多肽体外抗氧化总还原力的测定

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抗氧化能力指数测定原理及应用

抗氧化能力指数测定原理及应用随着人们健康意识的提高，抗氧化能力成为的焦点。

抗氧化能力是指机体在面对氧化应激时，消除和降低氧化压力的能力。

为了更好地了解机体的抗氧化能力，抗氧化能力指数的测定变得越来越重要。

本文将详细介绍抗氧化能力指数测定的原理、方法及应用。

抗氧化能力指数测定主要基于氧化还原反应的原理，通过测定样品对自由基的清除能力来评价其抗氧化能力。

一般情况下，测定的指标包括总抗氧化能力、还原力、氧自由基清除能力等。

总抗氧化能力：总抗氧化能力是指机体对氧化应激的综合防御能力，包括酶类和非酶类抗氧化物质。

测定总抗氧化能力的方法主要是基于比色或荧光法，通过检测样品对自由基的清除率来计算总抗氧化能力。

还原力：还原力是指样品对氧化剂的还原能力，通过测定样品在特定条件下的还原能力，可以评估其抗氧化能力。

常用的测定方法包括邻苯三酚自氧化法和铁离子还原法。

氧自由基清除能力：氧自由基是导致氧化应激的主要因素之一，通过测定样品对氧自由基的清除能力，可以了解其抗氧化能力。

常用的测定方法包括电子自旋共振法和化学发光法。

抗氧化能力指数测定在多个领域均有应用，如生物学、医学、营养学等。

以下是几个具体应用的例子。

生物学：在生物学领域，抗氧化能力指数测定被广泛应用于研究物种演化、生物衰老、药物筛选等方面。

通过测定不同物种或不同组织的抗氧化能力，有助于深入了解生物体的抗氧化机制和衰老过程。

医学：在医学领域，抗氧化能力指数测定可以帮助医生评估患者的抗氧化状态，预测其对疾病的易感性。

例如，某些疾病如癌症、糖尿病等与机体的抗氧化能力密切相关，通过测定患者的抗氧化能力，可以为疾病的预防和治疗提供参考。

营养学：在营养学领域，抗氧化能力指数测定可以评价食品的营养价值。

机体的抗氧化系统需要多种营养素的支持，如维生素C、维生素E、硒等。

通过测定食品中的抗氧化物质含量，可以为膳食营养推荐提供依据。

抗氧化能力指数测定对于评价机体的抗氧化状态具有重要意义，它不仅有助于了解个体的健康状况，还可为疾病的预防和治疗提供指导。

西兰花多肽的提取及其抗氧化活性分析

西兰花多肽的提取及其抗氧化活性分析
徐俊杰;赵伟;朱文赫;裴亚萍;吕士杰
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2017(038)011
【摘要】采用丙酮沉淀法提取西兰花花蕾粗多肽,并利用凝胶过滤层析对提取物进行分离纯化,制备西兰花多肽组分;采用超氧阴离子、DPPH自由基的清除及还原力测定实验研究多肽组分的抗氧化活性.结果表明:利用丙酮沉淀法、凝胶过滤层析等方法可分离获得3个组分,其中组分II在0.01 mg/mL和0.1 mg/mL浓度时,其超氧阴离子自由基清除率分别为23.38%、45.19%,高于同浓度维生素C;还原力分别为同浓度维生素C的1.37倍和1.6倍,表现出了良好的抗氧化活性,为进一步开展活性研究及西兰花多肽功能产品开发提供了参考.
【总页数】4页(P44-47)
【作者】徐俊杰;赵伟;朱文赫;裴亚萍;吕士杰
【作者单位】吉林医药学院基础医学院,吉林吉林 132013;中国医科大学小儿外科,辽宁沈阳 110001;吉林医药学院基础医学院,吉林吉林 132013;吉林医药学院临床医学院,吉林吉林 132013;吉林医药学院基础医学院,吉林吉林 132013
【正文语种】中文
【相关文献】
1.桃仁多肽的酶法制备及其抗氧化活性分析 [J], 杨玉蓉;李安平;钟政昌;李刚
2.南方刺参性腺多肽酶解工艺优化及抗氧化活性分析 [J], 徐仰丽;余海;王海棠;;;
3.亚麻多肽制备及其抗氧化活性分析 [J], 吴峰;王常青;石亚伟
4.南方刺参性腺多肽酶解工艺优化及抗氧化活性分析 [J], 徐仰丽;叶剑;余海;苏来金
5.鱼鳞多肽亚铁螯合物的氨基酸测定及体外抗氧化活性分析 [J], 覃宇
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体外抗氧化功能评价方法研究进展

体外抗氧化功能评价方法研究进展傅裕【摘要】体外抗氧化功能评价发展至今,已形成一个比较系统的体系.本文概述了一些常见的体外抗氧化功能评价方法和国内外新的研究进展,并对其优点、局限性做了简要归纳总结,同时对抗氧化功能评价未来发展进行展望.以期为抗氧化功能评价研究提供有益参考.【期刊名称】《肉类研究》【年(卷),期】2010(000)011【总页数】6页(P41-46)【关键词】体外抗氧化功能评价;化学评价法;生物活性评价法【作者】傅裕【作者单位】西南大学,食品科学学院,重庆,400715【正文语种】中文【中图分类】TS201一般而言，人体的抗氧化防御系统是平衡的,体内自由基的产生和清除也是平衡的。

然而一旦自由基产生过多或抗氧化防御体系出现故障,体内自由基代谢就会失衡,从而导致脂质过氧化、细胞损伤、DNA断裂等。

现代医学研究表明，衰老、癌症、心血管疾病、炎症的产生与发展等都可由自由基及其代谢产物诱发[1],化妆品中的自由基还会直接攻击人的皮肤，从表皮细胞中抢夺电子，使皮肤失去弹性，粗糙老化[2]，因而研究抗氧化功能评价极其重要。

抗氧化功能评价方法包括了体内评价和体外评价。

但体内抗氧化方法涉及到动物模型和人体实验，费用昂贵、周期过长，不适用于食品或添加剂抗氧化性的初筛工作。

所以，对于样品量很大或只是进行初筛样品的抗氧化功能评价时都采用体外抗氧化功能评价。

体外抗氧化功能评价发展至今，已经形成了一个比较系统的体系了，包括很多评价方法，我们将这些方法划分为两类[3]：即化学评价方法和生物活性评价方法。

其涉及营养学，保健食品，功能食品，药学，毒理学，生物化学等多个学科。

1 化学评价方法1.1 体外总抗氧化能力的测定（TAC测定）体外总抗氧化能力可以通过测定还原力[4，7,8]的大小来表示。

目前已有许多研究证实抗氧化能力同还原力是密切相关的[5]，抗氧化剂通过自身的还原作用提供电子清除自由基，还原力越强，其抗氧化能力也就越强。

抗氧化实验方法

1还原力的测定样品2ml加到2ml L磷酸盐缓冲液和2ml 1%的铁氰化钾溶液的混合液中;混合物在50℃保温20min,然后在反应混合物中加入2ml 10%的TCA,混合后以3000rpm离心10min,取上清液2ml与2ml蒸馏水以及%氯化铁在反应试管中反应,10min后测定其在700nm处的吸光值;吸光值越大表明还原力越强;注意：建议蛋白浓度以5mg/ml左右变化,例如,5之类变化;但具体情况应根据吸光值大小而定;L 的磷酸盐缓冲液的配制见附表;铁氰化钾溶液应盛装在棕色瓶中;比色皿的用法：可见光>400nm用玻璃比色皿即没有标字母或者标G的比色皿,紫外光时<400nm用石英比色皿即标Q字比色皿;2 DPPH自由基清除活性的测定将样品液添加到含mmol/L DPPH的95％乙醇中,混合,振荡,在室温下放置30min,然后在波长517nm处检测Ai;清除率计算公式为：空白为ml 95%的乙醇加入ml蒸馏水调零;式中：Ac——对照为ml DPPH溶液加上ml蒸馏水在517nm处的吸光值；Aj——样品液加上ml 95%的乙醇在517nm处的吸光值；Ai——样品液加上ml DPPH溶液在517nm处的吸光值；注意：建议酶解液蛋白浓度以2mg/ml 左右变化,如,1,2,之类变化,但是具体情况应视清除率而定,最终结果应有清除率大于50%和小于50%的情况;DPPH样品有毒,需戴口罩和手套进行操作;而且DPPH试剂很昂贵,用时注意节约;mol/L DPPH 乙醇溶液的配制：准确称取,用95%的乙醇溶液溶解并定容到100ml;3 在卵黄磷脂体系中抗氧化能力的测定以卵黄脂蛋白为底物的LPO模型反应体系包括:体积比为1:25稀释的卵黄悬液卵黄用等体积的,LPBS配成,使用前磁力搅拌10min mL、一定浓度的样品溶液、25m moll/LFeSO4溶液,用PBS缓冲液补足至;对照管除不加样液外其他试剂同前;将上述2种试管同时置37℃恒温水浴锅中保温培养1h;取出后,加入20%,静置10 min后,与对照管于3500r/min离心10min,取上清液,分别加入质量分数为%硫代巴比妥酸TBA溶液,加塞于100℃水浴15min,取出冷却;空白管以溶液代替,在532nm下测定吸光度,样品对卵黄脂蛋白LPO的抑制率表示为:SA%=Ac一AS/A C×100式中:Ac一不加样品的吸光度As一加入样品的吸光度注意：卵黄溶液不用时应放置冰箱保存;酶解液蛋白浓度以5mg/ml左右调整,但具体应视清除率大小而定,对酶解液蛋白浓度进行调整;硫代巴比妥酸溶液需放置于棕色瓶内保存;并以50m mol/L NaOH溶液配制;再在50℃水浴溶解;FeSO4溶液应以棕色瓶盛装;4 过氧化值的测定参照本食品学院林华娟等老师主编的食品分析实验讲义一书;5 超氧阴离子自由基清除率的测定邻苯三酚自氧化速率V对照：对照组和空白对照组加入4ml 蒸馏水去离子水和, mol/LTris-HCl缓冲溶液,在25℃水浴20min后,样品组加入或3m Mol/L邻苯三酚溶液,空白组以相同体积蒸馏水去离子水代替;震匀后马上在320nm处测定吸光值;迅速混匀并开始计时,每隔30 s读取吸光值,4 min后结束,以空白对照管调零;作吸光度随时间变化的回归方程,其斜率为邻苯三酚自氧化速率V对照;V对照在min~min之间,否则应调整邻苯三酚加入量样品自氧化速率V样品：样品组和空白组均加入一定浓度的样品溶液4ml, mol/LTris-HCl缓冲溶液,在25℃水浴20min后,样品组加入或3m Mol/L邻苯三酚溶液,空白组以相同体积蒸馏水去离子水代替;震匀后马上在320nm处测定吸光值;迅速混匀并开始计时,每隔30 s读取吸光值,4 min后结束,以空白管调零;作吸光度随时间变化的回归方程,其斜率为邻苯三酚自氧化速率V样品,按下式计算样品对超氧阴离子的抑制率：式中：抑制率%=V对照-V样品/V对照×100V对照－对照组邻苯三酚自氧化速率ΔA/minV样品－样品组邻苯三酚自氧化速率ΔA/min动物实验资料：摘自鹰嘴豆:抗氧化剂的抗氧化效果受到多种因素的影响,只有在生物体内具有抗氧化作用的物质才能有效的清除体内产生的自由基,才能表现出一定的生物活性;由于体外抗氧化测定方法容易操作,周期短,因此评价一种物质的抗氧化效果往往首先采用体外抗氧化体系;但体外抗氧化体系往往与人体内的生理环境相差太大,许多研究结果表明采用体外方法评价有效的抗氧化剂进入人体后却表现不出应有的抗氧化效果,因此抗氧化剂的抗氧化效果在采用体外方法进行初步评价后应采用动物实验进行体内评价;人体在正常生理代谢过程中会产生少量的含氧自由基,如超氧阴离子、羟自由基、过氧化氢等,这些自由基通过自然存在于体内的抗氧化酶如超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶及抗氧化剂如抗坏血酸、维生素E组成的抗氧化系统来消除;因此,在正常状态下,体内自由基维持在一定水平并处于动态平衡中,正常量的自由基对细胞的生长、分裂、解毒等具有有益的作用,在杀菌、免疫调节等方面具有积极而重要的意义;然而,随着增龄或在某些病理状态下以及机体受到创伤时,体内抗氧化酶活性下降,从而导致机体代谢异常而骤然产生大量活性氧自由基；或由于机体抗氧化物质不足,使促氧化剂与抗氧化剂之间的平衡失常,致使自由基与机的一些生物大分子,如蛋白质、核酸、脂质等发生反应,生成大量氧化物或过氧化物,并进一步引起细胞死亡和组织损伤;业已证明,氧化损伤与衰老、肿瘤、糖尿病、动脉硬化、神经退行性病变以及人类免疫缺陷病毒HIV感染等均有密切关系;D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型是按照衰老的代谢学说建立的,其机制与糖代谢紊乱6、D-半乳糖醇中毒7和活性氧自由基过剩有关；众多研究表明是生物体内含有半乳糖氧化酶,在催化D-半乳糖时可产生超氧阴离子自由基O2·-和H2O2；如果长期人为地给予过量D-半乳糖,使机体和细胞内自由基产生过量,除了造成组织细胞直接损伤外,还导致抗氧化酶活力下降和过氧化产物积累,从而表现出与人类自然衰老相似的生化变化、免疫功能低下、基因表达与调控异常细胞繁殖力下降及细胞退化性衰变等;有研究表明,D-半乳糖可降低人胚肺二倍体成纤维细胞HBS,从而使该细胞SOD活力降低和过氧化产物MDA增多,从而起到加速细胞老化的作用;本文在前述章节已经表明,鹰嘴豆蛋白酶解物具有体外抗氧化活性,但其在生物体内的作用效果尚不清楚;为此本章采用D-半乳糖诱导致衰老小鼠作为模型,分别以小鼠的血清、肝脏和心脏组织中的丙二醛MDA含量、超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活性作为评价指标,探讨鹰嘴豆蛋白酶解物在生物体内的作用,为揭示鹰嘴豆蛋白酶解物对体内过氧化状态的影响,明确其物质基础和相关机制提供证据;。

木薯叶片多肽的制备与抗氧化功能研究

木薯叶片多肽的制备与抗氧化功能研究张作达;王琴飞;吴若娜;牛晓磊;张振文【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2022(48)7【摘要】以木薯叶片为材料,采用碱溶酸沉法对木薯叶片蛋白质进行提取,通过正交法优化提取工艺,采用响应面法优化3种蛋白酶酶解条件,并对酶解所得多肽进行抗氧化功能验证。

结果表明,木薯叶片蛋白质最佳提取条件为:温度60℃、碱溶pH 11.0、提取时间2 h;酸沉pH 4.6,每克叶片鲜样的蛋白质最高得率为11.73%,所得蛋白质的纯度为92.57%。

响应曲面分析结果表明,利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶酶解木薯叶片蛋白质,其酶解最佳条件分别为:酶解温度36.74、35.00、36.45℃,pH值8.76、6.31、8.00,反应时间2.44、2.18、3.82 h,其中胰蛋白酶多肽得率最高,为41.89%。

酶解所得多肽溶液中游离氨基酸含量均极低,仅检测到酪氨酸,其质量浓度为9.90μg/mL。

抗氧化功能分析发现,中性蛋白酶酶解所得多肽抗氧化活性均较高,在其多肽质量浓度为1.5 mg/mL时,其DPPH自由基清除率、·OH清除率和总还原力分别为91.83%、79.3%、0.558。

因此,中性蛋白酶酶解所得多肽抗氧化活性最强,最适合制备木薯叶抗氧化肽。

【总页数】8页(P146-153)【作者】张作达;王琴飞;吴若娜;牛晓磊;张振文【作者单位】海南大学热带作物学院;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所【正文语种】中文【中图分类】TS2【相关文献】1.核桃多肽-苦荞-藜麦复合粉制备工艺及体外消化和抗氧化功能特性分析2.黑龙江小麦麦胚多肽的制备及抗氧化功能研究Ⅱ．超滤法精制抗氧化麦胚多肽工艺条件的优化3.小米多肽的制备及其抗氧化功能研究4.酶法制备多肽-Fe的体内抗氧化功能研究5.菜籽多肽的制备及酶水解菜籽多肽抗氧化活性研究进展因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

化学发光法对花生多肽的体外抗氧化活性和对DNA损伤的保护作用的研究

体外多种活性氧自由基的清除作用，首次研究了并花生多肽对ＤＡ损伤的保护作用。Ｎ
基金项目：益性行业（业）研专项（０９３４）农业部科公农科２０００３，技成果转化项目（０９６００）山东省自主创新成果２０Ｃ０５，转化重大专项（０９ＨＸ１１０）２０ＺＺＡ３３收稿日期：００— ４— ８２１０２作者简介：丽娜，，９８年出生，士，产品加工刘女１７博农通讯作者：岭，，９２年出生，究员，产品加工杜方男１７研农
１．ｌ，品得率８．９，９６％产６７％多肽中相对分子质量低于１００的组分高达９．３＿。现代营养研究表００５％２Ｊ
明：对分子质量低于１０相０的短肽具有较强的生物０活性。Ｊａｅｎ—ＹｗｎｕＨａｇ等研究发现，．／Ｌ１０ｍｇｍ花生多肽的还原力与００／ＬＢＡ或生育酚相．２ｍｇｍＨ当；．５ｍｇｍ００／Ｌ花生多肽清除自由基的能力与００．１
花生也称落花生，豆科植物花生的种子。因为香脆味美，养丰富，有补虚、寿、衰老、容营具益抗美
等功效，称为 “ 生果 ” 。研究采用碱性蛋白酶被长（ｌａｓ）Ａｃｌｅ水解花生冷榨粕制备花生多肽，制备过ａ在

功能性食品在体外模型中的抗氧化性评估

功能性食品在体外模型中的抗氧化性评估近年来，随着人们对健康生活的追求，功能性食品在市场上的需求不断增加。

功能性食品是指具有一定保健功能或能对人体机能产生积极影响的食品。

其中，抗氧化性作为一个重要的功能，备受人们关注。

本文将从体外模型的角度探讨功能性食品在抗氧化性评估中的应用。

首先，我们来简单介绍一下功能性食品的概念和抗氧化作用的重要性。

功能性食品是在食品的基础上添加特定的功能成分，如维生素、矿物质、膳食纤维等，以达到促进健康的目的。

而抗氧化作用则是指食物中的抗氧化物质可以减少或抑制自由基的产生，从而保护人体细胞免受氧化损伤。

抗氧化作用的重要性在于，自由基的过度生成会导致氧化应激，进而引起各种疾病的发生。

为了评估功能性食品的抗氧化性，研究人员通常会使用体外模型进行实验。

体外模型是指在体外环境下，使用细胞、组织或原代培养物等模拟人体生物过程的方法。

相比于动物实验和人体试验，体外模型具有成本低、快速、方便等优势，因此在抗氧化性评估中得到了广泛应用。

在体外模型中，常用的抗氧化性评估方法有多种，如DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法、还原力能力测定法等。

以DPPH自由基清除法为例，该方法通过将DPPH自由基与样品反应，观察其颜色的变化来评估样品的抗氧化能力。

这种方法简便易行，且结果可靠，被广泛应用于功能性食品的抗氧化性评估中。

同时，体外模型还可以通过检测抗氧化物质在人体内的吸收、分布和代谢等方面的指标来评估功能性食品的抗氧化性。

例如，可以通过检测细胞中的抗氧化酶活性、检测血液中的抗氧化物质浓度以及测量氧化损伤标志物的含量等方式，间接评估功能性食品的抗氧化性能。

这些指标的变化可以提供关于功能性食品抗氧化性的重要信息。

然而，需要指出的是，体外模型只能部分模拟人体内的生物过程，其结果仅供参考。

而且，虽然功能性食品在体外模型中表现出良好的抗氧化性能，但并不能完全保证其在人体内也能发挥同样的效果。

因此，在功能性食品开发过程中，还需要进行动物实验和人体试验，以全面评估其保健功能。

体外抗氧化清除自由基能力测定方法总结

体外抗氧化清除自由基能力测定方法总结1 总还原力的测定采用Lee等[14]方法,略修改.取1.0 mL浓度为25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL, 150μg/mL和200μg/mL的样液,加入2.5 mL磷酸缓冲液(0.2 mol/L,pH 6.6),然后加入2.5 mL 1%六氰合铁酸钾(K3Fe(CN)6), 50℃水浴30 min后加入2.5 mL 10%的三氯乙酸,混匀1 500 g离心10 min,取上清液2.5 mL加2.5 mL水和0.5 mL 0.1%的三氯化铁混匀,于700 nm处比色测定.以25~200μg/mL维生素C为标准溶液做标准曲线,以维生素C相当含量(mg/g)表示样品总还原力.2 DPPH·自由基清除率的测定采用Yamaguchi等[15]方法,取0.2 mL浓度分别为25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL, 150μg/mL和200μg/mL的样液同1.0 mL 95%的DPPH乙醇溶液混匀,于37℃反应60 min后在517 nm处比色.DPPH自由基清除率用以下方程式计算: Y= [(OD517对照-OD517样品)/OD517对照]×100式中:Y为清除率,%;OD517对照为517 nm下对照品的吸光度值;OD517样品为517 nm下不同浓度样品的吸光度值.3 羟基自由基(·OH)清除率的测定桦褐孔菌多酚的羟基自由基(·OH)清除率由改动后的Nicholas Smirnoff[11]法测得。

反应体系(4 mL)包括:1 mL H2O2(8.8 mmol/L),1 mL FeSO4(9 mmol/L),1 mL水杨酸(9 mmol/L),1 mL多酚溶液(0.4mg/mL)。

H2O2最后加入以启动整个反应。

反应体系在37℃条件下温育60 min,在15 000×g条件下离心6 min。

菲律宾蛤仔酶解多肽的分离及体外抗氧化作用研究【开题报告】

开题报告药学菲律宾蛤仔酶解多肽的分离及体外抗氧化作用研究一、说明选题的依据和意义菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum），隶属于软体动物门（Mollusca）、双壳纲（Bivalvia）、帘蛤科（Veneridae）的海洋生物，俗称花蛤，是我国四大养殖贝类之一。

花蛤肉组织蛋白含量高，脂肪含量低，并含有丰富的维生素和微量元素，具有良好的营养保健功能。

中医认为，蛤肉有滋阴明目、软坚化痰之功效。

近代研究表明，菲律宾蛤仔提取物具有提高免疫力、抑制细胞微核形成、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗菌等作用。

传统医学与现代研究均证实了菲律宾蛤仔的医疗保健作用，但是至今还没有将其开发成产品投入市场。

海洋是全球生命支持系统的一个重要组成部分，也是一种有助于实现社会、经济可持续发展的宝贵财富。

向海洋进军, 开发利用海洋资源, 成为扩大人类生存空间、增加资源储备的重要出路。

海洋生物技术作为一个全新的学科，已经成为21世纪海洋研究开发的重要领域。

当前世界各国对开发海洋药物和功能特殊的海洋生活活性物质都给予了高度关注。

浙江省海洋生物资源丰富，发展海洋经济具有得天独厚的条件，本项目研究为促进浙江省的十一五规划建设、加快实现海洋经济大省的步伐、成为“海上浙江”，打破资源限制具有重要意义；为促进功能性产品开发和海洋药物产业化的发展也具有重要的意义。

此外，菲律宾蛤仔是我国重要的养殖贝类，将其进行药物保健品的研究开发，不但不会破坏生态平衡，还将会为它的高值化利用寻找新的出路。

超氧化物阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）、过氧化自由基（ROO）和羟自由基（-OH）等自由基是生物体在新陈代谢过程中产生的中间产物，具有很强的氧化作用。

正常生理情况下，机体内的抗氧化酶及非酶类因子可以将自由基有效地清除，从而维持自由基产生与消除的平衡状态，但自由基多数不稳定，在病理情况下，可以迅速引起脂质的过氧化。

自由基通过造成细胞膜、DNA和蛋白活性的损伤，并与动脉硬化、脑卒中、阿尔茨海默病、肥胖、白内障以及肝脏疾病等多种人类疾病相关。

多肽体外抗氧化

多肽体外抗氧化——铁氰化钾还原法一．实验原理：样品（蝇蛆多肽提取物）将铁氰化钾（K3Fe(CN)6）还原成亚铁氰化钾(K4Fe(CN)6)，亚铁氰化钾再与三氯化铁反应生成普鲁士蓝（亚铁氰化铁Fe4[Fe(CN)6]3），在700nm 测吸光度值，通过测定吸光度来判断受试物还原力的强弱。

铁氰化钾溶液为黄色，猜测用三氯乙酸（CCL3COOH ）与反应剩余的铁氰化钾生成沉淀，离心除去，排除对吸光度数值的影响。

二．试剂的配置V1=0.10005585L V2=0.10003205L三．实验步骤；1ml 样液+2.5ml,0.2mol/l磷酸缓冲液（ph6.6）+2.5ml,1%铁氰化钾2.5ml,10%TCA（三氯乙酸）取1ml 上清液+0.2ml,0.1%三氯化铁+1ml 蒸馏水室温反应10min后在700nm处测吸光度多肽的浓度分别为10,20,30,40,50mg/ml四。

结果与分析以质量浓度为横坐标，吸光度值做纵坐标画图，对多肽的总还原能力与VC的总还原能力进行比较。

From:猪皮胶原多肽的体外抗氧化特性研究注意：配置不同浓度的样品溶液梯度，依次加入一定量磷酸缓冲液（保证溶液反应的PH环境，如2.5ml pH=6.6）、一定量浓度的铁氰化钾溶液（2.5ml 1%），混合均匀，将该体系置于一定温度下（比如：50℃,不能过高，不然会使物质失活，适当加热可以保证反应程度和时间）恒温水浴放置一定时间（如20min，以反应充分为宜），取出加入三氯乙酸溶液混匀，置于离心机内3000转离心10min（离心机使用时一定保证对侧样品等重），取一定量上清液于另一试管中，加入蒸馏水和三氯化铁溶液（3K4Fe(CN)6 + 4FeCl3 →Fe4[Fe(CN)6]3 + 12KCl ，黄色晶体亚铁氰化钾放进三氯化铁的溶液中，产生颜色很鲜艳的蓝色沉淀，即普鲁士蓝，测定吸光度时要摇匀，且普鲁士蓝耐热性在140℃，光照下较稳定，不用避光），混匀后用分光光度计在700nm下测定溶液吸光度。

常见体外抗氧化实验方法-抗氧化试验-抗氧化活性实验方法-抗氧化测定法-李熙灿Xican Li

常见体外抗氧化实验方法(含原理、试剂配制、操作流程、实例分析、英文表述)- 2023-3①DPPH·自由基清除法 2 Array②ABTS·+自由基清除法 5③ FRAP法(铁还原法) 811④过氧自由基(超氧自由基，·O2-)清除法(连苯三酚自氧化法)⑤羟基自由基(·OH)清除法(脱氧核糖法) 14⑥PTIO·自由基清除法(水溶液中) 16⑦ CUPRAC法(铜还原法) 18⑧铁络合能力(Ferrozin法) 20⑨脂质过氧化清除法(亚油酸为底物) 23⑩抗氧化产物的预测26①DPPH·自由基清除法/DPPH法原理：DPPH·（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即α, α-二苯基-β-苦基肼基游离基，由于p-π共轭，所以，氮自由基能稳定存在[1]。

当DPPH自由基被某物质清除，其最大吸收波长519nm处的吸光度A值随之减小；相应地，某物质自由基清除活性增加，其体外抗氧化活性也增加。

实验操作[1]:1.1 DPPH测试液的配置（适用于酶标仪测量，总体积为100μL）取DPPH 2毫克溶于约40mL溶剂（乙醇、95乙醇或甲醇）中，超声5min，充分振摇，务使上下各部分均匀。

取DPPH溶液80μL加入到96孔板中，加95乙醇（或无水乙醇）20μL，稀释混合，测A值，使A＝0.20±0.01。

该DPPH溶液避光保存，4h内用完。

（注意：如果是用分光光度计．．．．．，则A＝0.6±0.02比较合适）1.2 样品液的配置样品用合适的溶剂溶解，为便于计算，可配成1mg/mL浓度。

溶剂根据样品的极性进行选择，首选95乙醇或无水乙醇，如不溶可用DMSO。

1.3 预试取DPPH溶液80μL，往其中加少量样品液，加样时，先少后多渐加，边加边混合，并观察溶液的褪色情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量。

小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白的体外抗氧化活性研究

小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白的体外抗氧化活性研究边智尧;陈宝江;申帅峰;随腾玖;韩帅娟【期刊名称】《饲料工业》【年(卷),期】2024(45)7【摘要】试验旨在研究小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白的分子质量分布和体外抗氧化活性。

试验采用单因素完全随机设计,以维生素C为对照,分别测定小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白在0.625、1.25、2.5、5、10 mg/mL浓度下对DPPH自由基、羟自由基和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基的清除率,并通过测定T-AOC吸光度值计算总还原力。

结果表明:使用高效液相色谱测定小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白重均分子质量分别为513 u和551 u,二者分子质量小于1000 u 的比例分别为90.22%和86.93%。

在一定浓度范围内,随小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白浓度的升高,其体外抗氧化性能线性增加(P<0.05),且呈正相关关系。

在10mg/mL浓度时,小麦胚芽肽对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基清除率和总还原力分别为90.39%、70.66%、96.24%和2.23,大豆酶解蛋白对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基清除率和总还原力分别达到65.55%、68.21%、75.14%和0.51。

综上,在本试验条件下,不同浓度小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白均具有一定的抗氧化能力,且小麦胚芽肽相较于大豆酶解蛋白的抗氧化能力更强。

【总页数】7页(P80-86)【作者】边智尧;陈宝江;申帅峰;随腾玖;韩帅娟【作者单位】河北农业大学动物科技学院【正文语种】中文【中图分类】S816.32【相关文献】1.碱性蛋白酶酶解小麦胚芽粕制备抗氧化肽技术研究(英文)2.鸡蛋清蛋白酶解肽和大豆蛋白酶解肽的协同抗氧化活性3.小麦胚芽蛋白活性肽的酶法制备及抗氧化活性的研究4.大豆蛋白体外酶解物中血管紧张素转化酶抑制剂活性肽研究5.酶解大豆乳清蛋白制备抗氧化肽及其体外抗氧化活性评价因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

体外抗氧化实验操作步骤

体外抗氧化实验操作步骤实验前准备：1.准备所需试剂和设备，包括各种化学试剂、实验室常规设备和仪器。

2.清洗实验器具，保持实验环境干净。

3.为各个试验条件设置对照组，以进行对比分析。

实验步骤：1.提取样品：根据实验要求，选择需要评估抗氧化作用的样品。

将样品加入适当的溶剂（如甲醇、乙醇等），用摇床搅拌混合，待溶解半小时左右，然后离心离心管，离心后取上层液体。

2.总抗氧化能力的评估（TAC）：2.1. 准备1.0mol/L的硫酸和5mmol/L的FeSO4溶液。

2.2. 将150μl的提取液加入试管中，加入1ml的硫酸和1ml的FeSO4溶液。

2.3.在37℃恒温水浴中孵育30分钟，形成有色沉淀。

2.4.将试管放入离心机中，离心5分钟，弃去上清液。

2.5. 加入5ml去离子水彻底洗涤沉淀，重复离心和弃去上清液。

2.6. 加入2ml去离子水悬浮沉淀，加入2ml的硫酸和0.2ml的蒸馏水。

2.7.读取吸光度，计算出抗氧化能力。

3.单电子转移能力的评估（SET）：3.1. 准备0.1mol/L的DPPH（2,2-二苯基-1-苦基肼）溶液。

3.2. 向试管中加入100μl的提取液和2ml的DPPH溶液。

3.3.避光孵育30分钟，观察颜色变化。

3.4.分光光度计读取吸收值，计算样品的单电子转移能力。

4.过氧化氢清除能力的评估（CAT）：4.1. 准备0.1mol/L过氧化氢溶液。

4.2. 加入100μl的提取液和2ml的过氧化氢溶液。

4.3.在室温下孵育10分钟，读取吸光度。

4.4.通过对照组计算样品的过氧化氢清除能力。

5.还原力的评估（FRAP）：5.1. 准备FRAP试剂：将3mmol/L的2,4,6-三（2-吡啶基）-1,3,5-三嗪酸和10mmol/L的FeCl3混合，配制成10mmol/L的FRAP试剂。

5.2.加入提取液和FRAP试剂，置于37℃恒温水浴中孵育。

5.3.在室温下读取吸光度，计算出还原力。

抗氧化能力的体外测定方法研究进展

抗氧化能力的体外测定方法研究进展一、本文概述随着现代生活节奏的加快和环境污染的日益严重，人体面临的氧化应激压力不断增大，抗氧化能力的重要性日益凸显。

因此，抗氧化能力的体外测定方法研究进展成为了生物医学、营养学、食品科学等领域的研究热点。

本文旨在综述近年来抗氧化能力体外测定方法的研究进展，以期为相关领域的研究人员提供全面的信息参考和技术指导。

本文将首先对抗氧化能力的概念进行界定，明确其生理意义和重要性。

随后，将重点介绍几种常用的抗氧化能力体外测定方法，包括总抗氧化能力（TAC）测定、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定、过氧化氢酶（CAT）活性测定、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性测定等。

还将探讨这些方法的优缺点、适用范围以及在实际研究中的应用情况。

通过本文的综述，我们希望能够为相关领域的研究人员提供全面的抗氧化能力体外测定方法的知识体系和技术指导，为推动抗氧化能力研究的发展和应用提供有益的参考。

二、抗氧化能力的概念和机制抗氧化能力是指生物体系在面临氧化压力时，通过一系列复杂的生化反应来消除或抵抗活性氧（ROS）和活性氮（RNS）的能力。

这些活性物质是由正常细胞代谢或环境应激产生的，它们具有高度反应性，能够破坏细胞内的关键分子，如DNA、蛋白质和脂质，从而引发各种疾病，如癌症、心血管疾病和神经退行性疾病等。

抗氧化机制主要包括酶促和非酶促两大类。

酶促抗氧化系统包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）等，它们能够催化ROS和RNS的分解，从而防止其对细胞的损害。

非酶促抗氧化系统则主要包括各种抗氧化剂，如维生素C、维生素E、谷胱甘肽、尿酸、胆红素等，它们可以直接与ROS和RNS反应，从而消除其活性。

近年来，对抗氧化能力的研究已经从简单的抗氧化剂筛选发展到了对抗氧化机制的深入研究。

研究者们开始关注抗氧化剂之间的协同作用，以及抗氧化剂与细胞信号通路之间的关系。

对抗氧化能力的评估方法也从单一的化学测定发展到了细胞模型和动物模型的评估，使得对抗氧化能力的理解更加全面和深入。

抗氧化性测定方法

抗氧化性测定方法抗氧化性是指抗氧化物质对有害氧自由基的清除能力。

现代研究表明，氧自由基与许多疾病的发生和发展密切相关，如心血管疾病、癌症、阿尔茨海默病等。

因此，研究抗氧化性成为了一个重要的领域。

目前，常用于测定抗氧化性的方法有多种，包括化学方法、体外细胞试验、动物模型试验以及临床试验等。

以下将介绍其中一些常用的抗氧化性测定方法。

1.单位面积清除DPPH自由基法该方法利用DPPH自由基（2,2-二苯基-1-苦基肼）的紫色消退来测定样品的抗氧化能力。

实验中，将待测样品与DPPH自由基溶液混合，反应一段时间后，通过测量反应液的吸光度来评估样品的抗氧化能力。

抗氧化能力越强，吸光度下降越大。

该方法简单快速，常用于蔬菜、水果、茶叶等样品的抗氧化性测定。

2.生化物质抗氧化方法该方法通过测定待测样品对生化物质抗氧化能力的影响来评估其抗氧化性。

常用的生化物质包括DNA、脂质、蛋白质等。

例如，可以通过测定DNA的损伤程度来评估样品对DNA的保护能力。

DNA损伤越小，样品的抗氧化能力越强。

3.氧化还原能力测定方法该方法通过测定待测样品的氧化还原能力来评估其抗氧化性。

常用的氧化还原指标包括总抗氧化能力（TAC）、还原力（FRAP）以及氧化标志物（如谷胱甘肽、超氧化物歧化酶等）。

根据测得的氧化还原能力数值，可以评估样品的抗氧化性能。

4.活细胞抗氧化能力测定方法该方法通过使用活细胞进行体外试验，评估待测样品对细胞的保护能力。

常用的细胞包括人类乳腺癌细胞（MCF-7）、人类肝癌细胞（HepG2）等。

实验中，将细胞暴露在氧化应激条件下，并添加不同浓度的待测样品，通过测定细胞的存活率、DNA损伤程度、抗氧化酶活性等指标，来评估样品的抗氧化能力。

综上所述，抗氧化性测定方法具有一定的操作性、精确性、重现性以及规范性，在研究和评价抗氧化性方面发挥了重要的作用。

然而，不同的测定方法适用于不同的样品和需要，需根据具体情况选择合适的方法。

范围广泛的研究表明，物质的抗氧化能力与其健康益处或营养效应之间有着密切的关联，抗氧化性测定方法的研究也将进一步推动抗氧化物质的开发和应用。

体外抗氧化试验筛选抗氧化肽的方法比较

体外抗氧化试验筛选抗氧化肽的方法比较高涵;王志新;高爽;何俊萍【摘要】为获得筛选抗氧化肽的快速、准确和重复性高的测定方法,利用具有抗氧化活性的谷胱甘肽对文献报道中常用的7种生物化学体外抗氧化实验进行筛选,对筛选后的方法在采用不同试验人员进行验证,而后对验证重复性比较好的方法再用合成的具有抗氧化活性的肽568(Pro-Phe-Thr-Arg-Asn-Tyr-Tyr-Val-Arg-Ala-Val-Leu-His-Leu)、肽580(Trp-Asn-Trp-Ala-Asp)、肽567(Val-Tyr-Gln-Phe-Leu)和肽467(Pro-His-Cys-Lys-Arg-Met)进行确认,数据处理采用origin8.0和SPSS15.0进行.结果表明:常用的清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH·)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)这两种方法稳定性和重现性最佳,清除DPPH·和SOD可以作为抗氧化肽初步筛选的方法.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2019(040)001【总页数】4页(P7-10)【关键词】抗氧化肽;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼;超氧化物歧化酶;筛选;体外【作者】高涵;王志新;高爽;何俊萍【作者单位】河北农业大学食品科技学院,河北保定071000;河北科技大学生物工程学院,河北石家庄050000;河北农业大学食品科技学院,河北保定071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定071000【正文语种】中文体外化学试验是筛选具有清除自由基活性物质的重要手段，目前报道的有4大类24种方法，这些方法在不同的研究中均有应用[1-6]，由于不同实验室采用的方法不同，筛选得到的具有抗氧化活性物质的可比性和重复性存在一定的差异。

特别是在抗氧化肽开发应用中，探索具有重复性较强的体外化学试验方法将有利于抗氧化肽高通量快速筛选。