2,6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
实验四 维生素C的提取及含量测定
实验操作
1,提取 ,
用水将青椒洗净,用滤纸吸去表面水分. 称取10g,放入研钵中,加1%HCl溶液5ml一起 研磨,放置片刻,将提取液转入锥形瓶中.如 此反复2～3次.用适量白陶土脱色,过滤,最 后,将提取液转入50ml容量瓶中,再用1%HCl 溶液稀释到刻度并混匀,静置10min,备用.
实验操作
计 算
注意
1)生物组织提取液中 常有色素存在, 生物组织提取液中, (1)生物组织提取液中,常有色素存在,影响滴 虽可用白陶土将提取液脱色, 定,虽可用白陶土将提取液脱色,但最适用的白 陶土不易得到,往往不能将颜色脱尽. 陶土不易得到,往往不能将颜色脱尽. 滴定过程宜迅速,一般不超过2min 2min. (2)滴定过程宜迅速,一般不超过2min.滴定所 用的染料不应少于lml或多于4ml lml或多于4ml, 用的染料不应少于lml或多于4ml,如果样品含抗 坏血酸大高或大低时,可酌量增减样液. 坏血酸大高或大低时,可酌量增减样液.
维生素C的提取及含量测定 实验四 维生素 的提取及含量测定 (2,6-二氯酚靛酚滴定法 , 二氯酚靛酚滴定法 二氯酚靛酚滴定法)
实 验目的
掌握2 二氯酚靛酚的原理和方法. 的原理和方法.
实 验 原 理
维生素C又称抗坏血酸,在中性,碱性条件下不稳定,在 酸性条件下稳定,因此,弱酸性溶液中可提取维生素C . 还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚钠盐,本身则 氧化成脱氢抗坏血酸.在酸性溶液中,2,6-二氯酚靛酚呈 红色,被还原后变为无色. 因此,可用2,6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸. 当抗坏血酸全部被氧化后,稍多加一些染料,使滴定液呈 淡红色,即为终点.如无其他杂质干扰,样品提取液所还 原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比.
维生素C的定量测定
(2，6－二氯酚靛酚滴定法)
一、目的
掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C含量 的原理和方法
二、原理
维生素C,因其能防治坏血病，并有酸味,因 此又称为抗坏血酸。抗坏血酸（还原型）能还 原染料2，6-二氯酚靛酚,本身则被氧化成脱氢 抗坏血酸。2，6-二氯酚靛酚，在红色，被 还原后变为无色。因此，可用2，6-二氯酚靛 酚滴定样品中的抗坏血酸。当抗坏血酸全部被 氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈微红色， 即为终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所 还原的标准染料量与样品中所含的抗坏血酸量 成正比。
三、操作
1. 提取 称取新鲜辣椒4g于研钵中，加入 2%HCl 溶液10mL,研磨成匀浆，静置5min后,将 提取液通过两层纱布经漏斗滤入50mL容量瓶中 (并用2%HCl溶液冲洗研钵，洗出液转入容量 瓶)，最后用2%HCl溶液定容至刻度并混匀。
T为1mL2，6-二氯酚靛酚相当于维生素C的mg数； (0.0834) C为样品提取液的总mL数； (50mL) D为滴定时所取的样品提取液的mL数；(10mL) W为样品的重量(g) (4g)
试剂和器材
1. 试剂： （1）2%盐酸 ； （2）白陶土； （3）标准维生素C溶液（0.5mg/mL） ： 精确称取25mg纯维生素C ，溶于 25mL 2% HCl 溶液中，移入50mL容量瓶中并用2% HCl溶液稀释至 刻度,置冰箱中保存。 （4）0.025% 2，6-二氯酚靛酚溶液： 称取氧化型2，6-二氯酚靛酚0.25g，溶于1000mL蒸 馏水中，加NaHCO3 0.21g充分振荡，装入棕色瓶内， 置冰箱内保存。临用前过滤，用标准维生素C溶液标 定其浓度。 标定方法：取5mL标准维生素C溶液及5mL 2% HCl溶液于50 mL的锥形瓶中，用配制好的2，6-二氯
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）一、原理维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。
二、 实验仪器新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗三、实验试剂1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为0.1mg/ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、0.01% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。
（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
四、实验步骤（一）提取水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。
（二）滴定1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。
维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法
实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法1、测定原理2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。
抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO—C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。
2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。
还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。
在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。
根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。
在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。
反应式如下：二、实验仪器与试剂1.仪器组织捣碎机；水果刀；托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；台式离心机；电炉；吸耳球；玻璃棒；蒸馏水，蒸馏水洗瓶；记号笔、标签纸、定性滤纸；20cm镊子；5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗；漏斗架；50ml、250ml、 500ml 、1000ml烧杯；10ml 、500 ml、1000 ml量筒；100ml具塞量筒(或普通量筒)；100mL、250mL棕色容量瓶；50ml或100ml三角烧瓶。
2.原料及试剂本实验材料是，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯度。
(1)2%草酸溶液：草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。
(2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。
(3)抗坏血酸标准溶液：称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，备用。
(4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液：称取碳酸氢钠52.2mg，溶解在200mL沸水中。
维生素C的定量测定
维生素C的定量测定维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的：掌握2，6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法二、实验原理1、维生素c又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
2、在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中含有的维生素C，当样品中的维生素C被完全氧化后，在滴加过量的2，6-二氯酚靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
3、如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯酚靛酚的量与样品中所含有维生素C的量成正比。
三、实验仪器1、新鲜猕猴桃2、50ml容量瓶3、微量滴定装置4、100ml锥形瓶5、研钵6、漏斗7、吸管四、实验试剂1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水2、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液五、实验步骤1.样品中抗坏血酸的提取：1）将猕猴桃去皮，准确称取果肉5.090g，加2%草酸试剂10ml 置研钵中研成浆状；2）将浆状物倒入50ml容量瓶中，用2%草酸溶液稀释并定容，混匀，静止10分钟，过滤（最初数毫升滤液弃去），滤液备用。
2.滴定样品液的滴定：准确吸取滤液两份，每份10ml，分别放入两个100ml 锥形瓶中，用2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色。
滴定终点要保持15秒钟；六、实验结果：已知：1ml2，6-二氯酚靛酚染料相当于1毫克抗坏血酸初始读数/ml 最终读数/ml共用染液/ml抗坏血酸毫克数/mg10ml滤液平均含抗坏血/mg50ml滤液含抗坏血/mg滤液1 0.011 1.604 1.593 1.593 1.589 7.945 滤液2 0.048 1.633 1.585 1.585由上表可知5.090g猕猴桃果肉含7.945mg抗坏血酸素，则100g 猕猴桃果肉中含抗坏血酸素约156.090mg.七、实验结果分析与思考：1.2,6-二氯酚靛酚滴定法测定Vc含量的优缺点?优点：它具有简便易行、快速、比较准确等优点，适用于许多不同类型样品的分析。
2,6-二氯酚靛酚测vc
二、原理
还原型Vc能与氧化剂染料2,6-二氯酚靛酚作 用，染料本身被还原成无色的衍生物，同时 还原态的Vc被氧化成脱氢Vc。
HO O O HOCH CH2OH L 抗坏血酸 2H +2H HOCH CH2OH L 脱氢抗坏血酸
还原型VC
HO
氧化型2，6-二氯酚靛酚 （弱碱性，蓝色）
图 7 56
H+ 抗坏血酸的氧化型与还原型的互变
规定：三角瓶中，由无色变为微红 色，15秒钟内不消失，是滴定终点。
三、实验材料及设备
1.材料 新鲜松针 2.仪器 电子天平 离心机 3.器材 微量滴定管：5mL×1 移 液 管： 10mL×1 容 量 瓶： 50mL×1 量 筒： 10mL×1 锥 形 瓶： 50mL×6 研 钵： 1套
S为1ml2,6二氯酚靛酚溶液相当于维生素C 的mg数。
W为10ml样品提取液中含样品的克数。
七 注意事项
1.操作要尽可能快，不要超过2分钟。并防止 与铁铜器具接触，以减少VC的氧化。 2.样品提取液避免强光直射。 3. 酸化蒸馏水具有抑制氧化酶，保护VC作用。 在颜色反应中还提供了酸性条件。 4.要使结果正确，滴下使用的2,6-二氯酚靛酚 溶液在1-4ml之间。
hohochhochoh2h2hchhoch56抗坏血酸的氧化型与还原型的互变氧化型26二氯酚靛酚弱碱性蓝色还原型v还原型26二氯酚靛酚弱酸性无色氧化型染料弱酸性红色在滴定管中弱碱性的26二氯酚靛酚染料是蓝色的
生化分析实验
实验 九 2,6-二氯酚靛酚滴 定法测定L-抗坏血 酸的含量
一、目的
掌握滴定法测定Vc含量的基本原理和操作。
八、思考题
用滴定法测定生物材料中Vc的含量有什么优 缺点?
维生素C含量测定 2,6-二氯酚靛酚法 2010.9.21
注意事项
1.用2%草酸制备提取液,可有效地抑制抗坏血酸氧化酶, 1.用2%草酸制备提取液,可有效地抑制抗坏血酸氧化酶, 草酸制备提取液 以免抗坏血酸变为氧化型而无法滴定, 1%的草酸无此作 以免抗坏血酸变为氧化型而无法滴定,而1%的草酸无此作 用 。 2.市售的2,6-二氯酚靛酚质量不一,以标定货0.4mg抗坏 2.市售的2,6-二氯酚靛酚质量不一,以标定货0.4mg抗坏 市售的2,6 0.4mg 血酸消耗费2ml左右的染料为宜, 血酸消耗费2ml左右的染料为宜,可根据标定结果调整染 2ml左右的染料为宜 料的浓度 3.滴定过程易迅速,一般不超过2min。 3.滴定过程易迅速,一般不超过2min。样品滴定消耗燃料 滴定过程易迅速 2min 4ml为易如超出此范围 为易如超出此范围, 1～4ml为易如超出此范围,应增加或减少样品提取液用 量。 。
实验器材
材料 新鲜水果或蔬菜
1%草酸溶液:草酸1g溶于100ml蒸馏水中， 1g溶于100ml蒸馏水中 1%草酸溶液:草酸1g溶于100ml蒸馏水中， 草酸溶液 2%草酸溶液 草酸2g溶于100ml蒸馏水中， 草酸溶液: 2g溶于100ml蒸馏水中 2%草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中，抗坏血 酸标准溶液﹙0.1mg/ml﹚ 1%草酸溶液配制 草酸溶液配制， 酸标准溶液﹙0.1mg/ml﹚用1%草酸溶液配制， 0.05%2,6-二氯酚靛酚溶液。 0.05%2,6-二氯酚靛酚溶液。 天平，组织捣碎机， 仪器或其他用具 天平，组织捣碎机，容量瓶 ﹙50ml﹚，微量滴定管﹙5ml﹚，刻度吸管﹙ml, 50ml﹚ 微量滴定管﹙5ml﹚ 刻度吸管﹙ 10ml﹚ 锥形瓶﹙100ml﹚ 10ml﹚，锥形瓶﹙100m吸取4 抗坏血酸标准溶液（ ⑴ 1.2,6-二氯酚靛酚溶液的标定 准确吸取4.0抗坏血酸标准溶液（含0.4mg 抗坏血酸） 100ml锥形瓶中, ml锥形瓶中 草酸溶液, 抗坏血酸） 于100ml锥形瓶中,加6ml 1%草酸溶液,用2,6-二氯酚靛酚溶 液滴定至淡红色﹙15秒内不退即为终点 秒内不退即为终点﹚ 记录所用染料溶液的体积， 液滴定至淡红色﹙15秒内不退即为终点﹚。记录所用染料溶液的体积， 计算出1ml染料溶液所能氧化抗坏血酸的量。 计算出1ml染料溶液所能氧化抗坏血酸的量。 染料溶液所能氧化抗坏血酸的量 提取抗坏血酸取新鲜水果或蔬菜25g,加入25 取新鲜水果或蔬菜25g,加入25ml 草酸溶液,打成匀浆, ⑵提取抗坏血酸取新鲜水果或蔬菜25g,加入25ml 2%草酸溶液,打成匀浆,用 两层纱布过滤至100ml容量瓶中 滤饼用少量2 的草酸溶液洗几次, 两层纱布过滤至 100ml容量瓶中 , 滤饼用少量 2% 的草酸溶液洗几次 , 合并 100ml 容量瓶中, 滤液,定容至100ml。 滤液,定容至100ml。 100ml 样品滴定准确吸取样品提取液 ml和草酸15ml,放入50ml锥形瓶中 准确吸取样品提取液5 和草酸15ml,放入50ml锥形瓶中, ⑶样品滴定准确吸取样品提取液5ml和草酸15ml,放入50ml锥形瓶中,滴定方 法同2 另取20ml1 草酸作空白对照滴定。 20ml 法同2,另取20ml1%草酸作空白对照滴定。样品提取液和空白对照各做两 份。
食品中维生素C含量的测定实验
实验3 食品中维生素C含量的测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验原理维生素C又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
2，6-二氯酚靛酚的钠盐水溶液呈蓝色，在酸性溶液中呈玫瑰红色，当其被还原时就变为无色，因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。
当抗坏血酸完全被氧化后，稍多加一点染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。
二、试剂和器材偏磷酸醋酸溶液：取15g（用时研细）溶于40mL醋酸及20mL水的混合液中，然后用水稀释至500mL，过滤后储入试剂瓶中。
标准2，6-二氯酚靛酚溶液：取0.25g2，6-二氯酚靛酚溶于700mL蒸馏水中（用力搅动），加入300mL磷酸缓冲液（预先配制9.078g/L KH2PO4-11.867g/LNa2HPO4·2H2O水溶液，用时以KH2PO4：Na2HPO4·2H2O=4：6的比率将其混合，pH值为6.9-7.0），翌日过滤，滤液储于棕色瓶中，临用时，以抗坏血酸溶液标定。
标准维生素C溶液：以少量偏磷酸醋酸溶液溶解0.1g维生素C于100mL容量瓶中，再以该液稀释至刻度。
2，6-二氯酚靛酚液的标定：在3个100mL锥形瓶中，各置5mL偏磷酸醋酸液，再各加2mL标准维生素C溶液，摇匀。
用上面所制的标准2，6-二氯酚靛酚液滴定，呈玫瑰红色保持30s不褪色为止。
记下所用2，6-二氯酚靛酚溶液体积平均值，再以同样方法做一空白实验，取7mL偏磷酸醋酸液加水若干毫升（相当于以上所用的2，6-二氯酚靛酚溶液的低定量），仍用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定。
将第一次滴定的量减去空白实验的量，即为标准维生素的反应量，求出1mL 2，6-二氯酚靛酚对应于维生素C的质量（mg）。
研钵、容量瓶、剪刀、锥形瓶、微量滴定管三、实验步骤1、用自来水冲洗果蔬样品，再以蒸馏水清洗，用纱布或吸水纸吸干表面水分，然后称取25g，剪碎，在研钵中研呈浆状。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)一、目的要求:(1)学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
(2)了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
(3)熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理:维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶(抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图:当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂:1(实验材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器:(1)天平 (2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL，10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸 (5)锥形瓶(100mL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HCl)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)(2 25mg，溶于25ml 4,HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
维生素C的定量测定实验报告
生物化学实验报告维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的掌握2，6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法二、实验原理维生素C又称抗坏血酸。
在1928年从牛的肾上腺皮质中提出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。
因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。
三、实验器材1、松针、菜椒、大枣；2、取液器3、容量瓶100ml4、微量滴定管5ml5、电子天平6、研钵、烧杯数只7、漏斗两个四、实验试剂1、2%草酸溶液：称取草酸8.0311g，溶于400ml蒸馏水中；2、1%草酸溶液：称取草酸4.0254g，溶于400ml蒸馏水中；3、标准抗坏血酸溶液；4、1%HCl；5、0.1% 2，6-二氯酚靛酚溶液。
五、实验操作1、样品的提取松针：从南京大学教学楼前摘取的新鲜松针，用水清洗干净，吸去表面的水。
准确称取2.0004g，放在研钵中加入1%HCl溶液5ml一起研磨，研细。
放置片刻，将提取液转入100ml容量瓶中，如此反复几次加入提取液。
最后用1%HCl溶液定容，混匀，（每10ml样液中含松针0.20004g）静置10min，过滤，备用；菜椒和大枣：用水洗净，吸去表面水分。
准确称取得大枣 2.0025g、菜椒1.9963g。
分别加2%草酸10ml于研钵中，研细，转移提取液于100ml容量瓶中并用2%草酸溶液定容。
（这样，每10ml样液中含有枣0.20025g，或者菜椒1.9963g）静置10min，过滤，弃去最初几毫升滤液，备用；2、滴定标准抗坏血酸溶液：准确吸取标准抗坏血酸溶液 1.0ml加9ml 1%草酸在100ml锥形瓶中，微量滴定管以0.1%2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s 即终点；样品滴定准确称取10.0ml样品溶液，放入100ml锥形瓶中，用与标准抗坏血酸溶液滴定相同的方法滴定；六、数据记录七、数据计算由标准液滴定数据求出1ml染料相当于多少mg抗坏血酸：T = 0.1mg / 0.26ml = 0.385 mg/ml计算每100g样品中含抗坏血酸的质量公式：1000⨯=m VT m 其中：m 100g 样品中含抗坏血酸的质量；V 滴定时所用去染料的体积数；T 每毫升染料能氧化抗坏血酸质量数，0.385mg/ml ；0m 10ml 样液相当于含样品之质量数。
2,6-二氯靛酚滴定法测定番茄中维生素C的含量
2,6-二氯靛酚滴定法测定番茄中维生素C的含量摘要自从波兰裔美国科学家卡西米尔·冯克在1912年综合了以往的试验结果，发表了维生素的理论以来，国内外学者进行了广泛的研究。
目前国内测定维生素c的常见方法有:2,6-二氯靛酚滴定法、2,4-二硝基苯肼法、荧光法、碘滴定法、高效液相色谱法[1-3]等。
关键词 2,6-二氯靛酚滴定法；番茄；维生素c；含量1 前言维生素c（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素，是维持机体正常生理功能的重要维生素之一,具有多种重要的生理功能，广泛参与机体氧化、还原等复杂代谢过程,是蔬菜水果中的一项非常重要的营养指标。
维生素c的主要作用是提高免疫力，预防癌症、心脏病、中风，保护牙齿和牙龈等。
另外，坚持按时服用维生素C还可以使皮肤黑色素沉着减少，从而减少黑斑和雀斑，使皮肤白皙。
富含维生素c的食物有番茄、花菜、青辣椒、橙子、葡萄汁等，可以说，在所有的蔬菜、水果中，维生素c含量都不少。
美国专家认为，每人每天维生素c的最佳用量应为200～300毫克，最低不少于60毫克。
而中国营养学会建议的膳食参考摄入量（RNI），成年人为100mg/日，可耐受最高摄入量（UL）为1000mg/日。
市售的蔬果维生素c的含量不近相同，在此特意对番茄进行维生素c的测定，为人们正确补充维生素和合理饮食提供依据和指导。
2 实验部分2.1 实验原理维生素c属己糖衍生物，存在还原型与氧化型两种结构形态。
还原型维生素c分子中第二和第三个碳原子上的两个相邻的烯醇式羟基易离解出H+而具酸性，故又称抗坏血酸。
还原型维生素C在弱酸中稳定，而在碱中或加热条件下均易被破坏，其还原性又使得极易被氧化剂氧化，特别在碱性或中性环境中，或当有微量重金属离子(如Fe2、Cu+2等)存在时，更易被氧化分解。
述原型维生素c氧化后脱氢即转化为氧化型维生素C，后者加氢仍可还原成还原型维生素c，故氧化型结构本身仍具有生物学活性。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2, 6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C乂称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2, 6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈 红色。
抗坏血酸具有强还原性, 能使2, 6-二氯酚靛酚还原褪 色，其反应如图：当用2, 6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时， 滴下的2, 6-二氯酚靛酚被还原 成无色；当溶液中的抗坏血酸 全部被氧化成脱氢抗坏血酸 时，滴入的2, 6-一.氯酚靛酚立抗坏血酸 （蓝色） Cl o HO —CH CH 2O H CF 2.6•二氮（•红色）HO —CHO 一CIH —C脫氢抗坏血酸 还原型2,&二氨酚靛蜀（无色）即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1(实验材料：多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器：(1)天平(2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL, 10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸(5)锥形瓶(lOOmL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HC1)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黃色则不能用)(225mg,溶于25ml 4,HC1中，移入50ml容量瓶中，用蒸憎水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml中含抗坏血酸O.omg, o(3)0. 01M 2, 6,二氯酚靛酚准确称0. 25g氧化型2, 6,二氯酚靛酚、0. 21g碳酸氢钠溶于250ml热蒸镭水中，稀释至1000ml,充分振摇，装入棕色瓶内，置冰箱内过夜，临用前过滤，用标准Vc标定其浓度。
2,6-二氯酚靛酚钠法测定维生素C含量
2,6-二氯酚靛酚钠法测定维生素C含量一、实验目的维生素C是生物体内抗氧化体系成员之一。
因此，维生素C含量可作为植物抗衰老和抗逆境的重要生理指标，也可作为果品质量、选育良种的鉴别指标。
通过本实验掌握用2,6-二氯酚靛酚钠法测定植物组织维生素C含量的方法。
二、实验原理2，6-二氯酚靛酚钠是氧化性染料，可将还原态的维生素C氧化成脱氢维生素C，而染料本身从深蓝色被还原成无色的衍生物。
2，6-二氯酚靛酚钠在酸性条件下呈红色。
在滴定终点之前，滴下的2，6-二氯酚靛酚钠立即被还原成无色。
当溶液从无色转变成微红色时，即为滴定终点。
三、实验材料新鲜生菜四、设备与试剂滴定管、三角瓶、研钵、量筒、移液管1％草酸，0.1%2，6-二氯酚靛酚钠溶液五、实验步骤（一）维生素C的提取称取1.0 g新鲜样品（已称好），置研钵中，分次加20ml 1％草酸，研成匀浆（用1%的草酸定容20ml）。
通过纱布过滤后取10ml放于离心机中3000r/min离心10min,吸取上清使用。
（二）维生素C的测定吸取滤液10 ml，放入50 ml三角瓶中，立即用0.1% 2，6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至出现明显的粉红色在15 s内不消失为止。
记录所用滴定液体积（另取10ml 1%草酸作空白对照）。
（三）标准液的标定取1mg/ml抗坏血酸溶液1ml置于锥形瓶中，加9ml 1%草酸，用0.1%2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色15s不消失。
计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸（取10ml 1%草酸作空白对照）。
1.2ml 染料相当于1mg抗坏血酸（四）含量计算维生素C（mg/g样品）=（样品消耗染料体积-空白消耗染料体积）╳提取定容后的体积╳1ml染料能氧化抗坏血酸的毫克数/滴定用的样品体积╳水果质量六、注意事项1. 操作要尽可能快，并防止与铁、铜器具接触，以减少维生素C的氧化。
2. 草酸及样品的提取液避免日光直射。
果蔬中维生素含量的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
果蔬中维生素含量的测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）
学院
XXX
专业
XXXX
年级
XXXX
组员
XXXX
一、实验背景及目的：
维生素C又称为抗坏血酸，常存在于新鲜的蔬菜和某些水果中,尤其是在
橙子、枣、辣椒、苦瓜中含量丰富。是维持机体正常生理功能的重要维生素
之一。维生素C抗坏血酸在食品工业中常用做抗氧化剂，维生素C可促进胶原
二氧靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。取浸提液10mL作空白对照，结果计算。
3.3维生素C按以下公式计算:
（V-V0）×T×A
维生素C( mg/100 g)= ----------------------------×100%
W
式中:
V—滴定样液时消耗染料溶液的体积，mL。
V0—滴定空白时消耗染料溶液的体积，mL。
组别
体积（ml）
第一组
第二组
第三组
V（滴定样液时消耗染料溶液的体积）ml
V0（滴定空白时消耗染料溶液的体积）ml
V-V0
(体积改变量)ml
100g橙子中Vc含量mg
四、注意事项
（1)某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物定容时泡沫太多，可加
数滴丁醇或辛醇消泡。
(2)样品的提取液制备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，
定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计
2.1仪器设备
高速组织捣碎机:8000一12000 r/min。分析天平。滴定管:25 mL、10mL。
容量瓶:100mL。锥形瓶:100 mL、50 mL。吸管:10mL、5mL、2mL、1mL。
2．用2%盐酸提取样品的目的是什么？
2,6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
V2为滴定空白所用去染料体积（ml）;
V3为样品测定时所用滤液体积（10ml）;
V为样品提取液的总体积；
K为1毫升染料能氧化维生素C的量（mg）;
W为称取样品重量(g )。
五、注意事项
1.滴定时速度要尽可能快，因样品内一般都含有一些能将2，6一二氯酚靛酚还原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较维生素C弱。
2.滴定所用染料要在1~4ml之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。
3.抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2%草酸可抑制该酶，1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe2+能还原二氯酚靛酚，如用醋酸（8%即可）则Fe2+不会很快与染料起作用。
4.样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。
2、样品的测定：
取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml，用已标定的2，6一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值。
（三）结果计算
根据实验数据计算出每100g样品的维生素C含量：
维生素C（mg/100g样品）= ×100
5.在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有维生素C的生理作用，但不能将2，6一二氯酚靛酚还原脱色。
6.在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。应加入适量白陶土乳液进行脱色过滤后再滴定。
六、实验报告
保留每次测定的有效数据，计算样品维生素C的含量并讨论分析结果的准确性，科学性。
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法实验十五抗坏血酸含量测定(2,6-二氯酚靛酚法)一、目的学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、原理维生素 C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素 C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。
此外维生素 C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。
维生素C的分布很广，尤其在水果(如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等)和蔬菜(觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等)中的含量更为丰富。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素 C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素 C易丢失。
此外在碱性溶液中，维生素 C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。
利用它具有的还原性质可测定其含量。
还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。
因此用 2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素 C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。
用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、仪器、试剂和材料1(仪器(1)天平(2)组织捣碎机(3)微量滴定管(5ml)(4)容量瓶(50ml)(5)刻度吸管(5ml，10ml)(6)锥形瓶(100ml)2(试剂(1)l,草酸溶液:草酸1g溶于 100ml蒸馏水中(2)2,草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中(3)抗坏血酸标准溶液(0.1 mg,ml):精确称取10mg纯抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)用1,草酸溶液溶解并定容至100ml。
维生素C含量的测定实验报告
维生素C含量测定一、实验目的掌握用2，6－二氯酚靛酚测定维生素C的原理和方法。
二、实验原理1.维生素C有强的还原性，在中性和微酸中，呈蓝色的染料2，6－二氯酚靛酚还原成无色的还原型2，6－二氯酚靛酚，同时自身被氧化脱氢抗坏血酸。
在维生素C全部氧化后，再滴下的2，6－二氯酚靛酚将立即使溶液呈粉红色。
2.本实验采用2，6－二氯酚靛酚滴定分析，由于提取液中的其他还原性物质还原2，6－二氯酚靛酚速度较慢，故可将滴定过程控制在2min之内，并判断终点以红色15~30S内消失为准。
三、仪器与试剂维生素C标准液，维生素C样液，0.1mg/ml2，6－二氯酚靛酚溶液，1/1000mol/l 碘酸钾，甲醛醋酸缓冲液，2%草酸溶液，1%淀粉，6%KI溶液四、实验步骤1.标准维生素C的标定：吸取标准维生素C溶液5ml放入三角瓶，加入6%KI 溶液0.05mlt和1%淀粉5滴。
用微量管以碘酸钾液进行滴定，每滴下1滴既充分摇匀，滴至出现微青蓝色为止，记下计数Vc1，求出标准维生素C的含量。
2.维生素C样液的滴定：取三个三角瓶标记为A，B和C。
V1——表示维生素C和非维生素C的其他还原性性质总共消耗V2——表示非维生素C的还原性物质的消耗五、实验结果与讨论每100g样品还原型维生素C的量（mg）＝（（V1－V2）*C*V*100）/A测得：V1＝0.200ml V2＝0.140ml Vc1＝0.440ml Vc2＝2.30ml标准维生素C含量C1＝（0.440*0.88）/5=0.0078mg/ml分析：标准维生素C液中有部分氧化。
样品维生素C含量＝（0.200－0.140）*5*100*C/3=0.078mg1ml2，6－二氯酚靛酚溶液所能氧化维生素C的毫克数C＝C1/Vc2=0.0339mg分析：一般猪肉中，100g所含的维生素C约在0.1mg，本实验所求得的维生素C 含量为0.0339，比正常水平明显要低，造成的原因可能是：1、吸取样品液前未对样液进行摇匀，造成吸取的样液局部浓度偏低，测出来的含量也就偏低；2、用2，6－二氯酚靛酚滴定标准维生素C溶液时，由于产生的粉红色难以判断出来，另外滴定过程中，仪器难以控制，造成2，6－二氯酚靛酚消耗量偏少，则计算C（1ml2，6－二氯酚靛酚溶液所能氧化维生素C的毫克数）偏低，造成所测量得的样液维生素C含量偏低。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C一、目的和要求掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、原理维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。
最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效。
维生素C能够还原染料2,6-二氯酚靛酚，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，被还原后成无色。
当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全。
因此，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
三、试剂和器材（一）试剂2%草酸溶液：2g草酸溶于100ml蒸馏水中1%草酸溶液：1g草酸溶于100ml蒸馏水中标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）: 准确称取50mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至500mL，贮于棕色瓶中，冷藏。
最好临用前配制。
存，冷藏(最好临用时配置)；5. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液，棕色瓶贮存，冷藏(4℃下可保存一周)，临用时以标准抗坏血酸液标定。
0.1%2.6―二氯靛酚溶液称取2.6―二氯靛酚钠盐500mg，溶于300ml热水中，冷后加水稀释至500ml，过滤后盛于棕色药瓶内，保存在冰箱中。
（二）器材1. 新鲜蔬菜(辣椒、青菜、西红柿等)、新鲜水果(橘子、柑子、橙、苹果等)；2. 吸管1.0ml、10.0ml；3. 容量瓶25ml, 100ml；4. 微量滴定管5ml；5. 天平；6. 研钵；7. 漏斗Φ8cm.。
四、操作步骤1. 样液制备适量称取青椒一份10g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，抽滤（或四层纱布过滤，纱布再用少量2%草酸洗几次，合并滤液），滤液转入50ml容量瓶后用2%草酸定容，若不易过滤研磨后以2%草酸洗涤，离心(4000r/min，10min)2—3次，合并上清液于50mL 容量瓶中，定容至刻度。
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6.在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。应加入适量白陶土乳液进行脱色过滤后再滴定。
六、实验报告
保留每次测定的有效数据，计算样品维生素C的含量并讨论分析结果的准确性，科学性。
（三）器具
1、锥形瓶（50~100毫升）
2、移液管（1毫升，10毫升）
3、容量瓶（100毫升）
4、微量滴定管（3毫升或5毫升）
四、操作步骤
（一）提取
水洗净新鲜的水果，用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎，加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤，弃去最初几毫升滤液。
2、样品的测定：
取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml，用已标定的2，6一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值。
（三）结果计算
根据实验数据计算出每100g样品的维生素C含量：
维生素C（mg/100g样品）= ×100
三、材料、试剂与器具
（一）新鲜的水果
（二）试剂
1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、0.01% 2,6一二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6一二氯酚靛于300毫升含有104克NaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
式中：V1为滴定样品液所用去染料体积（ml）;
V2为滴定空白所用去染料体积（ml）;
V3为样品测定时所用滤液体积（10ml）;
V为样品提取液的总体积；
K为1毫升染料能氧化维生素C的量（mg）;
W为称取样品重量(g )。
五、注意事项
1.滴定时速度要尽可能快，因样品内一般都含有一些能将2，6一二氯酚靛酚还原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较维生素C弱。
七、思考题
1、要测得准确的维生素C值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么？
2、在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下？
3、试简述维生素C的生理意义。
讲解法
讲解法
演示法
实践法
维生素C是具有L系糖构型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。
维生素C（抗坏血酸）具有很强的还原性，能将染料2，6一
氧化型2，6一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸未全部氧化前，则滴下染料立即被还原成无色，一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时为滴定终点，即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全，从滴定时2，6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。
成都医学院教案首页
2012-2013年第2学期2010级预防医学本科专业任课教师：杨威特
课程
卫生学检测技术
题目
2，6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
学时
讲授
实验
5
练习
行课时间
2013年6月7日第1至5节
课次
第8次
教材
自编教材
教 具
电子课件
教学
目的
要求
掌握：定量测定维生素C的原理和方法
熟悉：微量滴定法的基本操作技术
实 施
情 况
小 结
教研室主任签名：2013年月日
成都医学院教案续页
教学过程、内容及时间分配
教学方法与手段
2，6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
一、目的
1．学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。
2．掌握微量滴定法的基本操作技术。
二、原理
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。
2.滴定所用染料要在1~4ml之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。
3.抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2%草酸可抑制该酶，1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe2+能还原二氯酚靛酚，如用醋酸（8%即可）则Fe2+不会很快与染料起作用。
4.样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。
（二）滴定
1、标定2，6一二氯酚靛酚溶液的浓度：
量取标准维生素C溶液1ml,加9ml 1%草酸加入50ml锥形瓶中，同时量取10ml草酸加入另一个50ml锥形瓶中作空白对照，用已标定的2，6一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6一二氯酚靛酚所能氧化维生素C的毫克数（K）。
教学重点
难点及其
解决方案
重点：定量测定维生素C的原理和方法
难点：滴定终点的判断
解决方案：通过实验让学生了解定量测定维生素C的原理和方法，并能采取过滤等方法排除影响判断滴定终点的干扰因素。
参 考
资 料
人民卫生出版社出版，梁康主编《卫生理化检验技术》
华中科技大学出版社出版，运珞珈、朱业湘主编《卫生理化检验与微生物学检验》