检验用色谱柱、流动相管理规程

1. 制订/日期

QC/主管2. 审核/日期

QC/部长3. 批准/日期

质量副总经理

分发部门：质保部（QA）、质控部（QC）

修订历史：

版本号修订日期修订概述

01 2020.07.02 首次制订

1.0 目的

本规程用于规范实验室分析检测用色谱柱、流动相的管理，保证检验质量。

2.0 范围

适用于公司分析检测用色谱柱、流动相的管理。

3.0 职责

3.1 本文件由质控部（QC）负责起草，质控部（QC）部长审核，质量副总经理批准；

3.2 质控部（QC）负责本规程的贯彻实施，质保部（QA）负责监督检查本规程的执行。

4.0 参考文件

《中国药品GMP指南》2010版。

5.0 定义

N/A

6.0 规程

6.1 色谱柱的管理

6.1.1 色谱柱的编号

为便于追踪和统一管理，为采购的每根色谱柱制定相应的唯一编号，具体编制规则如下：

两位流水序号，为该色谱柱当年购进时的流水顺序编号

两位年份

色谱柱分类代码（LC液相色谱柱，GC气相色谱柱，QT其他色谱柱）如：LC-12-06表示2012年流水序号为06的液相色谱柱。

6.1.2新购进的色谱柱应造册登记 ,登记内容包括：色谱柱编号、来源、品名、型号、规格、柱内保护

溶液、购进日期、启用日期、停用日期及原因等。

6.1.3色谱柱应分类存放 ,盒上贴上标签 ,注明类别。每启用一根色谱柱,在色谱柱上贴上标签,注明编

号、启用日期。液相色谱柱一般按填料不同分为无键合硅胶柱、正相键合色谱柱（如：氨基柱Amino/NH2、氰基柱Cyano/CN/Nitrile）、反相键合色谱柱（如：碳十八柱ODS/C18、碳八柱MOS/C8、碳六柱Hexyl/C6、碳四柱Butyl/C4、碳一柱Methyl/C1、苯基柱Phenyl）以及离子交换柱（如：阴离子交换柱SAX、阳离子交换柱SCX）和凝胶色谱柱等等；气相色谱柱按柱子内径大小可分为填充柱（一般用不锈钢管）和毛细管柱（玻璃或石英毛细管）。

6.1.4每根柱子每两个月保养一次并做好保养记录 ,特别是对于一些使用频率少的柱子,因为放置时间

长，容易干柱。对于确已失效的柱子,需贴上停用标签做好停用记录, 并专门存放不能随意丢弃，留待统一处理。对于价格比较昂贵用于成品检验的柱子，由于使用时间较长柱效降低后若性能仍

可满足中间体控制检测，则可降级用于检测产品的中间体，但应在柱子标签上注明仅用于中间体检测。

6.1.5色谱柱应有使用、维护保养记录，记录内容包括：色谱柱的一般信息（色谱柱编号、名称、来源、

启用日期、停用日期）、使用日期、使用时间、检测样品及批号、使用状况、维护保养时间、维护保养内容、操作者、备注。

6.2 液相色谱柱的使用

6.2.1 使用前注意事项

6.2.1.1在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用

高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。

6.2.1.2色谱柱使用的流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯

水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。

6.2.1.3 以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，

PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。

6.2.1.4样品也要尽可能清洁，最好使用流动相溶解样品。可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对

样品进行预处理，除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质；若样品不便处理，可使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。

6.2.2 使用时注意事项

（1）柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度；必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙；

（2）如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命；

（3）避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓

慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓；

（4）应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦

然。大多数反相色谱柱的 pH稳定范围是 2－7.5，尽量不超过该色谱柱的 pH范围；

（5）如使用柱温控制装置时，应注意在通入流动相后才能升温；

（6）一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效；

（7）选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分

析柱中的硅胶基质被溶解；

（8）避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱，可以而且应该经常更

换；

（9）经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的 20倍左右，即常规分析

需要 50-75mL。

6.2.3 液相色谱柱的保存

6.2.3.1 色谱柱每天实验后的保养

在完成分析工作之后，不应立即停机，需及时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5h以上，以除去色谱柱内的杂质，然后置换上对应的储存液。一般色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相；对于反相色谱柱使用缓冲液或含盐的流动相时，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将柱子的填料冲塌陷。

6.2.3.2 长期保存色谱柱

如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上、拧紧，防止溶剂挥发干燥。储存的温度最好是室温。

6.2.4 液相色谱柱的保养和再生清洗

6.2.4.1保护柱(预柱)的使用:对于较昂贵的色谱柱，可以在柱前加一保护柱，防止样品中杂质污染分析

柱；对于制备柱，因其进样量大，使用保护柱尤为重要。

6.2.4.2色谱柱使用一段时间后，常遇到柱子被污染，柱效会有一定程度的下降（比如：色谱峰高降低，

峰宽加大或出现肩峰的现象），通过采用适当的方法对色谱柱进行再生处理，可以延长色谱柱的