化学发光标记免疫分析法
常见化学发光免疫分析技术比较
常见化学发光免疫分析技术比较1、化学发光免疫分析化学发光免疫分析chemiluminescence immunoassay,CLIA,英音：,kemi,lju:mi'nesəns ,imju:nəuə'sei是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术;是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术;CLIA是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术;是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术;1.1、化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统;化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子hv , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额;免疫反应系统是将发光物质在反应剂激发下生成激发态中间体直接标记在抗原化学发光免疫分析或抗体免疫化学发光分析上, 或酶作用于发光底物;1.2、化学发光免疫分析类型化学发光免疫分析法以标记方法的不同而分为两种:1化学发光标记免疫分析法;2酶标记、以化学发光底物作信号试剂的化学发光酶免疫分析法1.2.1 化学发光标记免疫分析化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析CL IA , 是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法;常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridiniumester AE , 是有效的发光标记物,其通过起动发光试剂NaOH-H2O2作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成, 为快速的闪烁发光;吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法, 大分子抗原则采用夹心法, 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度;1.2.2 化学发光酶免疫分析从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂, 操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质如酶标记的抗原或抗体进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物, 在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定;目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶HRP 和碱性磷酸酶AL P , 它们有各自的发光底物;12.2.1 HRP 标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺3-氨基邻苯二甲酰肼,luminol , 或其衍生物如异鲁米诺4-氨基邻苯二甲酰肼 , 是一类重要的发光试剂;其结构如图4 所示;鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行, 在过氧化物酶及活性氧过氧化阴离子O2- , 单线态氧1O2 , 羟自由基OH· , 过氧化氢H2O2存在下,生成激发态中间体, 当其回到基态时发光, 其波长为425nm;早期用鲁米诺直接标记抗原或抗体 , 但标记后发光强度降低而使灵敏度受到影响;近来用过氧化物酶标记抗体, 进行免疫反应后利用鲁米诺作为发光底物, 在过氧化物酶和起动发光试剂N aOH-H2O2作用下, 鲁米诺发光, 发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度;Kodak AmerliteTM 半自动分析系统就是利用这一体系专门设计的;1.2.2.2增强发光酶免疫分析enhanced luminescence enzyme immunoassay, ELEIA在发光系统中加入增强发光剂, 如对2碘苯酚等, 以增强发光信号, 并在较长时间内保持稳定, 便于重复测量, 从而提高分析灵敏度和准确性;在全自动分析仪上, 还可通过计算机严密控制, 进行自动操作, 如加试剂, 混合, 温育, 洗涤, 加发光试剂, 发光计数, 数据处理, 绘制标准曲线, 直至完成病人血清样品的分析并打印出结果;Am erliteTM 发光增强酶免分析系统用荧光素、噻唑等增强剂, 其发光时间可持续长达20min, 试剂盒有甲状腺功能检测的促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素, 与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮, 以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等;1.2.2.3 ALP标记的CLEIA所用发光底物为环1, 2-二氧乙烷衍生物,,用于化学发光酶免分析底物而设计的分子结构中包含起稳定作用的金刚烷基, 其分子中发光基团为芳香基团和酶作用的基团, 在酶及起动发光试剂作用下引起化学发光;最常使用的底物AMPPD 3-2-spiroadamatane-4-methoxy-4-3-phosphoryloxy-phenyl-1,2-dioxetane Dioxetane中文名为: 3-2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-3-磷氧酰-苯基-1,2-二氧环乙烷;在碱性磷酸酶ALP 作用下, 磷酸酯基发生水解而脱去一个磷酸基, 得到一个中等稳定的中间体AMPD 半寿期为2-30min , 此中间体经分子内电子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子, 当其回到基态时产生470nm 的光, 可持续几十分钟如图5;AMPPD 为磷酸酯酶的直接化学发光底物, 可用来检测碱性磷酸酯酶或酶和抗体、核酸探针及其它配基的结合物;可检测到碱性磷酸酯酶的浓度为10-15mol/L ;美国DPC公司的Immulite全自动酶放大发光免疫分析仪, 以碱性磷酸酶为标记物, 以金刚烷作发光底物, 测定灵敏度相当于10- 21mol/mL的酶, 采用聚苯乙烯珠作载体, 其检测水平已能达到10- 12g/mL;AMPPD是一种生物化学领域中最新的超灵敏的碱性磷酸酶底物,其特点：反应速度快,在很短时间内提供正确可靠的结果;在它的分子结构中有两个重要部分,一个是联接苯环和金刚烷的二氧四节环,它可以断裂并发射光子；另一个是磷酸根基团,它维持着整个分子结构的稳定;在通常情况下,这种化合物很稳定;但是当有碱性磷酸酶存在时,DioxetanePhosphate作为酶的底物会在酶的催化一脱去磷酸根基团,形成一个不稳定的中间体;这个中间体随即自行分解二氧四节环断裂,同时发射光子;该试剂采用微粒子化学发光技术,采用最新磁性微粒,用以包被抗体;用碱性磷酸酶ALP标记抗原抗体;经过普通抗原抗体反应,碱性磷酸酶结合在微粒子上,碱性磷酸酶的结合量同病人血清中的待测物质成比例;经过洗涤反应管两边有磁场,磁性微粒包被的抗原抗体结合物被吸附在管子两边,其余游离部分被抽吸掉,最后加入发光底物DioxetanePhosphate,5分钟后,仪器通过光电倍增管检测反应的发光强度;AMPPD是碱性磷酸酶的化学发光底物,在适宜的缓冲液中,随着酶的催化水解作用,AMPPD分解成AMP-D,后者发出强度很高的光信号,其发光的速度取决于碱磷酶的浓度;当碱磷酶偶合到杂交的探针时,便可以通过此系统检测到杂交分子的存在量;2微粒体发光免疫分析微粒体发光免疫分析microparticle luminescence enzyme immunoassay,MLEIA ,该免疫分析技术有两种方法：一种是小分子抗原物质的测定采用竞争法;另一种是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法;该仪器所用固相磁粉颗粒极微小,其直径仅1.0μm,这样大大增加了包被表面积,增加抗原或抗体的吸附量,使反应速度加快,也使清洗和分离更简便,从而减少污染,降低交叉污染概率;反应中使用碱性磷酸酶ALP标记抗原或抗体,作用于其底物二氧乙烷磷酸酯,由其在激发态与基态的动力学变化中发生发光反应;2.1、竞争反应其原理是：用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,其免疫反应的结合形式有两种,一是标记抗原与抗体结合成复合物；二是测定抗原与抗体的结合形式;如受检标本中含有待测抗原,则与标记抗原以同样的机会与磁颗粒包被的抗体结合,竞争性地占去了吖啶酯标记抗原与磁颗粒包被的抗体结合的机会,使吖啶酯标记抗原与磁颗粒包被的抗体的结合量减少;由于磁颗粒包被的抗体是过量的,足以与待测抗原结合;2.2、双抗体夹心法：其原理是：标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式,即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物;具体讲是以顺磁性微珠作为载体包被抗体,利用磁性微珠能被磁场吸引,在磁场的作用下发生力学移动的特性,迅速捕捉到被测抗原,当加入标本后,标本中的抗原与磁性抗体形成复合物,在磁力的作用下,协助该复合物快速地与其他非特异性物质分离,使抗原-抗体结合反应的时间缩短,测定时间减少,降低了交叉污染的几率,此时再加入碱性磷酸酶标记的第二抗体,形成磁珠包被抗体-抗原-酶标记抗体复合物,经洗涤去掉未结合的抗体后,加入ALP的发光底物环1,2-二氧乙烷衍生物AMPPD ;AMPPD被复合物上ALP催化,迅速地去磷酸基团,生成不稳定的中间体AMPD;AMPD的快速分解,从高能激发态回到低能量的稳定态时,持续稳定地发射出光子hv,发射光所释放的光子能量被光量子阅读系统记录,通过计算机处理系统将光能量强度在标准曲线上转换为待测抗原的浓度,并报告结果;其检测水平可达pg/ml水平,重复性好; 3、电化学发光免疫分析Electrochemiluminescence immunoassay, ECLIAECLIA是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光ECL和免疫测定相结合的产物; 它的标记物的发光原理与一般的化学发光CLA不同,是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光二个过程;ECL与CLA的差异在于ECLA是电启动发光反应,而CLA是通过化合物混合启动发光反应;ECLA 不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA／RNA探针检测;其检测原理以TSH检测为例：第一步：结合了活化的三联吡啶钌衍生物即Rubpy32+ +N羟基琥珀酰胺酯NHS的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟;第二步：将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中,再次孵育9分钟,使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体,形成双抗体夹心法;下一步,蠕动泵将形成的 Rubpy32+-抗体-抗原-抗体-磁珠复合体吸入流动测量室,此时,磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面;同时,游离的TSH抗体与生物素结合的和与Rubpy32+结合的抗体也被吸出测量室;紧接着,蠕动泵加入含三丙胺TPA的缓冲液,同时电极加电压,启动ECL反应过程;发光剂 Rubpy32+和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应,使二价的Rubpy32+被氧化成三价,后者是一种强氧化剂；另一方面,TPA 被氧化成阳离子自由基TPA+●,后者很不稳定,可自发失去一个质子H+,形成自由基TPA●,这是一种很强的还原剂,可将一个电子给三价的Rubpy33+,使其形成激发态的Rubpy32+,而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛;激发态的Rubpy32+通过荧光机制衰减,发射出一个波长620nm的光子,重新生成基态的Rubpy32+;该过程在电极表面周而复始地进行,产生许多光子,光电倍增管检测光强度,光强度与Rubpy32+的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量;最后,终止电压,移开磁珠,加入清洗液冲洗流动测量室,准备下一个样品测定;4、时间分辨荧光免疫分析timeresolved fluoroimmunoassay,TRFIATRFIA以镧系元素作为标记物所建立的免疫测定技术;因镧系元素如Eu3+所发射的荧光寿命长,在测定特异性荧光时,可通过延迟检测时间而将标本或环境中的非特异荧光扣除,使其具有良好信噪比;时间分辨荧光免疫测定TRFIA是一种非同位素免疫分析技术,它用镧系元素标记抗原或抗体,根据镧系元素螯合物的发光特点,用时间分辨技术测量荧光,同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨,可有效地排除非特异荧光的干扰,极大地提高了分析灵敏度;在生物流体和血清中的许多复合物和蛋白本身就可以发荧光,因此使用传统的发色团进而进行荧光检测的灵敏度就会严重下降;大部分背景荧光信号是短时存在的,因此将长衰减寿命的标记物与时间分辨荧光技术相结合,就可以使瞬时荧光干扰减到最小化;时间分辨荧光分析法TRFIA实际上是在荧光分析FIA的基础上发展起来的,它是一种特殊的荧光分析;荧光分析利用了荧光的波长与其激发波长的巨大差异克服了普通紫外-可见分光分析法中杂色光的影响,同时,荧光分析与普通分光不同,光电接受器与激发光不在同一直线上,激发光不能直接到达光电接受器,从而大幅度地提高了光学分析的灵敏度;但是,当进行超微量分析的时候,激发光的杂散光的影响就显得严重了;因此,解决激发光的杂散光的影响成了提高灵敏度的瓶颈;解决杂散光影响的最好方法当然是测量时没有激发光的存在;但普通的荧光标志物荧光寿命非常短,激发光消失,荧光也消失;不过有非常少的稀土金属Eu、Tb、Sm、Dy的荧光寿命较长,可达1～2ms,能够满足测量要求,因此而产生了时间分辨荧光分析法,即使用长效荧光标记物,在关闭激发光后再测定荧光强度的分析方法医学教|育网搜集整理;平时常用的稀土金属主要是Eu铕和Tb铽,Eu荧光寿命1ms,在水中不稳定,但加入增强剂后可以克服；Tb荧光寿命1.6ms,水中稳定,但其荧光波长短、散射严重、能量大易使组分分解,因此从测量方法学上看Tb很好,但不适合用于生物分析,故Eu最为常用;4.1、时间分辨信号原理普通物质荧光光谱分为激发光谱和发射光谱,在选择荧光物质作为标记物时,必须考虑激发光谱和发射光谱之间的波长差,即Stokes 位移的大小;如果Stokes位移小,激发光谱和发射光谱常有重叠,相互干扰,影响检测结果的准确性;镧系元素的荧光光谱有较大的Stokes位移,最大可达290nm,激发光谱和发射光谱间不会相互重叠,加上其发射的光谱信号峰很窄,荧光寿命长,铕的荧光寿命可达730us,检测中只要在每个激发光脉冲过后采用延缓测量时间的方式,待短寿命的背景荧光衰变消失后,再打开取样门仪器记录长寿命铕鳌合物发射的特异性荧光,可以避免本底荧光干扰,提高检测的精密度;TRFIA的测量仪器是时间分辨荧光计,由三大部分组成：光源：脉冲光源：氙灯每秒闪烁1000次；小型N2激光器；输出脉冲波长：337nm荧光信号获取系统；数据处理系统医学教|育网搜集整理;4.2、解离增强原理解离增强镧系元素荧光免疫分析DELFIA是时间分辨荧光免疫分析中的一种;它用具有双功能基团结构的螯合剂,使其一端与铕Eu连接,另一端与抗体/抗原分子上的自由氨基连接,形成EU标记的抗体/抗原,经过免疫反应之后生成免疫复合物;由于这种复合物在水中的荧光强度非常弱,因此加入一种增强剂,使Eu从复合物上解离下来,自由Eu同增强剂中的另一种螫合剂螯合形成一种胶态分子团,这种分子团在紫外光的激发下能发出很强的荧光,信号增强了百万倍;因为这种分析方法使用了解离增强步骤,因此称为解离增强镧系元素荧光免疫分析;这是目前在时间分辨荧光免疫分析中应用最多的一种分析系统;。
化学发光免疫分析技术
• 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而 对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清 和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不 透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结 合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的 游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化 学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能 量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通 过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔 的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学 模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊 断。
血清FT3和FT4降低： ⑴甲减病人两者皆下降，但轻型甲减、甲减初期多 以FT4下降为主；⑵低T3综合征仅有FT3下降； ⑶某些药物，如苯妥英 钠、多巴胺、糖皮质激素也可使FT3和FT4降低。
• T3、T4均升高：高TBG血症、甲亢、甲状腺激素不敏感综合征。
化学发光免疫分析
一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望
一、化学发光免疫技术的概念
化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与 待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或 定性检测。
磁微粒模式图
特点 – 抗原和抗体结合与未结合 部分的易分离
Y
3.2、化学发光酶免疫分析
化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶 如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗 体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固 相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物 (发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光 电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至 计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
荧光和化学发光免疫分析方法
荧光和化学发光免疫分析方法荧光和化学发光免疫分析方法是一种常用的生物分析技术，广泛应用于生命科学研究、临床诊断和药物研发等领域。
本文将详细介绍荧光和化学发光免疫分析方法的原理、应用以及优缺点等方面。
首先，荧光免疫分析方法利用标记有荧光物质的抗体或抗原与待检测物相互作用，通过检测荧光信号来定量分析目标物。
其原理是当荧光标记物被激发后，会发射出特定波长的荧光信号，利用荧光光谱仪测量荧光强度来确定目标物的浓度。
荧光免疫分析方法具有高灵敏度、高选择性和多样性的优点，可用于检测蛋白质、核酸、细胞等生物分子。
化学发光免疫分析方法则是利用特定的化学反应产生荧光信号来检测目标物。
常用的化学发光免疫分析方法有酶免疫分析和化学发光免疫分析。
在酶免疫分析中，酶标记的抗体或抗原与待检测物相互作用后，加入底物，酶催化底物发生化学反应产生荧光信号。
而化学发光免疫分析则是通过特定的化学反应产生激发态分子，激发态分子发生无辐射跃迁产生荧光信号。
化学发光免疫分析方法具有高灵敏度、快速、稳定性好的特点，常用于临床诊断和药物研发等领域。
荧光和化学发光免疫分析方法在生命科学研究中有广泛的应用。
例如，在蛋白质研究中，可以利用荧光免疫分析方法检测蛋白质的表达水平、相互作用以及酶活性等。
在细胞研究中，荧光免疫分析方法可以用于检测细胞的分子分布、内源性蛋白质的表达和细胞信号传导等。
此外，荧光和化学发光免疫分析方法还可以用于检测病原体、药物残留和环境污染物等。
荧光和化学发光免疫分析方法具有许多优点。
首先，这些方法具有高灵敏度，可以检测到非常低浓度的目标物。
其次，这些方法具有高选择性，能够在复杂的样品中准确地检测目标物。
此外，荧光和化学发光免疫分析方法还可以实现高通量分析，节省时间和成本。
然而，荧光和化学发光免疫分析方法也存在一些缺点。
首先，荧光信号受到背景干扰的影响，可能导致误差的产生。
其次，荧光标记物的稳定性较差，容易受到光照和温度等因素的影响。
免疫法和化学发光法
免疫法和化学发光法免疫法是一种利用生物学技术测定生物样本中特定分子的方法。
这种方法主要利用生物分子（例如抗原、抗体、酶等）之间的特异性反应来检测生物样本中的目标分子。
免疫法被广泛用于检测临床样本中的疾病标志物、药物、毒素、微生物等物质，以及在环境、食品、水质等领域中的检测。
在免疫法中，典型的方法包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、免疫印迹（Western blot）、免疫荧光、免疫胶体金等。
这些方法中，ELISA被广泛使用，具有高灵敏度和特异性的优点。
它的基本原理是用酶标记的标记抗体与目标抗原结合，并通过酶的反应来测定目标抗原的存在。
此外，Western blot方法常用于检测抗体对蛋白质的结合，包括特异性抗体和糖蛋白成分的检测。
免疫荧光、免疫胶体金等方法也被广泛使用于病毒、微生物等的检测中。
化学发光法是一种利用光化学反应测定物质浓度的方法。
这种方法主要是利用特定化学反应发出光，且光的强度与检测物质的浓度成正比。
化学发光法的优点在于具有极高的灵敏度和特异性，适合于测定低浓度的分子、微生物等物质。
在化学发光法中，常用的方法包括荧光素氧化物酶发光法（luminol法）、鲁米诺发光法（luciferin-luciferase法）、电化学发光法等。
这些方法中，luminol法被广泛使用，用于检测过氧化物酶、铁、镁等物质的存在。
在luminol法中，用过氧化氢作为试剂将luminol氧化，发生光反应产生荧光。
此外，luciferin-luciferase法也被广泛使用于检测生物样本中ATP、细胞浓度等物质的存在，它利用了luciferin和luciferase之间的化学反应产生光的原理。
总的来说，免疫法和化学发光法是一种高度敏感、特异性强且可靠的分析方法，在临床医学、环境监测、食品安全等多个领域有广泛的应用前景。
化学发光免疫标记分析技术(基本原理)
吖啶酯化学发光系统-CH3-HOO-C=0-OH-光子+C02+-R
碱性磷酸酶化学发光系统-金钢烷（发光底物）及其衍生物的增敏化学发光系统-OCH3-AP-0P032-碱性磷 酶及其衍生物的化-·光子477nm
化学发光的检测类型-化学发光按化学反应类型分为：-◆直接化学发光（非酶促化学发光-吖啶酯系统-●-异鲁米诺 统-◆间接化学发光（酶促化学发光-·辣根过氧化物酶一鲁米诺系统（HRP系统-碱性磷酸酶一金刚烷系统AP系统 其它-电化学发光
板式化学发光-,适合流行病调查、疾病预防与控制、-体检中心，以及医院血站等大样本检-测项目的使用（比如HI 、TP、HCV和-乙肝两对半等。-通常采用96孔白色不透明微孔板进行包-被，不方便随到随测和医院急诊；-对 定量检测需要做标准曲线。-◆-国内厂家主要是板式化学发光系统
管式化学发光-采用管式或微粒子发光，测定快速、准确；-可以随到随测，适用于医院急诊；-定量检测的标准曲线存 在试剂条形码中，-可在2-4周内直接使用。-国外厂家全部是管式化学发光系统
间接化学发光-以碱性磷酸酶系统为例-洗涤清除团-间接化学发光：用参与发-◆》回+-光反应的酶来标记抗原或体，免疫反应后，加入-抗体包被-的磁珠-标记抗体-双抗体夹心复合物-发光底物，测定发光体系-的发光强度来进 抗原或-◆可茶-抗体的检测。-AMPPD-AMPD发光-两大反应体系：-辣根过氧化物酶-HRP系统：氧化还 反应，稳定性差-·源德、科美、安图-碱性磷酸酶（AP系统：水解反应，灵敏度较高-●-贝克曼：Access1 Access2,DXI600、DXI800-西门子：mmulite:1000,Immulite2000-达 生物：AULIN200
免疫学检测-◆-免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、-抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验手 及分子-生物学技术在免疫学研究中的应用。它包括：-抗原抗体的检测技术-免疫细胞的检测-细胞因子的检测-免疫 关基因分析-免疫标记技术-免疫PCRIM-PCR技术-杂交瘤技术与T细胞克隆技术
血检四项化学发光法调查
血检四项化学发光法调查目前血检四项（HBsAg、HCV、HIV、TP）的检测方法主要有酶联免疫（ELISA）、核酸扩增（PCR）、胶体金标记、以及化学发光（CLIA）。
现就CLIA在血检项目中的应用情况做一调查分析。
一．化学发光免疫分析法简介。
化学发光免疫分析法(Chemiluminescence imnunoassay，CLIA)是建立在放射免疫分析技术(radioimmunoassay，RIA)理论的基础上，以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法。
CLIA是利用化学反应中释放大量自由能，产生激发态中间体，当其回到稳定的基态时发射出光子（hν），用发光信号测量仪对所发出的光量子进行定量测量。
鲁米诺(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinim ester)衍生物、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)是目前CLIA中使用最多的四类标记物。
表1 化学发光法类型注：* 严格意义上属于荧光免疫。
二．国内外化学发光法的仪器和试剂情况。
国外化学发光法检测仪器的生产厂家以贝克曼、雅培、罗氏、拜耳这四家的市场占有率较高。
其中罗氏拥有唯一的电化学发光技术，雅培则独占微粒子酶联免疫（EMIA）。
不同厂家的仪器有各自的优势检测项目，主流的仪器型号如下：表2 国外主要化学发光免疫分析仪厂家国内也逐渐有厂家研制化学发光试剂，配合国外引进的仪器（多为半自动）共同销售，也有自发研制的化学发光仪（泰格科信）。
针对血检四项（HBsAg、HCV、HIV、TP），除北京科美生物（科美东雅）外，所有厂家试剂均只有HBsAg试剂。
表3 国内主要厂家仪器和试剂情况国外厂家的试剂大多随仪器配送，并没有在SFDA单独注册。
目前SFDA注册的血检四项化学发光法试剂列表如下。
就检测项目来看，除梅毒外，其余三项均可使用化学发光法；就现有资料，国内外只有北京科美东雅配有梅毒检测试剂。
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析化学发光免疫分析，也称为化学发光法或发光免疫测定法，是一种高灵敏度和高特异性的生物分析技术。
它结合了免疫学、生物学和化学的原理，利用特异性抗体与其抗原（或其他生物分子）相互作用，通过化学反应使其辐射出光信号，从而定量地检测目标物质的存在和含量。
一、化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析原理基于化学发光原理和免疫学原理。
化学发光原理就是将化学反应的能量通过光子的辐射转换为光的能量。
免疫学原理是利用特异性免疫反应来识别和区分不同的抗原或抗体。
化学发光免疫分析技术的基本步骤如下：1.选择特异性的抗体与目标物质的结合；2.引入辐射源激活化学发光前体（例如，过氧化物或二氧化硫酞）；3.目标物质与抗体发生结合后，释放了辐射源激活前体，使其进一步分解并产生化学发光；4.测定样品中的荧光强度，用于定量分析目标物质的存在和含量。
化学发光免疫分析发出的荧光信号对于抗原-抗体的结合非常敏感和特异。
比较常见的荧光标记物包括酶（如辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、荧光染料（如荧光素和荧光素衍生物）、金纳米粒子等。
二、化学发光免疫分析的应用化学发光免疫分析的应用涉及生物分子、环境污染、中药等领域。
下面将从这些不同应用领域来介绍化学发光免疫分析技术的具体应用。
1.生物分子分析生物分子分析是化学发光免疫分析技术的主要应用领域之一。
常见的生物分子包括蛋白质、核酸、糖等。
如免疫荧光分析技术可以快速、准确地分析细胞表面分子、内部生物分子和变态反应特异性IgE。
同时，化学发光免疫分析技术可以用于患者体液中的特定免疫球蛋白或蛋白质的定量检测。
2.环境污染分析环境污染分析是化学发光免疫分析技术的另一个主要应用领域。
通过测量土壤、水、空气等样品中的污染物含量，可以快速精准地确定其存在和含量。
化学发光免疫分析技术可用于检测重金属、有机污染物、致癌物等。
该技术不仅检测灵敏，而且简便易行。
3.中药分析中药分析中常用的技术包括高效液相色谱法、气相色谱法、电化学法等。
化学发光免疫分析方法
化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。
其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析。
化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。
化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。
免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。
化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。
待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。
一、化学发光免疫分析方法的类别化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为 3 大类，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。
（一）化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。
目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。
1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析。
鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。
在碱性溶液中，鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光，其中H2O2最为常用。
因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。
酶类主要是辣根过氧化物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、Cu2+、Co2+和它们的配合物。
鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子。
鲁米诺的发光光子产率约为0.01，最大发射波长为425 nm。
2. 吖啶酯类标记的化学发光免疫分析吖啶酯用于化学发光免疫分析方法（ChemiluminescentImmunoassay，CLIA）由于热稳定性不是很好，Klee 等研究合成了更稳定的吖啶酯衍生物。
化学发光免疫分析法报告
化学发光免疫分析法概述化学发光是物质在氧化还原过程中发光的现象。
能产生化学发光的物质称为化学发光剂。
化学发光免疫分析法是用化学发光剂包括发光物质或者发光反应催化剂等直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。
将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应结合起来，藉以检测抗原或抗体的分析技术。
将发光物质或酶标记在抗原或抗体上，免疫反应后，通过化学发光反应来测定发光标记物或酶标记物的化学发光信号，从而确定待测抗原或抗体的浓度.化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，clia）兴起于20世纪80年代，由于方法成熟，目前已经成为临床免疫诊断的主要方法。
化学免疫分析是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。
临床上所用的化学发光试剂盒包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。
免疫反应系统，其基本原理同酶联免疫技术（elisa）。
根据标记物的不同可分为三大类:1.标记酶的化学发光免疫分析，其中应用最多的是三种酶：依据HRP-Luminol-H202-对碘苯酚(PIP)增强型化学发光反应体系进行检测的辣根过氧化物酶(HRP)；能催化AMPPD的分解反应从而产生化学发光进行抗原抗体定量分析的碱性磷酸酶(ALP)；另一种是虫荧光素酶，能催化氧化虫荧光素产生发光而实现对ATP、各种激素、药物以及抗原抗体的定量分析。
2.标记直接化学发光物质的化学发光免疫分析，最典型的是标记氨基异鲁米诺(ABEI)和吖啶酯类的化学发光免疫分析。
3.标记荧光物质，通过过氧化草酸酯化学发光体系进行检测的化学发光免疫分析。
按照标记反应的过程和形成结合物的结构特点，可以将标记分子分为“直接偶联”和“间接偶联”两种方式。
间接偶联可以在原有结构中引进新的活性基，增加反应活性。
下面就鲁米诺、光泽精等几种化学底物发光原理作一简要评述。
1 常见的发光物质1.1 鲁米诺和其衍生物鲁米诺（luminol）和其衍生物是最早在化学发光免疫分析中使用而且被临床较广泛应用的一种常用的化学发光物。
免疫化学发光法
免疫化学发光法免疫化学发光法是一种具有高灵敏度、高特异性的免疫分析方法，在生物医学领域得到了广泛应用。
下面是关于免疫化学发光法的各个方面的介绍。
1.直接法直接法是一种简单的免疫化学发光技术，通过将特异性抗体与发光标记物直接结合，形成免疫复合物，然后测定复合物发出的光强度，从而实现对目标分子的定量检测。
直接法的应用范围广泛，如肿瘤标志物、病毒和细菌等微生物的检测。
使用直接法时需要注意保证抗体的特异性，以及避免非特异性结合的影响。
2.间接法间接法是通过将特异性抗体与酶或化学发光物质结合，形成酶或化学发光标记的抗体，然后将该抗体与目标分子反应，形成免疫复合物，最后加入相应的底物或激发剂，根据发光强度实现对目标分子的定量检测。
间接法的灵敏度较高，适用于多种生物分子的检测。
需要注意的是，要确保抗体的特异性以及发光标记物的稳定性。
3.竞争法竞争法是一种免疫化学发光技术，通过将特异性抗体与目标分子和发光标记的竞争性抗体结合，形成免疫复合物，然后测定复合物发出的光强度，实现对目标分子的定量检测。
竞争法的应用范围包括激素、病毒和肿瘤标志物等生物分子的检测。
使用竞争法时需要注意保证竞争性抗体的特异性，以及避免非特异性结合的影响。
4.夹心法夹心法是一种免疫化学发光技术，通过将特异性抗体与目标分子和发光标记的抗体分别结合，形成夹心状的免疫复合物，然后测定复合物发出的光强度，实现对目标分子的定量检测。
夹心法的灵敏度较高，适用于多种生物分子的检测。
需要注意的是，要确保抗体的特异性和发光标记物的稳定性。
5.斑点免疫法斑点免疫法是一种将特异性抗体或抗原点状固定在支持物上的免疫分析方法。
在斑点免疫法中，待测样品中的目标分子与已固定的抗体或抗原相互作用，形成免疫复合物，然后加入发光标记物，形成点状发光。
通过测量发光强度，实现对目标分子的定量检测。
斑点免疫法的优点是灵敏度高、特异性强、操作简便，适用于多种生物分子的检测。
需要注意的是，要确保固定化抗体或抗原的特异性和稳定性。
荧光和化学发光免疫分析方法
荧光和化学发光免疫分析方法荧光和化学发光免疫分析方法是现代生物医学研究和临床诊断中常用的分析方法。
这两种方法在原理和应用中有一些差异，但都具有高灵敏度、高选择性和高自动化程度的特点。
以下将详细介绍荧光和化学发光免疫分析方法的原理、应用和优缺点。
荧光免疫分析方法是基于荧光分子的发射特性进行分析的一种方法。
其原理是，通过标记抗体或抗原的荧光物质，使其具有荧光，并与待测物发生特异性的免疫反应。
然后，通过荧光测定仪器对免疫反应产生的荧光进行检测和分析。
荧光免疫法具有高灵敏度、高选择性、多样化的荧光标记物选择以及可通过多色荧光分析多个指标等特点。
因此在生物医学研究、肿瘤标志物筛查、病毒感染和免疫补体等方面具有广泛的应用。
荧光免疫分析方法主要分为直接荧光免疫分析和间接荧光免疫分析。
直接荧光免疫分析通过将荧光标记物直接结合到抗体或抗原上，实现荧光信号的检测和分析。
间接荧光免疫分析则是先将抗体与细胞或蛋白质结合，然后再用荧光标记的二级抗体结合到一级抗体上，以增强荧光信号。
这两种方法各有优缺点，可以根据具体需要选择使用。
化学发光免疫分析方法是基于化学发光反应进行分析的一种方法。
其原理是，在特定的化学反应条件下，荧光标记的抗体或抗原与待测物发生免疫反应，产生化学发光信号。
然后通过化学发光仪器对化学发光信号进行检测和分析。
化学发光免疫方法具有高灵敏度、快速、特异性高、背景干扰低等优点，因此在临床诊断和分子生物学研究中得到广泛应用。
化学发光免疫分析方法主要分为催化化学发光和基因工程发光两种类型。
催化化学发光是通过特定的酶促发光底物，在酶的作用下产生化学发光信号。
催化化学发光免疫分析方法常用于免疫分析和临床诊断。
基因工程发光则是通过将荧光基因植入生物体内，利用生物体自身的酶促发光反应产生化学发光信号。
基因工程发光免疫分析方法主要用于分子生物学研究领域。
荧光和化学发光免疫分析方法在临床诊断和生物医学研究中具有广泛的应用。
它们可以用于检测血液中的肿瘤标志物、感染性疾病的病原体抗原和抗体、免疫系统功能等指标。
化学发光免疫分析方法的种类
【化学发光免疫分析种类】
1.直接化学发光
A 吖啶酯发光
原理：纳米磁珠分离后的吖啶酯标记的抗原抗体复合物，在含H2O2的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见光，通过光电倍增管进行光子计数，相对光强度RLU与待测抗原浓度成函数关系。
特点：发光过程在5秒内完成，激发发光程序简单，测试速度快，但发光标记物吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，影响试剂稳定性。
代表仪器：拜耳公司的ACS180。
【化学发光免疫分析种类】
B 异鲁米诺发光
原理：发光过程和原理与吖啶酯完全相同，但激发发光速度更快，在3秒内完成整个过程，测试速度最快，而且克服了吖啶酯在缓冲液不稳定、易水解的缺点。
代表仪器：德国Byk–Sangtec公司的LIAISON
C 电化学发光
原理：纳米磁珠分离后的三联吡啶钌标记的抗原抗体复合物，在三丙胺的作用下，发生氧化还原反应，发出可见光，通过光电倍增管进行光子计数，相对光强度RLU与待测抗原浓度成函数关系。
特点：激发发光过程复杂，时间长，每一个发光过程约需25秒，测试速度慢。
代表仪器：瑞士ROCHE公司的ELECSYS 1010和ELECSYS 2010。
【化学发光免疫分析种类】
•2、酶促化学发光或持久发光
•原理：酶促化学发光一般是将碱性磷酸酶标记在抗体或抗原上，纳米磁珠分离后的碱酶标
记的抗原、抗体复合物在发光底物AMPPD作用下，持续发出可见光，通过光电倍增管读取光信号。
•特点：激发发光时间长，测试速度慢，因为酶易受环境温度的影响，试剂的稳定性不如直接化学发光好。
•代表仪器：美国贝克曼公司的ACCESS，雅培公司的AXSYM。
化学发光免疫分析法-自己整理
化学发光免疫分析法（CLIA）A、管式磁性微粒子化学发光免疫分析法：（竞争法：用标记抗原与待检抗原竞争性结合固相抗体，待检抗原与检测信号成反比）、原理：本实验采用竞争法，酶标抗原与标准品抗原竞争抗体，标准品抗原浓度越大，结合到抗体上的酶标抗原越少，RLU越小，B/B o值越小。
例：A为一种抗原小分子，有免疫反应性。
实验中采用竞争法对尿液中的A进行分析，使待测A、辣根过氧化物酶标记的A（A-HRP在均相体系中与异硫氰酸荧光素（FITQ标记的兔抗A抗体（FITC-A抗体）发生竞争性免疫反应，再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒，反应生成物结合在磁微粒上，在磁场经分离、洗涤后加发光底物，用冷光分析仪检测发光强度（RLU，测定尿液中A的含量、仪器:Flash ' n glow LB955管全自动进样冷光分析仪（Berthold公司）; 高速离心机（Beckman公司）,转速13000 r/min磁性分离器（北京科美生物技术有限公司定制，磁场强度2800高斯） XW80旋涡混合器（上海精科实业有限公司）试管12 X 60 mm®江拱东医用塑料厂）磁性微粒子（磁性分离剂,Adaltis公司）三、试剂1、A标准品2、A单克隆抗体•0——AFBi-BSA^HRP *：F!TC H AFB I +^4}抗FITCEFITC庐合別比FITCr^t I--r i詩玩FITC AFB1 FrrOAFBt^JMI 时fTC旳舸更片单丸垮序汗士体-F：障羊舍和料TJ5H笛箭♦—厲FR1 AF61^■ —FITC(- 歼ITC一餅3、A-BSA吉合物4、抗FITC抗体包被的磁性微粒子（5mg/mL）5、F ITC标记的A单克隆抗体6 HRP标记的A7、P BST 洗涤液L PBS,含% Tween-20）8、分析缓冲液mol/L的PBS缓冲溶液,pH ,含%BSA %的水解明胶、％的Procli n-300）9、发光底物液（鲁米诺、过氧化氢和对碘苯酚溶液）实验用水为二次蒸馏水四、试剂处理1、用分析缓冲液为稀释液，梯度稀释标准品；2、取A-BSA-HR溶液，以分析缓冲液为稀释液，梯度稀释,配制1:1000、1:2000、1:5000的A-BSA-HRP溶液,4 C保存.FITC-A单克隆抗体溶液的配制：取FITC-A 单克隆抗体溶液，以分析缓冲液为稀释液，梯度稀释，配制1:1000、1:2000、1:5000、1:10000、1:12000的FITC-A单克隆抗体溶液，4 C保存。
化学发光免疫分析方法.
为85.5％。Magliulo 等［20］建立了牛奶中黄曲霉毒素M1的化学发光酶
免疫分析方法，通过将黄曲霉毒素M牛血清白蛋白包被在聚丙烯板上，
通过酶标二抗在含有鲁米诺的基板上进行检测。该方法的最低检测限为
1 pg/mL，且板间板内数据的变异系数均低于9％，回收率在96％～
122％之间。 Lin 等［21］建立了农产品中黄曲霉毒素B1 的化学发光免 疫分析方法。该方法线性检测范围在0.05～10 ng/g 之间 ，检测灵敏度 为0.01 ng/g，板间及板内变异系数分别为12.2％及 10.0％。 农产品中样 品添加回收率在79.8％～115.4％之间。 同时， 将建立的分析方法与黄 曲霉毒素商品化酶联免疫试剂盒进行了相关性试验，相关系数为
菌素B1 的 ELISA 方法相比，其方法灵敏度提高了10 倍。 且通过样品的
添加回收率试验表明其有良好的回收率，其分析结果与ELISA 分析方法
与 HPLC 方法有良好的相关性。
Yang等［17］建立了食品中葡萄球菌肠毒素B（SEB）的碳纳米管的化
学发光免疫分析方法，通过将SEB 抗体吸附在碳纳米管表面 ， 然后将抗
方面报道还有Perschel 等［13］通过化学发光免疫分析对原发性醛固酮
过多症（PHA）进行快速筛选， Tudorache等［14］利用磁颗粒免疫支
持液膜方法（m-ISLMA）检测唾液中的孕酮含量，Iwata 等［15］利用双
夹心化学发光免疫分析方法测定血浆中内皮素－1的含量等。关于这方
面的应用，化学发光免疫分析方法应用的最为广泛，正是在医学检测方
种生物化学领域中最新的超灵敏的碱性磷酸酶底物，其特点是反应速度
快，在很短时间内提供正确可靠的结果。在它的分子结构中有两个重要
化学发光标记免疫分析法
化学发光标记免疫分析法化学发光标记免疫分析法（Chemiluminescent Immunoassay，CLIA）是一种常用于检测生物样本中特定分子的高灵敏度和高特异性的方法。
该技术利用化学发光效应，通过特异性抗体与抗原结合，进而检测出样品中的目标物质。
本文将探讨化学发光标记免疫分析法的原理、应用领域以及优点。
化学发光标记免疫分析法的原理是在化学反应中产生发光信号，该信号与目标物质的浓度成正相关。
这种发光反应一般是通过酶-底物体系进行催化反应来实现的。
常用的催化体系有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。
当特异性抗体与抗原结合时，HRP或AP被引入，与底物反应，产生可观察的发光信号。
该发光信号可以通过光子计数器或相关设备进行测量和定量，从而获得目标物质的浓度。
化学发光标记免疫分析法在许多领域中得到广泛应用。
在临床诊断中，它常用于检测生物体内的各种生物标志物，如肿瘤标志物、病毒抗原、抗体和药物浓度等。
在食品和环境安全领域，它可以用于检测食品中的农药残留、重金属和有毒物质等。
此外，化学发光标记免疫分析法还可应用于药物研发、生物学研究和环境监测等各个领域。
化学发光标记免疫分析法具有不少优点。
首先，它具有极高的灵敏度。
由于信号的产生是通过酶催化反应而非染色反应完成的，因此其灵敏度高于传统的染色法。
其次，该方法具有极高的特异性。
由于特异性抗体与抗原的结合是特异性的，因此它不会受到其他物质的干扰。
第三，化学发光标记免疫分析法的操作相对简单。
只需要将样品与标记抗体和底物反应，然后测量发光信号即可得到结果。
最后，该方法具有广泛的线性范围。
不同浓度的目标物质都可以在一定范围内进行准确测量。
尽管化学发光标记免疫分析法具有许多优点，但也存在一些局限性。
首先，该技术需要贵重的设备和试剂，因此成本较高。
此外，发光信号的持续时间较短，限制了信号的记录和测量时间。
最后，由于发光信号的产生涉及一系列的酶反应，因此在一些特殊样品（如高脂血样品）中可能会受到脂质干扰，影响结果的准确性。
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不同IgG浓度下CRET免疫传感器的荧光光谱。IgG浓度分别为：0 (a), 0.5 (b), 1 (c),1.5 (d), 2 (e), 2.5 (f), 3 (g), 3.5 (h), 及4 nM (i)。插入的曲线为荧 光强度比率（R=I425/I525）随浓度变化曲线
01 吖啶酯 Add your texts here
02 三联吡啶钌
03 鲁米诺及其衍生物 04 AMPPD
化学发光剂
吖啶酯:在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm 的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮 是该发光反应体系的发光体。
化学发光剂
三联吡啶钌: [RU(bpy)3]2+是电化学发光剂，它和电子供 体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一个电子而发生 氧化反应。
化学发光剂
电化学发光剂反应原理
化学发光剂
鲁米诺:化学名称为3-氨基邻苯二甲酰肼 鲁米诺发光原理
化学发光剂
AMPPD:化学名称为 3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧 酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐
AMPPD发光原理
标记技术
发光物标记 酶标记 元素标记
标记技术：将
化学发光剂的 分子与某些分 子结合，直接 或间接地测定 待测组分。通 过分析被标记 物来完成对待 测组分的测定
人体免疫球蛋白A检测
化学发光夹心法检测lgA装置：多毛细管玻璃板的微孔示意图
化学发光免疫分析检测IgA过程
化学发光强度和lgA浓度的关系
人体免疫球蛋白A检测 集束板与96孔板检测lgA的比较
冲洗后
（2） 加入碱 （pH>10）
发光
化学发光酶免疫分析
辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析
化学发光酶免疫分析
碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析
2 第二部分
文献调研
人体免疫球蛋白G检测
检测原理，A：初步免疫；B：竞争免疫
1.鲁米诺；2.FITC
425nm处鲁米 诺的化学发光信 号增强
表 人血清样品IgG浓度检测
相对标准偏差（RSD）：<5% 检测限（LOD）：2.9 × 10−11 M
其他免疫法检测IgG的检测限： •时间荧光免疫分析：5 μg/L •流免疫分析5.0 ×10−7 M •电化学免疫分析法：1.0 × 10−10 M •荧光共振能量转移(LRET)免疫分析：0.88 μg/mL
化学发光标记免疫分析法
1 第一部分
何为化学发光标记免疫分析？
化学发光
化学发光：又称为冷光，它是在没有任何光、热或电场 等激发的情况下由化学反应而产生的光辐射。
直接化学发光
标记物为吖啶酯或者ABEI
酶促物酶
电化学发光
标记物为三联吡啶钌
化学发光剂
在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放 能量的化合物
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析（CLIA）：将化学发光或生物发光体系与 免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记 免疫测定技术。
A
直接化学发光免疫分析
B 化学发光酶免疫分析
C 电化学发光免疫分析
直接化学发光免疫分析
--- 夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
带吖啶酯 标记物抗
体
（1） 加入H2O2 （pH<10）