洁净室沉降菌检测标准操作规程
沉降菌检测操作规程
●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。
●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。
●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。
⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。
⏹ 5.3 恒温培养箱。
⏹ 5.4 高压灭菌器。
⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。
⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。
洁净区沉降菌监测标准操作规程
洁净区沉降菌监测标准操作规程1目的：制定洁净区（室）沉降菌监测操作规程。
2范围：洁净区（室）沉降菌的监测。
3职责：QC员、QA员、QC主任、品质保证部经理、车间主任及相关人员对本SOP的实施负责4 程序：4.1 QA室根据洁净区（室）的验证结果，制定洁净区（室）的日常监测计划，依计划和生产需要填写洁净区（室）环境监测通知（以下简称通知），经品质保证部经理批准后，下发QC室和生产车间。
4.2 QC主任接通知后，与检验员、车间讨论确定具体监测时间，安排好监测工作，确保监测工作如期完成，如不能按期完成监测，应由QC室主任将情况以书面形式汇报至品质保证部，经品质保证部经理批准后，予以重新安排。
4.3 将培养皿在121℃湿热灭菌30分钟或者180℃干热灭菌2小时。
4.4 将灭菌培养基加热熔化，冷至45-60℃，在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml，待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
制备好的肉汤培养基平皿应保存在洁净的普通冰箱内，以2-8℃为宜，且应在2周内用完。
4.5 在监测前，应对被监测洁净区（室）消毒。
4.6 在空调净化系统正常运行30分钟后，在洁净区（室）内没有生产人员的情况下，监测人员穿戴好符合洁净级别要求的工作服，进入洁净区（不得多于二人）进行测试。
4.7 根据洁净区（室）面积大小确定最少采样点数目，在满足最少采样点数目的同时，还宜同时满足最少培养皿数。
采样点的布置应力求均匀，避免在某局部区域过于集中，培养皿应布置在有代表性的地方（如关键设备或易受污染的地方）和气流扰动最小的地方。
3.8将培养基表面暴露0.5小时后，收集培养皿，将培养皿倒置于恒温培养箱中，30-35℃培养48小时，每批培养基应有对照试验，每批可选定3只培养皿做对照培养，其中2只培养皿做阳性对照，1只培养皿做阴性对照。
4.9 达到规定的培养时间后，菌落数用肉眼直接计数、标记或在菌数计数器上点计，并用5-10倍放大镜检查有否遗漏。
洁净区沉降菌培养检验操作规程
洁净区沉降菌培养检验操作规程管理⽂件⼀、⽬的：规范洁净区沉降菌培养检验操作标准⼆、适⽤范围：洁净区沉降菌培养检验操作操作三、责任者：质量管理部四、内容：1.沉降菌培养1.1由QC⼈员将复核的培养⽫转移⾄恒温培养箱；1.2培养前，培养箱温度应设为32℃或者22℃，1⼩时后检测培养箱温度是否恢复正常；1.3采⽤⼤⾖酪蛋⽩琼脂培养基配制的培养⽫时，在32℃的培养箱中培养，培养时间为2天；采⽤沙⽒培养基配制的培养⽫时，在22℃培养箱中培养，时间为5天；1.4培养时每天检测培养箱温度⼀次，以培养箱中温度计温度为准。
2.检测（菌落计数）2.1⽤⾁眼对培养⽫上所有菌落直接计数，专⼈复核是否计数有遗漏；2.2若平板上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；2.3计数时⼀般⽤透射光对培养⽫背⾯或正⾯仔细观察，不要漏记培养⽫边缘⽣长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，⽤显微镜鉴别；2.4将所计数菌落进⾏记录，然后进⾏结果计算。
3.结果计算：3.1⽤计数⽅法得出各个培养⽫的菌落数，按下式计算：式中：M——平均菌落数M 1——1号培养⽫菌落数M——2号培养⽫菌落数2Mn——n号培养⽫菌落数N——培养⽫总数3.2结果评定：3.2.1⽤平均菌落数判断洁净室（区）空⽓中微⽣物；3.2.2洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准；3.2.3若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进⾏消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
4.洁净区沉降菌检测标准：4.1洁净区沉降菌检测静态标准：4.2洁净区沉降菌检测动态标准：5.⾮主要⼯作区的其他洁净区域，静态测试频次为每半年测试⼀次，动态测试频次为每⼀年测试⼀次。
洁净室沉降菌测试标准操作规程
5.1.3.2.动态测试洁净区已处于正常生产状态下进行的测试。
5.2.试准备5.2.1.仪器与设备5.2.1.1.培养皿：φ90mm×15mm，121℃20分钟湿执灭菌。
5.2.1.2.高压灭菌器、恒温培养箱处于完好状态。
5.2.1.3.制备采样皿：取已配制好的普通营养琼脂培养基，检查品名及使用期是否在规定期限内，外观性状是否有异常，确认无误后，将培养基放入水浴中熔化，冷却到约45℃时，在规定条件下高压蒸气灭菌，在超净工作台以无菌操作技术注入培养皿中，每皿约15ml，冷凝后倒置于30-35℃恒温培养箱培养48小时，无菌生长方可供采样用。
5.2.1.4.编号对培养皿按测定区域及个数进行编号。
编号前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现有质量问题的应以剔除。
5.2.1.5.根据洁净室房间多少及面积，计算所需的培养皿数。
5.3.测试5.4.采样将培养皿在各个测试洁净区域按附表1和附表2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖好。
5.5.培养全部采样结束后，取样员将培养皿和放置记录一并交化验室主任，化验室主任将培养皿交于检验员检测、检验员将培养皿倒置于30-35℃恒温培养箱中培养48小时。
5.5.1.1.计数取出用肉眼计数，然后用5-10倍放大镜检查有否遗漏。
5.6.记录按《沉降菌测试记录》填写。
5.7.结果计算计数各个培养皿的菌落数并求其平均值。
计算公式：M—平均菌落数M 1……Mi—分别为1号至I号培养皿菌落数6.2.3.可在关键设备或关键工作范围内增加采样点。
6.3.检测结束后，质量部发检测报告，将所有记录一并归档。
6.4.测定频次车间洁净（区）每3个月测一次；微生物限度检查室每周期测一次，其超净化工作台每次实验时同时测定；有净化要求的取样间或取样车每3个月测一次。
6.5.空气净化系统连续停运1周以上，经对房间进行消毒后测沉降菌。
附表3 ：平均菌落数标准洁净级别100级10000级100000级30000级平均标准1个/皿3个/皿10个/皿15个/皿。
洁净区沉降菌培养检验操作规程
管理文件一、目的：规范洁净区沉降菌培养检验操作标准二、适用范围：洁净区沉降菌培养检验操作操作三、责任者：质量管理部四、内容：1.沉降菌培养1.1由QC人员将复核的培养皿转移至恒温培养箱；1.2培养前，培养箱温度应设为32℃或者22℃，1小时后检测培养箱温度是否恢复正常；1.3采用大豆酪蛋白琼脂培养基配制的培养皿时，在32℃的培养箱中培养，培养时间为2天；采用沙氏培养基配制的培养皿时，在22℃培养箱中培养，时间为5天；1.4培养时每天检测培养箱温度一次，以培养箱中温度计温度为准。
2.检测（菌落计数）2.1用肉眼对培养皿上所有菌落直接计数，专人复核是否计数有遗漏；2.2若平板上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；2.3计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别；2.4将所计数菌落进行记录，然后进行结果计算。
3.结果计算：3.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算：式中：M——平均菌落数M 1——1号培养皿菌落数M——2号培养皿菌落数2Mn——n号培养皿菌落数N——培养皿总数3.2结果评定：3.2.1用平均菌落数判断洁净室（区）空气中微生物；3.2.2洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准；3.2.3若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
4.洁净区沉降菌检测标准：4.1洁净区沉降菌检测静态标准：4.2洁净区沉降菌检测动态标准：5.非主要工作区的其他洁净区域，静态测试频次为每半年测试一次，动态测试频次为每一年测试一次。
洁净区沉降菌测定规程
1.目的:明确洁净区(室) 沉降菌的质量控制标准，规范洁净区(室) 沉降菌的检验操作方法2.适用范围：洁净区(室) 沉降菌的控制和测试方法，及车间洁净室和洁净区无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。
3.责任者：质量控制部洁净区(室) 沉降菌检验操作人员车间QC检验操作人员。
4.操作内容和方法：4.1.定义：4.1.1菌落4.1.1.1细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU，通常用个数表示。
4.1.1.2 沉降菌⑴用规定的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.2.应对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。
4.2.1监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）等。
4.2.2动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。
成品批记录的审核应当包括环境监测的结果。
4.2.3对表面和操作人员的监测，应当在关键操作完成后进行。
在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。
4.2.4洁净区微生物监测的动态标准(1)如下：4.2.4.1表中各数值均为平均值。
4.2.4.2单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。
4.3. 沉降菌测试操作方法：4.3.1洁净区沉降菌控制限度：4.3.2、测试操作方法：4.3.2.1本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3.2.2所用的仪器和设备⑴高压消毒锅：使用时应严格按照仪器说明书操作。
⑵恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
⑶培养皿：一般采用Ф90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
⑷培养基：普通肉汤琼脂培养基（微生物限度检查法）或其他药典认可的培养基。
洁净室（区）沉降菌检测标准操作规程
洁净室（区）沉降菌检测标准操作规程⽬的制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试⽅法，指导沉降菌的测试⼯作。
范围适⽤于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。
责任QC微⽣物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进⾏统计分析。
程序1.定义1.1.菌落：微⽣物培养后，由⼀个或⼏个微⽣物繁殖⽽形成的微⽣物集落，简称CFU。
1.2.沉降菌：通过⾃然沉降原理收集在空⽓中的活微⽣物粒⼦，通过专⽤的培养基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。
1.3.动态测试：洁净室（区）已处于正常⽣产状态设备在指定的⽅式下进⾏，并且有指定的⼈员按照规范操作的状态。
2.测试⽅法2.1.测试过程2.1.1.设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平⽫或者⾃制TSA平⽫。
2.2.测试条件2.2.1.洁净室（区）的温度和相对湿度应与其⽣产及⼯艺要求相适应（⽆特殊要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。
2.2.2.风速、压差应在合格范围内。
2.2.3.动态测试。
2.3.测试⽅法2.3.1.将准备好的培养⽫按采样点要求放置或放在沉降架上（约1.0m）。
将采样台⾯取样位置或采样辅助设施表⾯消毒，打开培养⽫，将培养⽫盖置于已消毒位置，将培养⽫置于培养⽫盖上，使培养基表⾯充分暴露后，将培养⽫盖盖上后倒置。
2.3.2.在每⼀只培养⽫上标记好具体的取样位置及取样⽇期，将所有培养⽫在QC微⽣物室进⾏培养观察。
2.4.培养观察计数2.4.1.全部采样结束后，将培养⽫倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。
2.4.2.每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本⾝是否污染。
可每次选定2只培养⽫作对照培养。
2.5.计算2.5.1.平均菌落数M= M1＋M2＋…MNNM1＝1号培养⽫菌落数M2＝2号培养⽫菌落数Mn＝n号培养⽫菌落数n＝培养⽫总数2.5.2.结果判定2.5.2.1.最终结果采⽤平均值。
洁净区沉降菌操作规程
洁净区沉降菌操作规程洁净区沉降菌操作规程1. 概述洁净区沉降菌操作规程是为了确保洁净区域内的空气质量符合规定标准而制定的。
洁净区是进行微生物检测和培养工作的重要区域，任何存在细菌或其他微生物的污染都可能对结果产生影响。
因此，严格遵守该操作规程对于保证数据的准确性和可靠性至关重要。
2. 操作人员要求2.1. 操作人员必须经过相关培训，了解并熟悉本操作规程的内容。
2.2. 操作人员应具备良好的个人卫生习惯，必须在进入洁净区前进行必要的清洁操作，如洗手、更换工作服等。
2.3. 操作人员在操作过程中应保持安静，避免尘埃、气流等对样品产生污染。
3. 设备要求3.1. 洁净区内的设备必须定期进行消毒和清洁，保证操作环境的洁净度。
3.2. 设备必须符合相关的规定标准，确保其在操作过程中不会对样品产生污染。
3.3. 洁净区内必须配备必要的检测设备，如微生物培养箱、无菌平板等。
4. 操作流程4.1. 操作人员必须穿戴好个人防护装备，包括面罩、手套和工作服等。
4.2. 操作人员应在工作台上摆放必要的试剂和培养基。
4.3. 操作人员在摆放试剂和培养基的过程中应避免尘埃和颗粒物的产生。
4.4. 操作人员在取样过程中应使用无菌工具，避免污染样品。
4.5. 操作人员在操作完成后应及时清理工作台和设备，保持洁净区的干净和整洁。
5. 质量控制5.1. 洁净区内的空气质量必须定期进行检测，确保其符合规定的标准。
5.2. 洁净区内进行的实验必须进行严格的质量控制，包括阳性对照和负性对照的设置等。
5.3. 实验结果必须进行正确的解读和记录，确保数据的准确性和可靠性。
6. 废弃物处理6.1. 操作人员在操作过程中产生的废弃物必须进行正确的分类和处置。
6.2. 废弃物应按照相关规定进行正确的包装和封存，并交由专门的机构进行处理。
6.3. 废弃物的处理过程中必须避免对环境造成二次污染。
7. 紧急情况应对7.1. 在发生紧急情况时，操作人员必须立即停止操作，并按照相关规定采取应急措施。
沉降菌检测标准操作规程
沉降菌检测标准操作规程(总4页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除沉降菌检验标准操作规程1.目的本文件规定了洁净室（区）中沉降菌检验的操作方法，保证检验人员操作规范化、标准化，确保洁净室洁净度。
2.范围标准规定了医药工业洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室（区），无菌室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌测定。
本公司规定对万级净化实验室沉降菌检测项目进行一星期/次的检验。
3．职责QC操作人员、QC管理人员严格按照此规程执行；相关使用人员做好洁净室清洁维护工作。
4.内容4.1. 定义4.1.1.洁净室（区）对尘埃及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用均具有减少对区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
4.1.2.洁净工作台一种工作台或者与之类似的一个封闭围档工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
4.1.3.洁净度洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
4.1.4.菌落细菌培养后，由一个或几个细菌系列而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
4.1.5.沉降菌用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见菌落数。
4.1.6.静态测试洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。
4.1.7.动态测试洁净室（区）已处于正常状态下进行的测试。
4.2. 测试方法4.2.1.方法概述采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
洁净区环境沉降菌监测标准操作规程
依据：依据：《GMP》与药品生产质量检验的要求
目的：建立洁净环境沉降菌监测标准操作规程
范围：生产车间洁净区、生测室
1．仪器与试剂：ф90×150玻璃培养皿、普通肉汤琼脂培养基
2．操作方法：
2.1将培养皿布置在有代表性的地方和气流扰动最小的地方，其最少采样点数目见下表：
洁净级别100000级
面积（㎡）‹10 10 20 40 100
采样点数 2 2 2 2 3
2.2在每一采样点处，不论面积大小应至少放2个培养皿。
3．采样方法及培养：将培养皿按要求位置放置后，打开培养皿盖，使培养皿表面暴露30分钟后，将培养皿盖盖上，然后在30-35℃的条件（可用恒温培养箱）培养48小时后计数。
4．结果计算：
M =ΣM
i n
式中：M为平均菌落数（CFU）
5．结果判定
洁净粒度级别沉降菌落数（CFU/皿） 100000级平均≤10
300000级平均≤15。
车间洁净区、冷库沉降菌检测操作规程
1目的检测车间洁净区、冷库沉降菌，验证车间消毒的有效性。
2范围100级、1万级，10万级，30万级车间洁净区和冷库。
3检验依据GB/T16294-2010 医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法YY0033-2000 无菌医疗器具生产管理规范4内容4.1方法概述采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境中的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度已达到验证车间消毒的有效性。
4.2仪器和设备：高压蒸汽灭菌锅恒温培养箱培养皿，¢90mm×15mm玻璃培养皿培养基，平板计数琼脂4.3准备操作4.3.1将¢90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。
4.3.2按比例配置平板计数琼脂培养基，将其装入三角烧瓶，置于121℃湿热灭菌20min。
将加热溶化并冷却至46℃的培养基，在无菌操作要求下倒入培养皿，一般15ml～20ml/皿。
4.4采样点的布置：4.4.1采样点的布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置，布置规则如下图：4.4.2采样点数目：沉降法的最少采样点数可按表1确定。
表1 最少采样点数目面积m2洁净度级别100 1万10万/30万＜10≤≥≥10～＜20 ≥20～＜40 ≥40～＜100 ≥100～＜200 ≥200～＜400 ≥400～＜1000 ≥1000～＜2000≥2000 2～3481640801604008002224102040100200222236133263注：表面的面积：对于单向流洁净室，是指送风面积；对于非单向流洁净室是指房间的面积。
在满足最少采样点的同时，还应满足最少培养皿数，见表2。
表2 最少培养皿数洁净度级别所需¢90mm培养皿数（以沉降0.5h计）1001万10万/30万14 2 24.4.3工作区采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
沉降菌测试操作规程
1.0 目的通过监测发现问题及时采取措施予以解决，确保环境洁净度符合生产工艺要求。
2.0 适用范围适用于我公司净化车间十万级、万级和局部百级洁净区域。
3.0 职责3.1质量部负责净化车间环境检测。
4.0 工作程序4.1 原理4.1.1参照中华人民共和国国家标准GB/T 16294-2010《医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》进行。
本方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物性粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
4.2测试状态4.2.1 沉降菌测试前被测试洁净室已经过消毒。
4.2.2 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中（原始记录）中注明测试状态。
4.3 测试人员4.3.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.3.2 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
4.4 培养基4.4.1 培养基用大豆酪蛋白琼脂培养基或沙氏培养基。
4.4.2 培养皿一般采用Ф90mm×15mm规格的培养皿。
测试前培养皿表面必须严格消毒。
4.4.3 将培养基按要求配制加热熔化后，分装、灭菌。
冷却至60℃时，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿中。
加盖后在室温放至凝固。
4.4.4 制备好的培养基平皿在 2～8 ℃保存，一般以一周为宜。
4.5 测试时间测试应在净化空调系统正常运行不少于30min以后开始。
4.6 测试点和记录4.6.1 测试点按附录《沉降菌测试点分布图》。
4.6.2 测试点（采样点）的位置离地面 0.8米左右（略高于工作面）。
4.6.3 在测试报告中应记录房间温度、相对湿度、测试状态。
4.6.4 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
4.6.5不同面积的最少采样点数目见表1表14.6.6最少培养皿数：在满足最少采样点数目的同时，还应满足最少培养皿数，见表2 表24.6.7采样次数：每个采样点一般采样一次 4.7 平均菌落数的计算：平均菌落数NM M M M n21 ++＝ (1)式中： M 代表平均菌落数 M n 代表n 号培养皿的菌落数 N 代表培养皿总数 4.8 测试步骤4.8.1 将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
洁净区沉降菌监测标准操作规程
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1 目的与适用范围
建立洁净区（室）中沉降菌的监测规程，保证药品在规定的洁净级别内进行生产。
本规程适用于洁净区（室）的沉降菌的监测。
2 职责
质量控制部负责人、微生物检验员对本标准的实施负责。
3 内容
3.1 引用标准： GB/T 16294-1996。
3.2 定义：
3.2.1 洁净室：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
3.2.2 洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围档工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。
3.2.3 洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
3.2.4 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU 。
通常用个数表示。
3.2.5 沉降菌：用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
3.2.6 悬浮粒子：可悬浮在空气中的尺寸一般在0.001um ～1000um 之间的固体、。
洁净室沉降菌检测标准操作规程
洁净室沉降菌检测标准操作规程⒈目的：建立沉降检测的标准操作程序，用以规范员工的检测操作。
⒉范围：适用于公司内部生产洁净区内的沉降菌检测工作⒊责任：生产部、生产车间、质量管理部、QC检验室主任、检验员对本规程的执行负责。
⒋检测依据： YY/T0188.6－1995药品检验操作规程，第6部分，药品生物测定法。
⒌内容：5.1 设备：高压消毒锅、恒温培养箱；5.2 培养基及平皿制备：5.2.1 培养皿：一般采用￠90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
5.2.2 培养基一般采用普通肉汤琼脂培养基或其它药典认可的培养基。
5.2.3 将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟或于180℃干热灭菌2小时。
5.2.4 将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
5.2.5 待琼脂凝固后，将培养基平面倒置于30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平面上确无菌落生长，即可供采样用。
5.2.6 制备好的培养基平面宜在2～8℃的环境中存放。
5.3 采样点：5.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数。
最少采样点数目5.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
5.3.3 测试标准洁净区微生物监控的静态标准(a)如下：洁净区微生物监控的动态标准(a)如下：5.4 测试规则5.4.1 测试状态5.4.1.1 沉降菌测试前,被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
5.4.1.2 沉降菌测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。
5.4.1.3 测试状态有静态和动态二种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
静态测试时洁净室净化空调系统已处于正常运行状态。
洁净室沉降菌检测标准操作规程
1. 目的建立洁净室沉降菌检测的标准操作程序，用以规范检测人员的检测操作。
2. 范围适用于洁净区沉降菌的检测。
3. 职责3.1质量部专职检验员负责洁净室沉降菌的检测。
3.2 质量监督员负责监督本规程的执行情况。
4. 内容4.1仪器设备及培养基4.1.1培养皿：玻璃培养皿或一次用无菌培养皿。
4.1.2培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。
4.1.3仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅。
4.2 检测用培养基平皿的制备玻璃培养皿使用前应先灭菌，制备培养基平皿时注意无菌操作，每批次应设置对照平皿。
制备好的培养基平皿在2～8℃的环境中存放。
4.3采样4.3.1 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。
采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
图1 采样点位置参考图4.3.2 采样次数对任何小洁净室或局部空气净化区域，采样点不得少于2个，每个采样点一般采样一次。
表2 最少培养皿数注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积，对于非单向流洁净室，是指房间面积。
4.4采样注意事项4.4.1 测试用具要做无菌处理，以确保测试的可靠性，正确性。
4.4.2 采取一切措施，防止人为对样本的污染。
4.4.3对培养基、培养条件及其它参数做相应的记录。
4.4.4 计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别。
4.4.5采样前应仔细检验每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。
4.5 测试状态空态、静态和动态三种状态均可进行测试。
空态或静态时，室内测试人员不得多于2人。
确保静态测试时洁净室净化空调系统已处于正常运行状态，动态测试时洁净室已处于正常生产状态。
测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
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洁净室沉降菌检测标准操作规程
⒈目的：建立沉降检测的标准操作程序，用以规范员工的检测操作。
⒉范围：适用于公司内部生产洁净区内的沉降菌检测工作
⒊责任：生产部、生产车间、质量管理部、QC检验室主任、检验员对本规程的执行负责。
⒋检测依据： YY/T0188.6－1995药品检验操作规程，第6部分，药品生物测定法。
⒌内容：
5.1 设备：高压消毒锅、恒温培养箱；
5.2 培养基及平皿制备：
5.2.1 培养皿：一般采用￠90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
5.2.2 培养基一般采用普通肉汤琼脂培养基或其它药典认可的培养基。
5.2.3 将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟或于180℃干热灭菌2小时。
5.2.4 将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
5.2.5 待琼脂凝固后，将培养基平面倒置于30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培
养基平面上确无菌落生长，即可供采样用。
5.2.6 制备好的培养基平面宜在2～8℃的环境中存放。
5.3 采样点：
5.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数。
最少采样点数目
5.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
5.3.3 测试标准
洁净区微生物监控的静态标准(a)如下：
洁净区微生物监控的动态标准(a)如下：
5.4 测试规则
5.4.1 测试状态
5.4.1.1 沉降菌测试前,被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
5.4.1.2 沉降菌测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。
5.4.1.3 测试状态有静态和动态二种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
静态测试时洁净室净化空调系统已处于正常运行状态。
动态测试时洁净室已处于正常生产状态。
5.4.2 测试人员
5.4.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服.
5.4.2.2 静态测试时，所有生产设备均已安装就绪，但未运行，室内测试人员不得多于二人。
测试时间：对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始；对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
5.4.2.3 动态测试时，所有生产设备按预定的工艺模式运行并有规定数量的操作人员在现场操作。
5.4.3 测试步骤
5.4.3.1 采样方法:将已制备好的培养皿按采样点的布置要求放置，打开培养皿盖，使培养皿表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖上后倒置。
5.4.3.2 培养：全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中，在30～35℃培养，时
间不少于48小时。
5.4.3.3 菌落计数：用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点记，然后用5～10倍放大镜检查，有无遗漏。
若培养皿上有二个以上菌落重叠，可分辨时以二个以上菌落数计数。
5.5 注意事项：
5.5.1 测试用具要做无菌处理，以确保测试的可靠性，正确性。
5.5.2 采取一切措施，防止人为对样本的污染。
5.5.3 对培养基、培养条件及其它参数做祥细的记录。
5.5.4 计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别。
5.5.5 采样前应仔细检验每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。
5.6 结果计算：
用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算：
M1+M2+………+Mn
平均菌落M= ————————
n
式中：M--平均菌落数
M1--1号培养皿菌落数
M2--2号培养皿菌落数
Mn--n号培养皿菌落数
n--培养皿总数
5.7 结果评定：用平均菌落数判断洁净室（区）空气中微生物。
5.7.1 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
5.7.2 若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
5.8 记录：
5.8.1 测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。
记录必须有日期和实验员签名，并交质量管理科会签。
5.8.2 记录本应保留至最后一次记录后的二年。
5.8.3 存档处必须在记录本中注明。