福林酚测定法
蛋白质的定量测定—福林-酚试剂法
蛋白质的定量测定—福林-酚试剂法一、实验目的：1、学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法。
2、掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量。
3、掌握分光光度计的使用方法。
二、实验原理：Folin-酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。
甲试剂由碳酸钠，氢氧化钠，硫酸铜及酒石酸钾钠组成。
蛋白质中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用,生成蛋白-Cu2+紫红色络合物。
乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸,硫酸,溴等组成。
此试剂在碱性条件下，易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈深蓝色反应，在一定条件下，深蓝色强度与蛋白质浓度成正比。
三、实验步骤：取洁净干试管7支，按下表操作：30分钟后，以空白管对照，于660nm处比色，读取吸光度值。
四、结果与分析：1.吸光度A660值表2.绘制标准曲线以纵座标为吸光度，横座标为蛋白质浓度，绘制标准曲线，如下图：由图可知直线方程为y=5.6741x，待测管吸光度值为0.105，即y=0.105时，x=0.105/5.6741=0.0185g/L样品蛋白浓度（g/L）=0.0185×6.5×500=60.13g/L3.标准管法求浓度2号标准管与待测管吸光度相近，代入公式计算：样品蛋白浓度（g/L）=(0.105/0.087)×0.25×(0.4/1.0)×500=60.34g/L五、讨论1.如果只用乙试剂而不用甲试剂，也可以发生颜色反应，只是所要耗费时间较长。
2.甲试剂在本实验中起提供碱性环境的作用，其中的Cu2+还起到类似于催化剂作用，使反应更快显色。
3.福林-酚试剂法的主要缺点在于此法对蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量有要求，如果没有酪氨酸和色氨酸的话就无法显色。
4.所用试管一定要干净、干燥，否则即便是微量也会对反应体系造成影响，影响颜色变化，最终影响吸光度的测定。
5.加入试剂乙混匀后静置30min，使氧化还原反应充分反应。
福林酚法测定多酚含量原理
福林酚法测定多酚含量原理
福林酚法是一种测定多酚含量的方法。
福林是一种具有还原性的酚类
物质，可以与多酚反应生成具有蓝色，紫色，红色等吸光度较高的络合物。
该方法的原理基于福林与多酚之间的氧化还原反应。
福林酚法的测定步骤如下：
1.加样：取适量待测样品，放入试管中。
2.福林试剂的配制：将适量的福林溶于适量的乙醇中，制成福林试剂。
3.加入福林试剂：将制备好的福林试剂加入试管中，与待测样品充分
混合。
4.氢氧化钠溶液的配制：将适量的氢氧化钠溶解于适量的蒸馏水中，
制成氢氧化钠溶液。
5.加入氢氧化钠溶液：将制备好的氢氧化钠溶液滴加到试管中，与混
合液充分混合。
6.开始反应：将试管加热，使福林与多酚之间的反应加速进行。
7.定时停止反应：经过一段时间后，停止加热反应。
8.冷却：待试管冷却后，测定反应液的吸光度。
9.测定吸光度：使用分光光度计等设备，测定反应液的吸光度。
10.计算：根据反应液的吸光度值，参照标准曲线，计算出待测样品
中多酚的含量。
福林酚法的原理是基于福林与多酚之间的氧化还原反应。
福林具有还原性，在碱性条件下，可以与多酚发生氧化还原反应。
福林通过氧化还原反应，可以将多酚从原来的无色状态转变为有色络合物。
反应过程中福林的还原能力会逐渐消耗，导致吸光度降低。
因此，反应液的吸光度与多酚的含量之间有一定的正比关系。
福林酚法的优点是操作简单，灵敏度高，对于多酚含量的测定具有一定的准确度和可靠性。
因此，福林酚法广泛应用于食品、医药、化妆品等领域中对多酚含量的测定。
Folin-酚法
ＹＹＳＷＤＢ００９０ 蛋白质含量测定福林酚法
YY-SW-DB-0090 蛋白质福林－酚法
１． 范围 本方法采用蛋白质与福林 本方法适用于各类蛋白质２．０毫克的氮酚试剂ｐｈｅｎｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ铜复合物磷钨酸还原成蓝色复合物蓝色强度与蛋白质量成正比２５０ｍＬ－１但其缺点也很明显
干扰物质多蔗糖巯基化物柠檬酸等标准曲线的直线关系不特别严格
３．试剂 碳酸钠，氢氧化钠，酒石酸钾钠，硫酸铜５Ｈ２ＯＮａ２Ｗ０４，钼酸钠（Ｎａ２Ｍｏ０４
４．仪器 ７２型分光光度计
１ＯｇＮａ
２ＣＯ３或钠盐或钾盐
０．５ｇＣｕＳＯ４每次使用前将两溶液以Ａ：Ｂ此为试剂甲
在１．５升的磨口回流瓶中加入１０Ｏｇ钨酸钠２Ｈ２Ｏ２５ｇ钼酸钠（Ｎａ２Ｍｏ０４
再加５ＯｍＬ ８５ｌ００ｍＬ浓盐酸接上回流冷凝管以小火回流
１０小时５０ｍＬ蒸馏水及数滴液体溴
冷却后溶液呈黄色须再重复滴加液体溴的步骤将溶液稀
稀至１升滤液置棕色瓶中保存以酚酞为指示剂
约加１倍水使最终的酸浓度为１ｍｏｌ ５．３ 标准蛋白质溶液浓度为２５０ｍＬ－１取动物血清
６．操作步骤 ６．１ 按下表顺序加入各试剂 试管编号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ 蛋白质含量ｇｍＬｍＬｍＬ室温下放置１０分钟
试剂乙Ｌ－１
立即混匀
然后利用未知样品的光密度值
８．说明
８．１ 比色测定时的波长可选６５Ｏｎｍ或６６０ｎｍ１００可选用７５Ｏｎｍ
若在１２５
９．参考文献
１ 李如亮 主编． 生物化学实验． 武汉１９９８． ３７－５８
２ 张龙翔等 主编． 生化实验方法和技术． 北京１９９７． １３６－１４４
３ 李建武等 合编． 生物化学实验原理和方法． 北京１９９４． １５０－１７４ 。
福林酚测多酚原理
福林酚测多酚原理
福林酚是一种常用的多酚测定试剂，其原理基于多酚物质与福林酚在酸性条件下发生显色反应。
该反应是一种氧化还原反应，其中福林酚被还原为其自由酸态，而多酚物质被氧化。
在多酚测定中，首先将待测样品中的多酚物质提取出来。
常用的提取溶剂包括乙酸乙酯、甲醇、乙醇等。
提取后的溶液与福林酚试剂混合，在酸性条件下加热反应，通常使用硫酸作为酸性媒介剂。
在这个过程中，多酚物质被氧化，同时福林酚被还原。
福林酚在氧化还原反应中由有色福林阳离子被还原为无色福林酚酸。
显色的特点是福林酚酸与多酚物质在酸性条件下形成一种深红色的络合物。
该特殊的显色反应可以通过光度计或比色计进行测量，从而确定多酚物质的含量。
多酚测定中，福林酚是一种常用的试剂，因其与多酚物质之间的特异性反应而被广泛应用。
福林酚测定法是一种简便、准确、快速的多酚测定方法，在生物学、药物学、化学等领域中得到了广泛的应用。
蛋白质的定量测定――福林酚法(Folin―酚试剂法)
蛋白质的定量测定――福林酚法(Folin―酚试剂法)实验原理Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法。
以后在生物化学领域得到广泛的应用。
此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。
这个方法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时较长，要严格控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。
凡干扰双缩脲反应的基团，如 -CO-NH2, -CH2-NH2, CS-NH2以及Tris缓冲液、蔗糖、硫酸铵、巯基化合物均可干扰Folin—酚反应，而且对后者的影响还要大得多。
此外，酚类、柠檬酸对此反应也有干扰作用。
Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。
甲试剂由碳酸钠，氢氧化钠，硫酸铜及酒石酸钾钠组成。
蛋白质中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用，生成紫红色络合物。
乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成。
此试剂在碱性条件下，易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应，其色泽深浅与蛋白质含量成正比。
此法也适用于测定酪氨酸和色氨酸的含量。
本法可测定范围是25—250μg蛋白质。
试剂和器材一、试剂Folin—酚试剂:试剂甲：1) 4%碳酸钠溶液2) 0.2mol/L氢氧化钠溶液3) 1%硫酸铜溶液4) 2%酒石酸钾钠溶液。
临用前将（1）与（2）等体积配制碳酸钠—氢氧化钠溶液。
（3）与（4）等体积配制成硫酸铜—酒石酸钾钠溶液。
然后这两种试剂按50:1的比例配合，即成Folin—酚试剂甲。
此试剂临用前配制，一天内有效。
试剂乙：称钨酸钠（Na2WO2?2H2O）100g，钼酸钠（Na2MoO4?2H2O）25g置2000mL磨口回流装置内，加蒸馏水700mL，85%磷酸50mL和浓硫酸100mL。
充分混匀，使其溶解。
小火加热，回流10h（烧瓶内加小玻璃珠数颗，以防溶液溢出），再加入硫酸锂（LiSO4）150g，蒸馏水50mL及液溴数滴。
福林酚测定法
福林酚测定法试剂碱性铜试液取氢氧化钠10g，碳酸钠50g,加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合，作为乙液。
临用前，合并两液，并加水至500ml。
操作法⑴对照品溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3ml的溶液。
⑵供试品溶液的制备照各药品项下的方法制备。
⑶标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分别置具试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液（取福林试液中的贮备液1→16）4.0ml，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴中10分钟，在650nm的波长处测定吸收度；同时以0号管作为空白。
以吸收度作为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标绘制标准曲线。
⑷测定法精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入碱性铜试液起，依法测定，自标准曲线上查得供试品溶液的浓度，并乘以稀释倍数。
二）试剂与器材1.试剂（1）试剂甲：（A）10克 Na2CO3，2克 NaOH和0.25克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）。
溶解于500毫升蒸馏水中。
（B）0.5克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶解于100毫升蒸馏水中，每次使用前，将50份（A）与1份（B）混合，即为试剂甲。
（2）试剂乙：在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4·2H2O）,25克钼酸钠（Na2 MoO4·2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时，加入150克硫酸锂（Li2SO4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。
冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。
福林酚实验
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、目的熟悉并掌握福林（Folin）—酚法测定蛋白质浓度的原理和方法。
二、原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。
三、实验仪器1.卵清蛋白片2.7220分光光度计3.试管4.移液管四、实验试剂1. Folin-酚试剂A：碱性铜溶液甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml中。
临用时按甲：乙=50：1混合使用。
2. Folin-酚试剂B：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸馏水、50ml85%磷酸继100ml浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏10小时，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。
冷却，稀释至1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。
临用时，用1mol/l 的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。
3. 1mg/mL牛血清蛋白液：称取1g牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至1000ml四、实验步骤1.标准曲线的绘制取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图。
0.10.20.30.40.450.5牛血清蛋白液OD500摇匀，在室温下放置30分钟后在500nm下比色0.50.50.50.50.50.50.50.5Folin-酚试剂B摇匀，在室温下放置10分钟0.5（样液）4.00.54.00.44.00.34.00.24.00.14.00.054.04.0(1mg/ml)ml蒸馏水ml Folin-酚试剂A样品7654321管号2.样品测定准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度。
福林(Folin)-酚试剂法测定
将参比样品溶液和被测样 品溶液分别倒入比色皿中， 打开样品室盖，将盛有溶 液的比色皿分别插入比色 皿槽中，盖上样品室盖。 一般情况下，参比样品放 在第二个槽位中。 将0％T校具（黑体）置入 光路中，在T方式下按“0 ％T”键，此时显示器显示 “000.0”
四、实验步骤
1.标准曲线的绘制 取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比 色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标 作图。 2.样品测定 准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下 表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求 出样液的蛋白质浓度。
管号 牛血清蛋白液 (1mg/ml)ml 蒸馏水ml 蒸馏水 Folin-酚试剂 酚试剂A 酚试剂
摇匀，在室温下放置 分钟后在 分钟后在500nm下比色 摇匀，在室温下放置30分钟后在 下比色 OD500
蛋白质含量测定的方法有哪些，各有什么优 缺点？
下次试验：氨基酸纸层析和维生素C 下次试验：氨基酸纸层析和维生素 定量测定-2， ，二氯酚靛酚法。 定量测定 ，6，二氯酚靛酚法。
附：7200型分光光度计的操作程序
比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此， 比色皿的清洁程度 ， 直接影响实验结果 。 因此 ， 特 别要将比色皿清洗干净。装样前处理： 别要将比色皿清洗干净 。 装样前处理 ： 自来水反复 冲洗→蒸馏水漂洗2次 → 待装溶液漂洗 2次 。用完后 待装溶液漂洗2 冲洗 → 蒸馏水漂洗2 用自来水和蒸馏水洗净并用檫镜纸檫干放回比色皿 盒中。 盒中。
福林酚法
Folin酚法测定蛋白酶活力(2009-06-16 18:03:47)转载标签：生物蛋白酶活力测定folin酚法原理杂谈分类：专业学习一、原理采用福林-酚试剂法。
福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)，由于蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)，可使蛋白质及其水解产物呈上述反应。
因此可利用此原理测定蛋白酶活力。
通常以酪蛋白为底物，在一定pH值和温度条件下，同酶液反应，经一段时间后终止酶促反应，经离心或过滤除去酪蛋白筹沉淀物后取上清液，用Na2CO3碱化，再加入福林-酚试剂显色，蓝色的深浅与滤液中生成产物酪氨酸量成正比;酪氨酸含量用分光光度计在660nm波长处测定，从而计算出蛋白酶的活力。
二、试剂1) 福林-酚试剂向2000mL的磨口回流瓶中加入100g钨酸钠(Na2WO2•2H2O)、25g钼酸钠及700mL的去离子水，再加入50mL85%的磷酸及浓盐酸l00mL，充分混合后，接上回流冷凝管，以小火回流10h，结束后再加入150g的硫酸锂(LiSO4)、50mL去离子水及数滴液溴，再继续沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后滤液呈黄绿色(如仍呈绿色，需再重复滴加溴水的步骤)，加去离子水定容至1000mL，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中，贮于冰箱中可长期保存备用。
此溶液使用时可按1:3比例用去离子水稀释。
2) 0.4mol/L三氯乙酸(TCA)溶液精确称取TCA65.4g，加去离子水定容至1000mL。
3) 0.4mo1/L碳酸钠溶液精确称取无水碳酸钠42.4g，加去离于水溶解后，定容至1000mL。
4) pH值3～6醋酸缓冲液精确取NaAc•3HO16g与268mL浓度为6mol/L醋酸溶液混合，用去离子水稀释定2容至1000mL。
5) 2%酪蛋白底物缓冲液a) 测试酸性蛋白酶缓冲液精确称取酪蛋白20g，加入0.1mol/L氢氧化钠20mL(用去离子水配制)，在水浴中加热溶解，然后用pH值3.6醋酸缓冲液定容至1000mL。
福林酚法测定蛋白酶活力原理
福林酚法测定蛋白酶活力原理1. 什么是福林酚法？福林酚法，这个名字听上去有点复杂，但其实就是一种测定蛋白酶活力的办法。
简单来说，它就像是蛋白酶的“测谎仪”，用来告诉我们这些酶到底有多能干。
要理解这个方法，我们先得知道什么是蛋白酶。
蛋白酶，顾名思义，就是能把蛋白质搞得七零八落的“拆家伙”。
它们在生物体内的作用可大了，像是消化酶，它们的“工作”就是分解我们吃下去的食物中的蛋白质。
2. 福林酚法的工作原理2.1 准备材料好，咱们先说说准备工作。
你得有几个“主角”，分别是蛋白质底物、蛋白酶、福林酚试剂和氢氧化钠。
底物就是我们用来测试的“蛋白质样品”，而福林酚试剂则是测定结果的“显色剂”。
氢氧化钠用来调整酸碱度，确保反应顺利进行。
2.2 反应过程这个过程就像是做菜一样。
首先，把蛋白质底物和蛋白酶混合，放在一定温度下孵育一段时间。
这时候，蛋白酶开始“拆解”蛋白质了。
接下来，加入福林酚试剂，它会和被分解出来的小分子反应，变成有颜色的化合物。
颜色的深浅，就像是菜的颜色一样，直接反映了反应的程度。
然后，我们用光度计来测量这个颜色，颜色越深，说明蛋白酶的活力越强。
3. 数据分析和结果解读3.1 数据分析有了测量数据后，我们得拿出计算器了。
通过比色计测得的光吸收值，可以告诉我们有多少蛋白质被分解了。
这时候，咱们要把这些数据代入标准曲线中，得出最终的结果。
标准曲线就像是我们的“食谱”，按照它来判断蛋白酶的活力高低。
3.2 结果解读结果解读这一步就像是看天气预报一样。
通过分析，我们可以知道蛋白酶的活力究竟如何。
如果蛋白酶的活力高，那说明它的“拆家”能力强；如果低，那可能就是“效率不高”了。
这样，我们就能了解蛋白酶的实际情况，为后续的实验提供依据。
4. 实际应用福林酚法可不仅仅是在实验室里用得上，它在很多领域都有实际应用。
比如，在制药行业，它能帮助我们评估药物的效果；在食品工业，它可以帮助检测食品中的酶活性，确保食品的质量。
福林酚法测总酚原理
福林酚法测总酚原理
《福林酚法测总酚原理大揭秘》
嘿，大家知道不，有一种特别的方法可以用来测总酚，那就是福林酚法哟！这福林酚法测总酚的原理呢，就好像我们生活中的一件小趣事一样。
就说有一次我在厨房做蛋糕吧，我想知道我做的蛋糕里到底有多少“精华”成分。
这就好比我们要知道样品里有多少总酚。
然后呢，福林酚试剂就像是一个神奇的小侦探，它能和那些酚类物质发生反应。
就像我在找蛋糕里的某种特别味道一样，它能准确地把酚类给“揪”出来。
接着呀，这个反应会产生一种颜色的变化，哇，就像蛋糕烤好后颜色变得金黄诱人一样。
我们通过观察这个颜色的深浅，就能知道总酚的含量大概有多少啦。
这整个过程是不是很有意思呀！就像我们在生活中通过一些小细节去发现大秘密一样。
福林酚法就是这样神奇地帮我们测出总酚，让我们对样品有更深入的了解呢！嘿嘿，现在大家对福林酚法测总酚原理是不是有更清楚的认识啦！。
福林酚_实验报告
1. 理解福林酚法测定蛋白质浓度的原理。
2. 掌握福林酚试剂的配制方法。
3. 学习使用分光光度计进行蛋白质定量分析。
4. 通过实验，提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理福林酚法是一种常用的蛋白质定量分析方法。
其原理基于蛋白质中的酪氨酸和色氨酸在碱性条件下与福林酚试剂反应，生成蓝色的复合物。
该复合物的颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，通过比色法可以测定蛋白质的浓度。
三、实验材料1. 标准蛋白质溶液（已知浓度）2. 待测蛋白质溶液3. 福林酚试剂4. 碱性铜试剂5. 0.1mol/L NaOH溶液6. 0.85mol/L H2SO4溶液7. 10% TCA溶液8. 1%牛血清白蛋白溶液9. 7200型可见分光光度计10. 移液器11. 试管12. 烧杯13. 移液管14. 实验记录表格1. 福林酚试剂的配制a. 称取10g钨酸钠、2.5g钼酸钠，加入70ml蒸馏水。
b. 加入5ml 85%磷酸和10ml浓盐酸，充分混匀。
c. 将混合溶液转移至150ml磨口圆底烧瓶中，接上磨口冷凝管，回馏1小时。
d. 加入15g硫酸锂和5ml蒸馏水，混匀。
2. 蛋白质样品的处理a. 取0.1ml标准蛋白质溶液，加入1.9ml 0.1mol/L NaOH溶液，混匀。
b. 取0.1ml待测蛋白质溶液，加入1.9ml 0.1mol/L NaOH溶液，混匀。
c. 将混合溶液转移至试管中，加入0.5ml福林酚试剂，混匀。
d. 室温下放置5分钟。
3. 碱性铜试剂的加入a. 取0.5ml碱性铜试剂，加入上述混合溶液中，混匀。
b. 室温下放置10分钟。
4. 比色测定a. 使用7200型可见分光光度计，在660nm波长下，测定样品的吸光度。
b. 以1%牛血清白蛋白溶液为空白对照，进行校正。
5. 结果计算a. 根据标准蛋白质溶液的吸光度，绘制标准曲线。
b. 根据待测蛋白质溶液的吸光度，从标准曲线上查得蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：以标准蛋白质溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
福林酚法测蛋白
福林-酚法的原理该方法是双缩脲法的发展，包括两步反应：(1)在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。
(2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原，混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物)，颜色深浅与蛋白质含量成正比。
此方法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100倍，定量范围为5～100μg蛋白质。
FolIn试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物，均有干扰作用。
此方法的缺点是有蛋白质的特异性影响，即不同蛋白质因络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同，标准曲线也不是严格的直线形式。
【仪器与用具】试管若干；刻度移液管05Ml 1支，1Ml 1支，10Ml 1支；定量加样器；圆底烧瓶；冷凝管1套(带橡胶管)；微量滴定管；小烧杯；微量进样器50μl 1支；721分光光度计；恒温水浴器；研钵；玻棒；离心机；离心管。
【试剂】NA2WO4·2H2O；NA2MoO4·2H2O；85％H3PO4；浓HCl；LI2SO4·H2O；溴水；酚酞指示剂；NA2CO3；NAOH；CuSO4·5H2O；酒石酸钾钠；牛血清白蛋白。
所用试剂均为化学纯或分析纯。
【方法】1试剂的配制(1)碱性铜试剂(相当于双缩脲试剂)的制备首先配制A液：4％碳酸钠(NA2CO3)溶液与0.2Mol／L氢氧化钠(NAOH)溶液等比例混合(2％NA2CO3，01Mol NAOH)；B液：1％硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶液与2％酒石酸钾钠溶液等比例混合(0.5％CuSO4·5H2O，0.1％酒1word格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。
石酸钾钠)。
在使用前将A液与B液按50∶1的比例混合即成。
此为FolIn—酚试剂甲液，此试剂只能使用1天。
酚试剂(相当于FolIn试剂)的配备：称取钨酸钠(NA2WO4·2H2O)100g、钼酸钠(NA2MoO4·2H2O)25g，加蒸馏水700Ml溶解于1500Ml 的圆底烧瓶中。
福林酚法测定茶树中茶多酚的分布水平
福林酚法测定茶树中茶多酚的分布水平摘要：采用福林酚法对茶树不同部位多酚化合物总含量进行测定，比较不同部位中茶多酚含量的差异，探讨茶多酚在茶树体内的分布情况。
结果表明，茶树中茶多酚含量随生长部位的不同而存在差异，叶片中茶多酚含量最高，根部含量最低。
了解茶树不同部位茶多酚的分布将有助于为茶树茶多酚代谢的相关研究奠定基础。
关键词：茶树；茶多酚；福林酚法；分布茶叶富含茶多酚，一般是茶叶中儿茶素类、酚酸类和花色素类多酚化合物的总称，是茶叶中具有生物活性的主要成分，其含量一般占干重的15%～35%，其含量及组成与制茶类别及品质关系密切，直接影响茶汤色泽、滋味，历来为茶叶科技工作者所重视[1-3]；此外，人们还发现茶多酚具有抑菌、消炎等多种功效，其抗氧化特性还可应用于肉类、蔬菜等产品保鲜及深加工保健等领域[4-6]。
本研究针对同一茶树的不同部位所含茶多酚含量进行比较，分析茶多酚在茶树中分布差异，以期为茶树茶多酚的代谢及体内转运途径等研究奠定基础。
1 材料与方法1.1 材料茶树品种：早白尖5号无性系6～7年生健壮植株；采样时间：2011年7月15日；采集地：四川省自贡市荣县五通农场茶园（海拔715 m左右）。
在不同植株上随机剪取样品，按根、茎、当年生新叶、隔年生老叶片归类，分别用塑料保鲜袋密封样品，迅速带回实验室，80～85 ℃热风烘干至恒重后粉碎备用。
1.2 试剂与仪器10 mg/100 mL没食子酸标准溶液；1%（m/V，下同）铁氰化钾，现配现用。
福林酚试剂：称取Na2CO3·2H2O 50 g和Na2HPO4·12H2O 12.5 g，加入350 mL去离子水、25 mL浓硫酸及50 mL浓HCl溶液，混匀，以小火回流10 h；再加入75 g LiSO4，25 mL去离子水及数滴溴，开口沸腾15 min，以除去过量溴，冷却后定容至500 mL，过滤至棕色试剂瓶中；用1 mol/L的NaOH标准液滴定，酚酞为指示剂，后稀释至终浓度为1 mol/L。
福林-酚法测定蛋白质含量教案
25
50
100
150
200
250
—
—
BSA标准溶液/mL
—
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
—
—
待测蛋白质溶液/mL
—
——Leabharlann ————
0.5
1.0
蒸馏水/mL
1.0
0.9
0.8
0.6
0.4
0.2
—
0.5
—
试剂甲/mL
均加入5mL摇匀，室温下放置10分钟
试剂乙/mL
均加入0.5mL，立即混匀，室温下放置30分钟后比色
使用时用标准氢氧化钠溶液滴定，以酚酞为指示剂，然后适当稀释（约加1倍水），使最终的酸浓度为1 mol/L。
标准蛋白质溶液：取结晶BSA溶于蒸馏水，浓度为250μg/mL。
未知蛋白质溶液：浓度未知的牛血清酪蛋白溶液，使用时不需要稀释。
实验步骤
将试管标号并按下列顺序加入各试剂
试管
1
2
3
4
5
6
7
8
9
蛋白质含量/μg
根据多组标准蛋白质溶液与福林-酚试剂反应后所测得的吸光度，绘制标准曲线。以此便可求出未知蛋白质溶液中的蛋白质含量。
仪器与试剂
仪器
分光光度计、试管与试管架、吸量管与洗耳球等
试剂
试剂甲：A液——10 g Na2CO3，2 g NaOH和0.5 g酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中。
B液——0.5 g CuSO4·5H2O溶于100mL蒸馏水中。
选择波长为650nm进行比色，根据所得结果绘制标准曲线，由此可求未知蛋白质溶液蛋白质的含量。也可将数据输入Excel中利用图表得到散点图，并得出线性回归方程，由方程求出未知蛋白质溶液中蛋白质含量。
原料中蛋白质含量测定（福林酚法）
蛋白质含量测定（福林酚法）1．原理福林酚试液能够与溶液中的蛋白质发生有色反应，且其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比。
2．碱性酒石酸铜溶液的配制：2.1溶液A：精密称定硫酸铜（CuSO4·5H2O）100mg于10mL容量瓶中，加5mL纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
2.2溶液B：精密称定水合酒石酸钾钠200mg于10mL容量瓶中，加5mL纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
2.3溶液C：称取10.0g的无水碳酸钠及2.0g氢氧化钠于100mL容量瓶中，加50mL 纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
2.4碱性酒石酸铜溶液：分别精密移取1mL溶液A和1mL溶液B混合在干燥洁净的小烧杯中，将此混合液缓缓注入到20mL的溶液C中，摇匀即得。
（注：此溶液需现配现用，不可超过24小时使用）3．Folin-酚溶液：精密移取市售的Folin-酚试液5.0mL于50mL容量瓶中，加纯化水稀释至刻度并摇匀。
4．标准溶液配制：4.1标准贮备液的配制：精密称定10.0mg牛血清白蛋白对照品于50mL容量瓶中，加纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀，冷藏后备用。
4.2系列标准溶液的配制：分别精密移取2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL和10.0mL的标准贮备液至5个10mL容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，标准溶液浓度分别为40µg/mL、80µg/mL、120µg/mL、160µg/mL、200µg/mL。
5．样品溶液的配制：精密称定样品0.50g于50mL容量瓶中，加纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
6．空白溶液为纯化水。
7．检样操作：7.1分别精密移取1.0mL 空白溶液、1.0mL 样品溶液和1.0mL5个系列标准于25mL 干燥洁净的纳氏比色管中；7.2在各个管中加入碱性酒石酸铜溶液1.0mL ，并立即混合均匀，室温放置10分钟后，再按时间先后加入3.0mL Folin-酚溶液，并立即混合均匀。
福林(Folin)-酚试剂法测定
光透过窗口 容 量 的 2/3
比色皿的光面要与光源在一条线上。 比色皿的光面要与光源在一条线上。
1 0 0.5 4.0
2 0.05 0.45 4.0
3 0.1 0.4 4.0
4 0.2 0.3 4.0
5 0.3 0.2 4.0
6 0.4 0.1 4.0
7 0.5 0 4.0
样品 0.5（样液） （样液） 0 4.0
摇匀，在室温下放置 分钟 摇匀，在室温下放置10分钟 Folin-酚试剂 酚试剂B 酚试剂 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
摇匀，在室温下放置 分钟后在 分钟后在500nm下比色 摇匀，在室温下放置30分钟后在 下比色 OD500
附：7200型分光光度计的操作程序
连接仪器电源线，确定仪器供电电源有良好的接地性能。 接通电源，使仪器预热20分钟。 用<MODE>键设置测试方式：投射比（T），吸光度（A）， 已知标准样品浓度值方式（C）和已知标准样品斜率（F） 方式。 用波长选择旋钮设置您所需的分析波长。
拿放比色皿时，应持其“毛面” 不要接触“光面” 拿放比色皿时，应持其“毛面”，不要接触“光面”。
毛面
光面
若比色皿外表面有液体，应用擦镜纸朝同一方向拭干， 若比色皿外表面有液体 ， 应用擦镜纸朝同一方向拭干 ， 以保证吸光度测量不受影响。 以保证吸光度测量不受影响。
比色皿内盛液应为其容量的2/3， 比色皿内盛液应为其容量的 ， 过少会影响实验 结果，过多易在测量过程中外溢，污染仪器。 结果，过多易在测量过程中外溢，污染仪器。
分光光度计的使用注意项 注意事项: 分光光度计的使用注意事项:
比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此， 比色皿的清洁程度 ， 直接影响实验结果 。 因此 ， 特 别要将比色皿清洗干净。装样前处理： 别要将比色皿清洗干净 。 装样前处理 ： 自来水反复 冲洗→蒸馏水漂洗2次 → 待装溶液漂洗 2次 。用完后 待装溶液漂洗2 冲洗 → 蒸馏水漂洗2 用自来水和蒸馏水洗净并用檫镜纸檫干放回比色皿 盒中。 盒中。
福林酚测肽法
一、原理福林（Folin）－酚试剂法结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反应，其中包括两步反应：第一步是在碱性条件下，与铜试剂作用生成蛋白质－铜络合物；第二步是此络合物将磷钼酸、磷钨酸试剂还原，生成磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色混合物，颜色深浅与蛋白含量成正相关。
在650nm比色测定的灵敏度比双缩脲法高100倍。
由于肽键显色效果增强，从而减少了因蛋白质种类引起的偏差。
该法适于微量蛋白的测定（范围为5～100μg蛋白质）。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：各种植物材料（二）仪器设备：1. 722分光光度计；2. 离心机；3. 恒温水浴；4. 定量加样器；5. 冷凝回流装置一套；6. 研钵；7. 离心管；8. 刻度移液管；9. 微量滴定管；10. 试管等；（三）试剂：标准蛋白质溶液：称取25mg牛血清蛋白，溶于100ml蒸馏水中，使终浓度为250μg ／ml；试剂甲；试剂乙。
三、实验步骤（一）标准曲线的绘制1. 取18×200mm试管7支，1～7编号，分别加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml标准蛋白质溶液，用蒸馏水补足1ml，使每管含蛋白量分别为0、25、50、100、150、200、250μg／ml。
2. 用定量加样器给每支试管中加入5ml甲液，混匀，于30℃下放置10min。
3. 再向试管中喷射加入0.5ml乙液，立即振荡混匀，在30℃下准确保温30min。
4. 以不加标准蛋白的1号管为空白，在650nm下用1cm光径的比色皿测定吸光度。
以标准蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
（二）样品的测定称取鲜样0.8g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，定容25ml过滤，取滤液1.0ml于试管中，然后重复标准曲线绘制中的2～4步骤，以空白管调零，测定吸光度。
根据吸光度查标准曲线，求出样品中的蛋白质含量。
四、结果计算：样品中蛋白的含量（mg/g）＝C×VT/（Vs×FW×1000）式中：C－查标准曲线值（μg）；VT－提取液总体积（ml）；FW－样品鲜重（g）；Vs－测定时加样量（ml）粗蛋白量（％）＝蛋白氮含量×6.2。
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福林酚测定法
试剂碱性铜试液取氢氧化钠10g，碳酸钠50g,加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合，作为乙液。
临用前，合并两液，并加水至500ml。
操作法⑴对照品溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3ml的溶液。
⑵供试品溶液的制备照各药品项下的方法制备。
⑶标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分别置具试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液（取福林试液中的贮备液1→16）4.0ml，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴中10分钟，在650nm的波长处测定吸收度；同时以0号管作为空白。
以吸收度作为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标绘制标准曲线。
⑷测定法精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入碱性铜试液起，依法测定，自标准曲线上查得供试品溶液的浓度，并乘以稀释倍数。
二）试剂与器材
1.试剂
（1）试剂甲：
（A）10克 Na2CO3，2克 NaOH和0.25克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）。
溶解于500毫升蒸馏水中。
（B）0.5克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶解于100毫升蒸馏水中，每次使用前，将50份（A）与1份（B）混合，即为试剂甲。
（2）试剂乙：在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4·2H2O）,25克钼酸钠（Na2 MoO4·2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时，加入150克硫酸锂（Li2SO4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。
冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。
稀释至1升，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。
使用时用标准NaOH 滴定，酚酞作指示剂，然后适当稀释，约加水1倍，使最终的酸浓度为1N左右。
（3）标准蛋白质溶液: 精确称取结晶牛血清清蛋白或γ—球蛋白，溶于蒸馏水，浓度为250μg/ml左右。
牛血清清蛋白溶于水若混浊，可改用0.9%NaCl溶液。
2. 器材
（1）可见光分光光度计
（2）旋涡混合器
（3）秒表
（4）试管16支
（三）操作方法
1. 标准曲线的测定：取16支大试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分成两组，分别加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升标准蛋白质溶液（浓度为250μg/ml）。
用水补足到1.0毫升，然后每支试管加入5毫升试剂甲，在旋涡混合器上迅速混合，于室温（20～2 5℃）放置10分钟。
再逐管加入0.5毫升试剂乙（Folin—酚试剂），同样立即混匀。
这一步混合速度要快，否则会使显色程度减弱。
然后在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于700nm处测定各管中溶液的吸光度值。
以蛋白质的量为横座标，吸光度值为纵座标，绘制出标准曲线。
注意：因Lowry反应的显色随时间不断加深，因此各项操作必须精确控制时间，即第1支试管加入5毫升试剂甲后，开始计时，1分钟后，第2支试管加入5毫升试剂甲，2分钟后加第3支试管，余此类推。
全部试管加完试剂甲后若已超过10分钟，则第1支试管可立即加入0.5毫升试剂乙，1分钟后第2支试管加入0.5毫升试剂乙，2分钟后加第3支试管，余此类推。
待最后一支试管加完试剂后，再放置30分钟，然后开始测定光吸收。
每分钟测一个样品。
进行多试管操作时，为了防止出错，每位学生都必须在实验记录本上预先画好下面的表格。
表中是每个试管要加入的量（毫升），并按由左至右，由上至下的顺序，逐管加入。
最下面两排是计算出的每管中蛋白质的量（微克）和测得的吸光度值。
Folin—酚试剂法实验表
2. 样品的测定：取1毫升样品溶液（其中约含蛋白质20~250微克），按上述方法进行操作，取1毫升蒸馏水代替样品作为空白对照。
通常样品的测定也可与标准曲线的测定放在一起，同时进行。
即在标准曲线测定的各试管后面，再增加3个试管。
如上表中的8、9、10试管。
根据所测样品的吸光度值，在标准曲线上查出相应的蛋白质量，从而计算出样品溶液的蛋白质浓度。
注意:由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，显色的深浅往往随不同的蛋白质而变化。
因而本测定法通常只适用于测定蛋白质的相对浓度（相对于标准蛋白质）。
四、改良的简易Folin—酚试剂法
（一）试剂
1. 试剂甲：碱性铜试剂溶液中，含0.5N NaOH、10%Na2CO3、0.1%酒石酸钾和0.05%硫酸铜，配制时注意硫酸铜用少量蒸馏水溶解后，最后加入。
2. 试剂乙：与前面的基本法相同。
临用时加蒸馏水稀释8倍。
3. 标准蛋白质溶液：同基本法。
（二）操作步骤
测定标准曲线与样品溶液的操作方法与基本法相同。
只是试剂甲改为1毫升，室温放置10分钟后，试剂乙改为4毫升。
在55℃恒温水浴中保温5分钟。
用流动水冷却后，在660nm下测定其吸光度值。
改良的快速简易法，可获得与 Folin—酚试剂法（即Lowry基本法）相接近的结果。