[史上最强生物课件]动物细胞工程—2 2010.8
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第九章 动物细胞工程概述(全)课件
二、动物细胞工程的主要领域及意义
❖ （一）单克隆抗体与现代医学 ❖ （二）动物胚胎工程与畜牧业 ❖ （三）动物细胞规模化培养与现代医药业 ❖术的核心是用骨髓瘤细胞 (myeloma cell)与经特定抗源免疫刺激的B淋 巴细胞(antigen stimulated B lymphoblast)融 合得到杂交瘤细胞(hybridoma cell)，杂交瘤 细胞既能象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖， 又具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力。因 此，单克隆抗体技术又称为杂交瘤技术 (hybridoma technology)。
第九章
动物细胞工程
动物细胞工程
第一节 动物细胞工程概述
❖ 一、动物细胞工程发展简史 ❖ 二、动物细胞工程的主要领域及意义 ❖ 三、动物细胞特性 ❖ 四、动物细胞培养的环境与营养要求
一、动物细胞工程发展简史
❖ （一）融合现象的发现 ❖ （二）动物组织细胞培养技术的建立 ❖ （三）细胞融合技术的建立和杂交瘤技术的诞生 ❖ （四）动物克隆技术的建立
❖ 1997年2月，英国科学家Wilmut等在世界权 威杂志《Nature》上首例报道了世界第一只 克隆羊的诞生。它的贡献在于：实验证明了 哺乳动物高度分化的细胞同样含有全套遗传 信息，亦能在一定条件下发育成动物个体， 进一步证明了动物细胞的全能性。
多利诞生的技术路线：
取6岁供体羊乳腺细胞 — 血清饥饿培养 使细胞处于G0期经GnRH处理取卵细胞 — 移去 卵细胞的细胞核将培养的乳腺细胞的核移植到 去核的卵细胞中重组细胞植入第一受体羊输卵 管中培养至胚泡期(桑椹胚)桑椹胚再移植入第 二受体羊子宫内发育至分娩。
（四）动物克隆技术的建立
❖ 1891，Heape等人首次报道了家兔胚胎移植成 功的结果，他们把安哥拉家兔胚胎移植给比 利时兔，得到了4只安哥拉家兔。
高中生物动物细胞工程课件
2.3体细胞核移植技术的应用前景：
1、在畜牧业中可以加 速家畜遗传改良的进程 2、保护濒危物种 3、医药卫生领域生产 医用蛋白质及组织器官 的移植 4、了解胚胎发育和衰老过程；追 踪研究疾病的发展过程和治疗疾病
2.4体细胞核移植技术存在的问题：
思考与探究
2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？ 动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化 的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个 体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组 织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的 动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细 胞，使其分化成所需要的组织或器官。
3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是 对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？
绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少 量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母 细胞。 此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些 行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动 物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同， 其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同， 从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物100% 的复制。
2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10 代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 培养的动物细胞一般当传代至10～50代 左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其 细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以 内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因 此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞 正常的遗传基础，通常采用传代10代以内 的细胞。
3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（Lucinda） 的奶牛，年产奶量为30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前 世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶 量年平均水平仅为3～4 t。 （1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。
(讲课)动物细胞工程课件
8、如何理解原代培养和传代培养？
上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，
之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养。
9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？
不都能。
10、有些为何能一直传下去？
核型改变，遗传物质发生突变，丧失接触抑制 特性，突破细胞寿命极限，朝着癌细胞方向发展。
11、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？
结：
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
为什么用胰蛋白酶处理？
剪碎用胰蛋白酶处理
单个细胞 原代培养特点：细胞贴壁、 加培养液稀释 接触抑制。 细胞悬浮液 传代10代以内，遗传物质不改 原代培养 变，保持正常二倍体核型。 转入培养瓶
传代10-50代左右，增长缓慢 以至于完全停止，部分细胞核 型可能发生变化（遗传物质可 能改变）。 继续传代培养少部分细胞获得 不死性，细胞突变，遗传物质 已经改变，等同于癌细胞。
4、动物细胞的全能性和植物细胞的全能性一样吗？
不一样。
1）、高度分化的植物细胞仍然有发育成完整植株的能力，保持
着细胞全能性。细胞全能性是指已经分化的细胞，仍然具有发
育成完整新个体的潜能。 2）、高度分化的动物细胞，从整个细胞来说，它的细胞全能性 受到限制。但是，它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为细 胞核内仍有保持该物种遗传特性的全套遗传物质。只不过植物 细胞的全能性更容易表达出来，而动物细胞的全能性的表达能 力不如植物细胞。因为动物细胞经过多次分裂后细胞质的成分 已经发生了改变，激发细胞全能性表达的物质已经基本消失 。 我们说，高度分化的动物细胞核具有全能性。
动物细胞工程
◆动物细胞培养 ◆动物体细胞核移植技术和克隆动物 ◆动物细胞融合 ◆单克隆抗体制备
知识回顾：
动物细胞工程ppt课件
4.气体环境 ①气体的组成及作用 95%空气（O2）：细胞代谢所必需
5%CO2：维持培养液的pH ②培养装置: 培养皿或松盖培养瓶 置于 CO2培养箱中进行培养
（含有95%空气和5%CO2的混合气体）
培养皿
培养瓶
CO2培养箱
二、动物细胞培养的过程
①培养前用什么方法分散成单个细 胞？ ②体外培养动物细胞有哪些类型？ ③什么是细胞贴壁？什么是接触抑 制？ ④什么是原代培养和传代培养？ ⑤为什么要进行分瓶培养？怎么处 理？ ⑥动物细胞培养与植物组织培养有 什么相同之处与不同之处？
像建立骨髓库一样，有研究团队正在尝试建立HLA（Human Leukocyte Antigen，人类白细胞抗原）多态性丰富的iPS细胞库，可以为 需要的人找到HLA匹配度较高的iPS细胞，这样不仅可以节省时间、成本 ，还能减轻异体干细胞移植后发生的免疫排斥反应。
二、拓展应用 现在关于iPS细胞的研究正在不断深入。请你从以下两个方面来查阅
基本营养：水、无机盐、有机碳源、有机氮源 特殊物质：维生素、血清
血清
含有尚未研究清楚的细胞所需的营养物质 营养基构成：合成培养基 + 血清等一些天然成分
将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成 的培养基。
培养基的类型：固体培养基 or 液体培养基（培养液）
一、动物细胞培养的条件 2.无菌、无毒的环境 措施1: 灭菌处理——对象？ 培养液和所有培养用具 措施2: 操作在无菌环境下进行。 措施3: 培养液中适量添加 抗生素 。——抑制细菌生长 措施4：定期更换培养液——目的？清除代谢物，防止细胞代谢物积累对
【思考】动物细胞的整个培养过程中可能多次用到胰蛋白酶或胶原蛋白酶？
第一次使用的目的是使组织细胞分散开；
5%CO2：维持培养液的pH ②培养装置: 培养皿或松盖培养瓶 置于 CO2培养箱中进行培养
（含有95%空气和5%CO2的混合气体）
培养皿
培养瓶
CO2培养箱
二、动物细胞培养的过程
①培养前用什么方法分散成单个细 胞？ ②体外培养动物细胞有哪些类型？ ③什么是细胞贴壁？什么是接触抑 制？ ④什么是原代培养和传代培养？ ⑤为什么要进行分瓶培养？怎么处 理？ ⑥动物细胞培养与植物组织培养有 什么相同之处与不同之处？
像建立骨髓库一样，有研究团队正在尝试建立HLA（Human Leukocyte Antigen，人类白细胞抗原）多态性丰富的iPS细胞库，可以为 需要的人找到HLA匹配度较高的iPS细胞，这样不仅可以节省时间、成本 ，还能减轻异体干细胞移植后发生的免疫排斥反应。
二、拓展应用 现在关于iPS细胞的研究正在不断深入。请你从以下两个方面来查阅
基本营养：水、无机盐、有机碳源、有机氮源 特殊物质：维生素、血清
血清
含有尚未研究清楚的细胞所需的营养物质 营养基构成：合成培养基 + 血清等一些天然成分
将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成 的培养基。
培养基的类型：固体培养基 or 液体培养基（培养液）
一、动物细胞培养的条件 2.无菌、无毒的环境 措施1: 灭菌处理——对象？ 培养液和所有培养用具 措施2: 操作在无菌环境下进行。 措施3: 培养液中适量添加 抗生素 。——抑制细菌生长 措施4：定期更换培养液——目的？清除代谢物，防止细胞代谢物积累对
【思考】动物细胞的整个培养过程中可能多次用到胰蛋白酶或胶原蛋白酶？
第一次使用的目的是使组织细胞分散开；
《动物细胞工程》课件
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利用动物细胞工程可以将外源基因导入动物细胞，培育出转基因动物，提高其生产性能和抗病能力。
转基因技术
动物细胞工程可用于生产疫苗，通过培养动物细胞并表达病毒抗原，制备出高效、安全的动物疫苗。
动物疫苗
动物细胞工程可以用于构建生物反应器，通过大规模培养动物细胞生产各类蛋白质和生物活性物质。
生物反应器
选择适当的细胞
通过物理、化学或生物方法诱导细胞融合。常用的物理方法有电融合和激光融合，化学方法有聚乙二醇（PEG）诱导融合，生物方法有病毒诱导融合。
诱导细胞融合
通过特定的筛选和鉴定方法，从大量细胞中筛选出融合细胞，并进行鉴定。常用的筛选和鉴定方法有荧光染色法、免疫学检测法和分子生物学检测法等。
筛选和鉴定融合细胞
技术难度大
动物细胞工程的实施需要高超的技术水平和精细的操作技巧，如何提高技术成熟度和降低成本是亟待解决的问题。
伦理和法律问题
动物细胞工程的实践涉及到伦理和法律问题，如人道关怀、动物权益保护等，需要在实践中严格遵守相关法规和伦理准则。
安全性和有效性问题
动物细胞工程产品的安全性和有效性需要经过严格的评估和验证，以确保其不会对人类健康和生态环境造成不良影响。
1970年代
随着技术的不断进步和应用领域的拓展，动物细胞工程在医学、农业、工业等领域得到广泛应用。
1990年代至今
02
动物细胞培养技术
细胞具有增殖和分化的能力
动物细胞具有自我复制和分化的能力，可以在适宜的环境下生长和繁殖。
03
动物细胞融合技术
选择要进行融合的细胞，通常选择同种或同种的细胞进行融合。
感谢观看
THANKS
基因转移技术
02
动物细胞工程(完整ppt课件
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动物细胞培养过程
动物胚胎或幼龄动
胰蛋白酶
加培养液
单个细胞
细胞
物的组织、器官 剪碎
制成 悬浮
液
细胞部系分细胞“癌变”，细胞株
遗传物质改变，无 限传代
养原 代 培
壁细 胞 贴
细胞
50代细胞 剥离、分瓶
10代 细胞
动物细胞培养不能 最终培养成动物体
传代培养
.
动物细胞生长特性
细胞贴壁：
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。
3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细 胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？
不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞 核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA） 来自受体卵母细胞
4.动物克隆实例很多，为何多莉就举世闻名呢？
在1997年2月英国罗斯林研究所维尔穆特博士科研组 公布体细胞克隆羊“多莉”培育成功之前，胚胎细胞核 移植技术已经有了很大的发展。实际上，“多莉”的克 隆在核移植技术上沿袭了胚胎细胞核移植的全部过程， 但这并不能减低“多莉”的重大意义，因为它是世界上 第一例经体细胞核移植出生的动物，是克隆技术领域研 究的巨大突破。这一巨大进展意味着：在理论上证明了，
程
妊娠、出生
克隆羊多利
.
思考题
１、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之 前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？
为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用 价值的动物提供的细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10 代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型， 未发生突变
.
脱组 分织
化
植物细胞B
胞 促进融合 壁
的方法？
动物细胞培养过程
动物胚胎或幼龄动
胰蛋白酶
加培养液
单个细胞
细胞
物的组织、器官 剪碎
制成 悬浮
液
细胞部系分细胞“癌变”，细胞株
遗传物质改变，无 限传代
养原 代 培
壁细 胞 贴
细胞
50代细胞 剥离、分瓶
10代 细胞
动物细胞培养不能 最终培养成动物体
传代培养
.
动物细胞生长特性
细胞贴壁：
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。
3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细 胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？
不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞 核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA） 来自受体卵母细胞
4.动物克隆实例很多，为何多莉就举世闻名呢？
在1997年2月英国罗斯林研究所维尔穆特博士科研组 公布体细胞克隆羊“多莉”培育成功之前，胚胎细胞核 移植技术已经有了很大的发展。实际上，“多莉”的克 隆在核移植技术上沿袭了胚胎细胞核移植的全部过程， 但这并不能减低“多莉”的重大意义，因为它是世界上 第一例经体细胞核移植出生的动物，是克隆技术领域研 究的巨大突破。这一巨大进展意味着：在理论上证明了，
程
妊娠、出生
克隆羊多利
.
思考题
１、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之 前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？
为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用 价值的动物提供的细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10 代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型， 未发生突变
.
脱组 分织
化
植物细胞B
胞 促进融合 壁
的方法？
动物细胞工程ppt
二、单克隆抗体
（一）获得抗体的传统方法
2、缺点：
产量低，纯度低，特异性差。
把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。
人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
单击添加副标题
专题2 细胞工程
植物体细胞杂交的意义：
打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种。
一、动物细胞融合
细胞融合是正常的生命活动。 两个细胞正在融合 受精作用
(一)动物细胞融合的概念
02
03
01
04
添加标题
细胞A
添加标题
物理法 化学法
我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
添加标题
细胞B
添加标题
杂种细胞 灭活的病毒
ห้องสมุดไป่ตู้
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程
细胞核
病毒颗粒
细胞核
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性）
两个核的融合是在杂种细胞第一次有丝分裂时进行的
01
03
02
04
05
(三)动物细胞融合的应用
（一）获得抗体的传统方法
2、缺点：
产量低，纯度低，特异性差。
把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。
人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
单击添加副标题
专题2 细胞工程
植物体细胞杂交的意义：
打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种。
一、动物细胞融合
细胞融合是正常的生命活动。 两个细胞正在融合 受精作用
(一)动物细胞融合的概念
02
03
01
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添加标题
细胞A
添加标题
物理法 化学法
我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
添加标题
细胞B
添加标题
杂种细胞 灭活的病毒
ห้องสมุดไป่ตู้
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程
细胞核
病毒颗粒
细胞核
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性）
两个核的融合是在杂种细胞第一次有丝分裂时进行的
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(三)动物细胞融合的应用
动物细胞工程(优秀版)ppt课件
业后一起到广州闯天下。
14
洁心与大熊在进入高中的第一天相识，两人都是大个子，分座位的时候，老师让男女生各排一队，一队一个次第走到座位上，最后一排有六张桌子，洁心谦虚地站到一个比自己矮一点 点的女生前面，与大熊成了同桌
他们一个15岁，一个16岁，花开的季节。初学立体几何，大熊用小纸壳手工助洁心理解立体与平面的迥异，地理考试这对同桌囊括了班里两个第一，大熊94分，第一名，洁心47分， 倒数第一。大熊不知怎么就让无论如何都搞不懂季风洋流方向的洁心尤如神助，醍醐灌顶。洁心盼着上作文课，老师会朗读几篇上榜佳作，每每读到洁心的作文，大熊会看洁心一眼， 好像在说我知道这一篇是你写的，洁心也会漫不经心瞥一眼，故作平淡地回复嗯，是我。不知从何时起，他们走进彼此的心。大学毕业的第二年，他们结了婚，第三年，有了一个可爱 的孩子。洁心的日常开始以大熊小熊为中心，辞去优渥工作，成为家庭主妇，曾经的诗情画意干练要强变成琐碎的柴米油盐酱醋茶，窈窕淑女变成自带三层救生圈的黄脸婆，大熊成为 业内认可的职业经理人，小熊也取得全国乃至世界各大数学竞赛计算机竞赛的各色奖牌。被大熊小熊的光环映着，洁心日复一日忙忙活活庸庸碌碌地快乐着。人和人之间的比较，是丢 失快乐最简单的方式。昔日的同学大多事业有成，成为各自领域的精英，而洁心日渐落伍，好像被抛弃在另一个时代。比较也是客观认识自己最直接的方式。失落带来思考，洁心终于 意识到这十几二十年的岁月她把自己搞丢了。洁心想重回轨道却无力又无助，知识陈旧，书生意气，与社会严重脱节，抱怨，她偏执地认为大熊消耗了她的青春改写了她的命运，而人 到中年的大熊再不会像过去只要听到洁心呼唤，马上放下全世界飞奔而来，事业有成的他也不再对洁心的发号施令全盘言听计从，洁心觉得自己失去了整个世界。洁心没有意识到很多 时候大熊只是在迁就她，不和她计较，也没有意识到一个企业高管若凡事对一个家庭主妇唯命是从究竟是好事还是坏事，她越来越暴躁，越来越容易愤怒，家庭气氛像一只随时会被引 爆的火药桶，说不定什么琐事就会成为导火索。大熊忙碌粗心，洁心心灰意冷，俩人之间有了罅隙，有了不满，洁心不止一次发怒时大喊分手。洁心最脆弱的时候，大熊没有及时给予 支持和关注，洁心撕心裂肺的难过，大熊忙于工作，浑然不觉，洁心认为大熊不再爱自己，痴心错付，悔不当初，对自己的婚姻感到绝望，她给自己7天的时间思考，要不要走出这曾 欣欣然冲进来的围城。一位生性爱冒险的作家本杰明，无法走出半年前的丧妻之痛，带着一个青春期一个幼儿期的两个孩子，生活一团糟。本杰明放弃了专栏写作，拒绝开始新感情， 欲带着儿女换一个崭新环境开始新生活，于是他买了新房子，未曾想这房子却是一个经济窘迫、难以维系正常运转的动物园……本杰明走投无路之时，发现妻子给留下的“冒险基金”， 妻子自知无法常相陪伴，竭尽所能给丈夫最后的成全，这份爱让人唏嘘汗颜。本杰明给一双儿女讲述他和妻子初次见面，一见钟情，自惭形秽，踌躇不前时，自己骨子里天生的冒险精 神推着自己抓住了这份非你莫属的爱情。看着本杰明和一双儿女对着阴阳相隔的妻子、妈妈，互诉衷肠，洁心百感交集，泣不成声，她想世人听过见过无数美丽的爱情故事，但都是别 人的，现实的生活总会有种种难言的苦楚不如意，“万物皆有裂痕，那是光照进来的地方。”接受人和事的缺憾不完美，才是真实的生活。发起冷战的第三天，洁心不再继续臆想徒生 闷气，她决定给彼此一个机会，和大熊进行了一次推心置腹长谈，长谈的结果是洁心庆幸失而复得的婚姻和爱情，大熊说洁心没失去过，自己一直都在，从未离开，只是不该忽视了洁 心的内心需求。洁心开始找回自己的人生旅程，列清单，定目标，开始学习、锻炼、尝试，由内而外改变自己，每晚洁心大熊两人瑜伽对望，相伴练习腹肌撕裂。假期里，大熊更多地 陪伴洁心，两人相濡以沫走遍千山万水，洁心开始一展所长，用文字记录下他们的所见所闻，所感所悟。人到中年，两人相互珍惜，共同成长，生命和爱情焕发出绚丽光彩，照亮了彼 此的人生，很多小伙伴说因为他们，自己又开始相信并渴望爱情了。一日，，麦克是校园篮球明星，他本可以因篮球特长被全额奖学金保送进大学，但因女友怀孕他放弃了关键的冠军 赛而向女友求婚。20年后，麦克穷困潦倒，事业家庭均失意，戏剧性地他重返了17岁，仍是青春闪耀，17岁的他遇到现实中的一对儿女，中年的妻子，一切重来，当他又站在可以延 续辉煌改变人生命运的关键时刻，他意识到妻子和一双儿女才是他人生最宝贵的财富，依旧做出了和20年前相同的选择。当麦克和妻子紧紧相拥时，麦克又恢复了中年的模样，妻子说，
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洁心与大熊在进入高中的第一天相识，两人都是大个子，分座位的时候，老师让男女生各排一队，一队一个次第走到座位上，最后一排有六张桌子，洁心谦虚地站到一个比自己矮一点 点的女生前面，与大熊成了同桌
他们一个15岁，一个16岁，花开的季节。初学立体几何，大熊用小纸壳手工助洁心理解立体与平面的迥异，地理考试这对同桌囊括了班里两个第一，大熊94分，第一名，洁心47分， 倒数第一。大熊不知怎么就让无论如何都搞不懂季风洋流方向的洁心尤如神助，醍醐灌顶。洁心盼着上作文课，老师会朗读几篇上榜佳作，每每读到洁心的作文，大熊会看洁心一眼， 好像在说我知道这一篇是你写的，洁心也会漫不经心瞥一眼，故作平淡地回复嗯，是我。不知从何时起，他们走进彼此的心。大学毕业的第二年，他们结了婚，第三年，有了一个可爱 的孩子。洁心的日常开始以大熊小熊为中心，辞去优渥工作，成为家庭主妇，曾经的诗情画意干练要强变成琐碎的柴米油盐酱醋茶，窈窕淑女变成自带三层救生圈的黄脸婆，大熊成为 业内认可的职业经理人，小熊也取得全国乃至世界各大数学竞赛计算机竞赛的各色奖牌。被大熊小熊的光环映着，洁心日复一日忙忙活活庸庸碌碌地快乐着。人和人之间的比较，是丢 失快乐最简单的方式。昔日的同学大多事业有成，成为各自领域的精英，而洁心日渐落伍，好像被抛弃在另一个时代。比较也是客观认识自己最直接的方式。失落带来思考，洁心终于 意识到这十几二十年的岁月她把自己搞丢了。洁心想重回轨道却无力又无助，知识陈旧，书生意气，与社会严重脱节，抱怨，她偏执地认为大熊消耗了她的青春改写了她的命运，而人 到中年的大熊再不会像过去只要听到洁心呼唤，马上放下全世界飞奔而来，事业有成的他也不再对洁心的发号施令全盘言听计从，洁心觉得自己失去了整个世界。洁心没有意识到很多 时候大熊只是在迁就她，不和她计较，也没有意识到一个企业高管若凡事对一个家庭主妇唯命是从究竟是好事还是坏事，她越来越暴躁，越来越容易愤怒，家庭气氛像一只随时会被引 爆的火药桶，说不定什么琐事就会成为导火索。大熊忙碌粗心，洁心心灰意冷，俩人之间有了罅隙，有了不满，洁心不止一次发怒时大喊分手。洁心最脆弱的时候，大熊没有及时给予 支持和关注，洁心撕心裂肺的难过，大熊忙于工作，浑然不觉，洁心认为大熊不再爱自己，痴心错付，悔不当初，对自己的婚姻感到绝望，她给自己7天的时间思考，要不要走出这曾 欣欣然冲进来的围城。一位生性爱冒险的作家本杰明，无法走出半年前的丧妻之痛，带着一个青春期一个幼儿期的两个孩子，生活一团糟。本杰明放弃了专栏写作，拒绝开始新感情， 欲带着儿女换一个崭新环境开始新生活，于是他买了新房子，未曾想这房子却是一个经济窘迫、难以维系正常运转的动物园……本杰明走投无路之时，发现妻子给留下的“冒险基金”， 妻子自知无法常相陪伴，竭尽所能给丈夫最后的成全，这份爱让人唏嘘汗颜。本杰明给一双儿女讲述他和妻子初次见面，一见钟情，自惭形秽，踌躇不前时，自己骨子里天生的冒险精 神推着自己抓住了这份非你莫属的爱情。看着本杰明和一双儿女对着阴阳相隔的妻子、妈妈，互诉衷肠，洁心百感交集，泣不成声，她想世人听过见过无数美丽的爱情故事，但都是别 人的，现实的生活总会有种种难言的苦楚不如意，“万物皆有裂痕，那是光照进来的地方。”接受人和事的缺憾不完美，才是真实的生活。发起冷战的第三天，洁心不再继续臆想徒生 闷气，她决定给彼此一个机会，和大熊进行了一次推心置腹长谈，长谈的结果是洁心庆幸失而复得的婚姻和爱情，大熊说洁心没失去过，自己一直都在，从未离开，只是不该忽视了洁 心的内心需求。洁心开始找回自己的人生旅程，列清单，定目标，开始学习、锻炼、尝试，由内而外改变自己，每晚洁心大熊两人瑜伽对望，相伴练习腹肌撕裂。假期里，大熊更多地 陪伴洁心，两人相濡以沫走遍千山万水，洁心开始一展所长，用文字记录下他们的所见所闻，所感所悟。人到中年，两人相互珍惜，共同成长，生命和爱情焕发出绚丽光彩，照亮了彼 此的人生，很多小伙伴说因为他们，自己又开始相信并渴望爱情了。一日，，麦克是校园篮球明星，他本可以因篮球特长被全额奖学金保送进大学，但因女友怀孕他放弃了关键的冠军 赛而向女友求婚。20年后，麦克穷困潦倒，事业家庭均失意，戏剧性地他重返了17岁，仍是青春闪耀，17岁的他遇到现实中的一对儿女，中年的妻子，一切重来，当他又站在可以延 续辉煌改变人生命运的关键时刻，他意识到妻子和一双儿女才是他人生最宝贵的财富，依旧做出了和20年前相同的选择。当麦克和妻子紧紧相拥时，麦克又恢复了中年的模样，妻子说，
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例如花粉、病菌、病毒等。有时自身的组 织或细胞也会成为抗原，如癌细胞等。
抗原决定簇：
抗原表面具有的某 些特定的化学基团， 能决定抗原特异性， 是免疫细胞识别抗 原的重要依据。 各种抗原的决定簇 数目不同，同一抗 原的决定簇可能有 多种。
⑵什么是抗体？由何种细胞产生？主要分布在哪 里?起何作用？
当机体受到抗原刺激剂后由效应B细胞（浆细 胞）产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的 具有免疫功能的球蛋白——抗体。 抗体分布于血清中，也分布于组织液及外分 泌液中。
每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一， 特异性强的抗体。 如果利用单个B淋巴细胞进行无性繁殖（克
隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生
出化学性质单一、特异性强的抗体——单克隆抗
体。
在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞 能无限增殖形成细胞群吗？ 什么样的细胞能够在体外无限增殖呢？ ——肿瘤细胞！
关 键 一 步
骨髓瘤
问题: 在培养体系中, 有4种细胞. B细胞、瘤细胞,和杂交细胞。 我们还是拿不到McAb,怎么办? 筛选！筛出杂交瘤细胞。怎么筛? 又是一个思路问题。
McAb
免疫 经过免疫的 注射抗原 B淋巴细胞
骨髓瘤 细胞
单 克 隆 抗 体 的 制 备 过 程 ：
诱导细胞融合
动物 细胞 融合 技术 动物 细胞 培养 技术 杂交细胞 筛选 杂交瘤细胞 筛选 特异性杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 杂交瘤细胞系 提取 单克隆抗体
因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和
脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合
⑶动物细胞融合的原理：细胞膜的流动性
正在融合的鸡 血细胞
正在融合的
淋巴细胞与骨髓瘤细胞
把两个不同的动物 细胞放在一起，用灭活 的病毒处理细胞，它们 先发生质融合，再出现 核融合，进而形成杂交 细胞。 融合后的杂交细胞 经过有丝分裂后仍能形
• 核移植与克隆动物：供体、受体、核移植方法、 克隆动物的方法、克隆动物的遗传特性、应用
• 动、植物细胞工程的比较：植物组培技术与动物 细胞培养技术、植物体细胞杂交技术与动物细胞 融合技术
1.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生 产破伤风杆菌的抗体实验方案 A ⑴该实验方案的
目是 制备单克隆抗体 ；
⑵A是从小鼠的脾脏中取 B细胞 得_______,该细胞能够 产生 专一抗体 ； 细胞融合 ⑶图中B为________过程，
骨髓瘤细胞 B 杂交瘤细胞
C 足够数量的细胞群
体外培养 注射到
灭活病毒 常用_________作为诱导剂 小鼠腹腔 双亲细胞 ，该细胞继承___________的遗传特性，既能 无限增殖 分泌专一抗体 __________,又能___________ 。
荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖
科勒 米尔斯坦 如果把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的 骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞既能大 量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。
3.制备单克隆抗体的过程
⑴如何得到B淋巴细胞？
⑵如何诱导融合？
加入聚乙二醇（PEG）
⑶细胞两两融合后，有哪 些类型？ B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤 ⑷如何筛选出杂交瘤细胞？ 单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第 一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特 异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法 是不相同的。 ①首先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞
5.培养动物细胞需要哪些条件？
液体、营养物质（血清）、 PH、温度、气体、无菌等 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的 组织，将它分散成单个细胞，然后放在适 宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
动物组织块 幼龄动物的器官组织；动物胚胎
胰蛋白酶处理分散成单个细胞
加入培养液
细胞贴壁
接触抑制
细胞悬液
（2）克隆动物以表现早衰、生理缺 陷等健康问题
1970年，有两位科学家
做了一个著名的实验：
人—鼠细胞融合的实验， 以证明细胞膜上的蛋白 质分子是运动的。 人—鼠细胞是怎样实 现融合的？动物细胞融合 有什么实践意义呢？
三、动物细胞融合与单克隆抗体 1.细胞融合： 是指两个或两个以上的细胞融合为一个细胞 的过程。 ⑴自然发生： 受精卵 ⑵人工诱导： 利用诱导剂诱导动物细胞融合 诱导因素：聚乙二醇、灭活的病毒或电激等。
特点：既能产生专一 抗体又能大量繁殖
特点：特异性强灵敏 度高可大量制备
4、单抗隆抗体的应用
①作为诊断试剂
用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、 特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。
②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病
利用同位素标记单抗，在特定组织成像
③用于治疗疾病和运载药物
制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置， 在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。
适宜条件 原代培养 用胰蛋白酶等 处理贴壁细胞 传代培养
原代培养 传代培养 不死性细胞
卵母细胞采集、培养
MⅡ期卵母细胞 去核 去核卵母细胞
体细胞核移植过程 （体细胞克隆动物）
供体细胞注入 去核卵母细胞 体细胞培养
电激处理使供 体核进入受体 移植 代孕母牛 卵母细胞构建 重组胚胎
胚胎
克隆牛
供体牛
体细胞核移植技术存在的问题 （1）成功率非常低
抗体与相应抗原特异性结合
抗体由何种细胞产生？主要分布在哪里?
抗原 抗原不纯
刺激
动物体内
效应B
抗体 抗体不纯
血清抗体（也称多克隆抗体） 由血清中提取的抗体是由不同淋巴细胞产生
的多种抗体的混合物，可达百万种以上，称为多
克隆抗体。
特点：
产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏。
问题：
怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？
1.为什么要培养动物细胞？ 实验材料，药性、毒性检测，提取细胞分泌物等 2.要培养动物细胞，对取材有何要求？ 选择胚胎细胞或幼年动物组织，因为其分裂 增殖能力强。 3.培养基是用液体的还是固体的？培养基中的成 分有何特点？ 培养基是液体的，成份与动物内环境相似。 动物血清 4.动物细胞培养条件有何特点？ 体温和PH都应与动物体内环境相似。
小资料：
①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被
氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般 不分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是
能不断分裂增殖。
你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？
在培养液中加入氨基蝶呤，收集增殖细胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，仅有
单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。
⑵用于治疗疾病和运载药物 ①特异性强、灵敏度高
生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物
②疗效高、毒副作用小
结合同位素的单抗 -----生物导弹
结合同位素的单抗
-----生物导弹
单抗
放射 性同 位素
项目 原理
动物细胞融合 细胞膜的流动性
植物体细胞杂交 细胞膜的流动性和 植物细胞的全能性 去除细胞壁 聚乙二醇、离心、 振动、电激、 获得杂种植株 培育作物新品种 克服远缘杂交障碍
应答
抗原 刺激 B细胞 浆细胞 抗体
抗体的不纯性
一种抗原有多种不同的决定簇,刺激的是多种B细胞,作用于 不同的B细胞后,会产生多种抗体, 这是多克隆的, 故不纯!
怎么才能得到纯的抗体?
要想获单一的纯抗体,就必须从一个B细胞出发.
光纯还不行,还要大量.怎么办?
让B细胞大量繁殖(克隆)就可以产生大量抗体了.
①什么是病毒的灭活？ 灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能
力，但是并不破坏病毒的抗原结构。
仙台病毒 紫外线 灭活 丧失感染活性（不感染细胞）
保留融合活性（诱导细胞融合）
②灭活病毒诱导细胞融合的原理 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞 膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞 膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜 打开，细胞发生融合。
诱导细胞融合
动物 细胞 融合 技术 动物 细胞 培养 技术 杂交细胞 筛选 杂交瘤细胞 筛选 特异性杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 杂交瘤细胞系 提取 单克隆抗体
特点：既能产生专一 抗体又能大量繁殖
特点：特异性强灵敏 度高可大量制备
1975年Kohler和Milstein的单克隆抗体技术在生产和使用
（4）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，要筛 选出 细胞。在细胞培养过程中，为了促进细胞 摄取葡萄糖，常向培养液中加入 （激素）。 （5）培养2周后，即测定培养细胞 的特征，筛选出 细 胞置于不同孔内（如图所示）培养。 此操作前要将培养细胞稀释到 7～10个细胞/ml，每孔滴入 0.1ml细胞稀释液，其目的是 。 （6）要获得大量的单克隆抗体， 可对获得的杂交瘤细胞进行 培养。
抗体方面开创了新纪元，图10示单克隆抗体制备流程阶段
示意图。请据图回答下列问题：图10
（1）该技术是在动物细胞培养技术和
础上发展起来的。 （2）图10中细胞A体外培养不具有 分裂能力，但能分泌 细胞B体外培养能够 ， 。 。
图10
技术的基
（3）动物细胞融合常用的方
法是
（1）动物细胞融合（2）分泌特异性抗体 、无限增殖 （3）PEG（灭活的病毒、电刺激）
但，有问题: B细胞是不能无限繁殖的.怎么办? 找，什么细胞能无限繁殖呢? 癌! 只有癌细胞. 但它不能产生抗体. 思路就出来了:
癌细胞能无限繁殖,但不能产生抗体.B细胞能产生抗体,但不能大 量繁殖.融合呀!只要将两个细胞融合即可互补.
2.技术思路的重点
PEG诱导细胞融合
B
免 疫
瘤
矿物油
脾
HAT筛选 杂交瘤细胞 大量培养
方法——抗原-抗体杂交法