宋内氏志贺氏菌I相抗原在E. coliHB101菌株中的表达1)

否可以推论先证者父亲及母亲的异常染色体亦
可能由亲本遗传而来。
相抗原的表达是由受体菌从供体菌接受的 Ｉ 相 相质粒诱动转移的成 （ｏ Ｉ：ｎ， ） 条大质粒带和４ Ｆｒ ： Ｒ％有２ ｍ Ｔ５ ３ 条小 质粒编码的。宋内氏菌 Ｉ 质粒带 （ Ｉ 除 相质粒外，其余可能是Ｒ质粒） 功，为我们进一步开展志贺氏菌活菌苗的研究 。 转移接合子除有２条大质粒带外，还有２ 条小 奠定了基础。 质粒带。小质粒带数既不同于供体菌，又和受 （ 上接第 ３ 页） ３
忍。 ｃ 厅 ｏ Ｔｅ ｀ ｎ＇ ｔ Ｋａ
８８ ３ ６
４０５ １ ８２－ １
Ｔｅ＇ ｔ
１ Ｑ ０（＇ｌ ： ｎ） ） ＣＦｔａ ； ５菌株由 ９ ｓｃ Ｔ 陆德如、 苏国富指导 组建，
１ ）带有编码 Ｉ 相抗 原基 因的质粒 ； ２ 本实验室诱导的 ） 染 色体基因突变。
３２
谨致谢意。 本文于 １８ 年 ７月 ８日收到。 ９５
防 果， 效〔 ５ ６ １ ｃ
材 料 和 方 法
养基单菌落纯化２ 次。 将此重组株于４℃连 ２
续传代， 以去除温度敏感的 Ｆ 质粒。 Ｔ ５ ＇ ｎ 插人 Ｉ 相质粒后， 使其得到 Ｋ ｎ ａ 抗性。 诱动质粒的引人 宋内氏菌 Ｉ 相质粒自 身是不可转移的，须引人诱动质粒进行诱动。 Ｒ， ３具有较好的诱动作用Ｉ Ｒ。 ７ ３引人带有 Ｔ ５ Ｉ ｏ ｎ 标记的宋内氏菌４０５１ 株中， ８２－１ 其方法基本如
图２ 显示，受体 各菌 株及
图 ２ 转移接合子 Ｈ Ｓ的 质粒分析 。 ＨＳ２； Ｈ １１ ｃ 。 －０ ｂ Ｂ ； ． ０ ． ４０５ １ （ｏｍ Ｉ： ｎ ， ８２－ １ ｒ ： ５ Ｆ Ｔ Ｒ８ ． ３） ６
菌Ｈ １１ Ｂ０ 除染色体
外， 未见任何质粒带。 供体菌 ４０５１ ８２－１
位的配子， 碰上的均为重组型， 而且全被淘汰，
＿ ‘部节缺与复重型＿ １ 号分段失重的组；为 ２ ６ 为 １ ２ ６
ｔ ；８ 及 ６ （ １） ４ 号节段部分缺失与重复的重组型；
１‘分体 ‘部缺与复１ ２ Ｐ 单及号分失重；为 ６部 为 ＿ ２ ６
４ ｐ部分三体及 ６号部分缺失与重复。 在这 １ ６ 种合子中， 只有完全正常，（ ；８ 及 ｉ （） ｔ４１） ｎ ６ 携 ｖ 带者可发育成表型完全正常儿童，并可成活至
力。 当温度敏感的 Ｆｓｃ ｎ ＇ａ ： ｔ ： ，在４０ ｌ Ｔ ２ Ｃ连续
传代后，Ｆ 消失，Байду номын сангаас酵乳糖的 能力亦丧失。 ＇
当以 ４０５１ （ｏ ｌ：ｎ， ）为供体、 ８２－１ ｒ ： ５ Ｒ， Ｆｍ Ｔ ３ Ｈ １１ Ｂ０ 为受体进行接合转移时， 得到的接合子 Ｈ ［Ｂ０（ｏ Ｉ：ｎ）， Ｓ １１Ｆｒ ： ５］其所试生化特性 Ｈ ｍ Ｔ
［ ］ 李麓云等：１８。同上，８２：２－ １４ ２ ９３ （） １１ ２ａ Ｇ ｎｃｌ １１１：３ ｙ ｅｏ． ３（）３． ， 〔 ］ Ｍｉ ａｌ Ｔ ｅ ａ． １７． ｓ ｔ ａｄ ｙ ｅｏ． ５ ｃ ｅ， ｔ ： ８ Ｏ ｔ ． ｈ ． ｌ ９ ｂ ｅ ｎ Ｇ ｎｃｌ ， ５（） ３８ ３３ ２３： － １． ０
其母在配子形成过程中可形成正 常、 号倒位 ６
携带者及两组重组型等 ４种配子，其父亲与母 亲各 ４种配子结合后， 则可形成１种合子（ ） ６ 图３０ 参 考 文 献 其 ＿ 表与型全 常＿ ‘臂 〔１３ 何小轩等：１８０湖南医学院学报，８２：２－１０ 中６ 型核完正 ； 为号 １ 为 １ ６ ９３ （）１ ９ ３， 间位带（ 证，６，１平 ［３３ 何小轩等：１８０遗传，４１：４ 倒，者口 者 ＿ （ ８ 衡 女 ；为‘ ， 先 １ ； ９２ （）１ ， ［ ３ ｄｓ Ｋ ｊ， ｅａ ： ８ Ａ ． Ｏｓｔ ａｄ ４ ］ ａ ｉ ｉ Ｔ ｔ １７． Ｊ ｂ ｅ ｎ ａ ｈ ａ ｉ ． ｌ ９ ． ｍ ． ｔ ． 易携者 为Ｐ分体六 ‘ 分 位带； ‘ 单；为Ｐ 六 部 部 三 ；为‘８ ‘６ 带；为 体六 ， １ 二） 者 ‘ （ ， （携 六 Ｐ ；及 部单及 （ １ ‘ 分体 ‘） 分体 ‘６ ６ Ｐ 三及 ‘ 二） 为 部 ＇ 二， ６
材“ Ｚ ｃｑｎ “ ａ． Ｅｐ ｅ ｉｎ Ｆ ｒ Ｉ ｔ ｅ ｈ ｏｉ ｌ ｘ ｒｓｏ ｏ ｏｍ Ａ ｉ ｎ ： ｓ ｆ ｎｇ ｏ Ｓ ｉ ｌ ｓｎｅ ｉ Ｈ ｃｌ ＨＢ ０ Ｓｒｉ ｆ ｇ ｌ ｏ ｎｉ ． ｉ １１ ａ ｈ ｅ ａ ｎ ｏ ｔ ｎ
菌株和质粒
表 ｔ ｏ
试验中所用菌株和质粒见
上所述。培养温度均为 ３０ 在含有抗菌素的 ７ Ｃ， 琼脂平板上选择和抗宋内氏菌 Ｉ 相血清凝集之 菌落， 并纯化之。 宋内氏菌 １ 相质粒的诱动转移 以含有 Ｔ５ ｎ 标记和Ｒｓ ３诱动质粒的宋内氏菌为供 体， ｓ 以ＨＢ０ 为受体，使二者在含有抗菌素 的 Ｌ １１ Ｂ 平板上杂交。 ＨＢ０ 接受了宋内氏菌 １ １１ 相质
志贺氏菌痢是发展中国家高度流行的传染
培养基
Ｌ Ｂ肉汤，Ｌ Ｂ琼脂及麦康凯琼
病， 也是我国最常见的腹泻病之一。已表明非
经肠道的灭活菌体苗在试验攻击研究和野外试
验中无效［３ 用减毒 口服活菌苗则有一 定 预 ２。 ， １
脂培养基均本所制备。根据需要加人卡那霉素 （ ａ ５ｌ／ｌ Ｋｎ ０ｇｍ、四环素 （ｅ ５Ｅ／ｌ ） Ａ Ｔｔ ０ｇｍ，链 ） ｃ 霉素 （ｔ１０ｇｒ， Ｓ）０１／ 氨苯青霉素（ｍ ）５ｇ ｒ ｚｒ ｄ Ａ ｐ２ｐ ／
和亲代 ＨＢ ０ 完全一致。 １１
表 ２ 各菌株 及转移接合子生化检定结果 菌 株
葡 麦甘 乳 萄 芽露 糖 糖 塘醇 ①Ｏ
＋ 十 ＋ 十 十 十 十 ＋
图 １显示，Ｑ ０ （＇ｌ ： ｎ） １ ９Ｃ ｔａ ： ５ 有 条 Ｆ ｓｃ Ｔ 质 粒 带，宋 内氏菌 ４０５１ ８２－１染 色体上 方有２条质粒带 （ 最
（ 一）转移接合子的生化检 定 按常规
图 １ 各菌株质粒琼脂塘凝胶电泳图
方法进行。 表２ 结果表明， ＇ａ： 转人 Ｆｓｃ ｎ ｔ ：５ ｌ Ｔ
４０５１ 受体菌后， ８２－１ 使其获得了发酵乳糖的能
ａ Ｑ ０ （＇ｌ ： ｎ） ｂ ４０５１ （ｏ Ｉ； ． Ｃ ｔａ ： ５； ８２－１ ｒ ） ９ Ｆ ｓｃ Ｔ ． Ｆ ｍ ｃ ４０ － １ ｒ ＩＦｔａ：Ｔ ５； ４０５ ． ２ １ （ｏ ， ｓｃ：ｎ） ｄ ８２－ ８５ Ｆ ｍ ＇ｌ ． １ （ｏ Ｉ：ｎ） ｅＲ ｃｌ ８８ ； ４０５ １ ｒ ： ５； ． （３） ｆ ８２－ Ｆ ｍ Ｔ ． ｏ ｉ ６ ． １ （ｏｍ ：ｎ， ０ １ ｒ １ Ｔ ５ Ｒ８ｏ Ｆ ： ３
（ 二）转移接合子质粒分析
示。
转移接合子琼脂糖凝胶电泳图如图１ 图２ 、 所
（ 下转第３页） ７
３３
数分裂中期， 将形成特有的倒位圈， 经过互换， 理论上将形成 斗 种不同配子，它们分别与正常 配子相结合， 则可形成 ４ 种不同类型的合子， 其 中仅一种为正常者，一种为表型正常的倒位携 带者，还有两种则为部分节段缺失与部分节段 重复的重组型。重组型是引起流产、 死胎、 死产 及痴呆儿、 畸形儿的原因， 两例臂间倒位的先证 者（ 及先证者之妻） 均有过多次自然流产史无 例成功妊振，说明在受孕时没有碰上正常及倒
Ｅ． ｌ ＨＢ ｃ ｉ １ ｏ ０１
＋ 十
Ｏ ①① ④ ④Ｏ ＋
带。 当权℃ 脱去 Ｆ ＇ 质粒后，又出现 ２ 条 质粒带。 当引人 Ｒｓ ３ ｒ 后， 表现质粒带加宽， 这是因为质粒分子量 接近，质粒带重迭的
缘故。
ＨＳ ｏｍＩ： ｎ ） （ ｒ ：Ｔ ５ Ｆ
ｅ产酸产气； ＋产 酸不产气； 一 不发酵
遗传
Ｈ Ｒ ＤＴ Ｓ ｅｉ ） （） ３－ ３ １８ ＥＥ ＩＡ （ ｉ ｇ ８ － ３ ６ Ｂｊ ｎ ２ ２ ９
宋内 志 氏 相 原 Ｅ ｃｉ 氏 贺 菌Ｉ 抗 在 ． ｏ ｌ Ｈ１ 菌 中 表 ‘ Ｂ０ 株 的 达’ １
牟 钦 杨 雅刘 博 单 伟毛 基 兆 素 学 传 培
（ 军事医学科学院微生物流行病研究 所， 北京）
． ｌ ｍ
宋内氏菌Ｉ 相质 粒 的Ｔ ５ 记 ｎ标 在Ｉ 志贺氏菌（ 简称宋内氏菌） 一个大的非接合性 Ｉ 相质粒接合转移过程中，对于质粒的转移没有 相质粒 （ Ｗ ０ ６ｔｎ，通过质粒诱动 可检出的选择特性。为此，须用 Ｔ ５Ｋｎ 标 Ｍ １ Ｘ ｄｔ ） ２ １ ａｏ ０ ｎ（ ａｌ ） 相质粒，作为抗药性选择标记。 用含 有 系统， 转移到宋内氏Ｉ相菌中。 他们发现，宋 记 Ｉ Ｉ 内氏菌 Ｉ 相杭原的合成及其毒力的表达与该大 Ｆｓｃ ５ ＇ａ ：ｎ 质粒的Ｑ ０ 株作Ｔ ， ｔ ： ｌ Ｔ ９Ｃ菌 ｎ 的供体。 质粒有关％Ｊ 通过志贺氏菌 Ｉ ， 。 相质粒或有关 供体和受体各接种于Ｌ Ｂ肉汤， 分别于 ３℃ 和 ２ 染色体基因的转移研究志贺氏菌活菌苗，是一 ３℃ 过夜。第二天再转种 Ｌ ７ Ｂ肉汤，继续培养 条有希望的途径。 本文通过 Ｔ ５ ｎ 标记宋内氏菌 ３ 小时。供体和受体等量混合， 涂布Ｌ 琼脂表 Ｂ Ｉ 相质粒， 诱动质粒 Ｒ‘将其诱动进 人 Ｅ ｃｉ 面， ２ ３ ． ｏ ｌ ３℃温育一 小时后洗下菌苔， ２ ４ 用不同稀释 ＨＢ０ 受体菌， １１ 而使宋内氏菌 Ｉ 相抗原得到表 度的菌液涂布含抗菌素的麦康凯选择培 养基。 达。 ３℃ 培养２ －４ 小时，选择乳糖发酵阳性及 ２ ４ ８ 和抗宋内氏 Ｉ 相血清凝集之菌落。并用同一培 近年来，Ｋ ｐｃｏ Ｓｎｏｅｉ等将宋内氏 ｏｅ ， ｓ ｔ ｋ ａ ｎｔ
表 Ｉ 试 验所用菌株 和质粒 菌 株 质 粒 抗药性 来 等组建 源
Ｅ． ｌ Ｑ９ＣＦｔｌｃ ： ５ Ｋ ｎ， ｓ 中科院微生物所 ｃ ｉ ０ ＇＜ ：Ｔｎ ｏ ＿ ａ ａ｀ Ａ ｍｐ
首都 医院检验科 Ｓ ｒ Ｋａ ＇ ｔ｀ ｎ Ｈ ｃ ｌＨＢ １ ． ｉ １ ｏ ０ 中科院微生物所 Ｓ ｓｎ ｅ ． ｎ ｉ ｏ ） Ｉ 相质粒， Ａ ｐ＝Ｋ ｎ 本所 细菌室 ， ｍ ｀ ａ＇
生育年龄， 造成异常染色 体的传播。４ 部分单 ｐ 体及４ 部分三体虽可出生， ｐ 但表现为严重智力
低下及畸形，至于其他各种合子均在胚胎早期 夭拆在宫腔内，造成流产。病例２的先证者是
真可谓不幸中之大幸。病例 ２ ６ 号臂间倒位的 先证者之父、 母均为染色体异常携带者， 实属罕
其父母 １种合子中多次淘汰的幸存者。 ６ 根据先 见， 其父在配子形成过程中可形成正常、（ １） 证者的祖母也有过多次流产史及 新生儿死亡 ｔ；８ ４ 携带者， ｐ ４ 部分单体及４ 部分三体４ ｐ 种配子， 史， 先证者外祖母多年不育， 只生其母一胎，是
Ｉ 相质粒
染色体
粒。这种转移接合子（ Ｓ 以Ｈ 表示） ，单菌落连
续纯化 ３ 次。 血清学检测
Ｉ相抗原。
抗宋内氏菌 Ｉ 相血清由生
小质 位
物制品检定所提供。用常规玻片凝集试验检测
质粒 ＤＮ Ａ分离和琼脂糖凝胶电泳 各 菌株及转移接合子的质粒分离与检测，均按以 前报道的方法进行ｈ １ ０
结 果 和 讨 论
体 菌不同 ， 从而表明 ＨＳ为一新的重组株。 参 考 文 献
（ 三）血清学测定 受体菌 Ｈ １１ Ｂ ０ 与抗 宋内氏菌 Ｉ 相血清凝集阴性，Ｈ 菌株和供体 Ｓ 菌一样与 Ｉ 相血清凝集阳性，即Ｈ 表达宋内 Ｓ
上端 １条为 Ｉ 相质粒
带） 。两菌株杂交后，
４０５１接受了Ｆ质 ８２－１ ‘
粒 ，显示出 ３ 条质粒
Ｅ ｃｌ Ｑ ０ （ ＇ ｌ ：Ｔ ５ ． ｉ Ｃ ｔａ ： ｎ） ｏ ９ Ｆ ｓｃ
Ｏ
＋ 十 ＋
Ｓ ｓ ｎ ４０５１ （ｏ １ ． ｅ ８２－１ ｒ ） ｏ ｉ ｎ Ｆ ｍ
Ｓ ｓｎ ｅ ４０５ １ （ ｏｍ Ｆｔａ：Ｔ ５ ． ｎｉ ２－ １ ｒ １ ＇ ｌ ： ｎ ） ｏ ８ Ｆ ， ｓ ｃ Ｓ ｓｎ ｅ ４０５ １ （ ｏｍ ：Ｔ ５ ． ｎｉ ２一 １ ｒ Ｉ：ｎ ） ｏ ８ Ｆ Ｓ ｓ。。 ４０５ １ （ ｏｍ ： ｎ ， ６ ． 二ｉ ２－ １ ｒ Ｉ Ｔ ５ Ｒ８ ｏ ８ Ｆ ： ３）