银杏黄酮制备实验
银杏黄酮提取工艺流程
银杏黄酮提取工艺流程
《银杏黄酮提取工艺流程》
银杏黄酮是一种重要的天然植物提取物，具有多种药用价值，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等功效。
因此，银杏黄酮的提取工艺流程对于其药用价值的发挥至关重要。
银杏黄酮主要存在于银杏叶和种子中，而且含量较高。
因此，提取银杏黄酮的工艺流程主要分为以下几个步骤：
1. 原料准备：首先要对银杏叶或种子进行处理，如干燥、研磨等，以便提高提取效率。
2. 溶剂提取：将经过处理的银杏叶或种子与适量的溶剂（如乙醇、丙酮等）一起放入提取设备中，进行浸蚀提取。
3. 混合提取：将提取所得的浸蚀液进行混合提取，以增加提取效率。
4. 浓缩蒸发：将混合提取所得的液体进行浓缩蒸发，使溶剂蒸发掉，得到含有银杏黄酮的浓缩液。
5. 结晶沉淀：将浓缩液进行结晶沉淀，得到纯净的银杏黄酮提取物。
6. 产品干燥：最后将提取所得的银杏黄酮进行干燥处理，得到成品。
以上就是提取银杏黄酮的主要工艺流程。
通过科学、合理的工艺流程，可以提高银杏黄酮的提取效率和纯度，从而实现其药用价值的充分发挥。
同时，也需要注意在整个提取过程中，要严格控制各项工艺参数，以确保产品的质量和安全性。
正交试验优选银杏叶总黄酮提取工艺
样品的制备
含量测定
精密称取银杏叶提取250mg， 以20 mI 甲醇溶解，并定 容到 50 mI 容量瓶中，滤 过，备用。
精密吸取上述银杏叶提取 物样品5 mI，置25 mI 容 量瓶中，用甲醇并定容， 按标准曲线制备的方法测 定吸光度，计算含量
实施方法 ----正交试验设计
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 根据初步试验结果，参考有关文献并结合实际情况，选 用正交试验表安排试验，以提取溶剂乙醇的浓度、溶剂 用量（料液比）、提取时间（h）和提取次数为影响提取 物总黄酮含量的主要因素，每个因素取3 个水平，确立 因素水平表（见表l），取粉碎的银杏叶l00 g，以不同 浓度乙醇为溶剂，平行操作条件下，回流提取，合并提 取液，滤过，并测定计算总黄酮含量。
仪器与试药
• 仪器 UV -6010 紫外 -可见分光光度计（惠普上海分
析仪器厂）。
• 试药 银杏叶由广州市医药公司提供，经鉴定本品为银
杏科植物银杏 Ginkgo biIoba L. 的干燥全草；芦丁对 照品，中国药品生物制品检定所；其他试剂均为分析纯。
实施方法 ——银杏叶总黄酮的含量测定
标准曲线绘制 精密称取在 120 C减压干燥至恒重的芦丁 对照品 10. 0 mg ，加乙醇溶解，转入 50 mL 容量瓶中， 用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（ 0. 2 mg/ mL），精密吸取该液 1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0、 6. 0 mL ，分别置于 25 mL 容量瓶中，加水至 6 mL ，加 5%NaNO2 试液1. 0 mL，放置6 min，加10% Al（ NO3）3 试液 1. 0 mL，放置 6 min，加 10%NaOH试液10 mL，加 水至刻度，摇匀，放置 15 min 以相应试剂作空白，于 500 nm 处测定吸光度。以浓度（C）与吸光度（A）进行 线性回归，得回归方程为 A =0. 0043C +0. 0128 ， r = 0. 9998，（n = 6）。可见，在 1~6ug/ mI 浓度范围内 线性关系良好
银杏叶中黄酮类化合物的提取
银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺
常规提取法的溶剂一般选用水，醇水溶液，酮 水溶液。醇酮对黄酮成分提取率相近，而水的提 取率比较低，考虑到提取物的收率，提取溶剂的 成本以及操作安全陛，使用乙醇水溶液比酮水溶 液和水更合适。
恒压滴液漏斗法
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1、向恒压滴液漏斗中加入10克银杏叶粉末。 2、向烧瓶中加入200ml70%乙醇和适量沸石。 3、冷凝回流，水浴加热，进行连续萃取。 4、恒压滴液漏斗中的银杏叶粉末逐渐变白，烧瓶中的液 体变为绿色。 5、将萃取液进行减压蒸馏，得银杏浸膏粗产物，称重， 计算产率。 6、在500ml烧杯中，将银杏浸膏粗产物加250ml去离子水， 搅拌均匀。 7、再将此溶液转移至分液漏斗（大于350ml）中，分别用 60ml二氯甲烷萃取三次。合并萃取液。 8、用无水硫酸钠干燥。用旋转蒸发器蒸去二氯甲烷，蒸 馏剩余物为黄酮提取物。经干燥后称重，计算产率。
• 2-苯基色原酮分子结 构图
黄酮类化合物的六种结构式：
黄酮类化合物的理化性质
• 黄酮类化合物除少数游离外，大多与糖结合成苷。糖基多连在C8或C6 位置上，连接的糖有单糖（葡萄糖、半乳糖、鼠李糖等），双糖（槐 糖、龙胆二糖、芸香糖等）、叁糖（龙胆三糖、槐三糖等）与酰化糖 （2-乙酰葡萄糖、吗啡酰葡萄糖等） • 黄酮类化合物多为结晶性固体，少数为无定型粉末。 • 黄酮苷元一般难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚 等有机溶剂，易溶于稀碱液。黄酮类化合物的羟基糖苷化后，水溶性 相应加大，而在有机溶剂中的溶解度相应减少。黄酮苷一般易溶于水、 甲醇、乙醇、乙酸乙酯、吡啶等溶剂，难溶于乙醚、三氯甲烷、苯等 有机溶剂。黄酮类化合物因分子中多有酚羟基而呈酸性，故可溶于碱 性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。有些黄酮类化合物在紫 外光（254nm或365nm）下呈不同颜色的荧光，氨蒸汽或碳酸钠溶液处 理后荧光更为明显。多数黄酮类化合物可与铝盐、镁盐、铅盐或锆盐 生成有色的络合物。
银杏叶提取黄酮类物质工艺
银杏叶提取黄酮类物质工艺
银杏叶中的黄酮类物质是主要有效成分之一，银杏黄酮有强烈的清除细胞内自由基的作用，能降低细胞的氧化代谢，对脑和四肢动脉血流失调引起的一系列心脑血管疾病有明显和独特的疗效。
银杏叶中的黄酮类物质含量占干叶的0.8%～3.5%,随品种、地理分布和季节变化而异。
传统的提取工艺比较成熟，工艺路线如下：
原料预处理—浸提—过滤—抽滤—浓缩—沉降离心—色谱分离—浓缩—干燥—银杏叶提取物成品
改进后的提取工艺过程如下：
原料—预处理—浸提—过滤—膜过滤—色谱分离—膜浓缩—减压浓缩—干燥—银杏叶提取物成品
改进后的提取工艺过程描述：
原料：以采摘的银杏叶为原料。
预处理：将原料放入烘箱于60~65℃温度下烘干，然后用高速组织捣拌机粉碎。
浸提、过滤：以1:5(W/V)加入纯净水，煮沸4小时，经纱布过滤，滤渣再同法提取二次，三次浸提液直接经陶瓷膜过滤后合并。
膜过滤：在高温下用直接陶瓷膜系统逐遍过滤处理，并用纯净水采用水赶料法洗滤浓缩液，收集澄清透明滤液，弃去浓缩液。
色谱分离：按树脂体积的4倍量取离心液过聚酰胺柱，然后用蒸馏水过柱洗涤，至流出液清亮为止，再加入与树脂等体积的25%乙醇洗涤，流干后用80%乙醇洗脱，收集颜色较深部分，因洗脱液浓度较低，可进一步用卷式膜系统浓缩。
膜浓缩、减压浓缩、干燥：洗脱液先经膜浓缩，浓缩3-4倍后再进行减压浓缩，真空低温干燥，即得到淡黄色的银杏叶提取物成品。
采用膜分离技术和膜浓缩技术与传统分离浓缩技术相结合，可大大降低生产成本，提高收率和品质。
银杏黄酮提取工艺及纯化研究
银杏黄酮提取工艺及纯化研究一、引言银杏黄酮作为一种天然的活性成分，具有广泛的生物活性和药用价值。
由于其在保健品和医药领域的广泛应用，银杏黄酮的提取工艺及纯化研究备受关注。
本文将对银杏黄酮的提取工艺以及纯化过程进行探讨。
二、银杏黄酮的提取工艺2.1 原料准备在进行银杏黄酮的提取前，首先需要准备好优质的银杏叶。
选取新鲜的银杏叶，通过去杂、洗净等处理方法，获得干燥均匀的原材料。
2.2 提取方法2.2.1 传统提取方法传统的银杏黄酮提取方法通常采用溶剂提取的方式。
具体步骤如下： 1. 将粉碎后的银杏叶与适量的有机溶剂（如乙醇）进行浸提。
2. 在适当的温度下，反复搅拌并浸提一定时间。
3. 过滤提取液，获得含有银杏黄酮的溶液。
4. 通过浓缩、脱色等步骤，得到纯化的银杏黄酮。
2.2.2 新型提取方法近年来，一些新型的银杏黄酮提取方法也得到了广泛应用。
如超声波辅助提取、微波辅助提取等。
这些新型提取方法具有高效、省时等特点，在提取工艺中发挥着重要的作用。
三、银杏黄酮的纯化研究3.1 纯化方法3.1.1 水相反萃取法水相反萃取法是一种常用的纯化方法，其步骤如下： 1. 将含有银杏黄酮的提取液与适量的水进行充分混合。
2. 静置一段时间，使得银杏黄酮被水相萃取。
3. 分离水相和有机相，得到含有高纯度银杏黄酮的水相。
3.1.2 分子筛吸附法分子筛吸附法是一种利用分子筛材料对银杏黄酮进行吸附的方法。
具体步骤如下：1. 将含有银杏黄酮的溶液与分子筛进行接触。
2. 利用分子筛对银杏黄酮进行吸附。
3. 通过适当的溶剂洗脱等步骤，得到高纯度的银杏黄酮。
3.2 精制技术3.2.1 重结晶技术重结晶技术是一种常用的精制技术，通过溶解和结晶的过程，使得杂质与银杏黄酮分离。
其步骤如下： 1. 将纯化后的银杏黄酮溶解于适量的溶剂中。
2. 加热溶液，使银杏黄酮充分溶解。
3. 慢慢降低温度，促使银杏黄酮结晶。
4. 过滤结晶物，获得重结晶的银杏黄酮。
银杏黄酮的含量检测方法
银杏黄酮的含量检测方法
一．色谱条件：
色谱柱：Intersil ODS-3 4.6×150mm 5um
流动相：甲醇：0.04 mol/L 磷酸(50:50,V/V)
检测波长：360 nm
流速：1.0ml/min
灵敏度：0.01AUFS
柱温：25℃
二．溶液制备：
2.1 对照品溶液的制备：
称取槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品各约3mg于25ml容量瓶中，加入甲醇溶解定容。
2.2 样品溶液的制备：
称取银杏提取物约60mg于50ml容量瓶中，加入甲醇超声振荡提取约40min，放置室温，定容，用0.45um的微孔滤膜过滤。
三．样品测定：
槲皮素的保留时间约为9min，山柰素约为15min，异鼠李素约为18min，银杏黄酮含量按下式计算。
总黄酮含量=（槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量）×2.51。
银杏中黄酮的提取分离纯化
银杏中黄酮的提取分离纯化一、综述银杏树具有观赏、经济、食用、药用等价值，银杏叶含多种活性成分，包括黄酮、萜类、内酯、聚戍烯醇、生物碱、术酯体等，在药用方面，银杏叶提取物的有效成分主要是黄酮苷类和萜类物质，有通过降低血液黏弹性改善微循环系统的功能，银杏叶中黄酮类化合物的含量较高，主要有黄酮及其苷、双黄酮、儿茶素这三类物质。
其中黄酮及其苷类化合物大多数是由槲皮素、山萘醇及其苷组成。
黄酮类化合物主要是指母核为2-苯基色原酮的一类化合物，现在则泛指具有C6-C3-C6基本结构骨架的一大类天然化合物。
天然黄酮类化合物母核上常含一些助色团，使该类化合物多显黄色，又因为分子中γ-吡酮环上的氧原子能与强酸成盐而表现为弱碱性，因此称为黄碱素类化合物。
黄酮类化合物不仅来源广泛而且表现出多种多样的药理活性,具有对免疫系统作用、防癌抗癌作用、抗肿瘤作用、抗心血管疾病作用、对内分泌系统的作用、消除自由基和抗氧化活性。
二、实验依据1、黄酮类化合物的分析方法①分光光度法该法是测定黄酮类化合物含量最为普遍的一种分析方法。
；黄酮类化合物可与氯化铝、硝酸铝、氢氧化钾等形成稳定的络合物,并产生特征吸收光谱，通常采用硝酸铝比色法,黄酮类化合物与Al(NO3)3进行络合显色，测定其含量[33]。
②高效液相色谱法高效液相色谱的固定相有硅胶柱和氨基柱，C18在黄酮类化合物的分析过程中应用广泛，在检测器的选择中，紫外检测仍是最普遍的检测方法，此外还有电化学检测器、光电二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器等2、黄酮类化合物提取方法①有机溶剂提取法最常用的黄酮类化合物提取溶剂为乙醇和甲醇，高浓度的醇(如90%～95%)有利于于提取苷元，浓度为60%的乙醇或甲醇水溶液适则有利于于提取苷类物质；乙酸乙酯和丙酮也常用来提取黄酮类化合物。
②水浸提法随着黄酮类提取物在市场上销售价格的降低，对于提取剂的选择，首先要考虑其成本问题，显然水浸提法对于降低成本，提高产品的市场竞争力有很大的帮助，而且就环保的角度出发，水浸提法更加环保、安全。
银杏叶中黄酮提取方法
银杏叶中黄酮提取方法 Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】银杏叶黄酮的提取一、溶剂提取法：国内外使用最广泛的方法，步骤多、周期长、产率低、产品中有机溶剂易残留。
溶剂系统主要有乙醇，水溶液、丙酮-水溶液、NaOH-水溶液、NaOH-乙醇等。
精提物常在粗提物制备基础上精制，常用液-液提取法、沉淀法和吸附．洗脱法。
以60％丙酮为起始溶剂粗提取，再脱脂、去银杏酚酸等15道工艺制成提取物。
NaOH-水溶液提取效果最好，NaOH-乙醇溶液次之，正丁醇萃取水溶液中银杏黄酮苷，获得最佳萃取条件为萃取5 min温度60℃4次，萃取物中黄酮苷含量为57％。
V水：V正丙醇=1:25最佳。
银杏叶精提物树脂吸附纯化法以石油醚回流提取，再以80％乙醇回流提取，减压浓缩，新型澄清剂沉降，树脂分级吸附，pH值为3—4酸水和酸性25％乙醇洗涤，75％乙醇洗脱，喷雾干燥将银杏叶洗净，于60℃烘干至恒重，粉碎，过50目筛。
称取粉末25 g，置于索氏提取器中恒重，粉碎，过50目筛。
称取粉末25 g，置于索氏提取器中加入60％乙醇至250．0 ml，80℃下回流提取3．0 h，蒸馏回收乙醇，并用活性炭脱色，得银杏叶黄酮提取物。
乙醇浓度为50％一70％时,提取率随浓度增加提高，当浓度70％时提取率达最大。
随水浴温度升高总黄酮提取率快速增加。
当温度80℃时提取率达最大。
提取时间为三小时为佳。
二、超临界流体萃取法(SFE法)：利用临界或超临界状态的流体及被萃取的物质在不同蒸汽压力下所具有的不同化学亲和力和溶解能力进行分离纯化的操作。
最佳萃取实验工艺条件为萃取压力15 MPa、乙醇浓度90％、萃取温度55℃，此时，黄酮类化合物萃取得率较理想.三、高速逆流色谱技术提取法：是一种不用任何固定载体的液一液分配色谱技术W=70%的乙醇连续循环喷淋逆流6级萃取，m乙醇：m银杏叶=5:1，总萃取时间240min,萃取温度50~55度，萃取率99%以上。
银杏叶中黄酮的提取原理及方法
银杏叶中黄酮提取及含量测定一、实验目的提取银杏叶中的总黄酮并测定其含量。
二、实验原理银杏系银杏科银杏属落叶乔木，银杏叶中含有多种生理活性成分，其中黄酮类化合物是重要的生理活性物质，具有保肝护肝、预防治疗心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。
因此，将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用，这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。
银杏叶黄酮类化合物的提取方法目前研究的有水浸取法，成本低但浸取率低；有机溶剂浸取法中，乙醇浸取的效率高且无毒，是目前采用较多的方法；韩玉谦等采用超临界流体萃取法，在70%乙醇溶液中加热回流法和CO2 超临界流体萃取法提取银杏叶中的活性成分，银杏黄酮回收率为84 . 4 % ，是常规萃取法回收率的2倍多；乙醇超声波浸取法, 黄酮提取率可达到8 6 . 7 %。
银杏黄酮含量的测定常用分光光度法和高效液相色谱法。
分光光度法自20世纪9 0年代以来一直是用来测定银杏黄酮的一种重要方法, 由于其成本低、便于操作等特点, 是一种快捷有效的方法[1]。
本实验采用乙醇作溶剂进行索氏提取，建立了用Al(NO3)3显色法对芦丁标准品和银杏叶提取液进行光谱扫描测定银杏叶总黄酮含量的方法[2]。
三、实验仪器和试剂材料：银杏叶粉末50g试剂：标准芦丁样品，无水乙醇（600ml），50mlAl(NO3)3（0.1mol/L），乙醚，5%NaNO2溶液，10%AL(NO3)3，4%NaOH溶液。
仪器：紫外分光光度计、电子分析天平、水浴锅、烘箱、烧杯、容量瓶（100ml1个、50ml1个、10ml6个）、索氏提取器、减压蒸馏装置、锥形瓶、沸石等。
四、实验步骤1.1提取银杏叶中总黄酮（1）将银杏叶洗净, 在103℃下烘干至恒重,用研钵捣碎制得银杏叶粉（2）准确称取10.0g，置于索氏提取器中，按下列条件加热回流提取：乙醇浓度80％，料液比1：20(g／ml)，回流温度85℃，回流时间2 h，平行进行1~3次实验。
银杏叶提取黄酮及分离纯化
银杏叶提取黄酮及分离纯化组员：李佳辉、黄埔、赵超武一、实验目的1.掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取2.掌握紫外分光光度计的应用，以及相关溶液的配置3.学会自主设计实验，培养团队合作精神二、实验原理⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用；⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm;⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。
其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。
先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。
显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。
（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应）目前银杏叶黄酮的提取方法主要有：溶剂提取法、超临界流体萃取法（SFE法）、高速逆流色谱技术提取法（HSCCC)微波提取法、超色波提取法、酶提取法、分子烙印技术。
因溶剂提取法操作简单，所需试剂廉价易得，故通常使用此法来进行大规模生产。
其工艺流程如下：银杏叶—→粉碎—→NaOH-60%乙醇回流提取—→离心—→过滤—→滤液收集—→二次醇提—→合并两次滤液—→树脂吸附—→脱吸—→浓缩—→干燥—→提取物由于银杏叶黄酮中的类黄酮主要为芦丁，故用芦丁为对照物绘制标准曲线，并采用分光光度法进行测定。
三．实验材料及器材1.材料酸银杏叶、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷二氢钠、D101大孔吸附树脂、盐酸2.相关溶液的配制和树脂预处理0.20mg／mL芦丁标准溶液（500mL）、5％NaNO2（500mL）、10％AI(NO3)3（500mL）、1mol／LNaOH 、0.4mol／LNaOH（500mL）、0.4mol ／L HCl(500mL)、30%乙醇（500mL）30%乙醇（1）D101树脂预处理(500g)：商品树脂均残留惰性溶剂，故使用前根据应用需要，必须进行不同深度的预处理，在提取器内，加入高于树脂层10-20厘米的乙醇浸泡3—4小时，然后放净洗涤液，为一次提取过程。
HPLC法测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量
HPLC法测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）法是一种常用的分析方法，常用于药物、食品、环境等领域的分析。
本文将使用HPLC法来测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量。
1. 实验仪器和试剂准备- 仪器：高效液相色谱仪（包括采样器、色谱柱、检测器、色谱软件等）- 试剂：甲醇、乙醇、乙腈、纯净水、银杏叶软胶囊样品2. 样品制备将银杏叶软胶囊样品取重量（大约0.5克），加入适量的甲醇或乙醇中，以达到合适的浓度。
然后使用超声波清洗仪进行超声提取，提取时间约15分钟。
提取液离心，取上清液。
如果需要，可以通过滤膜过滤以去除颗粒杂质。
3. 色谱条件设置- 色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，4.6mm×250mm）- 流动相：甲醇-水（80:20）- 流速：1.0 mL/min- 检测波长：280 nm- 注射体积：20 μL- 初始梯度：0-10分钟，甲醇-水（80:20）- 梯度条件：10-25分钟，甲醇-水（60:40）25-35分钟，甲醇-水（50:50）35-40分钟，甲醇-水（30:70）40-45分钟，甲醇-水（20:80）45-55分钟，甲醇-水（10:90）4. 标准曲线绘制选取适量的外标总黄酮标准品，加入适量的甲醇或乙醇中，得到一系列的浓度。
分别进行HPLC分析，测量各浓度的峰面积，并绘制出标准曲线。
5. 样品测试用之前制备好的样品提取液进行HPLC分析。
将待测样品注入色谱柱，使用上述的色谱条件进行分析。
分析时重复进行3次实验，并计算出平均值。
6. 数据计算利用标准曲线上的峰面积和浓度，计算出待测样品中总黄酮的含量。
7. 结果和讨论通过HPLC法测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量，得到了样品的峰面积。
通过比对标准曲线，可以计算出样品中总黄酮的含量。
通过以上步骤，我们可以使用HPLC法测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量。
银杏黄酮提取工艺流程
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在进行银杏黄酮提取之前，要做好充分的准备。
银杏叶黄酮提取工艺
银杏叶黄酮提取工艺1. 导言银杏叶黄酮是银杏叶中的重要成分，具有抗氧化、抗炎、抗衰老等多种生物活性。
因此，提取银杏叶黄酮成为了一项重要的研究内容。
本文将介绍一种常用的银杏叶黄酮提取工艺，并深入探讨其原理、操作步骤和优化方法。
2. 银杏叶黄酮提取原理银杏叶黄酮主要存在于银杏叶的叶肉细胞中，其主要成分为黄酮类化合物，包括酮类、酚类、苷类等。
提取银杏叶黄酮的原理是利用溶剂提取和分离纯化的方法。
2.1 溶剂提取原理溶剂提取是将银杏叶中的黄酮类化合物溶解于适宜的溶剂中，利用溶剂与黄酮类化合物的亲和力差异来实现分离纯化的目的。
常用的溶剂包括乙酸乙酯、乙醇、醋酸等。
乙酸乙酯是一种非极性溶剂，对银杏叶黄酮有较好的溶解度，因此在提取过程中常用乙酸乙酯作为主要的溶剂。
2.2 分离纯化原理通过溶剂提取得到的提取液中含有多种化合物，想要得到纯度较高的银杏叶黄酮，则需要进行进一步的分离纯化。
常用的分离方法包括结晶法、色谱法等。
其中，色谱法是一种常见且效果较好的分离方法，能够对复杂的混合物进行高效、准确的分离。
3. 银杏叶黄酮提取工艺步骤银杏叶黄酮提取工艺主要分为原料处理、提取和分离纯化三个步骤。
3.1 原料处理原料处理是提取工艺中的第一步，其目的是准备好适宜的原料以用于后续的提取过程。
主要步骤包括银杏叶的采集、去杂质处理和干燥处理。
1.银杏叶的采集：选择生长健壮、无病虫害的银杏树，采摘新鲜健康的银杏叶。
2.去杂质处理：将采摘好的银杏叶进行清洗，去除叶片表面的杂质和尘土。
3.干燥处理：将清洗好的银杏叶进行晾晒或烘干处理，使其含水率在10%以下。
3.2 提取提取是银杏叶黄酮提取工艺的核心步骤，其目的是将银杏叶中的黄酮类化合物溶解到溶剂中。
1.将干燥处理好的银杏叶研磨成粉末状。
2.取一定量的银杏叶粉末，加入适量的乙酸乙酯作为溶剂。
3.进行搅拌浸泡，使溶剂与银杏叶充分接触。
4.进行过滤、浓缩，得到黄酮类化合物溶液。
3.3 分离纯化分离纯化是提取工艺的重要环节，通过对提取得到的溶液进行分离，可以得到纯度较高的银杏叶黄酮。
生物制药综合实验讲义
实验一银杏叶总黄酮的提取及测定1 实验目的（1）掌握银杏叶中黄酮的提取方法；（2）掌握银杏叶中黄酮的含量测定。
2 实验原理近几年来，随着对黄酮类化合物研究的日益深入与重视，黄酮类化合物提取技术的发展也得到了促进。
目前提取黄酮类化合物的方法主要包括有机溶剂浸提法、超声波提取法、超临界流体萃取法、微波提取法和酶提取法等。
本实验采用有机溶剂浸提法提取银杏叶总黄酮，运用芦丁法测定银杏叶总黄酮含量。
3 实验材料、试剂和主要仪器3.1 实验材料与试剂银杏叶，芦丁标准品，无水乙醇，NaNO2，Al(NO3)3，NaOH。
3.2主要仪器移液枪，圆底烧瓶，水浴锅，旋转蒸发仪，布氏漏斗，容量瓶，10 ml刻度管，酶标仪。
4 实验步骤4.1银杏叶黄酮的提取称量2 g银杏叶放入圆底烧瓶中，加入100 ml 80%乙醇于圆底烧瓶中，于80℃下热回流提取2h，用漏斗过滤，弃渣留滤液，滤液用旋转蒸发仪浓缩并转入100 ml容量瓶中，用30%的乙醇定容，摇匀，供检测使用。
4.2芦丁标准曲线的绘制用80%乙醇配制0.03%（0.3 mg/ml）的芦丁标准储备液。
分别吸取刚配制好的芦丁标液0.0，15.6，31.3，62.5，125，250，500 μl置于7个1.5 ml EP管中，用80%的乙醇补足至0.5 ml，依次编号0~6，加入30 μl NaNO2（5%），摇匀静置6 min后加入30 μl A1(NO3)3 （10%），摇匀静置6 min后再加入400 μl NaOH （4%），混匀，用80%乙醇补至1 ml，静置l5~20 min，以0号试管为空白，用酶标仪在510 nm波长处测定吸光度，以吸光度(A)为横坐标，芦丁浓度(μg/ml)为纵坐标，绘制标准曲线。
4.3总黄酮含量的测定做2个样，取适量提取液置于1.5 ml EP管中，用80%乙醇补充至0.5 ml，加入30 μl NaNO2（5%），摇匀静置6 min后加入30 μl A1(NO3)3（10%），摇匀静置6 min后再加入400 μl NaOH（4%），混匀，用80%乙醇补至1 ml，静置l5~20 min，以0号试管为空白，用酶标仪在510 nm波长处测定吸光度。
银杏黄铜的提取工艺、性质和功能研究
银杏黄酮的提取工艺、性质和功能研究摘要目的从银杏叶中分离纯化出总黄酮，并用来做定性、定量分析及其功能研究。
方法采用超声提取法从银杏叶中提取总黄酮，再用硅胶柱层析法分离纯化，用镁粉、浓盐酸做定性分析，以NaNO2、Al(NO3) 3和NaOH为显色剂在510nm处测定其吸光值，分析其含量，用普鲁士蓝法进行总黄酮还原力的测定。
结果与镁粉、浓盐酸反应溶液颜色呈橙色，银杏叶提取液稀释10倍后测得吸光度0.147；稀释5倍时吸光度为0.262；不稀释时浓度为1.229，当样品浓度为0.04mg/ml时还原力最强。
结论用超声波辅助提取法、硅胶柱层析法能较快速的分离纯化出银杏叶中的总黄酮，银杏叶黄酮具有较强的还原力。
关键词银杏总黄酮；提取工艺；银杏黄酮功能前言银杏又名公孙树，为银杏科银杏属植物。
银杏叶中黄酮类化合物含量较高，为2.5%~5.91%，主要含有黄酮和银杏内酯等有效成分，其中银杏黄酮具有扩张血管，增加脑血管流量，降低脑血管阻力，改善脑血管循环功能，保护脑细胞，免受缺血损害扩张冠状动脉；防止心绞痛及心肌梗塞，抑制血小板活化因子、抗氧化，防止血栓形成，清除有害的氧化自由基，提高免疫力和调血脂等药理作用[1]。
对治疗心脑血管疾病，增加冠状动脉血流量，及治疗脑缺血、脑老化、老年痴呆症哮喘等有独特疗效[1]。
国内外相继有银杏叶黄酮新药投入市场。
1 实验仪器：紫外分光光度计、电子天平、超声波提取机、漏斗、滤纸、三角瓶、50ml 移液管、容量瓶、移液枪、烧杯等。
2 实验方法[2]2.1 银杏黄酮提取步骤：（一）采用超声提取法从银杏叶中提取总黄酮。
（二）称取100g磨碎的银杏叶，用1000ml 60％的乙醇溶解称取的银杏叶。
（三）在超声功率800Hz下提取，连续超声35min。
（四）提取液减压布式漏斗过滤，再旋转蒸发器浓缩回收乙醇。
2.2 柱层析方法2.2.1 硅胶的预处理13称取3g硅胶样品放入烧杯中，再放入烘箱中105℃，干燥40min。
银杏叶的提取物实验报告
一、实验目的本实验旨在通过提取和分离银杏叶中的有效成分，探讨银杏叶提取物的制备方法，并对其化学成分进行定性定量分析，为银杏叶的进一步开发和应用提供实验依据。
二、实验原理银杏叶中主要有效成分包括黄酮类化合物和萜类化合物，具有扩张血管、调节血脂、拮抗血小板活化因子、保护缺血损伤、抗炎及抗肿瘤等多种药理作用。
本实验采用溶剂提取法提取银杏叶中的黄酮类化合物，并利用高效液相色谱法对其含量进行测定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 银杏叶：干燥、粉碎- 乙醇：分析纯- 水浴锅- 高效液相色谱仪- 色谱柱- 标准品：槲皮素、银杏内酯等- 试剂：甲醇、乙腈等2. 实验仪器：- 电子天平- 粉碎机- 滤纸- 离心机- 恒温水浴锅四、实验方法1. 银杏叶提取液的制备：- 称取一定量干燥、粉碎的银杏叶，加入适量乙醇，浸泡一段时间后，水浴加热回流提取。
- 提取液过滤，滤液浓缩至适量，得银杏叶提取物。
2. 高效液相色谱法测定银杏叶提取物中的槲皮素含量：- 标准品溶液的制备：准确称取一定量的槲皮素标准品，用甲醇溶解并定容，得标准品溶液。
- 样品溶液的制备：准确称取一定量的银杏叶提取物，用甲醇溶解并定容，得样品溶液。
- 色谱条件：流动相：甲醇-水（体积比80:20）；流速：1.0ml/min；检测波长：254nm。
- 样品溶液和标准品溶液分别进样，记录色谱图，根据标准品溶液的峰面积计算样品溶液中槲皮素含量。
五、实验结果与分析1. 银杏叶提取液的制备：- 经过提取、过滤、浓缩等步骤，成功制备了银杏叶提取物。
2. 高效液相色谱法测定银杏叶提取物中的槲皮素含量：- 样品溶液色谱图显示，在254nm波长下，银杏叶提取物中存在一个与槲皮素标准品峰相似的峰，说明提取物中含有槲皮素。
- 根据标准品溶液的峰面积计算，银杏叶提取物中槲皮素含量为2.5%。
六、结论本实验采用溶剂提取法提取银杏叶中的黄酮类化合物，并利用高效液相色谱法对其含量进行测定，成功制备了银杏叶提取物，并确定了其中槲皮素含量。
银杏叶中黄酮类化合物的提取
随着时间的↑ 随着时间的↑黄 酮类化合物提取 4h之前 率↑ ，4h之前 时间↑ 时间↑提取率的 影响比较明显， 影响比较明显， 4h之后时间的 之后时间的↑ 4h之后时间的↑ 提取率增加变缓。 提取率增加变缓。
实验条件：温度 ℃ 浸取剂70%乙醇溶液 ；料液比 实验条件：温度80℃ ；浸取剂 乙醇溶液 料液比1:15
提取率 （ % ） 提取率（
三 、实验结果及讨论
料液比对提取率的影响：
90 85 80 75 70 65 1:10 1:15 1:20 1:25 1:40
↑ 1:15
料液比
随着料液比↑提取 随着料液比 提取 率也随之↑。 率也随之 。在 1:15之前，对提 之前， 之前 取率的影响比较 明显， 明显，在1:15之 之 后，对提取率影 响变小。 响变小。
芦丁的化学结构式
二、研究内容
测量波长的选取： 测量波长的选取：
1.5 1.2
0.9 0.6 0.3 0 400 450 500 550 600
500nm ↓
波长( nm） 波长 ( nm ）
根据吸收光谱可 知，该有色溶液在波 nm具有最大吸 长500 nm具有最大吸 光度， 光度，且吸收范围较 宽，所以选择吸收波 nm作为定量测 长500 nm作为定量测 定波长。 定波长。
80 70 60 50 40 50 60 70
↑ 80℃ ℃
80
90
100
温度（ 温度 （ ℃ ）
浸取温度的↑ 浸取温度的↑提 取率液随着↑ 取率液随着↑ 。 80℃之前提取率 ℃ 增加迅速， ℃ 增加迅速，80℃ 之后， 之后，温度对提 取率的影响变小。 取率的影响变小。
实验条件：时间 浸取剂70%乙醇溶液 ；料液比 实验条件：时间4 h ；浸取剂 乙醇溶液 料液比1:15
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实验四、银杏黄酮的提取与检测一、实验目的：1、了解黄酮类物质的分离提取和检测方法。
2、了解大孔吸附树脂的特性和在生化分离中的应用。
二、实验原理：1、提取原理溶剂加到原料中进行提取的过程中，由于扩散、渗透作用，逐渐通过细胞壁透入细胞中，溶剂进入细胞后溶解可溶性物质，造成了细胞内外浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入植物细胞中，可溶性成分不断被提取出来，如此多次反复，直到细胞内外浓度相等，达到动态平衡为止。
2、大孔吸附树脂纯化原理：大孔吸附树脂是一种具有多孔立体结构人工合成的聚合物吸附剂，是在离子交换剂和其它吸附剂应用基础上发展起来的一类新型树脂，为用于固体萃取而设计。
是依靠它和被吸附的分子（吸附质）之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作的。
大孔吸附树脂吸附能力高，易解吸，内部微孔即多又大，表面积也大，具有较多的活性中心，使离子、分子扩散速率增大，交换速度加快，在使用上可以缩短生产周期，提高效率，而且大孔吸附树脂可以进行再生重复使用，因此使生产成本大为降低，适于工业化生产。
3、银杏黄酮含量的分光光度法测定原理黄酮类化合物的测定使用较广泛的是络合—分光光度法，该法的基本原理是，黄酮类化合物分子结构中，凡在C 3或C 5位上有羟基，都会与铝盐形成有颜色的配位化合物，见图：O O OAl 2+O OOAl2黄酮和铝盐的络合物芦丁因此，银杏叶中的黄酮类化合物包括单黄酮、双黄酮和黄酮苷都能与铝盐形成络合物，比色测定结果是总黄酮含量。
硝酸铝络合分光光度法测定总黄酮的原理为:在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成螯和物,加入氢氧化钠溶液后显红橙色,在500波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律,一般与芦丁标准系列比较定量.如果细说,硝酸铝显色法是先用亚硝酸钠还原黄酮，再加硝酸铝络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2’羟基查耳酮而显色.它的显色原理发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位,不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时是不显色的.三、仪器：电子天平（0.1mg ）、紫外分光光度计、恒温水浴摇床、电热恒温水浴锅、索氏提取器、电热恒温干燥箱、微波炉、超声波破碎仪、超声波清洗机、旋转蒸发器、循环水式真空泵、布式漏斗、真空抽率瓶、真空泵。
四、材料与试剂：银杏叶、甲醇、95%乙醇、丙酮、乙醚、石油醚（30~60℃）、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠、芦丁、大孔吸附树脂。
五、操作步骤：5.1、脱脂+取新鲜的银杏叶清洗、60℃下烘干、粉碎成40-60目，取10克叶末，于索氏提取器中装150ml 石油醚在60℃下索氏提取8小时。
5.2、提取将索氏提取石油醚液减压浓缩，浸膏待下次实验使用。
将叶末60℃下烘干后于索氏提取器中装150ml 70%乙醇在90℃下索氏提取4小时，或加入150ml 三角瓶中，每瓶加入100ml 70%乙醇中火微波处理20S 然后再超声波清洗器中破碎处理5min ，重复操作2次，合并提取液得到GBE 粗提液（可对比两种方法的异同）或用超声波破碎仪8S 工作、10S 间歇，工作30次，功率400W 。
5.3、纯化树脂预处理：将大孔吸附树脂置于2000ml 三角瓶中，用去离子水浸泡24h ，使树脂充分溶胀后过滤，然后再用无水乙醇浸泡4h 后上柱（先在柱内装入0.4-0.5柱体积的无水乙醇，然后将树脂上柱），再用无水乙醇冲洗，直至洗出的液澄清用水稀释无白色沉淀产生时止，再用去离子水洗柱，洗至乙醇含量在1%以下即可。
树脂纯化：以10倍柱体积的提取液控制吸附流速为4倍树脂柱体积/h 用大孔吸附树脂吸附，吸附完全后用20%乙醇洗涤，再用3倍树脂柱体积、流速为2倍树脂柱体积/h 的90%乙醇解吸，解吸后定容后。
制备产品：将90%乙醇解吸液减压浓缩，得到GBE ，计算得率。
5.4、检测5.4.1、银杏总黄酮的标准曲线的绘制（分光光度计法）精确配制浓度为0.2mg/ml 芦丁标准液100ml ，分别取芦丁标准液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml 于6个25ml 容量瓶中，用20%乙醇补充到12.5ml ，加入0.5ml 5%NaNO 2摇匀，放置5min 后加入0.5ml 10%AlNO 3，5min 后再加入5ml 1mol/L NaOH 混匀，用20%乙醇稀释到刻度，10min 后于波长510nm 处进行比色测定，空白试剂参比绘制标准曲线，数值添入下表并用最小二乘法做线性回归，得芦丁浓度C （g/L ）与吸光度A 的关系。
标准芦丁浓度（g/L ）—吸光度Standard concentration of rutin (g/L)-absorbance芦丁浓度（g/L ）0.0000.0080.0160.0240.0320.0400.048吸光度A5.4.2、银杏总黄酮含量的测定从定容的解吸液中取1.0ml 解吸液依据5.4.1方法测定其中黄酮含量。
实验报告要求：制表记录各部分的收率，记录各部分的物料用量与用时。
绘制银杏黄酮生产工艺流程图。
银杏总黄酮含量=×100%附加材料1、银杏及银杏叶次生代谢产物简介：银杏（Ginkgo biloba.L ）是地球上生长着的最古老的高等植物之一,在当今千百万种植物中，它为单科、单属、单种的古代孑遗植物，素有裸子植物活化石之称，为我国所特有。
银杏全身是宝，是我国多用途的经济树种，集食品、饮料、药材、木材和环境美化于一体。
银杏树形古雅，高大挺拔，叶形特异，抗病、抗虫、抗污染，生命力极强，是当今国内外街道、公园、庭院绿化、美化的理想树种，它与雪松、南洋杉、金松被称为世界四大园林树木；银杏种仁含有丰富的营养成分和化学物质，据《本草纲目》记载，银杏具有敛肺平喘，止遗尿、白带的功能。
我国人民长期用做医疗食品，在国际上久负盛名，为传统的外贸商品。
银杏叶中化学成分很多，主要有黄酮类、萜内酯类、聚戊烯醇等化合物，此外还有酚类、生物碱和多糖等药用成分。
黄酮类化合物和萜内酯类化合物是其中最主要的两大类生理活性物质，它们具有扩张血管、增加血流量、改善血液循环动力障碍、降低脑血管阻力、抑制血栓形成、拮抗支气管收缩、改善脑细胞代依据以标准曲线测定值×25×解吸液体积样品重量×1000谢水平及清除人体自由基等多种作用。
黄酮类化合物是一类低分子天然植物成分，系植物体多酚类的代谢物，具有C3-C6-C3的基本结构，包括黄酮（flavone）、异黄酮（isoflavone）、黄酮醇（flavonol）、异黄酮醇（isoflavonol）、黄烷酮（flavanone）、异黄烷酮（isoflavanone）、查耳酮(chalcone)、灿酮（xanthone）等，在植物化学上归属于含氧杂环化合物(肖崇厚,1998)。
最初这类物质的粗制品仅在染料方面应用，自二十世纪二十年代，国外把槲皮素、芦丁用于临床后，才开始引起人们的关注。
迄今，已有数百种不同类型的黄酮化合物在植物中发现。
2、微波和超声波在植物有效成分提取在的应用溶剂加到原料中进行提取的过程中，由于扩散、渗透作用，逐渐通过细胞壁透入细胞中，溶剂进入细胞后溶解可溶性物质，造成了细胞内外浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入植物细胞中，可溶性成分不断被提取出来，如此多次反复，直到细胞内外浓度相等，达到动态平衡为止。
从溶剂对有效成分的提取原理我们可以看出，提取效果主要取决于提取溶剂对有效成分的溶解性、溶剂向细胞壁内的渗透阻力、溶解有效成分后向细胞壁外的扩散阻力的大小。
我们选用70%乙醇作为提取银杏叶有效成分的提取溶剂，对银杏黄酮和银杏内酯的溶解性是良好的，但若将有效成分快速完全的从银杏叶细胞壁中提取出来的阻力是较大的。
因为银杏叶细胞壁中角质、蜡质成分较多，不利于溶剂的渗透和扩散；又由于构成植物细胞壁的主要成分纤维素的结构单位微纤丝在亚显微结构上相互交织成网状，这样的结构增加了有机溶剂通过细胞壁的阻力和有效成分向外扩散的阻力，而且很容易将向外扩散的有效成分吸附在细胞壁上。
传统的各种提取方法大多是将药用植物机械粉碎后，采用浸渍、渗漉、煎煮、回流等提取方法，并通过增加溶剂的用量和提取时间、升高提取温度等方法来加快有机溶剂的渗透速度、有效成分的溶解和扩散速度，但这些方法并不能破坏植物细胞壁的这种网格结构。
微波能够促进银杏叶和银杏细胞培养物中有效成分的溶出主要有以下两点原因：（1）在变频磁场、电场作用下，极性分子取向随电场方向改变而变化，从而导致分子转动、振动或摆动，加剧了反应物分子运动及碰撞频率，使分子在极短时间内达到活化状态，比传统加热方式均匀、高效。
（2）分子的剧烈运动导致植物细胞内部结构的破坏，有利于有效成分的溶出。
超声波是指频率高于20000HZ的声波，虽然人耳不可察觉，但它在自然界中广泛存在。
超声波作用基本原理如下：超声波在媒质中传播可使媒质质点在其传播空间内进入震动状态强化溶质扩散、传质，即超声波机械效应。
超声波在媒质质点传播过程中其能量不断被媒质质点吸收变成热能，导致媒质质点温度升高，即超声波的热学效应。
同时当大能量的超声波作用于提取介质，在振动处于稀疏状态时，介质被撕裂成许多小空穴，这些小空穴瞬时即闭合，闭合时产生高达几千大气压的瞬时压力，即空化效应。
在超声波作为70%乙醇提取银杏叶有效成分的强化手段时，超声波的空化效应中产生的极大压力可能造成了银杏叶细胞壁的破裂，有利于提取溶剂渗透到细胞壁内部，从而使银杏黄酮和银杏内酯更好的溶于乙醇中，同时超声波产生的机械效应和热学效应也加速了银杏叶细胞壁内有效成分的溶解和扩散，所以用超声波作为70%乙醇提取银杏叶有效成分的强化手段可以大大缩短提取时间并提高提取效率。
3、大孔吸附树脂概述大孔吸附树脂是一种具有多孔立体结构人工合成的聚合物吸附剂，是在离子交换剂和其它吸附剂应用基础上发展起来的一类新型树脂，为用于固体萃取而设计。
是依靠它和被吸附的分子（吸附质）之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作的。
合成吸附剂有大的比表面积和类似活性炭颗粒的内细孔结构。
这些多孔特性使之从水溶液中有效的吸附有机化合物。
用合成吸附剂萃取的过程能与其它溶剂萃取技术相比减少溶剂的使用量增加操作的安全性。
大孔吸附树脂具有多孔骨架，其性质与天然吸附剂活性炭相似，但具有下列优点，弥补了天然吸附剂－活性炭之不足。
1）物理、化学稳定性高，机械强度好，经久耐用。
2）再生容易，一般用水、稀酸、碱或有机溶剂，如低碳醇，丙酮即可，而且分离出来的物质灰分低。
3）品种多，可根据不同要求，改变树脂孔结构、极性等表面性能适用于吸附多种有机化合物。
4）树脂一般为小球状，直径为0.2-0.8毫米之间，因此流体阻力不像粉状活性使用时不便。