安捷伦液相基本操作课件
安捷伦高效液相色谱1200反冲针座
反冲针座方法:
1．将pump流量设定为1mL/min(或其他数值)。
打开purge valve。
2．切换到Diagnosis界面。
3．打开ALS的门，将连接到六通阀的5，6号的毛细管拆下(5号，针座到六通阀；6号，六通阀到柱温箱)。
4．将针座毛细管（原来连接到5号的）接到6号口，拧紧。
5．盖好ALS的门（重要，否则下一步change needle的工程无法操作）
6．从Diagnosis界面Maintenance菜单，选择ALS > Maintenance Positions，然后在弹出的窗口点击Change Needle功能下的Start。
（ALS的门必须关号，否则点击Start不会有反应的）。
见下图：
7．这样，针就会自动提起，离开针座一段距离。
8．这时，最好在ALS的leak sensor位置放一些吸水纸，防止一会儿从针座流出的液体引起ALS报Leak的错误。
9．准备好之后，关闭purge valve，看是否会有液体从针座流出/喷出。
如果可以流出，冲洗一会。
然后打开purge valve。
点击Change needle功能的End键。
关闭这个窗口。
将5，6口接回相应的毛细管。
问题应该已经解决。
安捷伦1260型HPLC使用操作
安捷伦1260型HPLC使用操作1.准备工作-打开高效液相色谱仪电源，并确保与计算机的连接稳定。
-打开色谱柱箱的前盖，并检查柱箱是否安装了所需的柱。
-检查并确认进样器和检测器的所有连接口均已连接到系统中。
-打开色谱仪控制软件，并确保与色谱仪的连接正常。
2.样品准备和进样-准备样品溶液，并使用过滤器将其过滤以去除悬浮物。
-选择适当的进样方式，可以是自动进样器、手动进样或在线进样。
-根据进样方式的不同，设置进样器参数，并将样品注入进样器。
-设置进样体积和进样流速。
3.设定色谱柱和流动相条件-选择合适的色谱柱，根据分析需要选择固定相材料和尺寸。
-设置所需的流动相条件，包括流动相组成、流速和梯度程序等。
-确保流动相的pH值适合分离物质的性质。
4.开始运行HPLC实验-在色谱仪软件中设置分析方法，包括运行时间、梯度程序和检测波长等参数。
-点击运行按钮，开始HPLC分析实验。
-监控进样、分离和检测过程，并保持对系统的稳定控制。
5.数据分析和结果解读-实时监测实验过程中的色谱图和峰形。
-根据标准品或已知样品进行定量分析，并计算所需的峰面积和浓度。
-使用色谱仪软件进行数据分析，并生成报告和结果图表。
-解读分析结果，如峰形和保留时间，确定分离物质的纯度和结构。
6.实验后处理-关闭色谱仪电源。
-清洗色谱柱和进样器，以及其他与样品接触的部件。
-将废液正确处理，并清理实验台面。
-存储和整理实验数据和结果文件，以备后续分析和参考之用。
以上是安捷伦1260型HPLC使用操作的基本步骤，根据具体的实验需求和样品特性，可能需要进行一些调整和优化。
熟悉和掌握这些操作步骤，可以提高实验的效率和结果的准确性。
安捷伦1260型HPLC使用操作
安捷伦1260型HPLC使用操作安捷伦1260型高效液相色谱仪（HPLC）是一种目前广泛应用于科研实验室和分析化验室的仪器，用于分离、鉴定和定量化学物质，尤其在药物研究、食品安全和环境监测等领域有着重要的应用价值。
下面将介绍如何使用安捷伦1260型HPLC进行操作。
1.准备工作-确保HPLC仪器和相关附件的电源已正常连接，并打开电源开关。
-检查溶剂瓶中的溶剂是否充足，并确保应用的溶剂完全溶解。
-测量并记录样品的重量或体积，并准备相应的样品溶液。
-在毛细管芯上安装合适的毛细管，确保毛细管没有损坏。
2.打开安捷伦1260型HPLC软件-打开计算机并登录HPLC软件。
-确保计算机与HPLC仪器连接正常，并与仪器建立通信。
-在软件界面上选择打开一个新的分析方法。
3.设置分析方法-在打开的分析方法中，设置适当的柱温、流速、柱压和波长等参数。
-根据样品的性质，选择合适的检测波长，以获得最佳的检测结果。
-设定进样器的进样体积和方法运行时间等参数，以获得期望的分析效果。
4.进样样品-使用自动进样器或手动进样器将待测样品进入HPLC系统中。
-设置进样器的洗涤方法，以确保不同样品的交叉污染风险降至最低。
-如果使用了自动进样器，将样品盘或样品架连接到进样器上，并设置自动进样的参数。
5.启动HPLC分析-在软件界面上，点击启动按钮，开始运行分析方法。
-监控仪器运行情况，确保流速、柱压等参数稳定在设定范围内。
-观察检测结果的峰形和峰高，并记录峰面积或峰高数据以便后续分析。
6.数据处理与结果分析-使用HPLC软件进行数据处理，可以进行峰识别、峰面积计算和浓度计算等操作。
-将结果数据导出并进行统计分析，如绘制色谱图、拟合曲线和计算浓度等。
-分析结果的可靠性和准确性需要通过质控样品或标准品进行验证。
7.仪器维护和清洁-定期对HPLC仪器进行维护，包括更换毛细管、清洗进样器和柱子，并检查其他配件的磨损情况。
-使用合适的溶剂进行清洗，以去除可能留在系统中的残留物。
安捷伦液相操作方法
安捷伦液相操作方法
安捷伦官网提供以下常见操作方法供参考：
1. 样品制备
（1）将样品溶解在有机溶剂中，使样品完全溶解。
（2）将溶液过滤，去除悬浮固体和大分子。
（3）根据需要用纯化柱、弱离子、强离子或其他柱纯化样品。
2. 样品装载
（1）通过注射器或进样器将样品送入流动相中。
（2）流动相的选择根据柱类型和样品特性而定。
（3）保持流速低于柱的最大运行压力。
3. 补偿溶液
（1）根据实验需要选择适当的补偿溶液。
（2）将补偿溶液通过补偿管加入到进样器中，与样品混合。
（3）注意不要过度稀释样品。
4. 柱温度
（1）根据柱的材料和分离条件选择合适的柱温。
（2）柱温过高可能会导致溶剂气化和柱效率下降。
5. 流速
（1）根据柱的尺寸和材料选择适当的流速。
（2）保持流速低于柱的最大运行压力。
6. 检测器设置
（1）根据样品的特性选择合适的检测器。
（2）检测器设置包括波长选择、灵敏度、峰宽等参数。
7. 数据处理
（1）数据处理包括样品峰面积、峰高、保留时间、分辨率等参数的测定。
（2）根据结果进行数据分析和报告撰写。
安捷伦高效液相色谱仪操作说明
安捷伦高效液相色谱仪把持说明之马矢奏春创作一、校枪及样品处置1. 校枪仪器：两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL步伐：翻开分析天平预热, 一只烧杯放到称量盘上调零, 一只装入纯水.将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL, 分别吸取纯水称质量, 如偏年夜或偏小, 调节移液枪直至准确到0.001g.（如枪使用过久或气密性欠好, 可以准备一个小烧杯装入纯水,每次先轻轻沾湿枪口, 甩失落水或在用卫生纸吸取口上的水, 再插上枪头使用.）注意慢吸慢放, 不要挂珠.2. 样品处置：用1.5mL离心管取0.5mL发酵液, 取出样品后, 首现在离心机上离心（13000rap/min 3min）.然后将样品稀释20倍, 取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中.混匀后在离心机上离心（13000rap/min 3min）.准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管）, 取200μL待测液盖紧盖子.按顺序放到自动进样盘中.二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、泵：四元、进样器：自动进样器（六通阀）、柱温箱、检测器：示差折光检测器开关翻开.翻开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server法式, 翻开色谱仪各组件电源, 待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后, 双击Instrument 1 Online , 图标翻开工作站.化学工作站自动与1200LC通讯.流动相:将流动相（一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相）放入溶剂瓶中, 翻开冲刷阀, 设流速为2ml/min, 单击确定 , 再依次单击泵→控制, 选中启动, 单击确定, 则系统开始冲刷, 至管路无气泡为止, 切换管路反复把持至所需管路均无气泡.在“控制”选项中选“关闭”, 关闭泵, 关闭冲刷阀.单击泵下面瓶图标, 输入溶剂的实际体积和瓶体积.每次四元泵开始前, 要翻开冲刷阀阀门以5ml/min的流速冲刷10分钟, 使脱气机与泵之间的流动相从冲刷阀流出, 以免隔夜的流动相损伤色谱柱.每次进样检测前, 要用流动相冲刷色谱柱30分钟, 到达柱温前20min流速设为0.2ml/min, 达柱温后再改为0.6ml/min.待1—1.5h检测器的基线稳定方可进行进样检测；检测结束后, 色谱柱要先用水冲刷20分钟, 然后用甲醇或乙腈冲刷至少20分钟,以延长色谱柱的使用寿命.绝对禁止偏酸、偏碱的流动相以及缓冲液在色谱柱中过夜.三、编纂分析方法新方法建立：法式菜单显示绿色, 即可进行参数设置及把持泵参数设定：设定流速、比例、运行时间、平衡时间、泵辅助设定（梯度）等.点击确定进入下一画面自动进样器参数设定：设定进样量（5μL）、抽取位置（调节针高度 3.0mm）、进样方式等.“序列”→序列参数→子目录（日期：年月日时间）“序列表”：拔出/批量输入向导→“追加”、“拔出”→“样品位置”、“开始位置”、“增量”、“拔出行数”标准进样：只能输入进样体积, 此方式无洗针功能.洗针进样：可以输入进样体积和洗瓶位置此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针.柱温箱参数设定：测按时75℃, 反冲时80℃.（在”温度”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”更多>>”键,选中“与左侧相同”使柱温箱的温度左右一致, 点击“确定”进入下一界面.检测器参数设定－示差参比池冲刷：10min（校零）.不需要每次都冲刷.温度设置50℃（不要设很高, 与检测器温度相立即可）选中点击确定进入下一画面方法保管单击方法另存为输入一—方法名, 如test 单击确认选择已有方法：点击【Method】, 点击【Load method】选项, 选取已存的各种把持方法.四、样品分析与收集数据将样品放于样品盘中相应位置, 所有的样品均需廓清.“序列”→“序列参数”：依照自动进样盘上的样品瓶的顺序编写参数（样品瓶位置、名称、方法）.待仪器显示Ready, 基线平稳, 从【Run control】菜单中选择【Run Method】, 开始进样分析.或点击“开始”开始进样分析.数据处置：单击【View】菜单, 单击【Data analysis】选项, 进行数据分析.单击【View】菜单, 单击【Method and Run control】选项, 回到样品分析界面.数据分析方法编纂从File 菜单选择Load signal 选中您的数据文件名, 单击Ok积分：从“积分”中选择“积分”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“积分事件”选项选择合适的斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高从积分菜单中选择积分选项则数据被积分如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止单击左边图标将积分参数存入方法五、标准曲线的绘制1.称取葡萄糖、果糖、蔗糖(恒重）各1g准确到, 稀释到1000mL容量瓶中.2.将标准溶液摇匀, 用离心管取糖标液, 准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管）, 取200μL待测液盖紧盖子.3.设置：将样品放于样品盘中相应位置, 所有的样品均需廓清.“序列”→“序列参数”：依照自动进样盘上的样品瓶的顺序编写参数（样品瓶位置、名称、方法、进样量:相应成梯度的量）.用浓度和峰面积回归, 就获得了标准曲线7、关机冲刷系统：反相柱用10％的甲醇水冲刷系统30分钟, 再用100％甲醇冲刷系统20分钟, 然后关泵, 正相柱先用合适溶剂冲刷, 后用柱保管液冲刷.退收工作站, 关闭计算机.关闭10％异丙醇溶液控制阀.关闭仪器各组件关失落电源开关8、注意事项⑴、色谱柱使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书, 注意适用范围, 如pH值范围、流动相类型等；必需使用呵护柱；色谱柱长时间不用时, 柱内应布满溶剂, 两端封死保管.⑵、流动相使用前必需过滤, 不要使用多日寄存的蒸馏水（易长菌）.⑶、仪器运行时, 泵头必需用10%异丙醇水溶液虹吸冲刷, 不能干涸.⑷、注意各流动相所剩溶液的容积设定, 若设定的容积低于最低限会自动停泵.⑸、对手动进样器当使用缓冲溶液时要用水冲刷进样口同时挪动转移进样阀数次每次数毫升⑹、若使用含盐流动相, 开机时必需先用10%甲醇水溶液冲刷20分钟以上再换上含盐流动相.⑺、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎, 在更换流动相时注意呵护, 当发现过滤头变脏或长菌时, 不成用超声洗涤, 可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤.⑻、检测器的灯有使用寿命限制, 一般在正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯, 分析结束, 立即关灯.⑼、使用双泵时, A、B、C、D四相中, 若所用流动相中有含盐流动相, 则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相, B、C （进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相.9、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的梗塞及其处置请严格执行溶剂过滤请勿使用多日寄存的蒸馏水及磷酸盐缓冲液如果应用许可可在溶剂中加入0.0001---0.001M的叠氮化钠.在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气,以隔绝空气防止使溶剂瓶流露在直射阳光下尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液梗塞后的处置法方法：将过滤头从组件中取下在35%硝酸液中浸泡1h, 然后用二次蒸馏水冲刷干净.不能超生清洗.10、泵的维护⑴、流动相使用前必需脱气过滤⑵、使用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项⑶、关机前反相色谱柱用10%的甲醇水冲刷系统20分钟, 然后用有机溶剂冲刷系统10分钟, 然后关泵.正相色谱柱用适当的溶剂冲刷.⑷、及时更换Purge Valve内的过滤芯, 当翻开Purge Valve时压力高于10bar 标明过滤芯已堵⑸、使用合适的密封圈：标准密封圈能适合于年夜大都应用.但使用正相溶剂最好使用聚四氟乙烯密封圈, 泵的压力限制最年夜压力设为200bar.⑹、使用梯度比例时的注意事项：当盐溶液与有机溶剂溶液混合时盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶而不会呈现沉淀.由于在比例阀的混合点重力作用使盐颗粒沉淀下来通常阀A接水相/盐溶液D接有机溶剂此法连接可有效使盐回落到盐溶液中并被溶解若倒置过来盐可能落在有机溶剂中呈现问题当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时推荐将缓冲盐通道接在A通道上有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上按期用水冲刷所有的通道以除去阀口上可能呈现的盐沉淀11、自动进样器使用注意使用自动洗针功能自动洗针功能可以把法式设置为“带有洗针的进样”,或将自动洗针功能包含在进样器法式中.当使用自动洗针功能时, 进样针在。
安捷伦液相使用方法
高效液相色谱仪的使用方法2008-05-11 20:24仪器名称：高效液相色谱仪仪器型号：Agilent 1100生产厂家：Agilent使用方法：(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。
2、打开1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。
8 、设Flow：5ml/min，单击OK。
9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purge valve。
11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。
12、单击泵下面的瓶图标，如图所示（以二元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积。
单击Ok。
（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项，如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。
安捷伦液相1100操作
•参比峰谱带宽度要大于或等于样品谱带宽度。
注意：增加样品谱带宽度，会降低样品的吸收强度，但会降低噪音。
选择合适的参比吸收波长可以减小梯度洗脱过程中的基线漂移。
Peak Supression（峰抑制）:
DAD检测器一个非常有趣的功能是进行峰抑制。例如有两个样品没有分开，共同洗 脱出来，可以设置某一个样品的等吸收波长为参比波长，则被设为参比峰的样品被 抑制，而另一个样品峰被分离。不过，此样品峰的吸收强度要损失10％～30％。
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VWD检测器参数设置
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运行时间表(Run Time Checklist)
选择在方法中要执行的项目 可以选择保存GLP数据 可以将方法和数据保存在一起
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方法信息 (Method Information)
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泵的操作参数
包括：流量(Flow)，流动相组成(Solvents)，停止采集时间(Stop Time)，后运 行时间(Post Time)，梯度编程(Timetable)，压力限制设定(Pressure Limits)等
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DAD检测器参数设置
可以选择存储 5 个信号 信号波长范围 191 - 949 nm 可变狭缝： 1, 2, 4, 8, 16 nm 可以时间编程
可以保存数张或所有光谱
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安捷伦液相色谱仪日常和维护和故障诊疗培训课件
工作原理
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Agilent 1100/1200 在线脱气机日常维护,故障诊断
何时需要使用Agilent 1100/1200在线脱气机
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使用灭过菌的溶剂瓶来减缓藻类生长。 使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或盐缓冲液 建议不超过 两天。 如果应用许可，在溶剂中加人0.0001－0.001 M的叠氮化钠。 避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。 用氩气或氦气置换流动相上层的空气。
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Agilent 1100/1200 在线脱气机日常维护,故障诊断
Question?
1.如何简单判断脱气机脱气是否正常？ 打开Purge阀，设定泵的流速2ml/min，提起当前所使用溶剂瓶内的溶剂 过滤头，使之脱离液面一小段时间，此时溶剂传送管内会产生一小段气 泡，放下过滤头，让此段气泡通过脱气机，如果脱气机正常，气泡应消 失或缩小。 2.如何简单判断脱气机腔体或溶剂过滤头是否堵塞？ 关闭泵，拧开脱气机出口或比例阀入口管线,此时溶剂会因为重力流出， 脱气机或溶剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。
1100/1200 HPLC 日常维护 & 故障诊断
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Agilent 1100/1200 在线脱气机日常维护,故障诊断