安捷伦液相基本操作课件

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色谱峰 数据
数据分析
调节积分参数
数据分析
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三.常见色谱故障
常见色谱故障----基线噪音
可能原因:a、检测池脏 b、检测池灯能量下降 c、由泵引起的脉冲 d、检测器上的温度效应 e、检测其中有气泡通过
常见色谱故障----基线漂移
可能原因:a、梯度洗脱所用溶剂有吸收 b、流动相脏 c、色谱柱没有用流动相平衡 d、系统中污染物溢出 e、实验温度不稳定
常见色谱故障----拖尾峰
可能原因： a、柱效降低或有柱塌陷 b、进样体积过大 c、柱外扩散效应 d、碱性基质与硅羟基作用 e、重金属反应
常见色谱故障----前伸峰
可能原因： a、色谱柱过载 b、进样体积过大 c、大峰之前有未彻底分离 的小峰
常见色谱故障----负峰
可能原因： a、样品吸收比流动相吸收小 b、溶解样品的溶剂通过色谱柱平衡被破坏 c、示差检测器中最常见，溶质的折光指数小 于溶剂的折光指数。
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2. HPLC的特点和优点 ①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，
为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速
度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚 至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。 ③高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳 分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多 倍。
常见色谱故障----压力过高
可能原因： a、色谱柱进样口过滤芯被污染 b、冲洗阀过滤芯被污染 c、色谱柱被污染 d、连接管路的毛细管堵塞 e、进样器转子上凹槽被堵塞 f、进样针或针座被阻塞
常见色谱故障----压力过低
可能原因： a、溶剂进样口过滤芯堵塞 b、连接管路泄漏 c、溶剂或流速改变 d、主动阀失灵、四元比例阀失灵或单向阀失灵 e、色谱柱失效（固Biblioteka Baidu相流失）
④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。 ⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液 相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性 差化合物的分离分析，显示出优势。
二.Agilent液相色谱仪基本操作
二元泵
流动 相瓶
自动进样器 排气阀
电 源 开 关 检测器
柱温箱
常见色谱故障----鬼峰
常见原因是流动相脏，尤其是水相。要求使用 超纯水，最多两天就换
常见色谱故障----双峰
可能原因：a、柱头塌陷或柱床运动 b、柱前滤芯堵塞 c、组分共流出 d、样品量过大 f、进样器的进样流路存在分叉流路
常见色谱故障----峰扩展
可能原因：a、柱效降低或有柱塌陷 b、进样体积过大 c、流动相粘度大
安捷伦液相的基本操作
目录
一.色谱基础知识
二.Agilent液相色谱仪基本操作
三.常见色谱故障
一.色谱基础知识
1.色谱法的分离原理 溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定
相时，由于与固定相 (stationary phase) 发生作用
（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强 弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定 相中流出。