试剂盒测试方法

血浆醛固酮放免试剂盒操作说明

样品采集：大鼠眼球取血，用肝素钠抗凝。3000转离心10min，取上清。送到郑大二附院测

定。

测定方法：将圆底聚苯乙烯试管编号（按复管操作），按下列流程操作。分别在NSB管、S0-S6标准管、样品管中加入125I-ALD、ANS 各100µl。向样品管内加入待测样品100µl。向S0-S6标准管加入标准品100µl。向NSB管内加入蒸馏水200µl。向S0-S6标准管加入ALD抗血清100µl，向样品管内分别加入ALD抗血清100µl。混匀后，4℃放置15小时。再次分别在NSB管、S0-S6标准管、样品管中加入分离试剂1000µl。充分混匀，室温放置15分钟。离心前任取两管测量，作为总放射性T。3500rpm(离心力1500g)离心15分钟，立即吸去上清液，测各管1分钟的放射性计数（cpm）。

结果计算：

以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测物结合百分率，在半对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。

碘[125I] 内皮素放射免疫分析药盒

样品收集：大鼠眼球取血，注入加有抑肽酶的肝素钠抗凝管中。4°C 3000转离心10min，取上清。送到郑大二附院待测。

测定方法

本实验采用非平衡法，取聚苯乙烯试管编号分别为T 、NSB、S0、 S 1– S5、样品、U0管。向NSB管内加入缓冲液200μl；向S0、U0管内加入缓冲液100μl；向S 1– S5、U0管内加入标准液100μl；样品管加入待测样品100μl；向S0、S 1–S5、样品管加入抗血清100μl。充分混匀，4℃放置 24h。各管分别加入125I – ET 100μl。充分混匀，4℃放置 24h。各管分别加入分离剂500μl （T管不加分离剂）。混匀，室温放置15min，4℃3500rpm 离心 20min，吸弃上清，测各管沉淀cpm数。

结果计算

1、以B/T计算NSB、S0结合百分率，以B/BO计算标准及待测样品结合百分率，在半对

数坐标纸上绘制标准曲线，并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序，直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。

NSB％＝（NSB管的cpm数÷T管的cpm数）×100％

Bo％＝（Bo管的cpm数－NSB管的cpm数）÷T管的cpm数×100％

B／Bo％＝（标准或样品管的cpm数－NSB管的cpm数）÷（Bo管的cpm数－NSB管的cpm数）×100％

碘[125I]心钠素放射免疫分析药盒

样品采集：大鼠眼球取血，注入加有抑肽酶的肝素钠抗凝管中。4°C 3000转离心10min，取上清。送到郑大二附院待测。

测定方法：本实验采用非平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按以下流程操作。分别向NSB管内加入缓冲液200µl向S0管内加入缓冲液100µl。向S1-S5管内加入标准品100µl。向U管内加入样品100µl。分别向S0管、S1-S5管、U管内加入抗血清100µl。摇匀后4℃放置24小时。再分别向T管、NSB管、S0管、S1-S5管、U管内加入125I-ANP剂100µl。摇匀后4℃

放置24小时。再分别向T管、NSB管、S0管、S1-S5管、U管内加入PR试剂500µl。充分混匀，室温放置20分钟，4℃3500rpm离心20分钟，吸弃上清液，在γ计数器上测定沉淀cpm 数。

结果计算

1、以B/T计算NSB、S0结合百分率，以B/BO计算标准及待测样品结合百分率，在半对数坐标纸上

绘制标准曲线，并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序，直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。

NSB％＝（NSB管的cpm数÷T管的cpm数）×100％

Bo％＝（Bo管的cpm数－NSB管的cpm数）÷T管的cpm数×100％

B／Bo％＝（标准或样品管的cpm数－NSB管的cpm数）÷（Bo管的cpm数－NSB管的cpm数）×100％

2、组织样品得出样品浓度后，再根据称取组织量，计算出每mg组织中的量。尿液样品从每ml浓度

再计算出每小时或每分钟排出量。

碘[125I]血浆肾素活性（PRA）放射免疫分析药盒

样品采集：大鼠眼球取血，迅速注入放在冰水浴冷却的酶抑制剂抗凝管中，摇匀，即刻再放回冰水中冷却，待离心时取出。1000转（4度）离心5分钟，分离血浆。血浆放入低温冰箱保存（—20℃以下）。送到郑大二附院待测。

酶抑制剂的配置：取0.34M8—羟基喹啉（硫酸）3ml，、0.32M二巯基丙醇1.5ml，0.30MEDTA-Na23ml 混匀即为酶抑制剂。

测定方法

本实验采用平衡法，取聚苯乙烯试管编号分别为NSB管、S0~S末管、对照管、测定管。向各管内加入10µl的调节剂，向对照管、测定管内分别加入100µl的标本。NSB管、S0~S末管、对照管4度放置1小时，测定管37度放置1小时。向NSB管加入零标准200µl，向S0~S末管加入标准品100µl。向NSB 管、S0~S末管、对照管、测定管内加入100µl125I-AI。向S0~S末管、对照管、测定管内加入抗血清100µl。混匀，4度放置过夜，任取三管测总T。各管加分离剂1000µl。混匀,室温放置15分钟,离心(3500转/分)15分钟,吸上清液,测定各管沉淀的放射性计数(cpm)。

结果计算

以B/T计算NSB、S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测样品结合百分率，在半对数坐标纸上绘制标准曲线，并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序，直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。NSB％＝（NSB管的cpm数÷T管的cpm数）×100％

Bo％＝（Bo管的cpm数－NSB管的cpm数）÷T管的cpm数×100％

B／Bo％＝（标准或样品管的cpm数－NSB管的cpm数）÷（Bo管的cpm数－NSB管的cpm数）×100％未知样品测定管、对照管浓度可根据Bi/Bo的百分结合率从标准曲线上查出。血浆肾素活性（PRA）=测定管AI浓度—对照管AI浓度。如样本血浆AI浓度大于6.0ng/ml时，请用缓冲液稀释。

碘[125I]血管紧张素II放射免疫分析药盒

测定方法

本实验采用平衡法，取聚苯乙烯试管编号，分别为NSB管、S O、标准管、样品管。向NSB管内加入零标准300μl，向S O、标准管加入200μl的标准品，向样品管内加入血浆样品200μl，向各管分别加入125I- AII 100μl，向S O、标准管、样品管加入100μl抗血清，混匀，4度放置过夜，测总T。向各管分别加入分离剂1000μl。、混匀,室温放置15分钟,离心(3500转/分)15分钟,吸上清液,测定各管沉淀的放射性计数(cpm)。

结果计算: 以B/T计算NSB、S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测样品结合百分率，在半对数坐标纸上绘制标准曲线，并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序，直接给出