人参皂苷Re的提取分离与鉴定
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人参皂苷Re的提取分离与鉴定
天然药物化学教研室
1
要求提取分离人参皂苷Re；
一、实验目的
2
掌握大孔树脂法提取人参皂苷的操作程序；
3
学习薄层层析在皂苷检识中的应用。
二、实验原理
果汁中含脂溶性杂质，用乙醚脱脂后，利于水溶 性皂苷在树脂上的吸附，籍此提取皂苷，且利用Re 溶于热乙醇，在冷乙醇溶解度小的特点析出 Re，与 其它成分分离。Biblioteka 四、鉴定1．泡沫实验
2．显色反应
3．薄层层析
取果汁1~2ml于试 管内，激烈振摇， 如产生多量蜂窝状 泡沫，放置10分钟 以上，泡沫不明显 减少，示有皂苷成 分。
LiebermannBurchard反应： 取果汁1ml，加等 量乙酸酐，滴加1 滴浓硫酸,变成紫红 色。
1)展开剂：1°氯仿：甲醇：乙酸 乙酯：水（2：2：4：1，下层） 2°氯仿：甲醇：水（65：35： 10，下层） 2)显色剂：5%硫酸乙醇溶液 （110℃以上加热5分钟）显红色、 紫红色斑点 。
2．人参皂苷Re的制备
取4/5量的乙醇提取物
少量展开剂2°溶解； 上样于硅胶H（40g）柱 展开剂1洗脱，每30ml为一流份收集
Fr3 ……
Fr1
Fr2
Fr13
TLC检测，合并Re单一斑点的流份 回收洗脱液至小体积（约20—30ml） 放置、析晶 Re粗晶B 95%乙醇重结晶 Re纯品C
注：①树脂柱用前需经无水乙醇处理； ②可用α—萘酚糖反应检测，实际中可目测，至 水洗液颜色变浅至清即可； ③洗脱时，自紫色带即将流出时，开始收集洗脱 液。收集1200~1500ml ④需半周时间； ⑤可用回流装置中脱色半小时。
五、思考题
1
1. 层析结果如何？ 若想进一步得到 Re纯品应怎样程 序处理？
2
2. 根据皂苷性质、 自行设计一种自人 参根中提取总苷及 皂苷单体分离的方 案。
三、实验方法
1．人参果汁总皂苷的提取
人参果肉50g
150ml水温浸（70℃，1hr），抽滤
滤液1 果肉 100ml水温浸（70℃，30′），抽滤 滤液2 果肉
合并，通过大孔吸附树脂D4020柱① ； 水洗至无糖反应② ； 90%乙醇（800~1000ml）洗脱③ 。 乙醇洗脱液
回收乙醇
乙醇提取物（人参粗总苷A）
天然药物化学教研室
1
要求提取分离人参皂苷Re；
一、实验目的
2
掌握大孔树脂法提取人参皂苷的操作程序；
3
学习薄层层析在皂苷检识中的应用。
二、实验原理
果汁中含脂溶性杂质，用乙醚脱脂后，利于水溶 性皂苷在树脂上的吸附，籍此提取皂苷，且利用Re 溶于热乙醇，在冷乙醇溶解度小的特点析出 Re，与 其它成分分离。Biblioteka 四、鉴定1．泡沫实验
2．显色反应
3．薄层层析
取果汁1~2ml于试 管内，激烈振摇， 如产生多量蜂窝状 泡沫，放置10分钟 以上，泡沫不明显 减少，示有皂苷成 分。
LiebermannBurchard反应： 取果汁1ml，加等 量乙酸酐，滴加1 滴浓硫酸,变成紫红 色。
1)展开剂：1°氯仿：甲醇：乙酸 乙酯：水（2：2：4：1，下层） 2°氯仿：甲醇：水（65：35： 10，下层） 2)显色剂：5%硫酸乙醇溶液 （110℃以上加热5分钟）显红色、 紫红色斑点 。
2．人参皂苷Re的制备
取4/5量的乙醇提取物
少量展开剂2°溶解； 上样于硅胶H（40g）柱 展开剂1洗脱，每30ml为一流份收集
Fr3 ……
Fr1
Fr2
Fr13
TLC检测，合并Re单一斑点的流份 回收洗脱液至小体积（约20—30ml） 放置、析晶 Re粗晶B 95%乙醇重结晶 Re纯品C
注：①树脂柱用前需经无水乙醇处理； ②可用α—萘酚糖反应检测，实际中可目测，至 水洗液颜色变浅至清即可； ③洗脱时，自紫色带即将流出时，开始收集洗脱 液。收集1200~1500ml ④需半周时间； ⑤可用回流装置中脱色半小时。
五、思考题
1
1. 层析结果如何？ 若想进一步得到 Re纯品应怎样程 序处理？
2
2. 根据皂苷性质、 自行设计一种自人 参根中提取总苷及 皂苷单体分离的方 案。
三、实验方法
1．人参果汁总皂苷的提取
人参果肉50g
150ml水温浸（70℃，1hr），抽滤
滤液1 果肉 100ml水温浸（70℃，30′），抽滤 滤液2 果肉
合并，通过大孔吸附树脂D4020柱① ； 水洗至无糖反应② ； 90%乙醇（800~1000ml）洗脱③ 。 乙醇洗脱液
回收乙醇
乙醇提取物（人参粗总苷A）