6-二氯酚靛酚法测定Vc
维生素C的测定(2-6-二氯酚靛酚滴定法
实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法一、测定原理2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。
抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO—C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。
2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。
还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。
在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。
根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。
在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。
反应式如下：二、实验仪器与试剂1.仪器组织捣碎机；水果刀；托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；台式离心机；电炉；吸耳球；玻璃棒；蒸馏水，蒸馏水洗瓶；记号笔、标签纸、定性滤纸；20cm镊子；5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗；漏斗架；50ml、250ml、 500ml 、1000ml烧杯；10ml 、500 ml、1000 ml量筒；100ml具塞量筒(或普通量筒)；100mL、250mL棕色容量瓶；50ml或100ml三角烧瓶。
及试剂本实验材料是，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯度。
(1)2%草酸溶液：草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。
(2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。
(3)抗坏血酸标准溶液：称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，备用。
(4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液：称取碳酸氢钠52.2mg，溶解在200mL沸水中。
实验七_维生素C的定量测定-2_6-二氯酚靛酚法
实验七_维生素C的定量测定-2_6-二氯酚靛酚法一、实验目的2. 掌握 2,6-二氯酚靛酚法的实验操作方法。
3. 提高实验操作技能，培养实验习惯。
二、实验原理2,6-二氯酚靛酚法是一种常用于测定维生素 C 的定量分析方法，其原理是利用维生素 C 对氧化剂的还原能力，在酸性条件下，与氧化剂溶液中的氧气直接发生反应，生成2,6-二氯酚靛酚，这是一种带有天蓝色色素的化合物。
其反应方程式为：C6H8O6 + 2C12H6Cl2O2 → C12H5Cl2O2（indophenol）+ 2HCl在测定中，利用紫外-可见光谱（UV-Vis）分析法，通过测量反应产物（2，6-二氯酚靛酚）的吸收光谱进行维生素 C 的浓度计算。
维生素 C 含量的测定范围为 0.1-2.0mg/mL。
三、实验操作A. 试剂和仪器1. 空白维生素 C 溶液：将 0.1 g 维生素 C 溶于 100 mL 的 0.05 M 磷酸缓冲液（pH=2.0），称取 1 mL 溶液，加入 10 mL 的 0.05 M 磷酸缓冲液当作空白维生素 C 溶液。
3. 柠檬酸铁铵溶液：称取 1 g 柠檬酸铁铵，加入 100 mL 的去离子水溶解得到 1% 的柠檬酸铁铵溶液。
4. 改良液：将5.5 g 的硫酸钾加入 100 mL 的 85% 磷酸（V/V），搅拌至溶解，加入 1 g 2,6-二氯酚靛酚，摇匀后吸入液面，加入水至 1 L。
B. 实验步骤1. 分别取 6 个试管，标号：1，2，3 为空白对比组，4，5，6 为实验组。
2. 将实验组试管中加入不同浓度的维生素 C 标准溶液（10 μg/mL，20 μg/mL，30 μg/mL），各加 2 mL，加入 2 mL 的柠檬酸铁铵溶液。
3. 将实验组试管加到热浴肢中，调节温度至37℃。
4. 在 1 分钟内，向实验组试管中加入 0.5 mL 的改良液，同时加入 1 mL 的硫酸（V/V = 4:1）。
5. 摇匀实验组试管，放置于常温下 20 分钟，直至颜色稳定。
2_6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C
实验五食品中维生素C含量测定维生素C是人类营养中最重要维生素之一，缺少它是会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。
今年来，发现它可以预防和治疗感冒，增强机体对肿瘤的抵抗力，并对化学致癌物具有阻断作用。
维生素C是己糖醛酸，属于水溶性维生素。
主要分为还原性和脱氢型两种，它广泛分布在植物的组织中，新鲜的水果、蔬菜特别是枣、辣椒、柿子叶、苹果、猕猴桃、芹菜等果蔬中含量较多，果蔬中维生素C含量受果树种类、品种、栽培条件、成熟度和贮藏条件有关。
因此，测定维生素C的含量，可以作为果蔬的营养品质和贮藏效果的评价之一。
一、目的要求1.学习并掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
2.进一步掌握滴定法的基本操作技术。
3. 了解测定蔬菜和水果中维生素C含量意义。
二、实验原理维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。
最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型2,6-二氯酚靛酚无色。
当用此染料滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
三、操作步骤1. 样液制备称取苹果和青椒各5g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，漏斗(+脱脂药棉)过滤，滤液转入25ml容量瓶后用2%草酸定容。
2. 标准液滴定准确吸取0.1mg/ml的标准抗坏血酸溶液各1.0ml，分置两个100ml锥形瓶中，加入1%草酸9.0ml，用微量滴定管以0.1%的2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。
食品中维生素C含量的测定实验
实验3 食品中维生素C含量的测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验原理维生素C又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
2，6-二氯酚靛酚的钠盐水溶液呈蓝色，在酸性溶液中呈玫瑰红色，当其被还原时就变为无色，因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。
当抗坏血酸完全被氧化后，稍多加一点染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。
二、试剂和器材偏磷酸醋酸溶液：取15g（用时研细）溶于40mL醋酸及20mL水的混合液中，然后用水稀释至500mL，过滤后储入试剂瓶中。
标准2，6-二氯酚靛酚溶液：取0.25g2，6-二氯酚靛酚溶于700mL蒸馏水中（用力搅动），加入300mL磷酸缓冲液（预先配制9.078g/L KH2PO4-11.867g/LNa2HPO4·2H2O水溶液，用时以KH2PO4：Na2HPO4·2H2O=4：6的比率将其混合，pH值为6.9-7.0），翌日过滤，滤液储于棕色瓶中，临用时，以抗坏血酸溶液标定。
标准维生素C溶液：以少量偏磷酸醋酸溶液溶解0.1g维生素C于100mL容量瓶中，再以该液稀释至刻度。
2，6-二氯酚靛酚液的标定：在3个100mL锥形瓶中，各置5mL偏磷酸醋酸液，再各加2mL标准维生素C溶液，摇匀。
用上面所制的标准2，6-二氯酚靛酚液滴定，呈玫瑰红色保持30s不褪色为止。
记下所用2，6-二氯酚靛酚溶液体积平均值，再以同样方法做一空白实验，取7mL偏磷酸醋酸液加水若干毫升（相当于以上所用的2，6-二氯酚靛酚溶液的低定量），仍用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定。
将第一次滴定的量减去空白实验的量，即为标准维生素的反应量，求出1mL 2，6-二氯酚靛酚对应于维生素C的质量（mg）。
研钵、容量瓶、剪刀、锥形瓶、微量滴定管三、实验步骤1、用自来水冲洗果蔬样品，再以蒸馏水清洗，用纱布或吸水纸吸干表面水分，然后称取25g，剪碎，在研钵中研呈浆状。
实验五、维生素C的定量测定
注意各管滴定终点均为微红色
五、结果计算
(VA VB) S 100 维生素C含量（mg/100g样品）= W
VA为滴定样品提取液所用的 2,6-二氯酚靛酚溶液的mL数 VB为滴定空白对照所用的 2,6-二氯酚靛酚溶液的mL数 S为1mL染料能氧化抗坏血酸mg数(需根据标定值计算） W为待测样品的重量。 注意测定时样品有稀释的要乘上稀释倍数
实验五—维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚法）
一、目的与任务
学习维生素C 2，6-二氯酚靛酚定量测定法的原理
和方法。
进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。
掌握果蔬类样品的处理及数据分析
了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
二、实验原理
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会
本实验在酸性条件下进行，此条件下副反应进行得很慢。
用2，6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在 抗血酸尚未完全被氧化时，滴下的2，6-二氯酚靛酚立即被 还原为无色，当抗坏血酸全被氧化时，滴下的2，6-二氯酚 靛酚溶液呈红色。所以在滴定过程中当溶液从无色转变为微 红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，为滴定的终点。
脱氢维生素C（氧化型）
二酮古乐糖酸
[O]
可以解离出两个H+ 烯二醇结构具有强还原性 还原型与氧化型可相互转化 脱氢形式不稳定易降解
草酸+苏阿糖酸
维生素C的特性
易溶于水，溶于乙醇，不溶于乙醚、苯。 容易被氧化。
酸性溶液(pH＜4)较稳定，中性以上极不稳定。 对光、热、金属离子（铁、铜）敏感。
结构
抗坏血酸分子中存在烯醇式结构
六、课后研讨
重点：结果记录和计算 总结本实验的操作要点和注意事项。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)一、目的要求:(1)学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
(2)了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
(3)熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理:维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶(抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图:当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂:1(实验材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器:(1)天平 (2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL，10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸 (5)锥形瓶(100mL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HCl)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)(2 25mg，溶于25ml 4,HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C
2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C文章来源：/目的和要求掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
原理维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。
最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型2,6-二氯酚靛酚无色。
当用此染料滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
操作步骤1. 样液制备称取苹果和青椒各5g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，漏斗(+脱脂药棉)过滤，滤液转入25ml容量瓶后用2%草酸定容。
2. 标准液滴定准确吸取0.1mg/ml的标准抗坏血酸溶液各1.0ml，分置两个100ml锥形瓶中，加入1%草酸9.0ml，用微量滴定管以0.1%的2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。
由所用染料的体积计算出T值(平均值)，即1ml染料相当于多少mg的Vc。
3. 样液滴定准确吸取已制备的样品滤液各两份，每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶内，滴定方法同前注意：1. 滴定过程宜迅速，一般不超过2min，因为样品中某些杂质亦能还原二氯酚靛酚，尽管其还原能力较弱且还原速度较Vc更慢。
2. 滴定所用染料宜控制于1~4ml，如果样品含Vc含量过高/低，可酌量增/减样液)。
3. 样品提取液应避免日光直射，否则会加速Vc氧化。
计算m=VT/m0×100式中m：100g样品中含Vc的质量(mg)V：滴定时所用去染料体积(ml)T：每毫升染料能氧化Vc质量数(mg/ml)m0：10ml样液相当于含样品之质量数(g)试剂和器材试剂1. 2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中。
维生素C的定量测定实验报告
生物化学实验报告维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的掌握2，6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法二、实验原理维生素C又称抗坏血酸。
在1928年从牛的肾上腺皮质中提出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。
因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。
三、实验器材1、松针、菜椒、大枣；2、取液器3、容量瓶100ml4、微量滴定管5ml5、电子天平6、研钵、烧杯数只7、漏斗两个四、实验试剂1、2%草酸溶液：称取草酸8.0311g，溶于400ml蒸馏水中；2、1%草酸溶液：称取草酸4.0254g，溶于400ml蒸馏水中；3、标准抗坏血酸溶液；4、1%HCl；5、0.1% 2，6-二氯酚靛酚溶液。
五、实验操作1、样品的提取松针：从南京大学教学楼前摘取的新鲜松针，用水清洗干净，吸去表面的水。
准确称取2.0004g，放在研钵中加入1%HCl溶液5ml一起研磨，研细。
放置片刻，将提取液转入100ml容量瓶中，如此反复几次加入提取液。
最后用1%HCl溶液定容，混匀，（每10ml样液中含松针0.20004g）静置10min，过滤，备用；菜椒和大枣：用水洗净，吸去表面水分。
准确称取得大枣 2.0025g、菜椒1.9963g。
分别加2%草酸10ml于研钵中，研细，转移提取液于100ml容量瓶中并用2%草酸溶液定容。
（这样，每10ml样液中含有枣0.20025g，或者菜椒1.9963g）静置10min，过滤，弃去最初几毫升滤液，备用；2、滴定标准抗坏血酸溶液：准确吸取标准抗坏血酸溶液 1.0ml加9ml 1%草酸在100ml锥形瓶中，微量滴定管以0.1%2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s 即终点；样品滴定准确称取10.0ml样品溶液，放入100ml锥形瓶中，用与标准抗坏血酸溶液滴定相同的方法滴定；六、数据记录七、数据计算由标准液滴定数据求出1ml染料相当于多少mg抗坏血酸：T = 0.1mg / 0.26ml = 0.385 mg/ml计算每100g样品中含抗坏血酸的质量公式：1000⨯=m VT m 其中：m 100g 样品中含抗坏血酸的质量；V 滴定时所用去染料的体积数；T 每毫升染料能氧化抗坏血酸质量数，0.385mg/ml ；0m 10ml 样液相当于含样品之质量数。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2, 6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C乂称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2, 6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈 红色。
抗坏血酸具有强还原性, 能使2, 6-二氯酚靛酚还原褪 色，其反应如图：当用2, 6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时， 滴下的2, 6-二氯酚靛酚被还原 成无色；当溶液中的抗坏血酸 全部被氧化成脱氢抗坏血酸 时，滴入的2, 6-一.氯酚靛酚立抗坏血酸 （蓝色） Cl o HO —CH CH 2O H CF 2.6•二氮（•红色）HO —CHO 一CIH —C脫氢抗坏血酸 还原型2,&二氨酚靛蜀（无色）即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1(实验材料：多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器：(1)天平(2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL, 10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸(5)锥形瓶(lOOmL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HC1)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黃色则不能用)(225mg,溶于25ml 4,HC1中，移入50ml容量瓶中，用蒸憎水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml中含抗坏血酸O.omg, o(3)0. 01M 2, 6,二氯酚靛酚准确称0. 25g氧化型2, 6,二氯酚靛酚、0. 21g碳酸氢钠溶于250ml热蒸镭水中，稀释至1000ml,充分振摇，装入棕色瓶内，置冰箱内过夜，临用前过滤，用标准Vc标定其浓度。
2,6-二氯酚靛酚钠法测定维生素C含量
2,6-二氯酚靛酚钠法测定维生素C含量一、实验目的维生素C是生物体内抗氧化体系成员之一。
因此，维生素C含量可作为植物抗衰老和抗逆境的重要生理指标，也可作为果品质量、选育良种的鉴别指标。
通过本实验掌握用2,6-二氯酚靛酚钠法测定植物组织维生素C含量的方法。
二、实验原理2，6-二氯酚靛酚钠是氧化性染料，可将还原态的维生素C氧化成脱氢维生素C，而染料本身从深蓝色被还原成无色的衍生物。
2，6-二氯酚靛酚钠在酸性条件下呈红色。
在滴定终点之前，滴下的2，6-二氯酚靛酚钠立即被还原成无色。
当溶液从无色转变成微红色时，即为滴定终点。
三、实验材料新鲜生菜四、设备与试剂滴定管、三角瓶、研钵、量筒、移液管1％草酸，0.1%2，6-二氯酚靛酚钠溶液五、实验步骤（一）维生素C的提取称取1.0 g新鲜样品（已称好），置研钵中，分次加20ml 1％草酸，研成匀浆（用1%的草酸定容20ml）。
通过纱布过滤后取10ml放于离心机中3000r/min离心10min,吸取上清使用。
（二）维生素C的测定吸取滤液10 ml，放入50 ml三角瓶中，立即用0.1% 2，6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至出现明显的粉红色在15 s内不消失为止。
记录所用滴定液体积（另取10ml 1%草酸作空白对照）。
（三）标准液的标定取1mg/ml抗坏血酸溶液1ml置于锥形瓶中，加9ml 1%草酸，用0.1%2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色15s不消失。
计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸（取10ml 1%草酸作空白对照）。
1.2ml 染料相当于1mg抗坏血酸（四）含量计算维生素C（mg/g样品）=（样品消耗染料体积-空白消耗染料体积）╳提取定容后的体积╳1ml染料能氧化抗坏血酸的毫克数/滴定用的样品体积╳水果质量六、注意事项1. 操作要尽可能快，并防止与铁、铜器具接触，以减少维生素C的氧化。
2. 草酸及样品的提取液避免日光直射。
实验十六-维生素C的定量测定(2-6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求:（1）学习并掌握用2，6—二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况.（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一,它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性.维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病,因而维生素C又称为抗坏血酸.水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源.不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法,都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2，6-二氯酚靛酚(DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色,在酸性溶液中呈红色.抗坏血酸具有强还原性,能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6—二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色.因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂:1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器:（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL) （4)刻度吸管(5mL，10mL) (5）锥形瓶(100mL）（6）微量滴定管(3mL) （7）漏斗（8)脱脂纱布(9）滤纸3．试剂：（1)2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg,溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制,此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，.（3)0.01M 2，6－二氯酚靛酚准确称0。
[精品]2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C
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[精品]2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C维生素C，也被称为抗坏血酸，是人体所需的一种重要营养物质，具有抗氧化、促进铁吸收等重要作用。
由于人体无法自行合成维生素C，因此需要从食物中摄取。
然而，维生素C很容易被氧化破坏，因此在分析检测过程中需要选择一种敏感、精确、简便的方法对维生素C进行定量分析。
2,6-二氯酚靛酚滴定法是一种广泛应用于维生素C分析的方法之一。
下面将介绍这种方法的原理和操作步骤。
原理：2,6-二氯酚靛酚是一种指示剂，可以在酸性条件下呈现红色，而在还原剂作用下会褪色。
维生素C是一种还原剂，可以将2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原物。
因此，在维生素C存在的条件下，将2,6-二氯酚靛酚逐滴加入已知浓度的维生素C溶液中，当维生素C 耗尽时，2,6-二氯酚靛酚不再被还原，呈现出由红色变为无色的转变。
在此过程中记录2,6-二氯酚靛酚的加入量即可计算维生素C的浓度。
操作步骤：1. 器材准备称取约100mg的2,6-二氯酚靛酚，加入100ml的95%乙醇中，摇匀即可得到表现绿色的溶液。
同时准备0.1mol/L的氢氧化钠溶液、2%的硫酸溶液，以及待测样品。
a. 将待测样品取约2g加入研钵中，加入10ml的2%的硫酸溶液，反复挥发至浓缩，使样品保持在干燥状态。
b. 加入20ml的去离子水，研钵放入热水浴中，加热溶解。
c. 实验设一个平衡水平标志线，定量转移10ml溶液到较大的滴定瓶中，加入几滴2,6-二氯酚靛酚溶液，搅拌均匀。
d. 向滴定瓶中逐滴加入氢氧化钠溶液至溶液呈深黄色，为初始色。
e. 开始滴定，滴定钠氢氧化溶液至溶液呈现红色，即为维生素C耗尽时，记录钠氢氧化溶液的滴定量。
f. 重复操作并求得平均数，计算维生素C浓度。
注意事项：1. 滴定瓶上方要留有足够的空间，以免在滴定时水溅出来。
2. 滴定时要缓慢滴加氢氧化钠溶液，以避免过量反应。
3. 滴定时要注意加入2,6-二氯酚靛酚溶液后，溶液会变为紫色，此时需要加入氢氧化钠溶液搅拌均匀使其还原为黄色，然后再开始滴定。
2,6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
V2为滴定空白所用去染料体积（ml）;
V3为样品测定时所用滤液体积（10ml）;
V为样品提取液的总体积；
K为1毫升染料能氧化维生素C的量（mg）;
W为称取样品重量(g )。
五、注意事项
1.滴定时速度要尽可能快，因样品内一般都含有一些能将2，6一二氯酚靛酚还原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较维生素C弱。
2.滴定所用染料要在1~4ml之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。
3.抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2%草酸可抑制该酶，1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe2+能还原二氯酚靛酚，如用醋酸（8%即可）则Fe2+不会很快与染料起作用。
4.样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。
2、样品的测定：
取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml，用已标定的2，6一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值。
（三）结果计算
根据实验数据计算出每100g样品的维生素C含量：
维生素C（mg/100g样品）= ×100
5.在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有维生素C的生理作用，但不能将2，6一二氯酚靛酚还原脱色。
6.在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。应加入适量白陶土乳液进行脱色过滤后再滴定。
六、实验报告
保留每次测定的有效数据，计算样品维生素C的含量并讨论分析结果的准确性，科学性。
维生素C含量测定 2,6-二氯酚靛酚法
注意事项
1.用2%草酸制备提取液,可有效地抑制抗坏血酸氧化酶,
以免抗坏血酸变为氧化型而无法滴定,而1%的草酸无此作 用 。
2.市售的2,6-二氯酚靛酚质量不一,以标定货0.4mg抗坏
血酸消耗费2ml左右的染料为宜,可根据标定结果调整染 料的浓度
3.滴定过程易迅速,一般不超过2min。样品滴定消耗燃料
份。
结果处理
维生素C mg/100g样品=﹙V1－V2﹚×V×M×100/V3×W 式中： V1为滴定样品所消耗染料的平均毫升数. V2为滴定空白对照所耗用染料的平均毫升数 V为样品提取液的总体积; V3为滴定时所取的样品提取液的毫升数; M为1ml染料所能氧化抗坏血酸的量﹙mg﹚ W为待测样品的重量﹙g﹚。
实验器材
材料 新鲜水果或蔬菜
试剂
1%草酸溶液:草酸1g溶于100ml蒸馏水中， 2%草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中，抗坏血 酸标准溶液﹙0.1mg/ml﹚用1%草酸溶液配制， 0.05%2,6-二氯酚靛酚溶液。 ﹙50ml﹚，微量滴定管﹙5ml﹚，刻度吸管﹙ml, 10ml﹚，锥形瓶﹙100ml﹚ 。
实验目的
实验原理
实验 4
维生素C含量测定 2,6-二氯酚靛酚法
实验器材
实验方法 实验结果 注意事项 思考题
实验目的
学习用2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的 原理和方法。 进一步熟悉，掌握微量滴定法的基本操
作技术 。
实验原理
维生素C具有还原性,利用它的还原性可测定其含量. 还原型维生 素 C能被2,6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型 ,染料本身被还原成无色的衍 生物,该氧化性染料在碱性环境中呈蓝色 ,在酸性环境中呈红色.因此
仪器或其他用具 天平，组织捣碎机，容量瓶
二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量维生素C，又称抗坏血酸，是人体十分重要的一种营养素。
它可以帮助身体对抵抗疾病、促进伤口愈合、预防心脑血管疾病等。
然而，人体无法自行合成维生素C，只能通过食物或药物的摄入加以补充。
为了保证身体足够的维生素C供应，需要了解食物或药物中维生素C的含量。
本文将介绍一种利用二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量的方法。
试剂和仪器试剂：二氯酚靛酚指示剂、0.05%的维生素C标准溶液、10%的三氧化二锰溶液、0.1M的草酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水。
仪器：比色皿、分液漏斗、准确的容量管、移液管、磁力搅拌器、分析天平和计时器。
实验步骤1. 准备试样溶液。
将待测食物或药物样品取约5克，用去离子水洗涤干净后切碎。
加入50毫升的去离子水，用磨研器磨碎。
将溶液转移到50毫升容量瓶中，用去离子水稀释至刻度线。
轻轻摇晃均匀。
2. 标准曲线的制备。
用0.05%的维生素C标准溶液依次取出5毫升、10毫升、15毫升、20毫升和25毫升，分别转移到50毫升容量瓶中，并用去离子水稀释至刻度线。
将5个标准溶液的吸光度分别测定，并标注吸光度-体积值。
根据数据得出标准曲线。
3. 滴定。
将50毫升的草酸溶液倒入滴定瓶中，用三氧化二锰溶液滴至草酸变为无色。
这时，加入50毫升试样液和适量的二氯酚靛酚指示剂，并用氢氧化钠溶液滴定至溶液由浅蓝色变为深蓝色。
记录所加入氢氧化钠溶液的体积。
4. 结果计算。
根据标准曲线得知滴定试剂溶液的维生素C含量。
根据所加入的氢氧化钠溶液体积，计算待测样品的维生素C含量。
例如，样品所需氢氧化钠溶液体积为10毫升，试剂溶液的浓度为0.1M，那么待测样品中维生素C的含量为50毫克/升。
注意事项1. 试剂应保持干燥，保存于阴凉、干燥的环境中。
2. 所用容器应干净，不含杂质。
3. 滴定过程中，应适度搅拌，以保证试液均匀混合。
4. 滴定时，草酸和三氧化二锰溶液应溶于去离子水中。
5. 操作时应保证安全，避免试剂接触皮肤、口腔和眼睛。
Vc测定方法
Vc测定方法（二选一预实验）2，6-二氯酚靛酚滴定法原理：维生素C又称抗坏血酸（ascorbic acid）。
在1928年，从牛的肾上腺皮质中提取出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。
因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。
1、试剂：2%草酸（20g/l草酸）：20.0g草酸，蒸馏水溶解，定容1000ml。
的100ml沸水中，2，6-二氯酚靛酚试剂：取100mg2，6-二氯酚靛酚溶解到有26mg NaHCO3摇溶，过滤，定容至1000ml棕色玻璃瓶（4℃约可保存一星期）。
标准抗坏血酸溶液（0.1mg/ml）：取10.0mg（0.0100g）抗坏血酸，用20%草酸溶液溶解，定容到100ml棕色容量瓶中（先用现配）。
标定：准确吸取标准抗坏血酸溶液10.0 ml（含1mg抗坏血酸）置100 ml锥形瓶中，以2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s钟即为终点，由所用染料的体积计算出1ml 染料相当于多少mg抗坏血酸。
重复3次，取平均值。
2、仪器：碱式滴定管（20ml）一只，容量瓶（1000ml2个、100ml棕色2个、100ml透明2个）、三角瓶、组织捣碎机、电子天平（1/w）、滤纸、纱布、铁架台、漏斗3、操作：提取：蔬菜洗净，滤纸吸干水分，称取10g，加入2%草酸100ml，在组织捣碎机中打成浆状，提10min。
四层纱布过滤至100ml三角瓶中。
取35ml左右于50ml离心管离心,4℃,1w rpm,20min，收集上清液，取10.0ml滴定。
10ml 2%草酸空白对照。
滴定：准确吸取滤液两份，每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶内，用已经标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至出现微红色，15s内不退色，记下用量。
Vc的含量测定方法
(5) 若样品滤液颜色较深， 影响滴定终点观 察， 可加入白陶土再过滤。
(6) 若样品中含有Fe2+、Cu2+、 Sn2+、亚硫 酸盐、硫代硫酸盐等还原性杂质时， 会使结 果偏高 。在提取过程中， 可加入EDTA等螯 合剂。
滴定度T (mg/mL) =
C× V
V1-V2
T： 每mL2, 6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数 C： 抗坏血酸的浓度， mg/mL V： 吸取抗坏血酸的体积， mL V1： 滴定抗坏血酸消耗染料的体积， mL V2： 滴定空白消耗染料的体积， mL
(3) 样品溶液的测定： 吸取滤液5mL于 100mL三角瓶中， 加入5mL2%草酸溶液， 用已标定的2, 6-二氯靛酚溶液滴定至出现 微红色， 且15s不褪色为止， 记录消耗染料 的体积， 平行操作三次， 取其平均 。 同时 ， 取10mL2%草酸做空白实验。
2, 6-二氯靛酚： 氧化态： 深蓝色 碱 性： 深蓝色
还原态： 无色 酸 性： 浅红色
3. 实验材料、仪器与试剂 材料： 枣 仪器： 三角瓶、研钵、移液管、漏斗、铁架
台、容量瓶， 滴定管、分析天平
试剂： 2%草酸溶液 标准抗坏血酸溶液 (0.2mg/mL) 0.02% 2, 6-二氯靛酚
4. 实验步骤 ( 1) 样品处理： 称取1g枣， 放在研钵
5. 结果计算
( V1- V2) × T× V4
抗坏血酸含量 (mg/100g) = ×100 W×V3
T： 滴定度 (mg/mL) W： 样品的质量 (g)
V1： 滴定样品消耗染料的体积 (mL) V2： 滴定空白消耗染料的体积 (mL) V3： 滴定时吸取样品溶液的体积 (mL) V4： 样品定容的体积 (mL)
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法实验十五抗坏血酸含量测定(2,6-二氯酚靛酚法)一、目的学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、原理维生素 C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素 C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。
此外维生素 C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。
维生素C的分布很广，尤其在水果(如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等)和蔬菜(觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等)中的含量更为丰富。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素 C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素 C易丢失。
此外在碱性溶液中，维生素 C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。
利用它具有的还原性质可测定其含量。
还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。
因此用 2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素 C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。
用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、仪器、试剂和材料1(仪器(1)天平(2)组织捣碎机(3)微量滴定管(5ml)(4)容量瓶(50ml)(5)刻度吸管(5ml，10ml)(6)锥形瓶(100ml)2(试剂(1)l,草酸溶液:草酸1g溶于 100ml蒸馏水中(2)2,草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中(3)抗坏血酸标准溶液(0.1 mg,ml):精确称取10mg纯抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)用1,草酸溶液溶解并定容至100ml。
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2，6-二氯酚靛酚法测定Vc 的含量
一．实验目的掌握2，6-二氯酚靛酚法测定Vc 的含量
二．实验原理
Vc具有还原性，可以还原2，6-二氯酚靛酚（由玫瑰色至无色），所以可以用2，6-二氯酚靛酚滴定样品溶液中的Vc。
抗坏血酸+2，6-二氯酚靛酚→脱氢抗坏血酸+2，6-二氯酚靛酚
（还原型）（氧化型）玫瑰色（氧化型）（还原型）无色
滴定终点：出现浅玫瑰色时，表明样品液中的维生素c全部被氧化。
计算公式：维生素c毫克数/100g 样品=（Va-Vb）*s/w*100
Va:滴定样品中提取液所用的2，6-二氯酚靛酚的平均毫克数。
Vb:滴定空白对照所用的2，6-二氯酚靛酚的平均毫克数。
S:1ml2，6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素c的毫克数。
W：10ml样品提取液中含样品的克数。
三．实验试剂与仪器：
菜花10%盐酸溶液偏磷酸-醋酸溶液2，6-二氯酚靛酚溶液
50ml容量瓶滤纸漏斗滴定管铁架台分析天平研钵
四．实验步骤：
1、30g菜花在研钵中研磨后，用滤纸过滤，滤液置50毫升容量瓶中，用偏磷酸溶液定容，至50毫升，备用。
2、量取10毫升滤液，用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至玫瑰色5s不退色为滴定终点（滴定过程不超过2分钟），记录2，6-二氯酚靛酚溶液用量。
3、空白取偏磷酸溶液10ml，滴定
4、侧S值。
取5ml标准抗坏血酸溶液加入5ml偏磷酸-醋酸溶液，然后用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成微玫瑰红色持续15s不退为终点，计算2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每毫升2，6-二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数（S）来表示。
5、计算结果。
五.数据处理:
m=30.07g; V A=2.0mL; V B=0.18mL; w=6.014g; s=0.171mg/ml
维生素C毫克数/100g样品=(2.0-0.18)*0.171*100/6.014=5.17 (mg/100g样品)
六、注意事项
●提取时，滤液过度浑浊会影响滴定终点的判断，纱布过滤时，要尽可能滤干净抽提
液，以免有残留的Vc 。
●终点时玫瑰色要持续15s.
●滴定速度要尽可能快一点，以免杂质干扰反应。
碘量法测定维生素C的含量
一、实验目的掌握碘量法测定维生素c的含量的方法。
二、实验原理
2CuSO4+4KI-------2CuI2+2K2SO4
2CuI2 ---------Cu2I2+I2
抗坏血酸(还原型)+I2→2HI+抗坏血酸（氧化型）
终点：声誉的微量碘与淀粉指示剂生成蓝色。
三、仪器与试剂
锥形瓶、滴定管、移液管
菜花提取液、淀粉指示剂溶液、0.01mol/L标准CuSO4溶液，偏磷酸溶液。
四、实验步骤：
1、取5ml菜花溶液，加10mlKI,加入2滴淀粉指示剂，用标准硫酸铜溶液进行滴定，至出现蓝色/红棕色，记录滴定量。
2、空白试验取5ml偏磷酸溶液于锥形瓶中，加入10ml 30%KI溶液，滴入数滴淀粉指示剂，摇匀。
对其进行滴定，记录滴定体积。
结果计算：
Vc mg/100g样品=V0滴定液消耗量*c*100/W
c :一毫升0.01M标准硫酸铜相当于
0.88毫克抗坏血酸，即c=0.88
数据处理:
V1=0.4mL; V2=0.1mL;
L-抗坏血酸含量(mg/份)=0.3*0.88=0.264mg/份
L-抗坏血酸含量(mg/g)=0.264*100/6.028=4.4mg/g
课后思考题
1.碘量法中，所用KI浓度为什么高达30%，相对于维生素C的浓度要高出许多？
答：高浓度的KI溶液可以使与CuSO4溶液反应得更彻底，反应终点判断更准确。
高浓度的KI与CuSO4反应，生成CuI2；CuI2再因不稳定分解为Cu2I2和I2；I2遇淀粉变蓝，反应更彻底也会使这一现象更明显。
同时也可提高反应的速率。
2、根据实验结果，你判断这两个方法中那一个精确度更高？原因如何？
答：用2，6-二氯酚靛酚测定比较精确，如试验数据可知，测定等体积、等浓度菜花提取液10mL中的Vc 含量。
用二氯酚靛酚法测定，需滴二氯酚靛酚2.3mL. 用碘化法测定则需滴硫酸铜溶液0.3mL，若待测样品Vc的浓度减少五倍，则需滴加二氯酚靛酚0.46mL，而滴加硫酸铜溶液0.015mL,而滴管每滴约0.1mL，半滴约0.05mL,因此Vc浓度减少五倍后，用碘化法测误差较大，或根本无法测定，而用二氯酚靛酚法误差较小，由此可知，二氯酚靛酚法可测定低浓度的Vc含量，精确度比碘化法高。
06级生物科学2班
小组成员: 刘录蝉40608066
张园40608092
郑玉琼40608069
何娟40608094。