性无症状的斑状发疹，旱淡红 色调，毛细血管扩张少见或不明显。
第12页/共26页
临床表现
此型为良性病，大多数病例只是美容问题，可发生骨损害和消 化性溃疡。可无Darier症。
为玫瑰色瘙痒性风团状轻度色素斑疹、丘疹或结节。损害为卵 圆形或圆形直径5～15mm小等，可互相融合，颜色淡黄到褐红。 疾病早期常见水疱或大疱形成。通常青春期前，皮损在数年内 自然消退，但亦有持续到成人期者。本病有可能发生系统性损 害，但发生恶性系统性疾病者极罕见。
3.成人型泛发性肥大细胞增生症 具有典型风团的淡褐色丘疹 和结节最常见，播散发生于全身，特别是上臂、小腿和躯干部。
第13页/共26页
临床表现
系统性肥大细胞增生症最常发生于成人，但约有10%患幼年播 散性的患者有系统性受累。也可由于继发性高嗜酸性粒细胞综 合征而引起器官功能障碍。肥大细胞释放大量组胺引起系统反 应，包括潮红。可能由于血浆中肝素增高而出现呕吐，鼻出血， 血便和瘀斑。亦可发生贫血，白细胞减少和血小板减少，凝血 酶原时原时间增长，60%患者24h尿组胺增高。当大量肥大细胞 浸润多种器官破坏正常功能时可发生恶性肥大细胞病。罕见情 况下，皮肤内脏型可致死亡。
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2019/5/29
7
DAD1 A, Sig=210,30 Ref=360,100 (M\94BZ0100.D)
mAU
2.595
800
cholesterol
700
Cholesterol standard
600
500
400
300
200
100
0
0
2
4
6
8
The effect of compound 48/80 on MCs degranulation
A B
实验结果
MCs were stained by toluidine blue (×1000) A，MCs； B，MCs+C48/80.
例数 （n）
组胺含量 （µg/ml）
颗粒释放液
细胞裂解液
组胺释放率 （%）
The effect of MCs on the distribution of cell free and esterified cholesterol in THP-1 macrophage-derived
foam cells
120
FC
EC
control (alone)=69.2%;
100
with HDL3=47.5%;
Groups control HDL3 MCs HDL3+MCs C48/80 HDL3+C48/80
TC 1092.3±65 527.3±49a 891.3±62 917.9±14c 807.3±68 314.3±10a
FC 336.3±31 276.9±34 650.1±46b 848.5±16c 343.1±36 253.2±11
50
**
40
#
Cholesterol efflux(%)
30
20
10 * 0
*
*
control HDL3
MCs HDL3+MCs HDL3+CC4488//8800
control=2.89%; with HDL3=40.98%; with MCs =2.91% ; with HDL3+ MCs =26.92%; with compound 48/80=3.71%; and with compound 48/80+HDL3=35.23%.
Bile
FC
CE
SR-BI
MC
A-I
?
A-I
LCAT
CE
CE
FC
FC
Nascent ABCA1
Mature
HDL
HDL
胆固醇流出减少
ABC1 = ATP-binding cassette protein 1; A-I = apolipoprotein A-I; CE = cholesteryl ester; FC = free cholesterol; LCAT = lecithin:cholesterol acyltransferase; SR-BI = scavenger receptor class BI
80
with MCs = 27.1%;
with HDL3+/80=57.5%;
40
a
and with compound 48/80+HDL3=19.4%. a:P<0.05 vs. control group;
20
b
b: P<0.001 vs. HDL3 group.
肥大细胞对THP-1巨噬细胞源性泡 沫细胞胆固醇分配和流出的影响
赵战芝 杨永宗
南华大学心血管病研究研
2019/5/29
1
肥大细胞(MCs)
研究背景
一种参与炎症免疫应答反应的炎症细胞。
胞浆内含有大量异染性颗粒（组胺等）。
受刺激时脱颗粒,释放胞浆一系列可溶性介质到细胞外
（compound48/80、oxLDL等可以刺激MCs脱颗粒) 。
HPLC analysis of THP-1macrophage derived foam cells
CE/TC Ratio:68.7%
Oil red O staining of THP-1macrophage derived foam cells
2019/5/29
6
The effect of MCs on the accumulation of cell cholesterol in THP-1 macrophage-derived foam cells
CE 756±60 250.4±17 241.2±19b 69.4±2 c 464.2±13 61.1±8
Values are represented as（ x s ）mg cholesterol/g protein, ( n=5 ).
a:P<0.05 vs.control,HDL3+MCs group; b:P<0.05 vs. control group;
2019/5/29
2
促动脉粥样硬化(As)形成
MCs加速oxLDL诱导平滑肌细胞泡沫化。
Compound48/80处理的新西兰白兔和apoE-/鼠主动脉脂纹形成比对照组早，面积大，分布 广。
2019/5/29
3
HDL Metabolism and Reverse Cholesterol Transport
5
0.340±0.005 0.077±0.021 81.53±4.51
MCs histamine release percentage
Formation of THP-1 macrophage-derived foam cells
FC
CE
FC，free cholesterol CE，cholesterol ester
0
n=5.
%FC or %EC
control HDL3
MCs HDL3+MCs
C48/80 HDL3+C48/80
2019/5/29
9
The effect of MCs on cholesterol efflux from THP-1
macrophage-derived foam cells mediated by HDL3
min
control
HDL3
MCs
HDL3+MCs
C48/80
HDL3+C48/80
The chromatography picture of cholesterol and cholesterol ester in THP-1 macrophage-derived foam cells identified by high performance liquid chromatography.