蚕蛹多肽的制备工艺及其体外抗氧化活性
柞蚕蛹多肽的抗氧化性及稳定性研究
•试验研究•北方蚕业 2020,41(3)21*柞蚕蛹多肽的抗氧化性及稳定性研究黄静雅张禹*朴美兰魏福安李晓艳李喜升*资助项目：现代农业产业技术体系建设专项（CARS-18）；农业农村部辽宁野蚕科学观测实验站项目（23-S-15）；辽宁省野蚕研究重点实验室项目（2003-）作者简介：黄静雅（1991—）,女，硕士，研究实习员，研究方向为柞蚕资源综合利用。
通信作者：张禹（1968—）,男，副研究员。
E-mail ： zyl3841517804@（辽宁省蚕业科学研究所，辽宁凤城118100）摘 要 研究柞蚕蛹多肽的抗氧化性及环境稳定性，并进行了体外模拟胃肠消化试验。
测定其DPPH 自由基清除能力、还原力、超氧阴离子自由基清除能力和龛基自由基清除能力，及 pH 值、温度、光照、金属离子、食•添加剂、防腐剂及模拟胃肠消化对其稳定性的影响。
结果表明：柞蚕蛹多肽的DPPH 清除能力、还原力、超氧阴离子自由基清除能力、龛基清除能力较好；在酸性至中性环境下稳定性较好，强碱条件下会迅速失活；光照和热处理都会使柞蚕蛹多 肽稳定性降低；在Fe3 +作用下柞蚕蛹多肽的活性明显低于其他金属离子；低浓度的NaCl 添加，可以使柞蚕蛹多肽对DPPH 的清除率小幅度的提升、柠檬酸添加量的增加会使柞蚕蛹多肽DPPH 自由基清除能力先提升后趋于平缓，柞蚕蛹多肽在白砂糖的作用下活性始终较为稳定；对柞蚕蛹多肽抗氧化稳定性的影响，苯甲酸钠〉山梨酸钾；柞蚕蛹多肽的胃肠消化抗氧化 稳定性较低，消化过程中其DPPH 清除率逐渐降低。
经胃消化阶段其清除率由59.09%降低至24. 05%，再经肠消化后下降至9. 4%。
关键词抗氧化性稳定性柞蚕蛹多肽多肽因其易吸收、安全无毒副作用近年来 在保健品市场上大放异彩［13］。
相关研究表明,一些种类的多肽具有良好的抗氧化性，例如刘雅硕等⑷证实鳄鱼肉多肽具有抗氧化活性；申 彩虹5从海参的酶解物中分离出两种海参肽,并发现分子量不同的肽会呈现出不同的抗氧化性；闵建华等⑷通过水解桑蚕蛹制备多肽具有较强的抗氧化能力，这些通过蛋白酶的作用水 解天然蛋白质的过程温和且高效。
酶解制备蚕蛹免疫肽条件优化
第57卷 第11期 广 东 蚕 业 V ol.57,No.11 2023年11月GUANGDONG CANYE Nov . 2023DOI ：10.3969/j .issn .2095-1205.2023.11.01酶解制备蚕蛹免疫肽条件优化李庆荣 陈敏仪 邢东旭 肖 阳 张伟龙 杨 琼（广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 广东广州 510610）摘 要 蚕蛹蛋白是一种优质的蛋白质资源，在畜禽及水产养殖中备受关注。
文章以新鲜蚕蛹为原料，以抑菌活性为目标，采用酶解法制备具有较好抑菌活性的酶解产物，并通过单因素试验的方法优化酶解工艺条件。
结果显示：在pH =3.0、酸性蛋白酶量6 000 U /g 、酶解温度43 ℃、酶解时间4 h 的工艺条件下，得到的酶解液抑菌活性较强。
期望研究结果为蚕蛹蛋白源生物活性肽的制备提供一定的理论基础，并为其在淡水养殖饲料中的应用提供参考。
关键词 蚕蛹；酶解；免疫肽 中图分类号:S886.9文献标识码:A文章编号:2095-1205(2023)11-01-04随着渔业的迅速发展与扩张，水产养殖业进入了高密度、高产量的精养模式，水产养殖病害日益严重。
抗生素等鱼药在水产养殖与疾病控制中起着不可替代的作用。
然而，由于鱼药大多是仿制兽药、人用药和农药等，存在科学性不足、针对性不强、药效不高、对环境影响大等问题。
根据《中华人民共和国农业农村部公告 第194号》，饲料用抗生素自2020年7月1日起全面退出市场，为保障畜禽水产养殖的生产效益和食品安全，开发安全、高效的抗生素替代品成为养殖业健康发展的难点和热点[1-2]。
我国蚕桑资源丰富，桑园种植面积超过1 300万亩，蚕蛹年产量达30万t 以上。
蚕蛹中蛋白质含量较高，占其干物质重的45%～50%，蚕蛹蛋白是一种比大豆蛋白更具营养价值的优质蛋白质资源。
近几年，蚕蛹蛋白在鳊鱼、草鱼、鸭嘴鱼、南美白对虾、罗氏沼虾等水产养殖上的应用研究表明，其能明显降低饲料成本，提高生长速度，降低饵料系数等[3-5]。
蚕蛹抗氧化肽的制备及其体外抗氧化活性评价
摘要 ： 为 更客观地 评价蚕蛹 抗氧化肽 的抗氧 化能力，以人工 胃肠模 拟液对 不 同蛋 白酶酶解物 的抗 氧化 能力进行 评价 优选 获得 最佳 的制备用 酶— —碱性 蛋 白酶．在 此基础上，以蚕蛹抗氧 化肽 总还原能力 为指标 ， 利用响应 曲面 法（ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｅ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ＲＳ Ｍ） 优化碱性蛋 白酶制备蚕蛹抗氧化肽 的最佳 酶解 工艺． 结果表 明： 碱性 蛋 白酶的 最佳 酶解 条件为 ｐ Ｈ＝８ ． ３ ０ ， 加 酶量为 １ ５ ． ３ ４ Ｌ （ １ ９ ０ ２ Ｕ） ， 温 度为 ５ Ｏ ． ４ ７。 Ｃ， 时问为 ２ ． ４ ５ ｈ ； 在此条件 下优 化预测得
ｔ ｏ ｏ ｐｔ ｉ ｍｕ ｍ ｔ ｈ ｅ ｏ ｐｔ ｉ ｍａ ｌ ａ ｌ ｋ ａ ｌ ｉ ｎ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ａ ｓ ｅ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｄ ｕ ｒ ｅ ｏ ｆ ｓ ｉ ｌ ｋ ｗｏ ｒ ｍ ｐｕ ｐ ａ ｅ ｐｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｆ ｏ ｒ ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ ｐｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｈｉ ｇ ｈ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ ｐｏ ｗｅ ｒ ． Ａｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄａ ｎ ｔ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｅ ｎｚ ｙｍｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｔ ｅ ｓ Ｗａ ｓ ａ ｓ ｓ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ ｐ ｏ ｗｅ ｒ ａ ｎ ｄ ｓ ｃ ａ ｖ ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｇ ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｓ ａ ｇ ａ ｉ ｎ ｓ ｔ ・ＯＨ ａ ｎ ｄ ＤＰＰＨ ・ ｒ ａ ｄ ｉ ｃ ｌｓ ａ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｏ ｐｔ ｉ ｍｕ ｍ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ａ ｒ ｅ ｓ ａ
蛹虫草多肽的提取及体外抗氧化活性研究
蛹虫草多肽的提取及体外抗氧化活性研究采用酶解法获取蛹虫草子实体中的多肽，并对中性蛋白酶和木瓜蛋白酶提取出的蛹虫草多肽进行体外抗氧化活性的测定。
结果表明，蛹虫草多肽具有一定的还原能力、清除DPPH的能力和清除羟自由基的能力，并且采用木瓜蛋白酶提取出的多肽活性均优于用中性蛋白酶提取出的多肽。
这为以后蛹虫草多肽在医学、食品及保健品等领域广泛应用提供了重要理论基础。
标签：蛹虫草；多肽；蛋白酶；抗氧化0 引言蛹虫草[Cordyceps militaris（L.）Link]是一种和冬虫夏草同属异种的药食兼用真菌，又名北冬虫夏草。
研究表明蛹虫草含有与冬虫夏草相近的功能物质及药用功效[1]。
蛹虫草含有蛋白质、虫草酸、脂肪、SOD酶、虫草素、虫草多糖和很多微量元素。
众所周知，多肽是机体完成各种生理活性必不可少的一种物质，在生物的代谢活动和疾病治疗中也有着举足轻重的作用，因此该研究现已成为一大热点[2]。
但目前国内外的学术研究，有关蛹虫草多肽内容的很少，大部分都围绕虫草素和虫草多糖的研究。
本文对蛹虫草子实体中多肽的提取、及体外抗氧化活性进行研究，旨在为日后蛹虫草多肽类物质的研究及其应用提供参考意见。
1 材料与仪器1.1 材料与试剂蛹虫草子实体、30%过氧化氢溶液、无水乙醇、硫酸亚铁、水杨酸、蒸馏水、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、DPPH、铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶。
1.2 仪器设备粉碎机、恒温水浴锅、分光光度计、离心机、电子天平、筛子、锥形瓶等。
2 实验方法2.1 多肽的提取将蛹虫草磨成粉用筛子过滤后，取6个150ml锥形瓶加入10 g虫草粉、90ml 蒸馏水，三个分别加0.5 g木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，室温下充分溶胀30min后放入恒温水浴锅中3 h，调节温度为55 ℃和50 ℃。
酶解完成后沸水浴煮沸10 min，离心（4000 r/min）10 min得上清即为肽类物质。
2.2 蛹虫草多肽体外抗氧化活性研究2.2.1 蛹虫草多肽对羟自由基清除能力的测定采用水杨酸法测定。
蚕蛹蛋白论文：蚕蛹抗氧化多肽的制备及分离纯化研究
蚕蛹蛋白论文：蚕蛹抗氧化多肽的制备及分离纯化研究【中文摘要】人类许多慢性疾病及衰老现象均和人体内的自由基水平失衡有关,外源性抗氧化剂可以帮助人们维持体内自由基的平衡。
通过对具有抗氧化活性的天然食物进行研究、筛选和改性有可能开发出有效的抗氧化药物和保健食品蚕蛹蛋白是一种优质蛋白质资源,含有18种氨基酸,其中8种人体必需氨基酸含量超过氨基酸总量40%,其蛋白含量约为50%,是一种比大豆蛋白更具营养价值的优质蛋白质资源本论文研究了蚕蛹蛋白粉的提取,酶解工艺条件,多肽抗氧化活性的检测方法,以及蚕蛹多肽中具有DPPH·清除活性的多肽的分离纯化。
1.蚕蛹蛋白粉的脱脂及前处理。
选取常规溶剂正己烷,丙酮,乙酸乙酯,无水乙醇分别作为单一脱脂溶剂做脱脂优化,以脱脂率为指标,得到最佳脱脂溶剂为丙酮。
以超声细胞破碎法,微波破碎法,去离子水浸泡法三种方法对蛋白粉进行破碎处理,以上清液中蛋白含量为指标,得到最佳的破碎处理条件为超声波100HZ,间隔2sec,破碎10min2.建立了蚕蛹多肽体外抗氧化活性的检测方法。
检测了蚕蛹蛋白水解液的抗氧化能力,包括清除超氧阴离子、清除羟自由基、清除DPPH·、【英文摘要】Many chronic diseases and human aging phenomenon have something to do with the imbalance of free radicals inside human body. External antioxidants can help people to maintain the balance of free radicals inside body.It’s possible to develop effective antioxidant drugs and health foods on the base of the research, screening and modification of natural foods with antioxidant activity. Silkworm pupa is a high quality protein resources, containing 18 amino acids, including 8 essential amino acids, the content of which is more than 40%。
虫草肽的生产工艺
虫草肽的生产工艺
虫草肽是一种从蝉蛹中提取的生物活性多肽，具有多种保健功能。
虫草肽的生产工艺涉及蝉蛹提取、蛋白质酶解、分离纯化等步骤。
以下是一般的虫草肽生产工艺流程：
1.蝉蛹提取：
•选择新鲜、健康的蝉蛹作为原料。
经过清洗和杀菌处理后，将蝉蛹进行初步的提取。
2.酶解蛋白质：
•将蝉蛹进行酶解，通常使用蛋白酶进行水解。
酶解的过程中，蛋白质会被分解成肽段，其中包括虫草肽。
3.分离纯化：
•对酶解产物进行分离和纯化，以提取虫草肽。
这可能包括使用各种分离技术，如离心、过滤、柱层析等，以得到高纯度的
虫草肽。
4.浓缩和干燥：
•对纯化得到的虫草肽进行浓缩，将溶液中的水分减少。
然后，通过适当的干燥方法，将虫草肽制成粉末状或其他形式。
5.检测和质量控制：
•对生产的虫草肽进行质量检测，确保其符合相关的安全和质量标准。
可能包括对肽段的成分分析、微生物检测、重金属检
测等。
6.包装和存储：
•最后，将虫草肽进行合适的包装，以确保其稳定性和保存期限。
妥善的存储条件有助于保持虫草肽的生物活性。
值得注意的是，虫草肽的生产工艺可能因不同生产商而有所不同，且具体的步骤和条件可能受到专利保护。
一种抗氧化肽及其制备方法和应用[发明专利]
![一种抗氧化肽及其制备方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/bb3c37ec0408763231126edb6f1aff00bed570fc.png)
专利名称：一种抗氧化肽及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：年纪尧,何思杰,吴纪龙,刘顺慧,张丹,寻筱萌,颜承海,王俊
申请号：CN202210220514.2
申请日：20220308
公开号：CN114656522A
公开日：
20220624
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种抗氧化肽及其制备方法和应用，所述的蚕蛹抗氧化肽的制备方法，包括如下：将脱脂蚕蛹粉进行超声（1‑100KHz）处理，碱溶酸沉法提取蚕蛹蛋白，利用蛋白酶水解，结合超滤层析，凝胶色谱和液质联用仪从水解产物中筛选出新型抗氧化肽。
鉴定得到的抗氧化肽，其特征在于,氨基酸序列是Glu‑Gly‑Leu‑His‑Ala（分子量525.25），Ser‑Leu‑Arg‑Leu‑Ser（分子量574.34）。
本发明利用超声改性处理，增强蚕蛹蛋白的肽键断裂，有效提升其的溶解度和抗氧化活性，为蚕蛹蛋白的高附加值产品开发提供了切实可行的方案。
申请人：江苏科技大学
地址：212100 江苏省镇江市丹徒区长晖路666号江苏科技大学科技处
国籍：CN
代理机构：南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：唐循文
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一种蚕蛹蛋白抗氧化肽的制备方法及蚕蛹蛋白抗氧化肽的应用[发明专利]
![一种蚕蛹蛋白抗氧化肽的制备方法及蚕蛹蛋白抗氧化肽的应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/7601231a4693daef5ff73d90.png)
专利名称：一种蚕蛹蛋白抗氧化肽的制备方法及蚕蛹蛋白抗氧化肽的应用
专利类型：发明专利
发明人：黄先智,丁晓雯,沈以红
申请号：CN201810464907.1
申请日：20180516
公开号：CN108456707A
公开日：
20180828
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种蚕蛹蛋白抗氧化肽的制备方法，属于食品加工技术领域。
所述制备方法包括：1)将蚕蛹粉与石油醚混合，超声，固液分离；2)将脱脂蚕蛹粉、水和蚕蛹蛋白水解酶混合进行酶解；3)将蚕蛹粉酶解液灭酶，离心，将得到的上清液采用0.40～0.50μm滤膜过滤，收集滤液；4)将滤液采用3000Da的超滤膜超滤，收集透过液，得到超滤液；5)将超滤液采用200Da的超滤膜超滤，收集截留物。
本发明制备得到的蚕蛹蛋白肽中必需氨基酸含量达到43％左右，总抗氧化能力、对超氧阴离子(O·)的清除能力、对·OH清除能力以及对DPPH的清除能力均较强。
申请人：西南大学
地址：400700 重庆市北碚区天生路2号
国籍：CN
代理机构：北京高沃律师事务所
代理人：刘奇
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蝉蜕蛋白的提取工艺优化及体外抗氧化活性研究
蝉蜕蛋白的提取工艺优化及体外抗氧化活性研究目的：优化蝉蜕蛋白的提取工艺，并考察其体外抗氧化活性，为蝉蜕蛋白的深入研究提供参考。
方法：以蛋白提取量为响应值，在单因素试验基础上，采用Box-Behnken响应面法对超声波辅助提取蝉蜕蛋白的液料比、超声时间、提取次数等条件进行优化，并进行验证试验。
以维生素C（VC）为阳性对照，以对1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和2，2′ -连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）自由基的清除率为指标，评价蝉蜕蛋白的体外抗氧化活性。
结果：蝉蜕蛋白的最佳提取条件为液料比28 ∶1（mL/g），超声时间65 min，提取2次。
验证试验中，蝉蜕蛋白的平均提取量为65.45 mg/g（RSD=1.68%，n=3），与预测值的相对误差为5.48%。
蝉蜕蛋白对ABTS和DPPH自由基均有一定的清除效果，当蝉蜕蛋白质量浓度为0.2 mg/mL时对ABTS自由基的清除率即达97.0%，其作用与VC相当；蝉蜕蛋白对DPPH自由基的清除能力稍弱，半数清除浓度为0.96 mg/mL，其作用不及VC。
结论：采用Box-Behnken响应面法优化蝉蜕蛋白的提取条件准确、可靠；蝉蜕蛋白具有一定的体外抗氧化活性。
ABSTRACT OBJECTIVE：To optimize extraction technology of protein from Cryptotympana pustulata and investigate its in vitro antioxidant activity，so as to provide reference for further research of protein from C. pustulata. METHODS：Using extraction amount of protein as response value，based on single factor test，Box-Behnken response surface methodology was used to optimize the ratio of liquid to material，ultraonic time and extraction times. Validation test was conducted. Using Vitamin C （VC）as positive control，in vitro antioxidant activity of protein from C. pustulata was evaluated by using scavenging rate of 1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl （DPPH）and 2，2′ -azino-bis（3-ethyl benzothiazoline-6-sulfonic acid）（ABTS）free radical as index. RESULTS：The optimal extraction condition of protein from C. pustulata was as follows as the ratio of liquid to material 28 ∶ 1 （mL/g），ultrasonic time of 65 min，extracting for twice. In validation test，average extraction amount of protein from C. pustulata was 65.45 mg/g（RSD=1.68%，n=3），relative error of which to predicted value was 5.48%. The protein from C. pustulata showed strong scavenging effect on ABTS and DPPH free radicals. When the concentration of protein from C. slough was 0.2 mg/mL，and the scavenging rate of it to ABTS free radicals was 97%，the effect of which was similar to VC. The protein from C. pustulata showed weak scavenging ability to DPPH free radical，IC50 was 0.96 mg/mL，the effect of which was not as good as VC. CONCLUSIONS：The extraction technology of protein from C. pustulata optimized by Box-Behnken response surface methodology shows high accuracy and good reliability. The protein from C. pustulata shows certain antioxidant activity in vitro.KEYWORDS Protein from Cryptotympana pustulata；Ultrasonic assisted extraction；Technology optimization；Box-Behnken response surface methodology；Antioxidant activity in vitro蝉蜕为蝉科昆虫黑蚱（Cryptotympana pustulata Fabricius）的若虫羽化时脱落的皮壳，味甘，性寒，入肺、肝经，具有疏散风热、明目退翳、利咽、解痉等功效[1]。
蚕蛹多肽的制备工艺及其体外抗氧化活性
蚕蛹多肽的制备工艺及其体外抗氧化活性
闵建华;李建科;陈婷
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2009(030)014
【摘要】采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶水解蚕蛹蛋白,以水解度和清除DPPH·能力为指标对酶解过程进行分析,并研究水解产物多肽的体外抗氧化活性.结果表明,碱性蛋白酶对蚕蛹蛋白具有较好的水解效果,其水解产物有较高抗氧化活性,对DPPH·、超氧阴离子自由基(O-2·)和羟自由基(·OH)都具有较强的清除能力.
【总页数】4页(P123-126)
【作者】闵建华;李建科;陈婷
【作者单位】陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062;陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062;陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062
【正文语种】中文
【中图分类】TQ936.16
【相关文献】
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4.蚕蛹多肽螯合钙的制备工艺优化及结构表征 [J], 赵梓月;王思远;廖森泰;穆利霞;邹宇晓
5.贮藏时间及缫丝工艺对桑蚕蛹蛋白质和脂肪酸组成及蛹油体外抗氧化活性的影响[J], 吴宝祥;梁舒韵;朱立宏;江虹锐;刘小玲;姜毅
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蝉蜕多肽及其设备制作方法与应用与相关技术
本技术属于多肽制备技术领域，尤其涉及一种蝉蜕多肽及其制备方法与应用。
所述蝉蜕多肽的制备方法如下：蝉蜕清洗研磨为粉末制成蝉蜕研磨液；加入复合蛋白酶酶解，酶解后高温酶灭活；离心收集粗蝉蜕多肽液；过滤得到细蝉蜕多肽液；凝胶柱层析分离，真空冷冻干燥得到蝉蜕多肽。
本技术所制备的蝉蜕多肽可以通过抑制肝癌细胞的增殖，促进肝癌细胞凋亡，抑制肝癌细胞迁移和侵袭来有效的抑制肝癌，因此，本技术所制备的蝉蜕多肽可以用于制备治疗肝癌药物。
权利要求书1.一种蝉蜕多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤（1）蝉蜕清洗，晾干后，置于加有液氮的研磨器中研磨为粉末；（2）在蝉蜕粉末中加入去离子水，使用磁力搅拌器搅拌至粉末完全溶解，得到蝉蜕研磨液；（3）在蝉蜕研磨液中，加入复合蛋白酶对蝉蜕研磨液进行酶解，得到蝉蜕酶解液；（4）对蝉蜕酶解液进行酶灭活，灭活后冷却至室温；（5）将冷却后的酶解液离心，收集上清液，得到粗蝉蜕多肽液；（6）将粗蝉蜕多肽液置于过滤器中，进行过滤，得到细蝉蜕多肽液；（7）采用凝胶柱层析分离对细蝉蜕多肽液进行分离，使用去离子水进行洗脱，收集洗脱液；（8）将收集的洗脱液置于真空冷冻干燥机中真空冷冻干燥，得到蝉蜕多肽。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述复合蛋白酶包括：胰蛋白酶、谷草杆菌蛋白酶和木瓜蛋白酶；按照质量比计，胰蛋白酶：谷草杆菌蛋白酶:木瓜蛋白酶为5:3:2；按照质量比计，蝉蜕研磨液：复合蛋白酶为1:0.01-0.2；所述酶解条件为37-50℃，1-2h。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述酶灭活条件为90-95℃，30-50min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述离心条件为10000-15000r/min,0.5-1h。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述过滤器的孔径为0.5-3μm。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（7）中，凝胶柱层析所使用的层析柱为Sephadex G-250洗脱柱，洗脱柱高度为35-40cm，洗脱柱宽度为1.2-2cm；流动相为去离子水，流速1-2mL/min。
全细胞固态发酵制备蚕蛹多肽工艺及抗氧化性研究
生理功能(如健脾、安神、益精、壮阳等)，自古以来就在 许多亚洲国家被广泛使用在20多年前就已被卫 生部纳入食品资源。蚕蛹水解物中必需氨基酸含量高
Hale Waihona Puke 1.3.2测定方法 1.3.2.1酶活力测定
福林酚法测定中性蛋白酶酶活力“。
达40%,因此蚕蛹蛋白精深加工技术研究开发及产物 的应用在国内外被广泛关注问。蚕蛹水解物卩坷具有较 强的清除自由基的能力，对DPPH自由基、超氧阴离子 自由基和径自由基的清除率分别可达到90.19%、
任公司;鉄皮:成都牧山食品有限公司。
Sephadex G-25 凝胶树脂、DPPH：美国 Sigma 公
、 、 司;焦性没食子酸、Vc Ve 牛血清清蛋白(bovine albu
min, BSA), 硫酸铜、硫酸钾、酒石酸钾钠、三氯乙酸、甲 醛(分析纯):四川蜀都化学试剂公司。
1.2仪器与设备 GL-20G-C高速冷冻离心机：上海安亭科学仪器
蚕蛹粉和隸皮充分混匀后加入90%蒸憎水,121 °C 灭菌30 mino接种1%米曲霉抱子,48h后倒瓶培养，
为评价指标，采用「(33)正交设计确定米曲霉水解蚕 蛹蛋白制备多肽的最佳工艺。正交试验因素和水平见
表lo
表1垂!®水解工艺优化正交试验因素与水平 Table 1 Factors and levels of orthogonal experiments for
China) Abstract: Using silkworm pupa meal and bran as raw materials, silkworm pupa polypeptide was produced by solid-state fermentation of whole cells. The parameters of polypeptide production were optimized to maximize its post-hydrolysis yield. By analysis of orthogonal experiments, the optimal parameters for polypeptide preparation were found to be: hydrolysis temperature of 30 戏，hydrolysis time of 3 d, and enzyme activity of 2 368 U/g. The polypeptide yield was 21.35 mg/mL, and the hydrolysis rate was 4.58% using the optimized hydrolysis process. Analysis of variance indicated that hydrolysis temperature and time each had significant effects on polypeptide yield and degree of silkworm pupa meal hydrolysis, while enzyme volume had no significant effect. Using Sephadex G-25 gel filtration chromatography to isolate polypeptide, component I and component II were ob tained. Both components display • OH scavenging capacity, with scavenging rates of >90%. Key words: silkworm pupa meal; degree of hydrolysis; peptide; purification; antioxidant
酶法制备蚕茧层抗氧化活性肽的工艺条件研究
确 定 中性 酶 酶 解 ｐ Ｈ、 加 酶量、 底 物 浓度 和 酶 解 时 间 ， 在此基 础上用正 交试验确定酶 的最佳 工艺条件 为， 温度 ６ ０℃ ，
ｐ Ｈ６ ． ５ ， 加酶量 １ ０％（ 以底 物质 量计 ） ， 底物浓度 ３ ． ３ ｇ ／ ］ Ｏ Ｏ ｍＬ ， 酶解 时间 ２ １ ０ ｍｉ ｎ 。 测得该条件下水解液的总抗氧化 能力
Ｃ ＨＥ Ｎ Ｌ ｉ － ｈ ｏ ｎ ｇ ， ＤＯ ＮＧ Ｙｉ ｎ ｇ ， Ｌ Ｕ Ｂｉ ｎ ｇ ， Ｃ ＨＥ Ｎ Ｚ ｈ ｉ － ｐ ｅ ｎ ｇ ， ＷＵ Ｊ ｉ ｅ
（ Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｉ ｒ ｎ ｇ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｚ ｈ ｅ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ２ １ ２ ０ １ ３， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ ｗａ ｓ ： ６ ０ ｃ ｃ， ｐ Ｈ ６ ． ５ ， ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ １ ０％（ ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ） ， ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｔ ｅ ｓ ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ ｗ ａ ｓ ｄ ｉ ｌ ｕ ｔ ｅ ｄ ｉ ｆ ｖ ｅ ｔ ｉ ｍ ｅ ｓ ｗ ａ ｓ １ ． ７ ９ ５ ． Ｄ Ｈ ｗ ａ ｓ ４ ． ２ ３ ％ａ ｎ ｄ ｓ ｏ ｌ ｉ ｄ ｓ ｗ ａ ｓ ９ ． ２ ｚ Ｏ ｎ Ｅ．
桑蚕蛹酶解多肽活性研究
桑蚕蛹酶解多肽活性研究作者：周建湘来源：《现代食品·下》2019年第07期摘要：桑蚕蛹是一种优质的蛋白质资源，其蛋白质含量占50%以上。
本文对其酶解产物的抗氧化活性进行了研究，结果显示，经酶解反应制得蚕蛹酶解多肽的水解度为21.4%。
使用邻苯三酚自氧化法检测蚕蛹酶解多肽的抗氧化活性，超氧离子清除率可达79.5%，表明其具有一定强度的抗氧化活性。
关键词：蚕蛹;酶解多肽;抗氧化活性Abstract：Silkworm chrysalis is a kind of high quality protein resource with protein accounts for more than 50%. The antioxidant activity of enzymatic hydrolysates from silkworm chrysalis was studied in this paper. The results showed that， hydrolysis degree of the enzymatic polypeptide from silkworm chrysalis was 21.4%. The antioxidant activity of enzymatic hydrolysis polypeptide ofsilkworm chrysalis was determined by pyrogallol autoxidation method. It’s superoxide ion clearancerate can reach 79.5%. It shows thatenzymatic hydrolysate of silkworm chrysalis has strong antioxidant activity.Key words：Silkworm chrysalis; Enzymatic hydrolysate; Antioxidant activity 中图分类号：TS201.1桑蚕是一种以桑叶为食的经济型鳞翅目昆虫，桑蚕整个生命周期经历卵、幼虫、蛹和成虫4个阶段[1]。
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Preparation and Antioxidant Activity in vitro of Silkworm Pupa Polypeptide
MIN Jian-hua，LI Jian-ke*，CHEN Ting (College of Food Engineering and Nutritional Science, Shaanxi Normal University, Xi'an 710062, China)
子量为 10000D 的超滤膜进行分离，收集滤过液冷冻干 燥；超滤分离条件为操作压力 0.1MPa，温度为常温。 1.4 蚕蛹蛋白多肽体外抗氧化活性的研究
1.4.1 还原能力的测定 采用普鲁士兰法，参照文献[5 ]的方法测定。反应
液在 700nm 处的吸光度越高，还原力越强，抗氧化性 越好。 1.4.2 清除超氧阴离子自由基(O－2·)能力测定
respectively. Alcalase was confirmed as an optimal enzyme preparation to prepare silkworm pupa polypeptide in terms of degree of hydrolysis (DH) of material and DPPH· scavenging activity of hydrolysates. The enzymatic hydrolysis procedure
采用核黄素 - 光 - 氮蓝四唑体系测定，参照文献[6] 的方法。
O－2·清除率(%)=
A0－A ————×
100
A0
式中：A0 为空白对照液 5 6 0n m 时的吸光度；A 为 样品液 560nm 时吸光度。
1.4.3 清除羟自由基(·OH )能力测定 采用邻二氮菲 -Fe2+ 氧化法，参照文献[7]测定。
124 2009, Vol. 30, No. 14
食品科学
※工艺技术
碱性蛋白酶(alcalase)、风味蛋白酶(flavourzyme)、 复合蛋白酶(protamex) 丹麦 Novo 酶制剂公司；木瓜蛋 白酶、胰蛋白酶 Amresco 生化试剂公司；牛血清白 蛋白 北京舟鼎国生物技术有限责任公司；DPPH· 美 国 Sigma 公司；其他试剂均为国产分析纯。 1.2 仪器与设备
※工艺技术
食品科学
2009, Vol. 30, No. 14 123
蚕蛹多肽的制备工艺及其体外抗氧化活性
闵建华，李建科 *，陈 婷
(陕西师范大学食品工程与营养科学学院，陕西 西安
710062)
摘 要：采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶水解蚕蛹蛋白，以水解度和清除
D P P H ·能力为指标对酶解过程进行分析，并研究水解产物多肽的体外抗氧化活性。结果表明，碱性蛋白酶对蚕 蛹蛋白具有较好的水解效果，其水解产物有较高抗氧化活性，对 DP PH ·、超氧阴离子自由基(O－2·) 和羟自由基 (·O H ) 都具有较强的清除能力。 关键词：蚕蛹蛋白；水解；抗氧化性
※工艺技术
食品科学
2009, Vol. 30, No. 14 125
某些肽键或带有某种基团的氨水解度，酶解产物的
活性也会不一样，在筛选制备蚕蛹抗氧化肽的最适酶种
时，不仅需要考虑水解度的大小，还应该考虑酶解物
的抗氧化能力大小。DPPH·是一种较为稳定的以氮为 中心的自由基，化学性质稳定，不易被清除，若受试
参考 Negi[8]和 Kaur[5]的方法，在此基础上进行改 进。在比色皿中加入1.95ml 质量浓度为 24mg/L的 DPPH· 乙醇(体积分数 95%)溶液，测定其在波长 515nm 处的吸 光度，然后加入 50μl 样品，记录加入提取物溶液后第 2、3、4、5min 的吸光度，5min 后每 5min 记录吸光 度 1 次，直到吸光度的改变在每分钟内不超过 0.003 单 位为止。
Abstract：As a high quality protein resource that contains 18 amino acids including 8 essential ones accounting for 40% of total
amino acids, silkworm pupa protein is more nutritional than soybean protein isolate. However, silkworm pupa protein is
parameters were as follows: substrate concentration 4%, enzyme/substrate concentration ratio 2:100, temperature 60 ℃, pH 4,
and hydrolysis duration 4 h, and under such conditions a DH of 28.2% was achieved. The hydrolysis product could effectively scavenge DPPH·, O－2· and OH· radicals, suggesting its strong antioxidant activity.
1.3.1 蚕蛹蛋白酶解工艺 取一定量蚕蛹蛋白粉，按 4%(m/V)底物浓度加入双
蒸水，在夹层玻璃反应器中搅拌，待温度恒定后，调 节一定的 pH 值，按酶与底物比(E/S)为 2:100(m/m，每 100g 蛋白质中所加的酶为 2g)加入蛋白酶开始水解，搅 拌状态下不断加入 0.5mol/L NaOH，以使反应体系的 pH 值始终维持在实验规定值范围内，用 pH-stat 法测定水 解度，水解一定时间后，终止反应，沸水浴灭酶 15min。冷却后以 4000r/min 离心 20min，收集上清液 4 ℃贮藏备用。
物能够清除它，则表示受试物具有较强的自由基清除能
力[10]。因此，DPPH·清除模型是一种广泛用于评价抗 氧化剂自由基清除能力的快速方法。
由图 1 可知，在前 30min 内，各酶水解度增速较
快，其后逐渐趋于平缓，表现出各自不同的特性。随
着酶解的进行，碱性蛋白酶和胰蛋白酶的水解度增大趋
势明显，一直高于木瓜蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋
was optimized using orthogonal array method and the corresponding product was subjected to further analysis of antioxidant activity such as reducing power and O2－·, ·OH and DPPH·scavenging activities. The optimal Alcalase-catalyzed hydrolysis
１ 材料与方法
1.1 材料与试剂 蚕蛹 陕西安康百瑞丝绸有限公司；蚕蛹蛋白粉
自制。
收稿日期：2008-10-17 作者简介：闵建华(1982 －)，男，硕士研究生，研究方向为食品营养与卫生。E-mail：bobo123876@ * 通讯作者：李建科(1960 －)，男，教授，博士，研究方向为食品营养与安全。E-mail：jiankel@
A－A0 ·OH 清除率(%)=(1 －————)× 100
A1－A2
式中：A 为加样品而不加 H 2O 2 的反应管吸光度； A0 为加入样品及 H2O2 的反应管吸光度；A1 为不加样品 也不加 H2O2 的反应管吸光度；A2 为加 H2O2 而不加样品 的反应管吸光度。
1.4.4 清除二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)活性测定 方法
白酶的水解度；1h 后，除碱性蛋白酶外，其他四种蛋 白酶水解进程曲线变得很平缓，其水解度明显低于碱性
A0－At DPPH·清除率(%)= —————× 100
A0
式中：A 0 为 D PP H ·乙醇溶液与对应溶剂的吸光 度；A t 为加入样品后 D P P H ·乙醇溶液时的吸光度。
２ 结果与分析
2.1 水解蚕蛹蛋白最适用酶的选择 具有生理活性的多肽主要是一些分子量较小的肽
段，而蚕蛹蛋白的水解度大小直接决定了多肽的分子量 大小，所以活性较强的肽段可能是那些水解度较大的酶 的酶解产物。而酶的专一性决定了某种蛋白酶可能只对
Key words：silkworm pupa protein； hydrolysis；antioxidant activity
中图分类号：TQ936.16
文献标识码：A
文章编号：1002-6630(2009)14-0123-04
生物活性肽是由蛋白质水解产生的含有数个到数十 个氨基酸组成的具有特殊生理功能的多肽类物质，其不 仅能够提供人体生长发育所需的营养物质，且具有重要 的生理功能，如神经、激素和免疫调节、抗血栓、抗 高血压、抗胆固醇、抗细菌、抗病毒、抗癌、抗氧 化、抗衰老等生理活性。生物活性肽的研究开发利用 已经成为全球食品和营养等相关领域研究的一个重要发 展方向[1]。
1.3.3 水解工艺条件的优化 利用正交试验设计法，选定温度、p H 值、底物
浓度、酶用量为考察因素，以蚕蛹蛋白水解度为指标， 确定最佳酶解条件。
1.3.4 蚕蛹蛋白活性多肽的分离 参考文献[3 ]、[4]，在最佳酶解工艺条件下进行水
解，水解液 10000r/min 离心 10min，上清液通过截留分
KDY-9810 型凯氏定氮仪 KeTUO 公司；501(A)型 超级恒温器 上海实验仪器厂有限公司；TGL-16G 型高 速离心机 上海安亭科学仪器厂；真空冷冻干燥机 巩 义予华仪器有限责任公司；雷磁 PHS-3C 型精密 pH 计 上海精密科学仪器有限公司；XX80EL005 型超滤设备、 超滤膜(截留分子量 30 万 D、1 万 D，滤膜有效面积为 0.1m2) Milipore 公司；JB-3 型定时恒温磁力搅拌器 上 海雷磁新泾仪器有限公司。 1.3 蚕蛹蛋白多肽的制备