柱层析分离芦丁和槲皮素以及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素

三．实验操作步骤
• （一） 柱层析分离芦丁和槲皮素 1. 装柱 聚酰胺5g，加水30 ml，搅 匀，倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 注意保持液面1cm高度。）
三．实验操作步骤
• 2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g，在水浴上除尽 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。 3. 洗脱 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 待两层析带之间的距离约1cm后，再用90%的 乙醇冲洗。
三．实验操作步骤
• 4. 收集 • 5. 检测 用试管收集，每试管接收10 ml。 分离结果用TLC检测。
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作
• 1. 配制展开剂，甲醇：丙酮：苯＝8：1：1 • 2. 将展开剂倒入展开缸中，展开缸中展开剂 的高度4mm左右。 • 3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm； • 4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、芦丁、 槲皮素)，点样一般为圆点，点样直径一般不 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。
二、实验原理
• 2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占 比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60： 20：20; 洗脱先后顺序: • 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 • 用正相色谱理论来解释。
二、实验原理
• 二）．黄酮苷元之间的比较： • 用氢键吸附的原理来解释。
二、实验原理
• 本实验利用聚酰胺在乙醇-水系统中，洗 脱原理与RP-18的洗脱原理类似，因此，芦 丁先从聚酰胺柱上洗脱出来，槲皮素后从 聚酰胺柱上洗脱出来。
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作 • 5. 倾斜展开缸，使展开剂到入展开缸的另 一个槽中，聚酰胺薄膜浸入展开剂的深度 为距圆点5 mm为宜，一般展距为8 cm,取出 薄层板，晾干。 • 6. 喷1％的AlCl3显色。 • 7. 实验结果见图1。
四．体会与讨论
• 1. 画出聚酰胺薄膜层析鉴定芦丁和槲皮素 分析图
实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以 及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素
一 、实验目的
• 掌握用聚酰胺柱层析分离芦丁和槲皮素 的方法。
二、实验原理
1. 槲皮素与芦丁的结构
OH HO O OH
OH OH O
源自文库
槲皮素
HO O
OH
OH
O Glc OH O
Rha
芦丁
二、实验原理
• 根据聚酰胺的“双重功能”来进行分离。 • 一）．比较黄酮苷 • 1. 展开剂的极性较大（水溶性溶剂所占比 例>50%）时，如：含水醇或水：甲醇：丁 酮：乙酰丙酮=65：15：15：5; 洗脱先后 顺序: • 三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元 • 理论: 用反相色谱理论来解释。