叶绿体色素的提取与分离
绿叶中色素的提取和分离实验原理
绿叶中色素的提取和分离实验原理
绿叶中色素的提取和分离实验：
1、提取：绿叶中的色素——研磨法。
称取、剪碎5g叶片，放入研钵中。
加入少许二氧化硅、碳酸钙、5mL丙酮。
快速、充分研磨。
根据叶绿体中的色素在有机溶剂（乙醇、丙酮等）中溶解的特性，用丙酮可将色素从叶片中提取出来（若用95％的酒精作溶剂，则应向色素提取液中加入无水碳酸钠，除去色素提取液中的水分。
若用丙酮作溶剂，则用量不宜过多，以2～5mL为宜，过多会影响色素浓度，过少不易过滤），过滤后收集滤液，将滤液收集到小试管中，及时用棉塞将试管塞紧备用。
2、分离：制备滤纸条，将干燥过的定性滤纸剪成6cm×lcm的条，一端剪去两角，距该端lcm处用铅笔画一条极细的横线。
用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画一条细而直的滤液线，待干燥后再重复画2～3次（次数越多色素越多）。
实验原理：
1、色素提取原理：色素溶于有机溶剂而不溶于水，可用95%的乙醇、丙酮等有机溶剂来溶解色素，从而提取绿叶中的色素。
色素提取也可用水浴加热法，即把叶片剪碎后放在95%的乙醇中，进行隔水加热来提取。
一般地说，叶片加热到变成黄白色，叶片中的色素基本上被提取出来了。
2、色素分离原理：各种色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散速度比较快，反之则比较慢，从而使各种色素相互分离开来。
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告实验目的：1. 学习叶绿体中色素的提取和分离的方法；2. 观察叶绿体中不同色素的吸收光谱。
实验原理：叶绿体是植物细胞中的特殊细胞器，其中含有多种色素，包括叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素等。
这些色素能够吸收不同波长的光线，并转化为化学能以参与光合作用。
本实验利用溶剂提取和色谱柱分离的方法，将叶绿体中的色素提取出来，并通过紫外-可见光分光光度计测定不同色素的吸收光谱。
实验步骤：1. 取一片鲜叶（最好选择深绿色的叶片）切碎，加入适量的乙醇或醋酸乙酯中浸泡，使叶绿体释放出色素。
注意保持容器密封以避免光照。
2. 将浸泡片刻半小时，使叶绿体彻底释放色素。
3. 将叶绿体悬液过滤，收集含有色素的过滤液。
4. 取一支色谱柱，填充色谱吸附剂（如硅胶），再用无色溶剂（如正己烷）预洗一次。
5. 将收集到的含色素液体加入色谱柱中，用无色溶剂洗脱，收集不同色素的洗脱液。
6. 用紫外-可见光分光光度计测定不同色素的吸收光谱。
实验结果：根据实验数据得到不同色素的吸收光谱曲线，可观察到叶绿素 a 在400-500 nm波长范围内有最大吸收峰，叶绿素 b 在450-550 nm波长范围内有最大吸收峰，类胡萝卜素在500-600 nm波长范围内有最大吸收峰。
根据吸收光谱的不同，可以推测各色素在光合作用中的吸收波长和参与的反应。
实验结论：通过该实验，我们成功地提取和分离了叶绿体中的色素，并观察到不同色素的吸收光谱。
这些实验结果可以帮助我们深入了解植物光合作用的机制，以及不同色素在光合作用中的作用。
同时，该实验也展示了提取和分离生物样品中化学物质的基本实验技巧和原理。
《叶绿体色素的提取和分离》 实验报告
《叶绿体色素的提取和分离》实验报告
叶绿体是植物细胞中的一种细胞质器，主要功能是光合作用。
叶绿体包括一系列色素，其中最重要的是叶绿素。
在本实验中，我们将提取和分离叶绿体色素，以便进一步分析其
结构和功能。
实验步骤：
1. 从新鲜的叶子中剪下片段，用无菌蒸馏水洗涤。
2. 用离心机将叶片离心，离心速度为1000 rpm，时间为5分钟。
3. 将上清液取出并过滤，过滤剂为细孔过滤纸。
5. 将上清液取出，并用1ml无菌蒸馏水洗涤叶绿体色素。
7. 取出上清液，将其光度值调至0.4-0.6。
（400nm处）
8. 将上述上清液转入紫外吸收仪中，观察叶绿素的吸收曲线。
实验结果：
实验得出的叶绿体色素提取液中，吸收最强的波长为680nm和430nm。
这对应着叶绿
体和类胡萝卜素的吸收峰。
实验得到的叶绿体色素移液后，需要经过离心的过程，这样可去除混杂物质，获得更
为纯净的叶绿素。
通过以上实验，我们成功地提取和分离了叶绿体色素。
叶绿素是植物所特有的，它起
到了光合作用的关键作用。
实验中的提取和分离方法，可以为进一步的分析叶绿素的结构
和功能提供帮助。
叶绿体中色素的提取和分离
“叶绿体中色素的提取和分离”实验改进（2）1．提取色素为了得到墨绿色的色素滤液，于实验前2～3天，取质地柔软、深绿色的草本植物的叶片放在通风处阴干。
研磨时，所取叶片要除去粗的叶脉和叶柄。
向研钵中加入少量二氧化硅和碳酸钙，进行研磨。
待研磨充分后，再加入少量氯化钠和适量丙酮，就出现了深绿色的液体，液体经脱脂棉过滤后就得到了墨绿色的色素滤液。
2．划滤液细线用毛细吸管吸取色素滤液，采用毛笔的执笔方式握住毛细吸管，悬腕，沿滤纸条上的铅笔划线作快速的划动，重复2～3次，就可以得到细、匀、齐的滤液细线。
3．分离色素（1）采用小试管法取长15cm、直径15mm的小试管，试管塞用橡皮塞。
在橡皮塞的中央用刀片刻一细槽，然后将划过滤液细线的滤纸条无色素的一端，插入橡皮塞的细槽中。
向小试管内加入3．5ml层析液，将滤纸条慢慢地垂直插入层析液中，橡皮塞要塞紧小试管。
注意滤液细线不能没及层析液。
（2）采用培养皿法不用滤纸条，也不划滤液细线，而取直径为10cm的干燥圆形定性滤纸，用毛细吸管吸取色素滤液，在滤纸的中央点成圆形的色素斑。
重复4～5次。
然后取一枚缝衣针，穿一条细棉线，在棉线末端打个结，将针穿过滤纸上的色素斑中心，在距线结约4cm处剪断棉线。
取直径l0cm的培养皿一套，向培养皿底中加入5ml层析液。
把上述圆形滤纸扣在培养皿底上面，无线结的一面朝下，棉线则浸没在层析液中。
再将培养皿盖盖在滤纸上。
采用该方法，可以看到色素随层析液由线结处向周围均匀扩散。
因此得到的4条色素带呈同心环状，十分清晰。
而且层析时，滤纸上的色素不会没及层析液中，点色素斑比划滤液细线容易得多，实验效果非常显著。
浅谈叶绿体色素的提取,分离实验的基本原理
浅谈叶绿体色素的提取,分离实验的基本原理叶绿体色素是植物共同的分子，是植物叶片绿色色素的主要成分，在植物的基因组中占有非常重要的地位。
叶绿体色素的提取和分离实验是植物生理学研究中常见实验，它们的研究对于深入解析植物叶片绿色色素的组成、形成机制以及植物的适应和演化有重要的意义。
本文简要介绍叶绿体色素提取、分离实验的基本原理以及实验步骤。
一、叶绿体色素的提取1.提取用植物组织植物细胞是由多种组织结构的嵌套形式组成的，而叶绿体这种特殊的细胞构造，它们除了在细胞质和细胞核里贮存着叶绿素外，还处于细胞子室内、细胞膜之间，因此叶绿体色素的提取，必须从整个植物细胞体内提取。
2.提取步骤a)取植物组织消化，加入蛋白酶消化液，消化温度保持在37℃，消化完成后，用离心机将悬浮液离心分离；b)将悬浮液和脉粗滤；c)用离心机将滤液离心，并将残留物清除；d)用硫酸钠缓冲液将离心液中的叶绿体色素进行沉淀分离；e)最后，用离心机将沉淀液离心，取得叶绿体色素提取液。
二、叶绿体色素分离实验叶绿体色素分离实验是以“四维定律”为基础的，四维定律指的是溶解物的溶解度与温度、酸度、配体浓度等四个维度的变化而发生变化。
以下是叶绿体色素分离实验的实验步骤：1.温度调节将叶绿体色素提取液加入50mL的萃取液中，将温度调节到10°C，保持温度稳定后，用离心机将其离心十分钟；2.酸度调整将离心液加入室温的硫酸铵溶液中，搅拌均匀，然后再次利用离心机离心，将叶绿体色素沉淀出来；3.配体浓度调整将离心液和硫酸铵溶液加入50mL的氯化钠溶液中搅拌均匀，然后将其再次离心，至此叶绿体色素被沉淀出来，即可获得叶绿体色素的分离液；最后，用离心机离心冷却至温度达到最低，来增强叶绿体色素的沉淀，以达到纯度高的目的。
综上所述，叶绿体色素的提取、分离实验步骤比较复杂，从植物组织的提取、细胞色素的悬浮液提取、细胞色素的滤液提取、通过改变温度、酸度、配体浓度的方法对叶绿体色素的分离实验，至此，叶绿体色素的提取和分离实验基本原理就介绍完了。
植物生理学实验 叶绿体色素的提取、分离
3 铜代反应
取上述色素乙醇提取液少许于试管中，1 滴1滴加入浓盐酸，观察颜色变化。然后加醋 酸铜晶体少许，酒精灯上慢慢加热溶液，观察 色素颜色的变化。
叶绿素的提取
叶绿素是一种酯，因此不 溶于水。通常用含有少量水的 有机溶剂如80％的丙酮，或者 95%乙醇，或丙酮∶乙醇∶水 ＝4.5∶4.5∶1的混合液来提 取叶片中的叶绿素，用于测定 叶绿素含量。 之所以要用含 有水的有机溶剂提取叶绿素， 这是因为叶绿素与蛋白质结合 牢，需要经过水解作用才能被 提取出来。 提取方法 研磨法 浸提法 研磨法提取 光合色素
制作绿色标本方法：用50%醋酸溶液配制的饱 和醋酸溶液浸渍植物标 本(处理时可加热)
当溶液变褐 色后，投入 醋酸铜粉末， 微微加热， 形成铜代叶 绿素
提取液的分离：因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适 当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流 动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过 一定时间后，可将各种色素分开。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：常春藤叶 （二）仪器设备： 研钵；漏斗；三角瓶或试管；剪刀；滴管；玻棒；圆形滤纸 （直径11cm）：酒精灯 （三）试剂： 95％乙醇；石英砂；盐酸；醋酸铜 推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:1）比例配 制（V／V）。
2. 叶绿体色素的分离 （1）取圆形定性滤纸一张（直径11cm），用毛细滴管 吸取或玻棒蘸取乙醇叶绿体色素提取液点于滤纸中心， 使色素扩散，风干后，再重复操作数次。 （2）用吸管吸取推动剂滴在滤纸中间，当推动剂前沿接 近滤纸边缘时，即可看到分离的各种色素。风干滤纸， 剪取一条分开的色素带，标明各种色素的位置及颜色， 作为结果贴于实验报告上。
0.1g叶+10ml混合液浸提
04叶绿体色素的提取与分离
滤纸
胡萝卜素(橙黄色)
叶绿素a(蓝绿色) 叶绿素b(黄绿色) 叶黄素(鲜黄色)
（三）去镁叶绿素的制取及金属原子对氢的再取代
方法:
吸取叶绿体色素酒精溶液1ml,加入几滴 10%HCl，轻摇后形成褐色的去镁叶绿素. 再加入少量醋酸铜粉末,酒精灯上慢慢加热, 叶绿体色素酒精溶液恢复为蓝绿色. 提醒: 用1ml色素酒精溶液放入试 管中(不用再制备叶绿素提取液)
实验四 叶绿体中色素的 提取及分离
一 、实验原理 根据据各类 色素的溶解不同的特性,将它们分离开来. 二、 实验材料:菠菜叶片 三、实验内容 1.叶绿素的提取 2.色素的分离 3.去镁叶绿素的制取及金属原子对氢的再取代 4.叶绿素的皂化 5.叶绿素酒精溶液提取液的吸收光谱
四、实验方法:
（一）叶绿体色素的提取 称取5g新鲜菠菜叶片,剪成小块,加入95%酒精,研磨过 滤,定容至25ml，此时可以观察叶绿素的荧光现象。
注意：定容前较为浓缩的溶液可直接用于下一步实验。
（二）色素的分离（纸上层析）
一:色素的纸上层析
1.装置
2.注意: a) 可用毛细管多重复点几次滤纸中央,使斑点 成浓绿色. b) 斑点直径在1cm左右.
700(nm)------------600-------------------500------------------400
700(nm)------------600-------------------500------------------400
提问:
1.色素纸上层析的原理? 结果？
(2)吸取2-3ml上层石油醚溶液于另一试管中, 加入2块NaOH和一滴甲醇.用力摇动试管,直到底 部出现一层绿色.加入等容积的水,摇晃,静止至分 层.上层为黄色,下层为绿色.
叶绿体色素提取与分离实验
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能的色素和结构
（一）捕获光能的色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素的提取和分离实验中在滤纸条上扩散速度 最快的色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
4、在圆形滤纸的中央点上，对叶绿体的色素进行色素分析， 会得到近似，同心的四个色素环，排到在最里圈的色素是 （） A、橙黄色 B、蓝绿色 C、黄色 D、黄绿色
练习
1、在植物实验室的暗室内，为了尽可能地降
低植物光合作用的强度，最好安装（ B）
A、红光灯 B、绿光灯 C、白炽灯 D、蓝光灯
2、为提高大棚蔬菜的产量，哪项措施更有效
5、下图是叶绿体色素的提取与分离实验中所用的材料与用具。请回答： 分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色的溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表示加，“—”表示不加。
处理 二氧化硅（少量） 碳酸钙（少量） 95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
C、安装绿色透光薄膜 D、安装无色透光薄膜
练习
3．在圆形滤纸的中央点上粘叶绿体的色素滤液， 进行色素分析，会得到近似同心环状的四个色素圈，
排在外圈的色素呈 [ A]
叶绿体中色素的提取和分离
生物体内的主要能源物质是: 糖类 生物体内主要的储能物质是: 脂肪
生物体进行生命活动的直接 能源物质: ATP 最终能量来源: 太阳的光能
能量之源——光与光合作用
太阳光中有能量，我 们制造出太阳能电池板 可以捕获其中的能量并 转化为电能。 绿色植物也能捕获 并转化太阳光中的能量， 那么，绿叶中通过什么 物质或结构捕获并转化 光能呢？
小鼠
存活。
结论： 植物能够净化因燃烧或呼吸而变混浊的空气。
结论1： 普利斯特利的实验 只有在阳光照射下
才能成功
结论2： 植物体只有绿叶才能更 新空气。
结论： 淀粉是光合作用的产物之一。
极 细 光 束
黑暗中
光照下
结论： 叶绿体是植物进行光合作用的场所 光合作用需要在光下进行 光合作用中释放氧气
O2
光合作用的过程
学习目标： 1．了解光合作用的探索历程 2. 掌握光合作用的过程
1
光合作用的概念:
光合作用是指绿色植物通过叶绿体,利 用光能,把二氧化碳和水转化成储存能 量的有机物,并且释放氧气的过程。 2 光合作用反应式: CO2 + H2
*O 光能 叶绿体
有机物 + *O2
在光合作用的探索历程中， 有几个比较重要的突破性实验？ 分别有什么发现？在探索过程中 最杰出的科学家是谁？
光合作用的过程
阅读课本P:103—106,填写下表
项目
光反应
叶绿体的类囊体薄膜上 光、色素、酶，水 H2O
酶
暗反应
叶绿体的基质上 酶，水，ATP, [H]，C5
场所 条件
物质变化
[H]+O2 ↑
酶
ADP+Pi+能量
叶绿体色素的提取与分离实验
3、用纸层析法将色素进行分离，在滤纸条上出现最宽旳一 条色素带旳颜色是（ ） A、橙黄色 B、黄色 C、蓝绿色 D、黄绿色
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能旳色素和构造
（一）捕获光能旳色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占1/4
吸收可见 旳太阳光
类胡萝卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素旳提取和分离试验中在滤纸条上扩散速度 最快旳色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色旳溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表达加，“—”表达不加。
处理
二氧化硅（少许） 碳酸钙（少许）
95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（1）A处理得到旳溶液颜色是 黄绿色 ，原因是__叶__绿__素_被__破__坏__________
（6）色素分离旳成果：相邻色素带间距最宽旳是 他们旳颜色是 橙黄色 和 黄色 ，主要吸收 蓝紫
胡萝卜素 和 叶黄素 ， 光。
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
7------实验：叶绿体中色素的提取和分离
叶绿体中色素的提取和分离一. 课本回扣:1. 实验原理:（1）提取：叶绿体中的色素能够溶解在中, 所以, 可以用提取叶绿体中的色素。
（2）分离: 叶绿体中的色素在层析液中的溶解度: 溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得, 溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得。
这样几分钟后, 叶绿体中的色素就在扩散过程中分离开来2. 步骤方法：（1）研磨前加入少许石英砂的目的是。
（2）研磨前加入少许碳酸钙的目的是。
（3）加入10mL无水乙醇的目的是。
（4）层析液是有机溶剂, 常由、和混合而成。
也可代用。
层析液的作用是。
3. 实验结果及分析：（1）扩散最快的是（颜色: ）扩散最慢的是（颜色: ）。
滤纸上有四条色素带说明了什么？。
（2）滤液细线为什么不能接触到层析液？。
1. （1）无水乙醇无水乙醇（2）不同快慢2. （1）研磨充分（2）防止叶绿素被破坏（3）溶解（提取）色素（4）20份石油醚2份丙酮1份苯93号汽油使叶绿体中的色素随着层析液在滤纸上的扩散而分离开来3．（1）胡萝卜素（橙黄色）叶绿素b（黄绿色）绿叶中的色素有四种, 它们在层析液中的溶解度不同, 随层析液在滤纸上扩散的快慢也不一样。
（2）滤纸上的滤液细线如果触到层析液, 细线上的色素就会溶解到层析液中, 就不会在滤纸上扩散开来, 实验就会失败。
1. “叶绿体色素的提取和分离”实验:（1）在“叶绿体色素的提取和分离实验”中, 将叶绿体色素进行分离的方法名称是。
（2）某学生在实验过程中将划有滤液细线的滤纸条（已重复几次划线）插入层析液, 几分钟后取出观察, 发现在滤纸条上无色素分带现象, 而其他用同一滤液作实验的同学的滤纸条上却色素分带明显。
其实验失败的原因最可能是。
（3）为了获得整齐又不重叠的四条色素带, 在画滤液细线时应注意：①②（4）如果没有丙酮和菠菜叶片, 要保证分离后的色素带清晰, 可以用来代替的最佳实验材料是A. 酒精和麦苗B. 酒精和大白菜C. 蒸馏水和大白菜D. 蒸馏水和麦苗（1）纸层析法（2）滤液细线没入层析液中（3）应画得细而直待上次凉干后再重复几次（4）A2. 下面是有关叶绿体色素的提取和分离实验的问题, 请回答:（1）实验中加入研钵内的丙酮的作用是；实验中加入研钵内的石英砂的作用是；实验中加入研钵内的碳酸钙的作用是。
叶绿体中色素的提取和分离
叶绿体中色素的提取和分离问题：（1）研磨时为什么加SiO2 和CaCO3?加入ＳｉＯ２目的是研磨充分，加入ＣａＣＯ３目的是保护色素，避免被酸性物质破坏（细胞内含有酸性物质，细胞结构被破坏后，叶绿体色素有可能和酸性物质直接接触）（2）研磨叶片时为什么加2mL丙酮？色素易溶于有机溶剂丙酮（3）研磨时为什么要迅速而充分？迅速：研磨过慢，色素有可能被破坏，充分：尽可能的把色素全部在叶片中释放出来（4）将研磨液过滤后的滤液收集到小试管中，为什么要用棉塞将试管口塞紧？内含丙酮，丙酮易挥发，塞紧可防止挥发（5）制备滤纸条时为什么要将纸条的一端剪去两角？层析时，滤纸条两侧边缘扩散较快，减掉两角后，扩散後的色素线可以呈现直线，便于观察（6）为什么要用培养皿盖在盛有层析液的烧杯上？层析液易挥发，这样可以防止挥发。
（7）为什么各种色素带的宽窄有差异？各种色素的含量不同导致色素带宽窄有别（8）实验结束后为什么要用肥皂将手洗干净？丙酮和乙醚有一定毒性（9）整个实验采用什么方法？纸层析法提取液和层析液都是有机溶剂，都能溶解色素。
作用不同：提取液是提取色素，层析液是分离色素。
成分不同：提取液一般用丙酮，层析液是由20份石油醚，2份丙酮和1份苯混合而成。
分离原理是叶绿体中的四种色素在层析液中的扩散速度不同，如果采用丙酮作为层析液的话各种色素分子在其中溶解度差别不大，扩散速度也不存在明显差异那么就没有办法达到分离各种色素的目的。
叶绿体中的色素都能溶解于有机溶剂中，如：丙酮（酒精）等。
所以可以用丙酮提取叶绿体中的色素。
叶绿体中的四种色素在层析液中的扩散速度不同，层析液的主要成分是石油醚，石油醚是一种脂溶性很强的有机溶剂，叶绿体中的四种色素在石油醚中的溶解度不同：溶解度最高的是胡萝卜素，它随石油醚在滤纸上扩散得最快；叶黄素和叶绿素a的溶解度次之；叶绿素b的溶解度最低，扩散得最慢。
这样，几分钟后，四种色素就在扩散过程中分离开来。
叶绿体色素提取和分离
对实验的反思和改进建议
在实验过程中，应严格控制实验 条件，确保实验结果的准确性和
可靠性。
在提取色素时，可以采用更温和 的方法，以减少对叶绿体的破坏，
提高提取效率。
可以尝试采用不同的分离方法， 以提高色素的分离效果和纯度。
THANKS FOR WATCHING
在叶绿体色素提取和分离实验中，可以采用分光光度法、色谱法等方法测定色素 含量。这些方法能够准确测量色素的浓度，进而评估提取效果。实验结果应提供 不同处理下叶绿体色素的含量数据，以便进行比较和分析。
叶绿体色素的纯度分析
总结词
叶绿体色素纯度是衡量提取物质量的重要指标，高纯度的色 素有利于后续实验和应用。
02 实验材料
实验材料的选择
选择新鲜的绿色植物
为了获取高纯度的叶绿体色素，应选 择新鲜、绿色的植物，如菠菜、豌豆 等。
选用适宜的溶剂
实验器材的准备
准备好实验所需的玻璃器皿、滤纸、 研钵、离心机等器材，确保其清洁度。
常用的溶剂有丙酮、乙醇等有机溶剂， 根据实验需求选择合适的溶剂。
实验材料的处理
植物材料的研磨
将新鲜植物材料剪碎后放入研钵 中，加入适量溶剂进行研磨，使 叶绿体充分释放。
过滤和离心
将研磨后的混合物过滤，去除残 渣，然后使用离心机将色素溶液 与残渣分离。
色素溶液的纯化
根据实验需求，可以采用不同的 方法对色素溶液进行纯化，如纸 层析、柱层析等。
实验材料的保存
溶剂的储存
01
有机溶剂应存放在阴凉、干燥的地方，避免阳光直射和高温。
详细描述
纯度分析可以通过色谱分析、光谱分析等方法进行。这些方 法能够检测色素中的杂质和污染物，并评估色素的纯度。实 验结果应提供色素纯度的数据，包括纯度百分比和杂质含量 等信息，以便了解提取物的质量。
叶绿体色素的提取和分离
⑵、分离色素 制备滤纸条：剪去两角－使扩散均匀，防止边
缘毛细现象
画滤液细线：直、细、浓(风干后重复数次）
层析液不能没及滤液细线：防止色素 溶于层析液 层析分离 加盖：防止挥发 洗手：丙酮有毒
类 胡 萝 卜 素
叶 绿 素
叶绿素 色素
叶绿素a
叶绿素b 叶黄素
（蓝绿色）
（黄绿色）
（黄色）
含量约占3/4 含量约占1/4
（3）细胞的代谢
——进行叶绿体色素的提取和分离
1、实验原理 提取：色素能溶解在有机溶剂中，不溶于水 如：丙酮溶液 无水乙醇 分离：色素在层析液中溶解度不同，使四种色素 随层析液在滤纸上扩散的速度不同而分离
2、实验用：称取
5g左右的鲜叶，剪碎，放 入研钵中。加少许的石英 砂（充分研磨）和碳酸钙 (保护叶绿素)与丙酮溶液。 在研钵中快速研磨。将研 磨液进行过滤。
类胡萝卜素 胡萝卜素 （橙黄色）
吸收可见 的太阳光 叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
类胡萝卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿体中色素的提取与分离实验
2.在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研 磨充分，有利于色素的提取；加少许碳酸钙 的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的 色素受到破坏。
3.分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细 线接触到层析液，这是因为色素易溶解在层 析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。
B．滤纸条上滤液细线会变粗而使色素太分散
C．色素会溶解在层析液中而使结果不明显
D．滤纸条上几种色素会混合起来
5．某人做叶绿体中色素分离实验时，使用的 是圆形滤纸，装置如下图。实验结束时在圆形 滤纸上形成四个同心色素圆环，则最内圈所呈 颜色为 （D）
6．叶绿体中色素经层析后，出现在滤 纸上扩散最宽的色素带是（A）,最窄的 色素带是 （C） , 最整齐的色素带是
（C）
A．叶绿素a C．胡萝卜素
B．叶绿素b D．叶黄素
7．叶绿体的色素能在滤纸条上彼此分 离开的原因是 （C）
A．色素提取液中的不同色素已分层 B．阳光的照射使不同的色素彼此分 开
C．滤纸对各种色素的吸附力不同 D．丙酮酸使色素溶解并彼此分离的 扩散速度不同
小结：在叶绿体色素的提取和分离实验中：
【实 验】
叶绿体中色素的提取和 分离
一、实验原理
1.叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂: 酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用 丙酮可提取叶绿体中色素。
2.色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的 色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快， 溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上 的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色 素分离。
五、实验讨论： 1．滤纸条上有几条不同颜色的色带？其排 序怎样？宽窄如何？这一说明了什么？
实验 叶绿体中色素的提取和分离
第三章
细胞的物质代谢
解析：观察表中A、B、C三个研钵的处理与
结果的关系。(1)因为A中未加CaCO3，使其中
的部分叶绿素受到破坏，所以溶液颜色为黄 绿色。(2)B中加入了SiO2和CaCO3，研磨出的
叶绿素等色素不能溶解于蒸馏水中，故溶液
几乎无色。(3)C中加入了SiO2和CaCO3，研磨 出的叶绿素等色素能溶解于有机溶剂酒精中, 故溶液为深绿色。
A．①②④
C．③④
B．①③④
D．①②
第三章
细胞的物质代谢
解析：选A。实验中收集到的色素滤液为淡绿
色，说明单位体积滤液中叶绿素含量少。其中
原因可能是①实验材料 含叶绿素少；②操作中研磨不充分、不迅速；
③乙醇加入量太多；④研磨时未加CaCO3。
第三章
细胞的物质代谢
3．在圆形滤纸的中央，滴上绿叶中的色素滤 液进行色素分离，可看到近似同心环状的四 个色素圈，排在最外的一个呈( A．蓝绿色 C．黄色 B．黄绿色 D．橙黄色 )
可能是选材不正确，即使是黄化叶片也应该
有色素带，主要是叶黄素和胡萝卜素。
第三章
细胞的物质代谢
2．某同学在做提取叶绿体中色素的实验时，
收集到的色素提取液为淡绿色。分析产生该
结果的可能原因是( ) ①研磨不充分，色素未能充分提取出来
②乙醇加入量太多，稀释了色素提取液
③乙醇加入量太少，色素未提取出来 ④未加CaCO3粉末，叶绿素分子已被破坏
解析：选D。因为呈橙黄色的胡萝卜素扩散的
速度最快，因此排在最外一圈。
第三章
细胞的物质代谢
4．下列哪组是影响叶绿体色素分离效果的关 键因素( ①选取植物 线 ) ②研磨 ③过滤 ④画滤液细
叶绿体中色素的提取和分离
1．实验原理(1)提取：绿叶中的色素溶于有机溶剂而不溶于水，可用无水乙醇等有机溶剂提取绿叶中的色素。
(2)分离：各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢，从而使各种色素相互分离。
2．实验步骤选材→提取色素→制备滤纸条→画滤液细线→分离色素→观察结果。
3．实验分析(1)需要选用新鲜绿色叶片作实验材料的原因是什么？提示：新鲜绿色叶片中色素含量高，从而使溶液中色素含量较高，实验效果明显。
(2)提取色素时，需加入哪些物质？它们的作用分别是什么？提示：无水乙醇：提取绿叶中的色素。
CaCO3：防止研磨过程中色素被破坏。
SiO2：使研磨更充分。
(3)若色素提取液呈现淡绿色，可能的原因有哪些？提示：①叶片颜色浅；②绿叶不新鲜；③研磨不充分；④未加入CaCO3或加入量太少；⑤加入的无水乙醇量太大；⑥研磨时间过长，部分色素被破坏。
(4)制备滤纸条时，为什么要剪去两角？提示：防止层析液沿滤纸边缘扩散过快，从而导致色素带分离不整齐。
(5)为什么滤液细线要重复画，且线要细、直、齐？提示：重复画线是为了增加色素的浓度，使分离出的色素带清晰分明。
画线细、直、齐是为了防止色素带之间出现重叠。
(6)层析时，为什么不能让滤液细线触及层析液？提示：滤纸条上滤液细线触及层析液，会使滤液细线上的色素溶解于层析液中，滤纸条上得不到色素带，使实验失败。
(7)根据层析后得到的如下结果填写角度一以基础判断的形式，考查实验选材及试剂的作用及实验操作1．(2013·海南高考)关于叶绿素提取的叙述，错误的是()A．菠菜绿叶可被用作叶绿素提取的材料B．加入少许CaCO3能避免叶绿素被破坏C．用乙醇提取的叶绿体色素中无胡萝卜素D．研磨时加入石英砂可使叶片研磨更充分解析：选C菠菜绿叶含大量的色素，易于研磨，是提取色素的良好材料。
加入少许CaCO3的目的是中和液泡破坏后释放的酸性物质，防止研磨中色素被破坏。
叶绿体中的色素有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素等，四种色素均溶于乙醇。
叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素是位于植物叶绿体中的一类有机化合物，包括叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素等。
提取和分离叶绿体色素的方法如下：
1. 手工研磨法：将植物叶片取出后，加入适量的减水醇（如乙醇或甲醇），用研钵或机械研磨器搅拌研磨，使细胞破碎释放叶绿体色素。
然后通过离心将悬液离心分离出叶绿体色素。
2. 酒精沉淀法：将植物叶片切碎后加入适量的酒精溶液，用撇去悬浮物，然后再用滤纸滤除酒精中的杂质。
过滤后的溶液可以进行酒精沉淀，即加入适量的酒精悬浮叶绿体色素，并通过离心分离出沉淀。
3. 层析法：将植物叶片经过研磨和过滤后得到的色素溶液，可以通过色谱柱层析进行分离。
常用的色谱柱包括硅胶柱、纸层析柱和高效液相色谱柱等。
通过向色谱柱中加入适当的溶剂系统，可以将叶绿体色素按照其亲水性和亲油性进行分离。
4. 液-液萃取法：将植物叶片研磨并与适量的有机溶剂（如二氯甲烷、苯或正己烷）混合，通过摇晃、振荡或搅拌等方法，使叶绿体色素在有机相和水相之间分配。
随后，分离有机相并蒸干，即可得到叶绿体色素。
这些方法可以根据实验需求和设备条件选择使用，提取和分离叶绿体色素可以用于进一步的分析和研究。
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三 实验器材
•
菠菜、研钵、漏斗、剪刀、滴灌、培养皿(直 径11cm）、康维皿或平底短玻璃管、圆形滤纸、 95%乙醇、石英砂、碳酸钙粉、推动剂：丙酮： 笨（10：2：1）比例配制（体积比）
四、实验步骤
• 1.叶绿体色素的提取
• （1）取菠菜或其他植物新鲜叶片4~5片（2g左右），洗净，擦干去掉 中脉减碎，放入研钵中。 • （2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2~3mL95%乙醇，研磨至 糊状，再加10~15mL95%乙醇，离心35分钟，提取上清液过滤于三角 瓶中，残渣用10mL95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。 • （3）如无新鲜叶片，也可用事先制好的叶干粉提取。取新鲜叶片 （以菠菜叶为最好），先用105℃杀青，再在80℃下烘干，研成粉末， 密闭贮存。用时称叶粉2g放入小烧杯中，加95%乙醇20~30mL浸提， 并随时搅动。待乙醇呈深绿色时，滤出浸提液备用。
• •
2.叶绿体色素的分离 （1）取圆形定性滤纸一张（直径11cm），在其中心戳一圆形小孔（直径约3mm）， 另取一张滤纸条（5cm×1.5cm），用滴管吸取乙醇叶绿体色素提取液，沿纸条的长度 方向涂在纸条的一边，使色素扩散的宽度限制在0.5cm以内，风干后，再重复操作数次， 然后沿长度方向卷成纸捻，使浸过叶绿体色素溶液的一侧恰在纸捻的一端。 （2）将纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中，使与滤纸刚刚齐平（勿突出）。 （3）在培养皿内放一康维皿，在康维皿中央小室中加入推动剂，把带有纸捻的圆形 滤纸平放在康维皿上，使纸捻下端浸入推动剂中。迅速盖好培养皿。此时，推动剂借 毛细管引力顺纸捻扩散至圆形滤纸上，并把叶绿体色素向四周推动，不久即可看到各 种色素的同心圆环。
叶绿体色素的提取与分离
一、实验目的
了解和掌握叶绿体色素提取、分离的基本原理和方法。
Comp绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素
（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。它们与类囊体膜相结合成为
色素蛋白复合体。这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故
可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。提取液可用色谱分析的原理加 以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推 动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同 的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色 素分开。
五.注意事项
分离色素用的圆形滤纸，在中心打得小圆孔 ，周围必须整齐，否则分离的色素不是一个同心 圆。
六、思考题
• 1、研磨提取叶绿素时加入CaCO3有什么作用？ • 2、用不含税的有机溶剂如无水乙醇无水丙酮等提取植物 材料，特别是干材料的叶绿体色素往往效果不佳，原因何 在？
• •
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如无康维皿也可在培养皿中放入一平底短玻璃管，以盛装推动剂。所用培养皿底、盖 的直径应相同，且应略小于滤纸直径，以便将滤纸架在培养皿边缘上。
（4）当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，即可看到分离的各种色素： 叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。用铅笔 标出各种色素的位置和名称。