植物组织中还原糖含量的测定

植物组织中还原糖含量的测定

(3，5–二硝基水杨酸法)

一、实验目的

通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，学习比色定糖法的基本操作。二、实验原理

3，5–二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色物质（即3–氨基–5–硝基水杨酸)，

该物质在540nm波长处有最大吸收。在一定浓度范围内，还原糖的量与棕红色物质

的光吸收值成正比例关系，利用比色法可定量测定样品中的含糖量。

三、实验仪器、试剂和材料

1.仪器：25ml刻度试管、离心管或漏斗、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、离心机、分光光度计等。

2.试剂：1mg/ml葡萄糖标准液、3，5–二硝基水杨酸

3.材料：食用面粉

四、实验操作步骤

1、葡萄糖标准曲线的制作

取7支干燥洁净的25ml刻度试管或大试管，编号，按下表准确加样：

将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，

再以蒸馏水定容至25ml，加塞后颠倒混匀。在540nm波长下，用0号管为参比管调零

，分别读取各管的吸光度(A540nm)。以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标绘制标准曲线。

2、样品中还原糖的提取

准确称取1.5g食用面粉，放在小锥形瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，

然后加25ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，然后将锥形瓶中内容物转入一个50mL

容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。充分混合，过滤，滤液即为还原糖待测液。3、样品含糖量的测定

分别取2ml还原糖待测液于两支刻度试管或大试管中，

然后各加3，5–二硝基水杨酸1.5ml。其余操作与制作葡萄糖标准曲线时相同。测定各管吸光度。

五、实验结果处理

以上述还原糖待测液的吸光度平均值，在标准曲线上

查出相应的还原糖毫克数。按下式计算样品中还原糖的百分含量。

提取液总体积

还原糖%= (测定时取用体积/样品质量

(mg))×100

六、实验注意事项：

标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。