安捷伦1200液相色谱操作规程

1 目的：建立一个安捷伦1200高效液相色谱仪标准操作程序。

2 范围：本规程适用于安捷伦1200高效液相色谱仪的操作。

3 责任：相关操作人员。

4 程序：

4.1 原则与定义

4.1.1高效液相色谱法是将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液为流动相，用高压泵将流动相压入装有填充剂的色谱柱，注入供试品，经流动相带入柱内，在填充剂上分离后，各组分先后进入检测器，用记录仪记录色谱图，各供试品谱图与标准或对照品谱图比对，经一定的数据处理进行化合物的定性和定量分析。

4.1.2 除另有规定者外，都应按现行版《中国药典》附录（高效液相色谱法）的要求测定。

4.2 仪器及用具

4.2.1 安捷伦1200高效液相色谱仪系统

4.2.2 DAD紫外检测器

4.2.3 色谱柱

4.2.4 色谱工作站

4.2.5 溶剂过滤系统

4.2.6 样品过滤系统

4.2.7 其他用具和试剂应符合现行版《中国药典》规定或仪器说明书上指明的要求。

4.3 准备工作

4.3.1流动相临用前过滤并脱气。

4.3.2供试品溶液和标准品(或对照品)溶液应按药品标准中有关规定配制过滤。

4.4 操作方法

4.4.1 开机准备好流动相并安装色谱柱。依次打开仪器各部件电源开关（在线脱气机、输液泵、自动进样器、柱温箱、检测器等），约15min 后，仪器进入待机状态，此时仪器各部件指示灯应无色或呈黄色。计算机进入工作站的操作页面。色谱条件的设定,当色谱参数设置完成后，单击工作站流程图右下角的【on】，仪器开始运行。

4.4.2 样品测定

4.4.3 分析报告的打印

4.4.4 关机，分析结束后，按规定程序彻底冲洗色谱柱及所用的仪器流路。4.4.5 实验结束工作

4.4.6 全部分析工作结束后，依次关闭电脑、检测器、电源开关。

4.4.7 泵流量调到零，关闭泵电源。

4.4.8 仪器参数设定及操作方法同药典仪器操作规程安捷伦1100。

4.5.1反相高效液相色谱，如所用流动相含有缓冲溶液，实验前需要用重蒸馏水冲洗管路和色谱柱，实验结束时也要用水冲洗约半小时, 然后再用甲醇平衡柱子约30min后关闭仪器，以保护柱子。

4.5.2反相键合柱一般需充满甲醇保存，硅胶柱一般充满正已烷保存。

4.5.3如果从正相转到反相条件或从反相转到正相条件，通常采用异丙醇为过渡溶剂，然后再按照所需的实验条件，平衡柱子。

4.5.4输液泵压力不稳时，打开排液阀，用针筒抽取流动相, 排除可能存在的气泡，若不能解决问题，应停泵拆开色谱柱与泵、与检测器的连接，分段赶气泡。

4.5.5一般不要在高于3000PSI柱压条件下操作，当柱压异常升高时要考虑(1) 柱前管道有无阻塞，可拆除色谱柱，增大输液泵流量进行冲洗；(2)色谱柱本身内阻增加，一般排除较难，可试行采用不同流动相洗柱以减小内阻。

4.5.6试液一般需经0.45μm滤漠过滤，试液浓度不能太大，以免引起色谱柱负荷过载和污染进样阀。实验结束再用相应溶剂冲洗进样阀管路。

4.5.7单一色谱峰发生分裂，肩峰等不正常情况时，首先考虑色谱柱有否损坏, 若有柱头塌陷，可进行局部填补，柱体内部损坏则无法改善，应予更换。

编制：潘渭樵

审核：戴其昌

批准：蒋国强