化学发光标记免疫分析法
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化学发光标记免疫分析法
1 第一部分
何为化学发光标记免疫分析？
化学发光
化学发光：又称为冷光，它是在没有任何光、热或电场 等激发的情况下由化学反应而产生的光辐射。
直接化学发光
标记物为吖啶酯或者ABEI
酶促化学发光
标记物为碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶
ห้องสมุดไป่ตู้
电化学发光
标记物为三联吡啶钌
化学发光剂
在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放 能量的化合物
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析（CLIA）：将化学发光或生物发光体系与 免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记 免疫测定技术。
A
直接化学发光免疫分析
B 化学发光酶免疫分析
C 电化学发光免疫分析
直接化学发光免疫分析
--- 夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
带吖啶酯 标记物抗
体
（1） 加入H2O2 （pH<10）
表 人血清样品IgG浓度检测
相对标准偏差（RSD）：<5% 检测限（LOD）：2.9 × 10−11 M
其他免疫法检测IgG的检测限： •时间荧光免疫分析：5 μg/L •流免疫分析5.0 ×10−7 M •电化学免疫分析法：1.0 × 10−10 M •荧光共振能量转移(LRET)免疫分析：0.88 μg/mL
人体免疫球蛋白A检测
化学发光夹心法检测lgA装置：多毛细管玻璃板的微孔示意图
化学发光免疫分析检测IgA过程
化学发光强度和lgA浓度的关系
人体免疫球蛋白A检测 集束板与96孔板检测lgA的比较
冲洗后
（2） 加入碱 （pH>10）
发光
化学发光酶免疫分析
辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析
化学发光酶免疫分析
碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析
2 第二部分
文献调研
人体免疫球蛋白G检测
检测原理，A：初步免疫；B：竞争免疫
1.鲁米诺；2.FITC
425nm处鲁米 诺的化学发光信 号增强
化学发光剂
电化学发光剂反应原理
化学发光剂
鲁米诺:化学名称为3-氨基邻苯二甲酰肼 鲁米诺发光原理
化学发光剂
AMPPD:化学名称为 3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧 酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐
AMPPD发光原理
标记技术
发光物标记 酶标记 元素标记
标记技术：将
化学发光剂的 分子与某些分 子结合，直接 或间接地测定 待测组分。通 过分析被标记 物来完成对待 测组分的测定
01 吖啶酯 Add your texts here
02 三联吡啶钌
03 鲁米诺及其衍生物 04 AMPPD
化学发光剂
吖啶酯:在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm 的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮 是该发光反应体系的发光体。
化学发光剂
三联吡啶钌: [RU(bpy)3]2+是电化学发光剂，它和电子供 体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一个电子而发生 氧化反应。
525nm处的 FITC发光信号降 低
不同IgG浓度下CRET免疫传感器的荧光光谱。IgG浓度分别为：0 (a), 0.5 (b), 1 (c),1.5 (d), 2 (e), 2.5 (f), 3 (g), 3.5 (h), 及4 nM (i)。插入的曲线为荧 光强度比率（R=I425/I525）随浓度变化曲线
1 第一部分
何为化学发光标记免疫分析？
化学发光
化学发光：又称为冷光，它是在没有任何光、热或电场 等激发的情况下由化学反应而产生的光辐射。
直接化学发光
标记物为吖啶酯或者ABEI
酶促化学发光
标记物为碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶
ห้องสมุดไป่ตู้
电化学发光
标记物为三联吡啶钌
化学发光剂
在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放 能量的化合物
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析（CLIA）：将化学发光或生物发光体系与 免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记 免疫测定技术。
A
直接化学发光免疫分析
B 化学发光酶免疫分析
C 电化学发光免疫分析
直接化学发光免疫分析
--- 夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
带吖啶酯 标记物抗
体
（1） 加入H2O2 （pH<10）
表 人血清样品IgG浓度检测
相对标准偏差（RSD）：<5% 检测限（LOD）：2.9 × 10−11 M
其他免疫法检测IgG的检测限： •时间荧光免疫分析：5 μg/L •流免疫分析5.0 ×10−7 M •电化学免疫分析法：1.0 × 10−10 M •荧光共振能量转移(LRET)免疫分析：0.88 μg/mL
人体免疫球蛋白A检测
化学发光夹心法检测lgA装置：多毛细管玻璃板的微孔示意图
化学发光免疫分析检测IgA过程
化学发光强度和lgA浓度的关系
人体免疫球蛋白A检测 集束板与96孔板检测lgA的比较
冲洗后
（2） 加入碱 （pH>10）
发光
化学发光酶免疫分析
辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析
化学发光酶免疫分析
碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析
2 第二部分
文献调研
人体免疫球蛋白G检测
检测原理，A：初步免疫；B：竞争免疫
1.鲁米诺；2.FITC
425nm处鲁米 诺的化学发光信 号增强
化学发光剂
电化学发光剂反应原理
化学发光剂
鲁米诺:化学名称为3-氨基邻苯二甲酰肼 鲁米诺发光原理
化学发光剂
AMPPD:化学名称为 3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧 酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐
AMPPD发光原理
标记技术
发光物标记 酶标记 元素标记
标记技术：将
化学发光剂的 分子与某些分 子结合，直接 或间接地测定 待测组分。通 过分析被标记 物来完成对待 测组分的测定
01 吖啶酯 Add your texts here
02 三联吡啶钌
03 鲁米诺及其衍生物 04 AMPPD
化学发光剂
吖啶酯:在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm 的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮 是该发光反应体系的发光体。
化学发光剂
三联吡啶钌: [RU(bpy)3]2+是电化学发光剂，它和电子供 体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一个电子而发生 氧化反应。
525nm处的 FITC发光信号降 低
不同IgG浓度下CRET免疫传感器的荧光光谱。IgG浓度分别为：0 (a), 0.5 (b), 1 (c),1.5 (d), 2 (e), 2.5 (f), 3 (g), 3.5 (h), 及4 nM (i)。插入的曲线为荧 光强度比率（R=I425/I525）随浓度变化曲线