简第四章 基因工程制药(二)
简述基因工程制药的基本流程
简述基因工程制药的基本流程基因工程制药是通过人工改造和调整生物体的基因来生产更有效、更安全的药物。
它的基本流程包括以下几个关键步骤。
1. 目标基因的筛选：在基因工程制药的过程中，首先需要确定目标基因。
目标基因是指具有治疗或预防特定疾病能力的基因。
研究人员通过分析遗传病或其他需要治疗的疾病的相关机制，找到与之相关的基因。
2. 基因克隆：在筛选目标基因后，研究人员需要对其进行基因克隆。
基因克隆是指将目标基因从其所在的生物体中分离出来，并通过PCR（聚合酶链式反应）等方法进行复制，形成多个完全相同的基因。
3. 基因的调整与修改：在基因工程制药中，研究人员还需要对目标基因进行调整和修改，以增强其表达或改变其特定性。
调整和修改的方法包括点突变、插入、删除或拼接等，以获得更理想的基因序列。
4. 载体构建：基因工程制药中常用的方法是将目标基因插入到载体中，通过载体帮助基因进入到目标生物体中并进行表达。
载体通常是一段DNA序列，包含促进基因表达和复制的区域。
在构建载体时，研究人员将目标基因与载体的DNA序列进行连接。
5. 重组表达：完成载体构建后，研究人员将其导入到宿主细胞中，并通过转染等方式使其表达。
在宿主细胞内，目标基因会被转录成mRNA，并通过翻译合成蛋白质。
6. 蛋白质纯化和药物制备：蛋白质是常见的生物制药产品，所以在基因工程制药中，研究人员需要对目标蛋白质进行纯化和制备。
纯化的目的是去除其他无关的蛋白质和杂质，使得产生的药物更纯净、更安全。
7. 药物测试和临床实验：基因工程制药生产的药物需要进行一系列的测试和临床实验，以确保其药效和安全性。
这些测试包括药理学、毒理学和临床试验等，通过这些测试可以评估药物的活性、剂量和不良反应等。
参考内容：[1] Rodin, A. S., & Antonova, O. V. (2021). Basic principles of genetic engineering for the production of pharmaceuticals [J]. Tomsk State University Journal of Biology, (4), 285-301.[2] Thomas, S., Sheela, S., & Skariah, K. (2011). Basic concepts in molecular biology related to genes, heredity, and genetic engineering–Review[J]. Indian journal of dental research: official publication of Indian Society for Dental Research, 22(5), 683. [3] Rao, P. A., Prudhvi, K. L., & Padmanaban, G. (2021). Principles and practice in genetic engineering: genome editing and its application in human therapeutics [J]. Journal of Advanced Research, 28, 43-56.[4] Sprouffske, K., Wagner, J. B., Weaver, L. T., & Adams, W. W. (2019). Genetic engineering as a tool for controlling infectious diseases: A guide [J]. Journal of infectious diseases, 219(12), 1871-1880.。
(完整版)生物技术制药习题答案(夏焕章版)
第一章绪论填空题1. 生物技术制药的特征高技术、高投入、高风险、高收益、长周期。
2. 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为三类，分别是治疗药物、预防药物、诊断药物。
3.现代生物药物已形成四大类型：一是应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂；二是基因药物；三是来自动物植物和微生物的天然生物药物；四是合成与部分合成的生物药物；4.生物技术的发展按其技术特征来看，可分为三个不同的发展阶段，传统生物技术阶段；近代生物技术阶段；现代生物技术阶段。
5.生物技术所含的主要技术范畴有基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程；选择题1.生物技术的核心和关键是（A ）A 细胞工程B 蛋白质工程C 酶工程D 基因工程2. 第三代生物技术（ A ）的出现，大大扩大了现在生物技术的研究范围A 基因工程技术B 蛋白质工程技术C 海洋生物技术D细胞工程技术3.下列哪个产品不是用生物技术生产的（D ）A 青霉素B 淀粉酶C 乙醇D 氯化钠4. 下列哪组描述（A ）符合是生物技术制药的特征A高技术、高投入、高风险、高收益、长周期B高技术、高投入、低风险、高收益、长周期C高技术、低投入、高风险、高收益、长周期D高技术、高投入、高风险、低收益、短周期5. 我国科学家承担了人类基因组计划（C ）的测序工作A10% B5% C 1% D 7%名词解释1.生物技术制药采用现代生物技术可以人为的创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医学药品，称为生物技术制药。
2.生物技术药物一般说来，采用DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸来药物称为生物技术药物。
3.生物药物生物技术药物是重组产品概念在医药领域的扩大应用，并与天然药物、微生物药物、海洋药物和生物制品一起归类为生物生物药物。
简答题1.生物技术药物的特性是什么？生物技术药物的特征是：（1）分子结构复杂（2）具有种属差异特异性（3）治疗针对性强、疗效高（4）稳定性差（5）免疫原性（6）基因稳定性（7）体内半衰期短（8）受体效应（9）多效应和网络效应（10）检验特殊性2.简述生物技术发展的不同阶段的技术特征和代表产品？（1）传统生物技术的技术特征是酿造技术，所得产品的结构较为简单，属于微生物的初级代谢产物。
《生物技术制药》课程笔记
《生物技术制药》课程笔记第一章：绪论一、生物技术的发展史1.1 生物技术概述生物技术是指人们利用微生物、动植物体对物质、能量、信息进行操纵的技术。
它广泛应用于食品、农业、环境保护、能源、医药等领域。
1.2 生物技术的发展简史生物技术的发展可以分为三个阶段：（1）传统生物技术阶段：早在公元前22世纪，中国就开始了酿酒、制酱、制醋等传统生物技术应用。
此后，世界各国也逐渐发展了各自的发酵技术。
（2）现代生物技术阶段：20世纪初，科学家们开始研究酶和微生物，发现了遗传物质DNA和RNA，并逐步揭示了生物体的遗传密码。
这一阶段的代表性成果包括抗生素的发现、遗传工程的创立以及生物制品的生产。
（3）生物技术革命阶段：20世纪70年代末，基因工程技术的发展使生物技术进入了一个新的时代。
基因克隆、基因编辑、基因组学等技术的突破，为生物技术在医药、农业、能源等领域的应用开辟了广阔前景。
二、生物技术药物1.2.1 生物技术药物概述生物技术药物是指利用生物技术方法生产的药物，主要包括蛋白质药物、抗体、疫苗、寡核苷酸药物等。
1.2.2 生物技术药物的特性生物技术药物具有以下特点：（1）高特异性：生物技术药物针对性强，能够精确作用于疾病相关分子。
（2）低毒性：生物技术药物通常来源于自然界中的生物体，毒副作用较低。
（3）复杂性：生物技术药物的结构复杂，生产过程需要严格控制条件。
（4）生产成本高：生物技术药物的生产设备、工艺和原材料成本较高。
三、生物技术制药1.3.1 生物技术制药概述生物技术制药是指利用生物技术方法生产药物的过程。
它主要包括基因工程、细胞培养、蛋白质工程等技术。
1.3.2 生物技术制药特征生物技术制药具有以下特征：（1）生产过程高度自动化、精确化。
（2）药物作用机制明确，针对性强。
（3）生产周期较长，生产成本较高。
（4）药物质量和安全性要求严格。
1.3.3 生物技术在制药中的应用生物技术在制药领域的应用主要包括：（1）生产生物技术药物，如蛋白质药物、抗体、疫苗等。
《基因工程制药》课件 (2)
通过利用基因工程技术，制造创新的药物和生物制品，为医疗和健康领域带 来巨大好处。
基因工程制药的定义
基因工程制药是一种利用基因工程技术，通过改变生物体的基因组来制造药 物和生物制品的过程。它已经成为当今医药领域的重要发展领域。
基因工程制药的发展历史
1
1 978年
莱昂纳德·赞科夫首次成功将人类胰岛素基因植入大肠杆菌，开创了基因工程制 药的先河。
总结和展望
基因工程制药是医疗和健康领域的重要创新领域，具有巨大潜力和市场前景。随着技术的发展和应用的深入， 基因工程制药将为人类的生命健康带来更多惊喜和福音。
免疫治疗
利用基因工程技术可以改变 免疫细胞的基因表达，提高 免疫系统对疾病的应对能力。
基因工程制药的制备工艺
1. 基因克隆：将目标基因插入宿主细胞中的载体。 2. 转化：将插入载体的细胞转化为表达机器，并产生目标蛋白。 3. 纯化：通过多种技术，将目标蛋白从细胞表达物中纯化出来。 4. 制剂：将纯化的目标蛋白制备成药物形式，如注射剂、片剂等。
2
1982 年
人类胰岛素经过基因重组技术制备成功，成为第一种基因工程制药产品。
3
1 997年
美国批准上市第一种基因工程制药产品——重组人粒细胞集落刺激因子（GMCSF）。
基因工程制药的应用领域
肿瘤治疗
基因工程制药可以通过改变 细胞的基因表达，研发更有 效的抗癌药物。
遗传性疾病
基因工程制药可以研发治疗 遗传性疾病的基因治疗药物， 帮助患者恢复健康。
基因工程制药的优势和挑战
1 优势
提高治疗效果、减少副作用、增强药物稳定性。
2 挑战
技术复杂性、高ห้องสมุดไป่ตู้本、监管要求严格。
基因工程制药2课件
2、枯草芽孢杆菌
优点： （1）分泌能力很强，可以将蛋白质产物直接分 泌到培养液中。 （2）不会形成包含体。
缺点： （1）不能使蛋白质产物糖基化。 （2）枯草芽孢杆菌具有很强的胞外蛋白酶分泌 系统，常常对蛋白质产物造成破坏。
质粒pBV220的结构框：（图2－3）
ori-------复制起始点；
clts857-------抑制子基因，在31℃时，其基因产物 具有阻抑PL的活性，当温度升高时，这种阻抑活 性就丧失，PL就开始指导合成mRNA；
PR-------启动子1；PL--------启动子2； BglII、EcoRI、SmaI、BamHI、SalI、PstI、
缺点： （1）生产慢、 （2）生产率低、 （3）培养条件苛刻、费用高， （4）培养液浓度较稀。
二、大肠杆菌体系中的基因表达
（一）表达载体 （二）影响真核基因在大肠杆菌中表达的因素 （三）真核基因在大肠杆菌的中表达的形式
（一）表达载体
表达载体必须具备的条件：
（1）载体能独立地进行复制：分严紧型和松弛型，前 者在宿主细胞中拷贝数仅1~3个，后者在宿主细胞中 拷贝数可高达3000个。
表达载体必须具备的条件
（6）所产生的mRNA必须具有翻译的起始信 号，即起始密码AUG和SD序列（ShineDalgarno sequence），以便转录后能顺利翻译。
大肠杆菌表达载体的构成：
复制及选择系统 （载体）
转录系统
（目的基因）
蛋白质翻译系统 （目的蛋白）
23
外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理：
生物制药--基因工程制药--ppt课件可编辑全文
组建重组质粒 构建基因工程菌或细胞
前5个步骤是上游过程
培养工程菌
后4个步骤是下游过程
产物分离纯化
除菌过滤
半成品和成品鉴定
包装
基因工程制药
2.1 目的基因的获得
逆转录法
• 从真核细胞中提取产生该蛋白质的 mRNA 并纯化 （oligo-dT 亲和层析法）
• 借助于逆转录酶，以 mRNA 为模板，以 oligo-dT 为引物， 进行第一链 cDNA 的合成
• 酶解除去 mRNA 链； • 通常在合成 cDNA 第一链后直接 PCR 扩增，即“逆转录
－PCR法”
基因工程制药
2.1 目的基因的获得
逆转录法
基因工程制药
2.1 目的基因的获得
从基因组中直接分离
• 随机断裂法：将基因组 DNA 用内切酶切成多个片段，然 后将这些片段混合物随机重组入适当载体、转化、扩增， 再筛选出所需的基因片段
基因工程制药
2.2 基因载体的选择
质粒载体 —— pET-32a(+)
E. coli 中表达的优良载 体。
pET-32a(+) 具有 Ampr 抗性，酶切位点丰富。含 T7lac 启动子；含有 T7.Tag 和 His-Tag 融合标签，便于 检测和纯化目标蛋白。
基因工程制药
2.2 基因载体的选择
Escherichia coli Rye13
Hae III G GCC
Haemophilus aegyptius
Hind III A AGCTT
Haemophilus influenzae
Hpa I GTT AAC（平末端）
Haemophilus parainfluenzae
基因工程制药(多图版)
超纯水设备
通风设备
移液枪
精密电子天 平
生化培养箱
实验室常见的人体细 胞
实验室常见的微 生物
第一步：了解基因的本 质
四种碱基互补配对原 则
生命的信息全部存储在 DNA列里。
发现者沃森和克里 克获得了诺贝尔奖。
真正的背后 英雄不应被 遗忘，她是 富兰克林。
感 受 造 化 的 神 奇
第二步：了解基因工程制药 的基本过程
放大培 养
摇瓶培 养
倒入离 心管或 离心瓶
放入离 心机
离心效果
细胞 破碎
超声破 碎
高压匀浆破 碎
胀破
分离 纯化
盐析
亲和色
透析
凝胶色 谱
分离 纯化
电泳槽加 样
电泳
电泳结果
凝胶电泳分离
第三步：熟悉部分相关过 程实体设备和操作对象
分离纯化实体 设备
色谱分离设备
透析设备
磁力搅拌器
透析效果示例
凝胶电泳 设备
空白凝 胶
电泳后凝 胶
处理后谱图 效果
其它实验室常用 设备
（完整版）生物技术制药复习资料
（完整版）生物技术制药复习资料《生物技术制药》复习资料（Biotechnological Pharmaceutics）第一章绪论一、概述1.概念：生物药物（生物制药）是泛指包括生物制品在内的生物体的初级和次级代谢产物或生物体的某一组成部分，甚至整个生物体用作诊断和治疗疾病的医药品。
|采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品，叫做生物技术制药。
2.技术范畴：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、生化工程以及后来衍生出来的第二代、第三代的蛋白质工程、抗体工程、糖链工程和海洋生物技术等。
3.相关学科：有生物学（含微生物学、分子生物学、遗传学等）、化学、工程学（化学工程、电子工程等）、医学、药学、农学等。
但从基础学科来讲，生物学、化学和工程学是其主要的学科。
4.应用范围：（1）医药；（2）农业；（3）食品；（4）工业；（5）环境净化；（6）能源。
二、生物技术的发展简史1.传统生物技术阶段主要产品：乳酸、酒精、丙酮、丁酸、柠檬酸、淀粉酶。
生产的特点：过程简单，大多属兼气发酵或表面培养，生产设备要求不高，产品化学结构简单，属初级代谢产物。
2.近代生物技术阶段主要产品：抗生素、维生素、甾体、氨基酸；食品工业的工业酶制剂、食用氨基酸、酵母、啤酒；化工业的酒精、丙酮、丁醇、沼气；农林业的农药；环境保护业的生物治理污染。
生物技术的特点：（1）产品类型多，初级（氨基酸、酶、有机酸）、次级（抗生素）、生物转化（甾体）；（2）生物技术要求高，纯种、无菌、通气，产品质量要求也高；（3）生产设备规模大；（4）技术发展速度快。
3.现代生物技术主要产品：胰岛素、干扰素、生长激素等。
生物技术的内容包括：（1）重组DNA技术及其它转基因技术（基因工程）；（2）细胞和原生质体融合技术（细胞工程）；（3）酶或细胞的固定化技术（酶工程）；（4）植物脱毒和快速繁殖技术；（5）动物细胞大量培养技术；（6）动物胚胎工程技术；（7）现代发酵技术；（8）现代生物反应工程和分离工程技术；（9）蛋白质工程技术；（10）海洋生物技术。
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第四章 基因工程制药
第31页，共97页
二 基因工程菌常用的培养方式
分批培养（batch
culture）；
补料分批培养（fed
batch culture）； 连续培养（continuous culture）； 透析培养（dialysis culture）； 固定化培养（immobilized culture）。
第四章 基因工程制药（二）
基因工程菌的稳定性； 基因工程菌生长代谢的特点；
基因工程菌中试（看课本自学）；
基因工程菌发酵；
基因工程药物的分离纯化；
基因工程药物的质量控制。
第六节 基因工程菌的稳定性
遗传不稳定性的表现；
遗传不稳定性的的产生机制
； 影响基因工程菌稳定性的因素； 提高质粒稳定性的方法； 质粒稳定性的分析方法 ；
第四章 基因工程制药
第12页，共97页
质粒稳定性的分析方法
分裂稳定性：
平板稀释计数； 平板点种法。
结构稳定性：
单菌落中提取质粒，酶切后凝胶电泳或测序；
单菌落进行目标产物的表达分析，检测表达单元
的DNA。
第四章 基因工程制药
第13页，共97页
平板稀释计数法
基因工程菌 选择性培养液
第四章 基因工程制药
第17页，共97页
菌体生长的调控
主要有两种观点：
能量决定最大比生长速率； 小分子前体和催化组分等决定最大比生长速率。
第四章 基因工程制药
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菌体生长与能量的关系
能量（生长）>能量（有氧代谢），产生
代谢副产物乙酸；
有报道，乙酸浓度达到15g/L时菌体生长 停止； 乙酸的抑制与pH有关，适当提高pH能减 少乙酸的抑制。
菌体生长与能量的关系；
菌体生长与前体供应的关系。
第四章 基因工程制药
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菌体生长的表示方法
通常用比生长速率来表示； 比生长速率μ
：每小时单位质量的菌体所增加 的菌体量称为菌体比生长速率。它是表征微 生物生长速率的一个参数，也是发酵动力学 中的一个重要参数。其大小为0.693除以倍增 时间td（菌体量倍增）。
营养缺陷互补和抗生素抗性；
第33页，共97页
连续培养
以一定稀释率进行不间断培养；
基因工程菌的不稳定性—连续培养困难； 解决办法：生长阶段和基因表达阶段分开，
两阶段连续培养，第一阶段质粒稳定，第二 阶段获得最高表达水平或最大产率。
关键的控制参数：诱导水平、稀释率和细胞
比生长速率。
第四章 基因工程制药
第34页，共97页
补料分批培养
培养一段时间后，间歇或连续补加新
鲜培养基；
根据生长规律，通常控制溶氧和流加
补料结合。
第四章 基因工程制药
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透析培养
原理：利用膜的半透性 使培养物和培养基分离；
目的：去除代谢产物如 乙酸等对工程菌生长和 外源基因表达的影响；
膜、透析液、时间等；
E.coli—青霉素酰化酶 （11倍）。
第四章 基因工程基因工程菌的稳定性至少应在25代以上。
不稳定性两种表现形式：
质粒结构不稳定：重组 DNA 分子某一区域缺
失、重排、修饰，表观生物学功能丧失； 质粒分裂不稳定：分裂时出现一定比例不含 质粒的子代菌；
遗传不稳定性的的产生机制
第四章 基因工程制药
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固定化培养
基因工程菌培养的一大难题：维持质粒的稳
定性。
固定化技术应用：固定化后，质粒的稳定性
大大提高，便于连续培养，特别是对分泌型 菌更为有利。
第四章 基因工程制药
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三 基因工程菌的发酵工艺
与传统的微生物发酵工艺的区别：
生物材料方面：基因工程菌带外源重组载体；
第四章 基因工程制药
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分批培养
DO-Stat方法：
DO控制在20％（搅拌转速、通气速率）；
Balanced
DO-Stat方法：
乙酸维持在低浓度（DO、搅拌转速、糖的流
加速率）； 糖的流加速率和DO的平衡。
控制菌体比生长速率：
葡萄糖流速； 搅拌转速。
第四章 基因工程制药
生产目的方面： 基因工程菌生产的目的是使外源基因高效表达，
尽可能减少宿主细胞本身蛋白的污染。
基因工程菌发酵对营养要素和环境条件的需
求与宿主菌有共性之处，但也有特殊的需求。 特殊需求往往比共性需求更重要，更难满足， 经常是制约产业化的重要因素。
第四章 基因工程制药
第38页，共97页
四 培养基组成与控制
一般，复合培养基营养较丰富，质粒稳定性
一般高于合成培养基； 但对于酵母，极限培养基比丰富培养基更有 利于维持质粒的稳定性；
比生长速率和限制性基质：
含有pBR325的E.coliGM31和GY2345： 用葡萄糖培养时，低比生长速率更容易丢失
质粒； 用氯化铵培养时，高比生长速率更容易丢失 质粒。
第四章 基因工程制药
第26页，共97页
第八节 基因工程菌中试
看课本自学。
第四章 基因工程制药
第27页，共97页
第九节 基因工程菌发酵
基因工程菌的培养过程；
基因工程菌常用的培养方式；
基因工程菌的发酵工艺；
培养基组成与控制；
培养工艺与控制； 其他因素对基因工程菌发酵的影响； 基因工程菌的培养设备； 高密度发酵。
基因工程菌质粒的表达需与宿主细胞竞争共同
的前体和催化结构，致工程菌生长速率降低 （工程菌的比生长速率往往低于其宿主细胞，特
别是工程菌诱导后）。
第四章 基因工程制药
第25页，共97页
证据：在基础培养基中加入氨基酸（小分子
前体）能使菌体比生长率提高，蛋白合成增 加； 质粒存在对菌体代谢的影响（自学，P32）。
第四章 基因工程制药
第4页，共97页
影响基因工程菌稳定性的因素
遗传特性：
宿主；
载体；
外源基因是否整合到宿主染色体上。
发酵工艺：比生长速率
培养基（生长速率、限制性基质）； 温度、pH 值和溶氧；
培养操作方式；
第四章 基因工程制药
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培养基（2－1）
培养基的营养：
第四章 基因工程制药
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糖原
1-磷酸葡萄糖
a
6-磷酸葡萄糖 b
葡萄糖
6-磷酸果糖
1
果糖
1，6-二磷酸果糖
3-磷酸甘油醛
2 3
磷酸二羟丙酮
丙酮酸
3-磷酸甘油酸磷酸
3-磷酸甘油酸
磷酸烯醇式丙酮酸
第四章 基因工程制药
4
2-磷酸甘油酸
第21页，共97页
第四章 基因工程制药
第22页，共97页
第四章 基因工程制药
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培养方式
分批：相对稳定； 连续：特别是在非选择性培养基中，
质粒很不稳定；
第四章 基因工程制药
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提高质粒稳定性的方法
施加选择压力（分裂不稳定有效，生产不可取）: 抗药性标记：抗生素； 营养缺陷型标记：营养组份。 分阶段控制培养： 菌体生长阶段（阻遏）； 菌体达到一定浓度（诱导和去阻遏）。 控制培养条件：培养基，T，pH，DO，有害代 谢物；(基因工程菌反应慢) 固定化。
对数生长期
选择性培养基
繁殖一定代数
非选择性培养液
涂布
非选择性培养 基
第四章 基因工程制药
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平板点种法
长出菌落 基因工程菌 非选择性培养基 统计菌落数 选择性培养基 （含抗性标记） 计算稳定率
第四章 基因工程制药
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第七节 基因工程菌生长代谢的特点
菌体生长的表示方法； 菌体生长的调控；
培养基中添加酵母提取物和谷氨酸等有利于
提高质粒稳定性。
第四章 基因工程制药
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温度
大多数基因工程菌，在一定温度范围内，随
着温度升高，质粒稳定性下降； E.coli：
生长最适温度：37℃； 质粒稳定性最好的温度：30℃； 温敏启动子控制的质粒：42℃诱导外源基因的
低浓度—细菌生长； 高浓度目的蛋白不表达； 一般起始浓度0.015mol/L左右。
其他：维生素、生物素、营养物质（营养缺
陷型菌株）等。
第四章 基因工程制药
第42页，共97页
选择剂（selective agent）
维持工程菌的纯正性和质粒的稳定性的化合物； 目的：质粒的稳定性，根据质粒上的营养缺陷或 选择性标记基因，添加或缺陷选择剂； 选择剂种类：
第四章 基因工程制药
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葡萄糖通过糖酵解产生的丙酮酸，在有氧条
件下，将进入三羧酸循环进行完全氧化，生 成H2O 和CO2，并释放出大量能量； 第一 阶段：（丙酮酸由胞液进入线粒体后） 丙酮酸的氧化脱羧（丙酮酸 乙酰CoA）；
第二阶段：三羧酸循环（乙酰CoA H2O 和CO2，释放出能量）。
表达（经常伴随质粒丢失）。
第四章 基因工程制药
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pH值
例如：基因工程酵母表达乙肝表面抗原的
质粒：
pH为6.0时，质粒最稳定； pH为5.0时，质粒最不稳定；
第四章 基因工程制药