造血检验

（三） 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （neutrophil alkaline phosphataseNAP）
（偶氮偶联法）
[原理] 磷酸萘酚钠 NAP PH9.6
萘酚+ 重氮盐偶联
（亮红色沉着于胞浆中） [结果] NAP主要存在于成熟中性粒细胞，
其他血细胞均呈阴性反应。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （neutrophil alkaline phosphatase NAP）
3、百分率：计数100个成熟中性粒细胞，计算
阳性率。
4、积分法：计数100个成熟粒细胞，按反应强度作
出分级，将其百分率乘以级数，然后
相加。
类白血病反应 慢粒白血病反应
[参考值]
正常：百分率10-40%， 积分40-80分
[临床意义] 1. 区别CML 、 类白血病反应 ↓ 积分为0 ; ↑ 积分>200分 2. 急粒 积分↓;急淋 积分↑;急单 N或↓ 3. AA时↑ PNH↓ 4. 化脓性感染↑ 病毒性感染时↓
鉴别T细胞白血病与B细胞白血病
阳性
阴性
鉴别Gaucher病与Nienann-Pick病
阳性
阴性
（五）、氯醋酸AS-D萘酯酶染色 naphythol AS-D chloroacetate esterase,AS-D NCE
原理： 氯醋酸AS-D萘酚
不溶性红色沉淀
AS-D NCE AS-D萘酚
H2O
单核系：弱阳性 淋巴系：阴性
[临床意义] 鉴别急粒和急淋
（二） 苏丹黑B染色 (Sudan black,SB)
[原理] 苏丹黑B（脂溶性染料）
细胞质内含脂结构
棕黑色或深黑色 [结果]
粒细胞系统：阳性 （黑色粗大） 单核细胞系统：阳性 （黑色细小） 其他细胞：阴性
[临床意义]
大致同POX;可用陈旧 骨髓片
4+ 红色大团块
临床评价
阳性或强阳性： 红细胞系统疾病：
红血病、红白血病、MDS 淋巴细胞系统疾病：
急淋（原淋、幼淋巴细胞）、慢淋、 恶性淋巴瘤 单核细胞系统疾病： 急单（原单、幼单核细胞）
血液学检验
本章主要内容：
造血检验的基本方法
血象和骨髓像检验 骨髓检查的步骤与方法 有核细胞增生程度、分级标准及粒红比例
细胞化学染色检验 常用的细胞化学染色及临床应用 （POX、NAE、NAP、Fe、PAS）
骨髓组织病理学检验 血细胞的超微结构检验 造血检验的临床应用 其他自学
三、骨髓象检验
（钙钴法）
[原理] β-甘油磷酸钠 NAP 甘油+磷酸钠 NaHPO4 + Ca（NO3)2+（NH4） SCO↓ 棕黑色（沉着于胞浆中
[结果] NAP主要存在于成熟中性粒细胞， 其他血细胞均呈阴性反应。
1、胞浆中出现灰色到棕黑色沉淀者为阳性。
2、反应强度分为五级：
- + ++ +++
++++
淡红 淡灰 灰黑 浅棕黑 深棕黑色
非特异性酯酶+NaF
（七）糖原染色（过碘酸-雪夫反应） (periodic acid –Schiff,PAS)
【原理】
过碘酸
细胞内的糖原氧化
双醛基 + 无色品红（雪夫碱）
紫红色沉淀
结果判断
阳性：胞质中红色颗粒或弥漫状物质
淋巴细胞判断
0
无色
1+ 一圈PAS颗粒
2+ 两圈PAS颗粒
3+ 三圈 PAS颗粒
原红细胞<1%， 早幼红细胞<5%， 以中、晚幼红细胞为主，各占10%； c．形态无明显异常或红细胞形态大致 正常。
5) 淋巴细胞系统占20-25%； （主要是成熟细胞）
6）单核细胞系统<4% （主要是成熟细胞）
7）浆细胞系统<2% （主要是成熟细胞）
7) 巨核细胞 a.数量/全片：7-35个；
骨髓中性粒细胞杆状核与分叶核＞外周血中性粒 细胞杆状核与分叶核
骨髓有核细胞＞外周血有核细胞
二、骨髓细胞学检查的
内容与方法
一、骨髓涂片检查 低倍镜检查 油镜检查 检查结果的临床意义 血涂片的观察 填写检查报告单
1、低倍镜检查：
（1）观察骨髓涂片: 取材：骨髓小粒、 脂肪小滴 制片：厚薄，头、 体、尾分布 染色：细胞着色情况
取材、制片、染色
2.判断骨髓增生程度
骨髓细胞增生分级(五级) 增生极度活跃 增生明显活跃 增生活跃 增生减低 增生明显减低
骨髓增生程度分级(高倍镜）
极度减低 1~5/HP
增生减低 5~20/HP
增生活跃 20~50/HP
明显活跃 50~100/HP
极度活跃 >100/HP
（二）、油镜检查：
（1） 有核细胞分类计数：
原幼淋增多：
ALL、慢粒急变、淋巴瘤白血病等；
成熟淋巴细胞增多：
CLL、淋巴瘤白血病、再障、淋巴细胞 性类白血病、传淋、传单等
单核细胞改变
原、幼单核细胞为主： 急单，慢单急变、粒-单白血病等
成熟单核细胞为主： 慢单、慢性粒--单细胞白血病、CML
其他细胞改变
浆细胞增多： 恶性增多： 浆白，MM等 良性增多： AA，感染等 组织细胞增多： 恶性增多：恶组，MM 良性增多：感染性疾病
粒细胞各阶段比例：
原粒<2%，早幼粒<5%， 中性中幼粒约8%， 嗜酸中幼粒约<1%； 中性晚幼粒约10%，嗜酸晚幼粒<2% 杆状核约20%， 嗜酸杆状核<3%， 中性分叶核约12%，
嗜酸分叶核<5%， 嗜碱性中幼粒、晚幼粒细胞罕见，
杆状核、分叶核<1%
4) 红系增生良好：
a. 占有核细胞的20-25%左右 b. 各阶段比例适当；
（三）、血细胞形态的改变
1.胞体异常 大小异常：巨变，幼红，小原粒 形态异常：
不规则，多形性，伪足状突起 成熟红细胞椭圆形，口形，球形，泪 滴形，靶形。
成熟红细胞的形态异常
2.胞核异常
数目：双核和多核 形态异常：不规则形，凹陷，切迹，折叠， 扭曲。 核染色质 核仁异常 异常核分裂
3.胞质量异常：
9)无特殊细胞及寄生虫。
四、骨髓象分析
有核细胞增生程度 极度活跃：反映骨髓造血功能亢进
（白血病） 明显活跃：反映骨髓造血功能旺盛
（贫血） 增生活跃：反映骨髓造血功能基本正常
（正常骨髓象） 增生低下：反映骨髓造血功能减低（AA） 增生重度低下：反映骨髓造血功能衰竭
（重型AA）。
血细胞数量改变
1、粒/红比值 ⑴粒/红比值增加： >5：1，CML，感染 ⑵粒/红比值正常： 2-4：1，两系成比例增加或减少 ⑶粒/红比值减少： <2：1，粒系减少,红系增加，增生贫血
(1.5cm×3.0cm) b.各阶段情况正常；
原巨核细胞不见或偶见， 幼巨核细胞 0-5%， 颗粒巨核细胞 10-27%， 产血小板巨核细胞 44-60%， 裸核 8-30%， 血小板易见、成堆状存在，形态正常。
8)其他细胞: 组织细胞、内皮细胞、肥大细 胞、网状细胞及组织嗜碱细胞等 欧间，未见异常。
（传淋和慢淋） 3. 同一患者骨髓象变化不显著，血象有异常
（传单） 4. 同一患者骨髓象异常，血象无变化（MM） 5. 骨髓象难辨认，血象易辨认
细胞化学结果
报告细胞化学结果 （专门讲述）
填写骨髓报告
或打印骨髓报告 保存好骨髓与血液片
诊断意见
综合骨髓象、血象和细胞化学所见 意见：
肯定性诊断-----
据化学反应原理,将骨髓片染色,观察单个细胞 内在的生化特性，了解它们的代谢活动，生理
功能和病理变化.鉴别各种类型血液细胞
（一） 过氧化物酶染色 (Peroxidase, POX)）
[原理]
H2O2 细胞内 联苯胺 [O]
POX [O]↑ 联苯胺蓝 +
亚硝基氰化钠
暗蓝色颗粒(定位于胞浆内)
[结果] 粒系： 强阳性
血友病、晚期妊娠
主要作用： 辅助诊断
（肯定性、支持性、可疑性、排除性诊断） 疗效的观察
（完全缓解、部分缓解、未缓解）
（二） 骨髓穿刺
穿刺部位
髂后上棘：第五腰椎向上3cm处。 髂前上棘：顶端后约1-2cm处。 胸骨：胸骨中线，相当第二肋间水平的胸
骨体上端。 小于3岁的小儿选择胫骨内侧
标本的采集
慢性粒细胞性白血病
Chronic myeloid leukemia
慢粒 阴性
（四）、酸性磷酸酶 （acid phoshatase ACP)
原理：硫化铅和偶带偶联法 结果：胞质内出现棕黑色颗粒者为阳性
（硫化铅） 胞质内出现亮红色颗粒者为阳性
（偶氮偶联法）
临床意义
鉴别多毛细胞白血病，不被L-酒石酸所抑制
普通显微镜检查 诊断：主要是血液疾病 内容：
常规检验 特殊检验
三、骨髓象检验
㈠ 临床应用 1． 适应症
血细胞减少或增多。 各种急慢性白血病。 各种类型的贫血。
不明原因的骨痛、骨质破坏、肾功 能异常、 黄疸、紫癜；
不明原因的长期发热，肝、脾、 淋巴结肿大；
出血； 恶性血液病化疗的疗效观察；
禁忌症：
骨髓取材的部位和方法 部位：胸骨、棘突、髂骨等处 方法：多用穿刺法吸取
骨髓取材情况的判断
⑴取材满意： ①抽吸骨髓时病人有特殊的痛感； ②骨髓液和涂片均有骨髓小粒和脂肪滴； ③显微镜观察涂片 骨髓特有细胞如： 巨核细胞、浆细胞、组织嗜碱细胞、 成骨细胞、破骨细胞、网状细胞、 网状纤维等。
④细胞比值
各种白血病、巨幼细胞性贫血、MM、 骨髓转移癌、戈谢病、尼曼-匹克病等
支持性诊断-----
缺铁性贫血、再障、溶贫等可建议作相应检查
ຫໍສະໝຸດ Baidu
诊断意见
可疑性诊断-难治性贫血等
排除性诊断-ITP、类白血病
形态学描写-骨髓象有改变，但提不出诊断性意 见，建议动态观察
对比意见--几次骨穿结果对比
骨髓象检查的注意事项
粒细胞数量改变
1） 粒系细胞增多 原粒增多：M1、M2a、M4、CML（急变 ） 早幼粒增多：M3，粒细胞缺乏，感染 中幼粒增多：M2b，，CML，类白 晚幼粒，杆状核为主：CML、感染等。
嗜酸粒细胞增多：
变态反应，寄生虫， 嗜酸粒细胞白血病，CML； 嗜碱粒细胞增多： 嗜碱粒细胞白血病， CML等 粒细胞减少 粒细胞缺乏症、AA、急性造血停滞等
增多或减少 内容物异常：Auer，中毒性颗粒，空泡变化 着色异常：多嗜性红细胞 颗粒异常：增多或减少 内外质异常：发育不平衡
本节小结
骨髓细胞的形态学特征； 骨髓细胞学检查的步骤与方法； 骨髓细胞的增生程度、粒红比值； 正常骨髓的特征；
第二节、血细胞的细胞化学染色
定义： 血细胞化学染色是以形态学为基础，根
计数200-500个有核细胞，计算各系统各阶段 细胞百分率。
（巨核细胞单独计数） （2） 计数粒红比例（G∶E） （3） 观察细胞形态有无异常 （4） 观察有无其他特殊细胞及寄生虫。
二、血象检验：
1. 低倍镜检查： （1）涂片、染色情况； （2）有无大的异常细胞； （3）寄生虫；
2. 油镜检查：
红系细胞数量改变
红系细胞增多 原红及早幼红增多：红血病，M6 中红及晚幼红增多：增生性贫血
（溶贫，缺铁贫等） 巨幼红/巨幼样变增多：
巨幼贫、红白血病、MDS等 铁粒幼红细胞增多:
铁粒幼红细胞贫血、MDS
巨核细胞数量改变
巨核细胞增多 增殖性疾病、M7 、ITP、脾亢 巨核细胞减少 AA、AML
淋巴系细胞数量改变
（1）分类计数100个WBC （注意形态及有无异常细胞）；
（2）注意成熟红细胞的形态 （如有幼稚红细胞应在计数100个WBC中记 录幼稚红细胞的数目及其阶段）；
（3）粗略估计血小板数目或形态; （4）有无寄生虫。
血片检查的重要性
1. 不同疾病时，骨髓象相似而血象有区别 2. 不同疾病时，骨髓象有区别而血象相似
+坚牢酱紫
结果
临床评价
急性白血病的鉴别： 1.急性粒白血病 M3
1+～2+ 2+～3+ 2.急性单核细胞白血病
原、幼单核细胞---阴性 3.急性淋巴细胞白血病
原、幼淋细胞----阴性
（六）α-醋酸萘酚酯酶 (α- NAE) ( α -naphythyol acetate esterase）
α-醋酸萘酚 α –NAE α-萘酚+重氮盐 （坚牢蓝B）
正确认识细胞是骨髓象检查的前提，检 查者必须反复实践，积累经验，需经较长时 间的锻炼才能熟练掌握。不要根据一两个特 点就做出肯定或否定的判断。宁可看得仔细 而少看，不可贪多而马虎
正常骨髓象报告：
1) 增生活跃 2) 粒红比值正常（G∶E 2～4：1） 3) 粒系增生良好：
a.占有核细胞的40～60%； b.各阶段细胞比例适当； c.细胞形态无明显异常。
棕黑或灰黑色（胞桨中）
临床评价
鉴别白血病类型；同时必须做NaF抑制试验 急性粒细胞白血病 ---
原粒细胞弱阳性，不被NaF抑制； 急性单核细胞白血病---
原单核细胞阳性，被NaF抑制；
结果判断
阳性：胞桨中出现棕黑、灰黑色颗粒沉淀
急性单核细胞白血病
acute monocytic leukemia