第17章 高效液相色谱法
分析化学前八章课后习题答案(第六版,李发美)
第二章误差和分析数据处理1．指出下列各种误差是系统误差还是偶然误差？如果是系统误差，请区别方法误差、仪器和试剂误差或操作误差，并给出它们的减免办法。
(1)砝码受腐蚀；(2)天平的两臂不等长；(3)容量瓶与移液管未经校准；(4)在重量分析中，试样的非被测组分被共沉淀；(5)试剂含被测组分；(6)试样在称量过程中吸湿；(7)化学计量点不在指示剂的变色范围内；(8)读取滴定管读数时，最后一位数字估计不准；(9)在分光光度法测定中，波长指示器所示波长与实际波长不符。
(10)在HPLC测定中，待测组分峰与相邻杂质峰部分重叠。
答：（1）系统误差；校准砝码。
（2）系统误差；校准仪器。
（3）系统误差；校准仪器。
（4）系统误差；控制条件扣除共沉淀。
（5）系统误差；扣除试剂空白或将试剂进一步提纯。
（6）系统误差；在110℃左右干燥后称重。
（7）系统误差；重新选择指示剂。
（8）偶然误差；最后一位是估计值，因而估计不准产生偶然误差。
（9）系统误差；校准仪器。
（10）系统误差；重新选择分析条件。
2．表示样本精密度的统计量有哪些? 与平均偏差相比，标准偏差能更好地表示一组数据的离散程度，为什么？3．说明误差与偏差、准确度与精密度的区别和联系。
4．什么叫误差传递？为什么在测量过程中要尽量避免大误差环节？5．何谓t分布？它与正态分布有何关系？6．在进行有限量实验数据的统计检验时，如何正确选择置信水平?7．为什么统计检验的正确顺序是：先进行可疑数据的取舍，再进行F检验，在F检验通过后，才能进行t检验?8．说明双侧检验与单侧检验的区别，什么情况用前者或后者?9．何谓线性回归？相关系数的意义是什么？10．进行下述运算，并给出适当位数的有效数字。
(1)41016.614.1510.452.2⨯⨯⨯ (2)0001120.010.514.2101.3⨯⨯ (3)002034.0512.21003.40.514⨯⨯⨯- (4)050.11012.21.80324.02⨯⨯⨯(5)5462.31050.78940.142.551.22856.23-⨯⨯-+⨯(6) pH = 2.10 , 求[H +] = ?（2.54×10?3；2.98×106；4.02；53.0；3.144；7.9×10?3mol/L ） 11．两人测定同一标准试样，各得一组数据的偏差如下： (1)0.3 －0.2 －0.4 0.2 0.1 0.4 0.0 －0.3 0.2 －0.3 (2)0.10.1－0.60.2－0.1－0.20.5－0.20.30.1① 求两组数据的平均偏差和标准偏差；② 为什么两组数据计算出的平均偏差相等，而标准偏差不等？③ 哪组数据的精密度高？ （①1d ＝0.24，2d ＝0.24，S l ＝0.28，S 2＝0.31。
色谱分析知到章节答案智慧树2023年齐齐哈尔大学
色谱分析知到章节测试答案智慧树2023年最新齐齐哈尔大学第一章测试1.色谱的分离的核心部分是色谱柱。
参考答案:对2.色谱分析法只能测定有色物质。
参考答案:错3.吸附色谱是利用吸附剂对样品的吸附性能不同达到分离。
参考答案:对4.气固色谱和液固色谱都是吸附色谱。
参考答案:对5.基于组份在两项之间溶解或吸附能力的不同，经过反复多次的平衡，使性质有微小差别的组份分离。
（）参考答案:对第二章测试1.衡量色谱柱选择性的指标是（）。
参考答案:相对保留值2.衡量色谱柱柱效的指标是（）。
参考答案:理论塔板数3.下列途径（）不能提高柱效。
参考答案:将试样进行预分离4.在一定柱长条件下，某一组分色谱峰的宽窄主要取决于组分在色谱柱中的（）。
参考答案:扩散速率5.色谱柱温升高的结果是（）。
参考答案:组分的保留体积减小6.组分的分配系数越大，表示其保留时间越长。
（）参考答案:对7.在载气流速比较高时，分子扩散成为影响柱效的主要因素。
（）参考答案:错8.分离温度越高，保留时间缩短，峰面积不变。
（）参考答案:对9.某试样的色谱图上出现三个色谱峰，该试样中最多有三个组分。
（）参考答案:错10.色谱柱理论塔板数n与保留时间的平方成正比，组分的保留时间越长，色谱柱理论塔板数越大，分离效率越高。
（）参考答案:错第三章测试1.根据色谱峰的面积可以进行定性和定量分析。
( )参考答案:错2.采用内标法进行高效液相色谱法定量时，需知校正因子。
参考答案:对3.用色谱法进行定量时，要求混合物中每—个组分都能出峰的方法是( )。
参考答案:归一化法4.色谱分析中，某试样中有不出峰组分，不能采用下列哪种定量方法? ( )参考答案:归一化法5.色谱外标法的准确性较高，无需仪器稳定性高。
（）参考答案:错第四章测试1.检测器性能好坏将对组分分离产生直接影响（）参考答案:错2.对所有物质均有响应的气相色谱检测器是( )。
参考答案:热导检测器3.热导池检测器是一种质量型检测器（）参考答案:错4.为了用气相色谱法测定样品中的微量水分，宜选用的检测器是（）。
分析化学实验智慧树知到课后章节答案2023年下温州医科大学
分析化学实验智慧树知到课后章节答案2023年下温州医科大学温州医科大学第一章测试1.为使天平读数从0.000g切换为0.0000g，应采取下列哪个步骤（）A:长按cal/1/10键 B:长按ON/OFF键 C:短按cal/1/10键 D:短按ON/OFF键答案:短按cal/1/10键2.称量在空气中性质不稳定的试样时，应采用下列哪种称量方法（）A:选项均可 B:差减法 C:直接法 D:定量法答案:差减法3.电子天平的水平泡如果偏向右边，说明右边低了，要升高右边的脚或降低左边的脚。
（）A:错 B:对答案:错4.用容量瓶准确配制溶液时，最后的定容应该放置在水平的桌面上完成。
（）A:对 B:错答案:错5.分析天平平衡读数时，必须关好天平的左右两侧边门。
（）A:对 B:错答案:对第二章测试1.移液管在取液前需要用待取液润洗两到三次。
（）A:对 B:错答案:对2.在用移液管移取液体时，当液面升高到刻度线以上时，立即用食指按住移液管上口，将移液管提起离开液面，先用滤纸擦掉移液管外壁上的液膜，然后将移液管的末端靠在容器内壁上，调好液面高度。
（）A:错 B:对答案:对3.使用吸量管分别移取不同体积的同一溶液时，应尽量使用同一支吸量管。
（）A:对 B:错答案:对4.在平行实验中，第一份样品滴定完成后，如果滴定管中的标准溶液还留下一半以上，可以继续用来滴定第二份样品，以免浪费试剂。
（）A:对 B:错答案:错5.盐酸滴定氢氧化钠，到终点时消耗的滴定剂的体积，记录正确的是（）A:24.00 mL B:24 mL C:24.0 mL D:24.0000 mL答案:24.00 mL第三章测试1.紫外分光光度计不需要经常鉴定的项目是（）A:杂散光 B:波长的准确度 C:pH对测定的影响 D:吸收度准确性答案:pH对测定的影响2.紫外分光光度计的定量原理（）A:摩尔吸收系数表示 B:透射光比率 C:与入射光强度、吸收介质厚度与浓度成正比 D:透射光除以入射光答案:与入射光强度、吸收介质厚度与浓度成正比3.使用紫外分光光度计测定时，取吸收池，手指应拿毛玻璃面的两侧，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净。
第十七章-气相色谱法..
相对极性Px分类：
β,β ' -氧二丙腈：P =100
角鲨烷：
P =0
其余：Px=0---100 分为5级 0—20 0或1 非和弱极性
角鲨烷、甲基硅 橡胶
21—40 2 中等极性 DNP、OV-17
41—60 3 中等极性 氰基硅橡胶
61—80 4 极性
二、实验条件的选择性
R(
n 4
)
r2r,12,1 1
k2k2 1
（a） （ b） （c）
a：柱效项 b：柱选择性项 c：柱容量项
1.提高r21和k
（1） r21 反映了固定液的选择性， r21值越大（即固定液选 择性 好），分离度就越大，分离越好。若r21 =1 ，则 R = 0 ，两组分不能分离。
1. 填充柱
2. 毛细管柱(开管柱)
四、检测系统 1. 热导池检测器 2. 氢火焰离子化检测器 3. 电子捕获检测器 4. 火焰光度检测器
五、温度控制系统 控制和测量汽化室、色谱柱、检测器温度。
色谱柱温控方式：恒温分析、程序升温。
三、气相色谱法的特点
1. 高选择性 2. 高效能 3. 高灵敏度 4. 分析速度快 5. 应用范围广 沸点在500℃以下，热稳定好，分 子量在400以下的组分的分离和测定
对于气体、气态烃等低沸点混合物，柱温选在比平均沸 点低50℃至平均沸点范围内分析。
对于沸点范围较宽的试样，宜采用程序升温。
程序升温：指在一个分析周期里，色谱柱的温度随时 间由低温到高温呈线性或非线性地变化，使沸点不同的组分， 在其最佳柱温下流出，从而改善分离效果，缩短分析时间。
总结：范第姆特方程 H=A+B/U+CU
高效液相色谱法3
2.内标法 内标法分为 工作曲线法 内标一点法 内标二点法 内标对比法 校正因子法 在HPLC中最常用内标对比法。 选择内标物的三个条件(纯、样品中不含有、保留时 间接近)，在HPLC中的要求与GC完全一致。一般可选择 一个化学结构与待测物质相似、物理性质相近的纯物质作 为内标物，加到待测样品溶液中，经过样品前处理后进样。 使用内标法可抵消因仪器稳定性差、进样量不够准确等原 因带来的实验误差。
(一) 多环芳烃的分析 一 多环芳烃的分析(图21－18) 多环芳烃的分析，可用反相或吸附色谱法分析。反 相色谱法用ODS柱，用乙腈−水或甲醇−水为流动相。但用 甲醇−水时，保留时间较长，因此多采用梯度洗脱。多环 芳烃也可用硅胶(YWG等)柱，以不含水的正己烷为流动相， 也能获得较好的分离效果，但需注意溶解样品的溶剂应与 流动相的性质相近。许多多环芳烃是致癌物质，其含量监 测在食品分析与环境保护监测中都有实用意义。
(1)内标对比法： 这种方法不需知校正因子又具有内标法的定量准确 度与进样量无关的特点，方法简便实用。在药物分析中分 析结果(含量)常用标示量％表示:
( Ai / As )样品 (ms )样品 W 标示量% = × × ×100% ( Ai / As )对照 (ms )对照 m
(21.13)
式中(ms)样品与(ms)对照分别是内标物在试样溶液及对照溶液 中的量，W为平均片重(或丸重等)，m是取样量，其它符 号的含义同GC章。若试样溶液与对照溶液中加人内标物 的量相等，所称取的样品重与平均片重相同，则上式的后 二项均等于1。
A的标示量％=(178024／202694)÷(154856／171222)×100％=97.l％ P的标示量％=(820968／202694) ÷(692272／171222)×100％=100.l％ C的标示量％=(407792／202694) ÷(372221／171222)×100％=92.5％
仪器分析 高效液相色谱法
第17章HPLC法17.1 内容提要17.1.1 基本概念高效液相色谱法──在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱(GC)的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，使之发展成为高分离速率、高分离效率、高检测灵敏度的高效液相色谱法，易称为现代液相色谱法。
高效液相色谱仪──采用了高压输液泵、高效固定相和高灵敏度检测器等装置的液相色谱仪称为高效液相色谱仪。
梯度洗脱──用两种(或多种)不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续的改变流动相的浓度、配比和极性，使样品中各组分能在最佳的分配比下出峰的操作技术。
也称为梯度淋洗。
低压梯度──又称外梯度，特点是先混合后加压。
它是采用在常压下预先按一定的程序将溶剂混合后再用泵输入色谱柱系统，易称为泵前混合。
高压梯度──又称内梯度，特点是先加压后混合。
它有两台高压输液泵、梯度程序器(或计算机及接口板控制)、混合器等部件组成。
两台泵分别将两种极性不同的溶剂输入混合器，经充分混合后进入色谱柱系统，是一种泵后高压混合形式。
柱外效应──由色谱柱以外的因素引起的色谱峰形扩展的效应。
柱外因素常指从进样口到检测器之间，除色谱柱以外的所有死时间，如进样器、连接管、检测器等的死体积，都会导致色谱峰形加宽、柱效下降。
液固吸附色谱法──以固体吸附剂为固定相，吸附剂表面的活性中心具有吸附能力，样品分子被流动相带入柱内，它将与流动相溶剂分子在吸附剂表面发生竞争吸附性。
K值大的强极性组分易被吸附，K值小的弱极性组分难被吸附，样品组分因此被分离。
液液分配色谱法──根据物质在两种互不相溶(或部分互溶)的液体中溶解度的不同，有不同的分配，从而实现分离的方法。
分配系数较大的组分保留值也较大。
正相分配色谱法──流动相极性低而固定相极性高的称为正相分配色谱法。
反相分配色谱法──流动相极性高而固定相极性低的称为反相分配色谱法。
化学键合相──利用化学反应将有机分子键合到载体表面上，形成均一、牢固的单分子薄层而形成的各种性能的固定相。
仪器分析 第十五-第十九章思考题
第十五章思考题1.色谱法具有同时能进行分离和分析的特点而区别于其它方法，特别对复杂样品和多组份混合物的分离，色谱法的优势更为明显。
2.按固定相外形不同色谱法是如何分类的？是按色谱柱分类：①平面色谱法：薄层色谱法、纸色谱法②柱色谱法：填充柱法、毛细管柱色谱法3.什么是气相色谱法和液相色谱法？气体为流动相的色谱称为气相色谱。
液体为流动相的色谱称为液相色谱。
4.保留时间（tr）、死时间（t0）及调整保留时间（t’r）的关系是怎样的？t’r = tr - t05.从色谱流出曲线可以得到哪些信息？①根据色谱峰的个数可以判断样品中所含组分的最少个数；②根据色谱峰的保留值可以进行定性分析；③根据色谱峰的面积或峰高可以进行定量分析；④色谱峰的保留值及其区域宽度是评价色谱柱分离效能的依据；⑤色谱峰两峰间的距离是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据。
6.分配系数在色谱分析中的意义是什么？①K值大的组分,在柱内移动的速度慢，滞留在固定相中的时间长，后流出柱子；②分配系数是色谱分离的依据；③柱温是影响分配系数的一个重要参数。
7.什么是选择因子？它表征的意义是什么？是A，B两组分的调整保留时间的比值α= t’r（B）/t’r（A）＞1意义：表示两组分在给定柱子上的选择性，值越大说明柱子的选择性越好。
8.什么是分配比（即容量因子）？它表征的意义是什么？是指在一定温度和压力下，组分在两相分配达到平衡时，分配在固定相和流动相的质量比。
K=ms/mm意义：是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数；9. 理论塔板数是衡量柱效的指标，色谱柱的柱效随理论塔板数的增加而增加，随板高的增大而减小。
10.板高（理论塔板高度H/cm）、柱效（理论塔板数n）及柱长（L/cm）三者的关系（公式）？H=L / n11.利用色谱图如何计算理论塔板数和有效理论塔板数（公式）？12.同一色谱柱对不同物质的柱效能是否一样？同一色谱柱对不同物质的柱效能是不一样的13.塔板理论对色谱理论的主要贡献是怎样的？(1)塔板理论推导出的计算柱效率的公式用来评价色谱柱是成功的；(2)塔板理论指出理论塔板高度H 对色谱峰区域宽度的影响有重要意义。
第17章 制剂分析概论-知识点2-含量与标示百分含量的计算
制剂含量表示的是每个样本的含 量与标示量的偏离程度
片剂含量测定 标示量% 每片中药标物示的量实（际g含/片量）（g/片）100%
含量
平均片重（g/片）100%
供测试得品量质量
平均片重（g/片）
100%
标示量（g/片）
标示量（g/片）
特点：灵敏度高、准确度高 仪器价格比较低廉 应用广泛
缺点：专属性较差
紫外-可见分光光度法
对照品比较法
配制：供试品溶液CX ；对照品溶液CR 测定：CX = CR（AX/AR）
要求：溶剂一致，CX/CR =(10010)%
含量：
吸收系数法
配制：供试品溶液CX 测定：
含量：
固体制剂： 液体制剂：
固体制剂： 液体制剂：
电子捕获检测器（ECD）
缺 点 ： 价格昂贵
HPLC法, GC法
内标加校正因子法
内标物加入待测样品中，以待测 组分和内标物的峰面积大小对比
外标法
以对照物质和样品中待测组分的峰 面积大小相比较进行定量的方法。
要求：对照品、内标物同一条件 下出峰，且符合含测要求
优点：准确度高、不受进样重 复性影响
应用：GC、微量成分
（一）容量分析法（滴定分析法）
特点：准确度高、操作简便、快速、 仪器简单、价廉
应用：常量分析 原料药的含量测定 组分含量>1%
缺点：专属性差
容量分析法（滴定分析法）
直接滴定法 用滴定液直接滴定被测药物的含量
剩余滴定法
含量：
固体制剂：
滴定度 浓度校正因子
液体制剂：
剩余滴定法
又称返滴定法或回滴定法，是先加入定量过量的滴 定液A，使其与被测药物定量反应，待反应完全后， 再用另一滴定液B来回滴剩余的滴定液A
药物分析知到章节答案智慧树2023年中国药科大学
药物分析知到章节测试答案智慧树2023年最新中国药科大学第一章测试1.在《中国药典》中，通用的测定方法收载在（）。
参考答案:附录部分2.根据药品质量标准规定，评价一个药物的质量采用（）。
参考答案:鉴别、检查、质量测定3.美国国家处方集收载的内容为（）。
参考答案:药用辅料的标准4.药品质量标准的性状项下主要记叙药物的（）。
参考答案:物理常数;溶解度;外观、臭、味5.可以在药物分析工作中参阅的国外药典有（）。
参考答案:EP;JP;USP;BP第二章测试1.药品检验工作的基本顺序为（）。
参考答案:取样→检验→留样→报告2.《中国药典》中的“精密称定”指称取重量应准确至所取重量的（）。
参考答案:千分之一3.药品贮藏条件的凉暗处是指（）。
参考答案:避光并不超过20℃4.取样的要求是（）。
参考答案:;代表性;真实性5.关于恒重的定义及有关规定正确的是（）。
参考答案:炽灼至恒重的第二次及以后各次称重应在继续炽灼30分钟后进行;干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1小时后进行;连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以下的重量第三章测试1.测定易粉碎的固体药物的熔点，《中国药典》2010年版采用的方法是（）。
参考答案:第一法2.旋光度是（）。
参考答案:偏振光旋转的角度3.光的吸收定律公式A = E∙C∙L中，E 为（）。
参考答案:4.影响药物旋光度的因素有（）。
参考答案:溶液浓度;化学结构;测定温度;光路长度;光源5.测定吸收系数时，采用的溶剂应（）。
参考答案:测定波长附近无干扰吸收峰;化学惰性第四章测试1.硫色素反应可以用于鉴别（）。
参考答案:维生素B12.紫外光谱的纵坐标范围一般是（）。
参考答案:0～13.下面关于中国药典所收载标准红外光谱图的说法，错误的是（）。
参考答案:以分辨率为1 cm-1条件绘制4.中药定性鉴别中使用较多的色谱法是（）。
参考答案:高效液相色谱法;薄层色谱法5.关于薄层色谱法，叙述正确的是（）。
高效液相色谱_蒸发光散射检测器测定脂肪酸和甘油酯的含量
摘要 :建立了一种利用反相高效液相色谱 - 蒸发光散射检测 、通过梯度洗脱测定油脂中脂肪 酸 、单甘酯 、二甘酯与三甘酯含量的方法 ,色谱柱是 C18反相柱 ,流动相为乙腈 (0. 05 %醋酸 V/ V) 二氯甲烷 ,流速 1. 0 mL/ min ;蒸发光散射检测器漂移管温度 70 ℃,载气流速 1. 7 L/ min 。各物质色 谱峰面积的自然对数与浓度的自然对数呈良好的线性关系 ,精密度 RSD 为 0. 43 %～2. 75 % ,最低 检测限为 0. 02～0. 04μg ,回收率测定值为 93. 2 %～104. 5 %。该方法不仅可以准确 、快速地定量 、 定性分析各类混合脂肪酸甘油酯和游离脂肪酸 ,而且还可以分离具有立体异构的单甘酯和二甘酯 。
lnA = a + b ln C 式中 : A ———峰积分面积 ;
C ———进样浓度 μ, g/μL 。
表 2 甘油酯和脂肪酸的线性范围和线性方程
组分名称
1 - 棕榈酸甘油酯 1 ,3 - 二油酸甘油酯 1 ,3 - 二棕榈酸 - 2 - 油酸甘油酯 三棕榈酸甘油酯 棕榈酸
线性方程 相关系数
表 4 样品中脂肪酸和甘油酯的含量( %)
组分名称
棕榈油 乌桕脂
棕榈油甘 油解产物
乌桕脂甘油 解产物
2 - 油酸甘油酯
-
-
2. 3
2. 3
1 - 油酸甘油酯
-
-
0. 9
-
1 - 棕榈酸甘油酯
-
-
8. 1
21. 6
油酸
-
-
0. 6
2. 4
棕榈酸
-
-
1. 1
高效液相色谱法习题答案
第二十章 高效液相色谱法思考题和习题1． 简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。
相同点：均为高效、高速、高选择性的色谱方法，兼具分离和分析功能，均可以在线检测不同点：2．何谓化学键合相？常用的化学键合相有哪几种类型？分别用于哪些液相色谱法中？采用化学反应的方法将固定液键合在载体表面上，所形成的填料称为化学键合相。
优点是使用过程不流失，化学性能稳定，热稳定性好，适于作梯度淋洗。
目前常用的Si-O-Si-C 型键合相，按极性分为非极性，中等极性与极性三类。
①非极性键合相：常见如ODS 键合相，既有分配又有吸附作用，用途非常广泛，用于分析非极性或弱极性化合物；②中等圾性键合相：常见的有醚基键合相，这种键合相可作正相或反相色谱的固定相，视流动相的极性而定：③极性键合相：常用氨基、氰基键合相，用作正相色谱的固定相，氨基键合相还是分离糖类最常用的固定相。
3．什么叫正相色谱？什么叫反相色谱？各适用于分离哪些化合物？正相色谱法：流动相极性小于固定相极性的色谱法。
用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用于含有不同官能团物质的分离。
反相色谱法：流动相极性大于固定相极性的色谱法。
用于分离非极性至中等极性的分子型化合物。
4．简述反相键合相色谱法的分离机制。
典型的反相键合色谱法是用非极性固定相和极性流动相组成的色谱体系。
固定相，常用十八烷基（ODS 或C18）键合相；流动相常用甲醇-水或乙腈-水。
非典型反相色谱系统，用弱极性或中等极性的键合相和极性大于固定相的流动相组成。
反相键合相表面具有非极性烷基官能团，及未被取代的硅醇基。
硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，视覆盖率而定。
对于反相色谱的分离机制两种观点，一种认为属于分配色谱，另一种认为属于吸附色谱。
分配色谱的作用机制是假设混合溶剂（水十有机溶剂）中极性弱的有机溶剂吸附于非极性烷基配合基表面，组分分子在流动相中与被非极性烷基配合基所吸附的液相中进行分配。
高效液相色谱分析法 HPLC
§2-3 各类高效液相色谱法简介
一、液固吸附色谱法（LSC） (liquid-solid adsorption chromatography)
二、液液分配色谱法（LLC） (liquid-liquid partition chromatography, chemical bonded phase chromatography
2．流动相差别的区别 GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用
力，只与固定相有相互作用。 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用
力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起 正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改 变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用，当 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 也可以增大分离选择性。 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）
2．进样装置 1）隔膜进样（高分子有机硅胶垫→进样室）
GC系统压力较小，可以 HPLC系统压力太大，必须停泵进样（早期） 2）阀进样：不必停泵，六通阀
液相色谱
3．色谱柱：直径4~6mm,柱长10~30cm 柱效评价：色谱系统适应性试验 R，n，fs（拖尾因子） 柱再生：维护、保养、柱子的冲洗
4．检测器 1）紫外检测器：适于吸收紫外光的物质 2）荧光检测器：只能分析自身发光的物质 灵敏度高 3）示差折光检测器：利用折光率的差别 灵敏度低，温度要求严格 4）电化学检测器 5）化学发光
注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间 5．出柱顺序：强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱 6．硅胶吸水量↑，LSC→LLC • 硅胶含水量较小 吸附色谱 硅胶极性较大 • 硅胶含水量>17% 分配色谱 硅胶失活→载体
高效液相色谱测定法
高效液相色谱测定法
高效液相色谱测定法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和定量技术，可
以用于分离和测定复杂的混合物。
它基于物质在流动相（溶剂）和固定相（色谱柱上的填料）之间的相互作用的差异，利用流动相的流动将待测样品分离成不同的组分。
通过分析组分的保留时间和色谱峰的峰面积或峰高，可以定量不同组分的含量或浓度。
高效液相色谱测定法具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、重复性好等优点，因此在许多分析领域得到广泛应用。
它可以应用于生物医药、环境监测、食品安全等多个领域，用于分析和监测有机化合物、无机化合物、药物、天然产物、食品成分等。
高效液相色谱测定法的基本步骤包括：样品预处理、制备流动相、样品进样、流动相流动、色谱柱分离、检测器检测、结果处理等。
根据样品的性质和分析要求，可以选择不同的检测器，如紫外检测器（UV）、荧光检测器、质谱检测器等。
需要注意的是，高效液相色谱测定法在操作过程中需要注意样品制备和仪器条件的优化，以提高分离效果和分析结果的准确性。
此外，也需要注意流动相成分的选择、色谱柱的使用寿命等因素对分离效果的影响。
高效液相色谱_荧光检测法测定蜂蜜中的果糖_葡萄糖和麦芽糖_张其安
1.2.1 果糖、葡萄糖、麦芽糖标准液的配制 分别准确称取 3g 果糖、2.4g 葡萄糖、0.24g 麦芽
糖标准物质置于 3 个 100mL 的容量瓶中，用超纯水定容， 4℃保存。
1.2.2 混合标准液的配制 分别吸取 1.2.1 节中各单糖标准液 1mL，充分混匀，
待衍生化。 1.3 样品处理
准确称取 2g 蜂蜜置于 100mL 的烧杯中，加入 30mL
收稿日期：2010-09-09 作者简介：张其安(1966 —)，男，会计师，本科，研究方向为蜂产品加工与检测。E-mail：sdhkfy@ * 通信作者：杨少波(1978 —)，男，助理工程师，硕士，研究方向为蜂产品加工与检测。E-mail：shboyg@
250 2011, Vol. 32, No. 14
蜂 蜜 中 还 原 糖(B)色 谱 图 Fig.2 HPLC chromatogram of mixed monosaccharide standards and
reducing sugars in honey using 0.1 mol/L phosphate buffer solution-acetonitrile at 90:10 as mobile phase
摘 要：建立反相离子对色谱法同时测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、麦芽糖含量的方法。样品经对氨基苯甲酸衍生化 后，采用 ODS 柱，以 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液(20mmol/L 四丁基硫酸氢铵，pH2.5):乙腈 =95:5 为流动相，荧光检测 器检测，外标法定量。结果表明，果糖、葡萄糖、麦芽糖的检出限分别为 21 0、96 、24 0μg/k g，线性范围分 别为 130～140、52～98、154～98mg/kg，在其线性范围内相关系数 r ≥ 0.9988；该方法加标回收率在 98.2%～ 101.2% 之间，RSD 在 3.4%～5.4% 之间。该方法灵敏、结果可靠。 关键词：高效液相色谱；荧光检测；蜂蜜；还原糖
仪器分析(天津大学)知到章节答案智慧树2023年
仪器分析（天津大学）知到章节测试答案智慧树2023年最新第一章测试1.现代分析仪器基本组成包括信号发生器、检测器、信号处理器和读出装置四大部分。
参考答案:对2.溶液理论中四大平衡是酸碱平衡、沉淀溶解平衡、络合平衡和氧化还原平衡。
参考答案:对3.与化学分析相比，仪器分析具有灵敏度（），检出限（）等优点，操作（），容易实现自动化；但相对误差（），价格昂贵，维护成本高。
参考答案:高，低，简便，较高4.仪器分析一般都有独立的方法原理和理论基础参考答案:对5.按分析任务，分析化学可分为定性分析、定量分析和结构分析。
参考答案:对6.按数量级分类，分析化学可分为常量分析、微量分析、痕量分析、单分子分析等。
参考答案:对7.电分析方法包括电导分析、电位分析、电解分析、库伦分析、电泳分析和伏安分析等。
参考答案:错8.色谱分析法是指根据混合物的各组分在互不相溶的两相中吸附、分配或其它亲和作用的差异而建立的分离分析方法。
参考答案:对9.下列表述正确的是（）参考答案:化学分析是基础，仪器分析是发展方向10.下列表述错误的是（）参考答案:与核磁共振技术相关的诺贝尔奖共有四次第二章测试1.线光谱是物质受外界能量作用后，由于( )能级跃迁产生的。
参考答案:原子外层电子2.下列哪种因素会引起对朗伯-比尔定律的偏离?参考答案:溶质发生解离;杂散光进入检测器3.某种溶液在254 nm处的透射比T% =10%，则其吸光度为0.1。
参考答案:错4.某金属离子X与R试剂形成一有色络合物，若溶液中X的浓度为用1 cm比色皿在525 nm处测得吸光度为0.400，则此络合物在525 nm处的摩尔吸收系数为( )参考答案:5.为减小吸光度的测量误差，一般要求吸光度控制在一定范围内，可以通过改变光程，或改变被测物的浓度来实现。
参考答案:对6.吸收光谱可分为原子光谱和分子光谱两大类。
参考答案:对7.不同波长的光具有不同的能量。
波长越长，光的能量越大。
高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定蛋黄卵磷脂的含量
图 ! " （ "） 蛋黄卵磷脂标准品及 （ #） 样品的色谱图 $%&! ! " ’()*+",*&)"+- *. ,(/ 0(*-0(",%1234(*3%5/ （ " ）-,"51")1 "51（ # ）" )/"3 -"+03/
# ! #" 方法学验证 # B # B !" 标准曲线及检测限 % % 精确吸取标准溶液 $, + ， $, & ， $, # ， $, ( 5’ ， 加正己 烷 # 异丙醇 （ 体积比为 +/ + ） 混合溶剂稀释至 + 5’ ， 在 选定的色谱条件下， 每份标准溶液平行测定 & 次。以 峰面积 ! 的对数为纵坐标， 进样质量 " （ "- ） 的对数 为横坐标 作 图， 得 线 性 回 归 方 程 为 /- ! 0 +, !+# ) ・ /- " 1 &, -&" + ， 相关系数 # ! 为 $, **( * 。线 性范 围为 $, +- 2 +, -+ - > ’ ， 检测限为 $, -" " -（ $ % & 0 & ） 。
B83$%)7$ ：8 9+HI&: J&K HI+ :+H+K96=4H6&= &J +??)$ LI&MLI4H6:$#7I=+ N$ =&K94#)LI4M+ I6?I L+KJ&K94=7+ #6O"6: 7IK&94H&?K4LI$（ (,).,/- ）P6HI +34L&K4H63+ #6?IH M74HH+K6=? :+H+7H6&= （ 0/12 ） P4M :+3+#&L+:’ B LI&MLI4H6:$#7I=+ P4M M"77+MMJ"##$ M+L4K4H+: &= 4 (&34),45 16#674 #" 8 7&#"9=（ &- ) 99 6’ :’ . +(" 99 ，% ! 9 ） ，"M6=? I+Q4=+)6M&LK&L4=&#)P4H+K 7&=H46=6=? & ; 47+H67 476:（ &(/ #(/ , ，3 < 3 < 3 ）4M 9&N6#+ LI4M+ 4H 4 J#&P K4H+ &J +- " 9/ < 96=’ *I+ :K6JH H"N+ H+9L+K4H"K+ 4=: 46K 74KK6+K ?4M LK+MM"K+ &J HI+ 0/12 P+K+ M+H 4H (" > 4=: &(" 5,4 ，K+ML+7H63+) #$’ *I+ #6=+4K :+H+7H6&= K4=?+ P4M "- +# 1 +- #+ ? < /（ ! ! 0 "- ))$ ) ） 4=: HI+ #696H &J :+H+7H6&= （ /@2 ）P4M "- #% ! ? P6HI +Q7+##+=H K+#4H63+ MH4=:4K: :+364H6&=（ R12 ）&J &- ! ; （ " 0 ( ） ’ *I+ K+) 7&3+K$ P4M 6= HI+ K4=?+ &J ),- ! ; 1 +!,- ! ; ’ *I+ K+M"#HM 6=:674H+: HI4H HI6M 9+HI&: 6M 477"K4H+ ， K4L6: ，M69L#+ 4=: K+LK&:"76N#+ ，4=: HI"M M"6H4N#+ J&K HI+ 4=4#$M6M &J +??)$ LI&MLI4H6:$#7I&) #6=+ 6= K+4# M49L#+M’ C#6 ?*%53 ：I6?I L+KJ&K94=7+ #6O"6: 7IK&94H&?K4LI$（ .,/- ） ；+34L&K4H63+ #6?IH M74HH+K6=? :+) H+7H6&=（ 0/12 ） ；LI&MLI4H6:$#7I=+（ ,- ） ；+??)$ LI&MLI4H6:$#7I=+（ 0B,- ） * * 卵磷脂是一种 天 然 的 两 性 表 面 活 性 剂， 化学名 称为 磷 脂 酰 胆 碱 （ LI&MLI4H6:$#7I=+ ， ,- ） ， 广泛 存在于动物、 植物体内， 具有重要的生理功能和独特 的乳化性能
中国药科大学-分析化学课件-第17色谱分析
峰宽和之半
tR2 W1
tR1 W2
2
R 2(tR2 tR1) 1.177(tR2 tR1)
W1 W2
W1 2(1) W1 2(2)
讨论
• 设色谱峰为正常峰，W1≈W2= 4σ
R 1.0 tR 4 基本分离 R 1.5 tR 6 完全分离(定量分析前提）
R 1.0 完全未分开
调整保留体积VR’：保留体积与死体积之差，即组分 停留在固定相时所消耗流动相的体积
VR'
VR
V0
t
' R
FC
注：VR' 与Fc无关；t
' R
1 Fc
V0 和 Vm、t0 和 tm 的区别
• V0 ：由进样器至检测器的流路中未被固定相占有的空 间体积 ； 流定相充满死体积所需的时间为t0 。
• Vm ：平衡时流动相在色谱柱中占有的体积，流动相经 过色谱柱所需时间用tm 表示。
线性：对称峰 凸形：拖尾峰
• 对称因子(symmetry factor)
——衡量色谱峰对称性
色谱峰
正常峰（对称）——fs在0.95~1.05之间
非正常峰 前沿峰 ——fs小于0.95 拖尾峰 ——fs大于1.05
对称因子：（拖尾因子）
fs
W0.05h 2A
A B 2A
8.分离因子和分离度：—分离参数
➢吸附色谱：利用物理吸附性能的差异（固定相固体）
（ absorption chromatography）
➢离子交换色谱：利用离子交换原理（固定相离子交换树脂）
（ion exchange chromatography ）
➢空间排阻色谱：利用排阻作用力的不同（固定相凝胶）
大专本科分析化学第十七章色谱分析法概论
s
）
m
Vs ） = t （ 1+ K B tRB 0 Vm
Vs tR= t0 （KA－KB） Vm
tR≠0
KA≠KB kA≠kB
二、基本类型色谱法的分离机制
• 分配色谱法
• 吸附色谱法
• 离子交换色谱法 • 分子排阻色谱法
（一）分配色谱法
分离原理
•
利用被分离组分在固定相或流动相中的溶解度差别而实 现分离。
也称为空间排阻色谱法、凝胶色谱法。 • 分为凝胶渗透色谱法（gel permeation chromatography；
GPC）和凝胶过滤色谱法（gel filtration chrom源自tography；GFC）
分子排阻色谱法
• 根据空间排阻（理论，孔内外同等大小的溶质分子处于
扩散平衡状态。
渗透系数
• 高效液相色谱发：球型或无定型全多孔硅胶 和堆积硅珠。 • 气相色谱法：高分子多孔微球等
吸附色谱法 • 流动相 气-固吸附色谱法：气体，常为氢气或氮气。 液-固吸附色谱法：有机溶剂。
• 洗脱能力主要由流动相极性决定。强极性流动相占据吸附
中心的能力强，洗脱能力强。 • Snyder溶剂强度0：吸附自由能，表示洗脱能力。0值越
• 色谱法与光谱法的主要不同点:
色谱法具有分离和分析两种功能 光谱法不具备分离功能
• 色谱法创始于20世纪初，俄国植物学家M.S.Tswett 在研 究植物叶子中的色素组成时做了一个著名的实验: 将碳酸钙粉末放在竖立的玻璃管中，从顶端注入植物
色素的提取液，然后不断加入石油醚冲洗。
植物色素慢慢地向下移动并逐渐分散成数条不同颜色 的色带。
（0＜Kp＜1 ）
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非极性键合相 2. 中等极性键合相 3. 极性键合相
1.化学键合相色谱法的固定相
（1）非极性键合相(反相色谱键合相) 硅胶表面键合烃基硅烷，为非极性基团，其烃基 配基可以是不同链长的正构烷烃
如十八烷基硅烷(octadecylsilane,ODS或用C18表示) 应用最广泛 辛烷基硅烷(用 C8来表示)又可以是带有苯基的碳链
HPLC
第一节 概述 第二节 基本原理 第三节 高效液相色谱法 的主要类型 第四节 高效液相色谱仪 第五节 高效液相色谱法 的应用
学习目标 1.掌握化学键合相色谱法、高效液相 色谱法应用。 2.掌握高效液相色谱法的洗脱方式及 梯度洗脱的优点。 3.熟悉高效液相色谱法与经典的液相 色谱法和气相色谱法的异同点。 4.熟悉高效液相色谱仪的构造。 5.了解高效液相色谱法固定相和流动 相的选择。
可以通过改变键合官能团的类型来改变分离的选
择性。 传质速度快，柱效高。 适于梯度洗脱。
化学键合相色谱法分类
分类：
正相(normal phase，NP)键合相色谱法
固定相极性比流动相的极性要强， 适合于分离中等极性和极性强的化合物
反相(reversed phase，RP)键合相色谱法
第三节 高效液相色谱法的主要类型
分配色谱法(partition hromatography) 吸附色谱法(adsorption chromatography) 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC） 化学键合相色谱法(bonded phase chromatography. BPC) 胶束色谱法(micellar chromatography；MC)
常用的有硅胶、氧化铝及高分子多孔微球(有机胶)，其
一、 液-固吸附色谱法
1. 液-固吸附色谱法的固定相
堆积硅珠(YQG)
由二氧化硅溶胶加凝结剂聚合而成。粒径3～5um，理
论塔板数每米8万，传质阻力小，柱容量大，是一种好 的高效填料
高分子多孔微球(YSG)
又称有机胶，表面为芳烃官能团，由苯乙烯与二乙烯
恒流泵：在输送流动相过 程中流量恒定。常用柱塞 往复泵 输液泵应具备的性能：
无脉动；流量恒定；流量范
围宽且可调节；耐高压；耐 腐蚀 ；适于梯度洗脱
过滤和脱气
流动相和样品溶液的过滤
目的：以免其中的细小颗粒堵塞色谱柱以及影响高压输
液泵的正常工作。
流动相进入高压泵前必须进行脱气处理
目的：除去其中溶解的气体(如氧气)，防止流动相由色
第一节 概述
高效液相色谱法（HPLC）
－－以高压液体为流动相的液相柱色谱法。 又称为高压液相色谱法；高速液相色谱法。
一、 高效液相色谱法与经典液相色谱法的比 较 二、 高效液相色谱法与气相色谱法的比较
一、 高效液相色谱法与经典液相色谱法 的比较
经典液相色谱法为基础，引入气相色谱法的理论和 实验技术。 高压输送流动相，流速快，分析速度快。 高效固定相，颗粒极细（一般为10μm以下）、规 则均匀的固定相，(键合相)传质阻抗小，柱效高， 分离效率高。 高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检测器最 小检测限可达10-9g，而荧光检测器最小检测限可达 10-12g。
接管、接头、检测器在内的管路体积（死体积）。 死体积越大，对色谱峰展宽影响越大。
为了减少柱外因素对峰宽的影响，必须尽量减小
驻外死体积。如采用进样阀进样，使用“零死体 积接头”连接管路各部件，并尽可能使用内腔体 积小的检测器。
第三节 高效液相色谱法的主要类型
一、 液-固吸附色谱法 二、 化学键合相色谱法 三、 流动相的要求和洗脱方式
氰乙硅烷基键合在硅胶表面制成。它们常作为正相色谱 的固定相。 该键合相表面基团为极性较大的基团，
2.化学键合相色谱法的流动相
在化学键合相色谱中，溶剂的洗脱能力(即溶剂的强 度)直接与溶剂的极性有关。
正相键合相色谱中，由于固定相是极性的，因此极性强
的流动相洗脱能力强； 反相键合相色谱中，由于固定相是非极性的，因此，极 性弱的流动相洗脱能力强
固定相的极性比流动相极性弱， 适用于分离非极性至中等极性的化合物
1.化学键合相色谱法的固定相
键合相的种类:
化学键合相按基团与载体(硅胶)相结合的活性键
类型，
分为酯化型(Si-O-C)和硅烷化型(Si-O-Si-C)
化学键合相按基团的极性可将其分为非极性、中
等极性和极性三类
1.
苯交联而成
用于分离芳烃、杂环、甾体、生物碱、脂溶性维生素、
酚、醛、醚等。柱效低，但选择性好，峰形好。
2.液-固吸附色谱法的流动相
常用溶剂:
己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。
流动相的选择
应重点考虑溶剂的极性
溶剂的极性强弱可用Snyder提出的溶剂极性参
数ε0来表示。ε0为溶剂分子在单位吸附剂表面的 吸附自由能。ε0越大，说明溶剂的极性越强， 洗脱能力就越强。
第二节 基本原理
一、 柱内展宽 二、 柱外展宽
高效液相色谱法对基本概念和理论
如塔板理论、速率理论、保留值与分配系数的关系、 分离度等与气相色谱法基本一致，
由于流动相分别为液体和气体，两者的扩散系数和粘度
差别较大，因而在应用色谱基本理论时，必须考虑本身 的特点。
其中最重要的是速率理论中，各种动力学因素对高 效液相色谱峰展宽带影响与气相色谱中有所不同。
谱柱进入检测器时因压力降低而产生气泡，增加基线的 噪音，造成灵敏度降低，甚至无法分析。 脱气方法：常用的脱气方法有低压脱气法、吹氦脱气法 和在线脱气法。目前，许多高档的高效液相色谱仪都配 有在线脱气装置。
而后者又可进一步分为
普通反相液液分配色谱法
离子对色谱法(ion
pair chromatography ,LPC)
离子抑制色谱法(ion
suppression chromatography ,ISC)
一、 液-固吸附色谱法
1. 液-固吸附色谱法的固定相
次还有分子筛及聚酰胺等 硅胶 表孔硅胶、全多孔硅胶、堆积硅珠 全多孔硅胶 优点：表面积大，容量大 缺点：孔径深，传质阻力大 无定形全多孔硅胶(YWG)：粒径5～10um，理论塔 板数每米2～5万，价格便宜、载样量大，但渗透性差 球形全多孔硅胶(YWG)：粒径3～10um，理论塔板 数每米8万，涡流扩散项小，渗透性好。
二、 化学键合相色谱法
以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合 相色谱法(bonded phase chromatography； BPC) 化学键合相：采用化学反应的方法将官能团 键合在载体表面所形成的固定相
化学键合相色谱法优点
优点：
耐溶剂冲洗，化学性能稳定，热稳定性好(70℃
以下不致破坏)，使用寿命长。
分析化学
“十二五”职业教育国家规划教材
主编
石慧 刘德秀
化学工业出版社
目 录
第一章 绪论 第二章 分析天平与称量方法 第三章 误差与分析数据处理
第十章 配位滴定法
第十一章 氧化还原滴定法 第十二章 电化学分析法 第十三章 紫外-可见分光光度法
第四章 样品的采集及常见的与处理 方法
3.固定相和流动相的选择
（2）流动相的选择 正相键合相色谱法
采用在烷烃中加适量极性调节剂的方法
反相键合相色谱法
一般以极性最大的水为主体，加入一定量与水互溶的甲
醇、乙腈和四氢呋喃等极性调节剂。水－甲醇是反相色 谱最常用的流动相
混合溶剂（二元或多元流动相）
三、 流动相的要求和洗脱方式
高效液相色谱仪
主要部件
process and main assembly of HPLC
一、 高压输液系统 二、 进样系统 三、 分离系统 四、 检测系统 五、 数据处理系统
输液系统
进样系统
色谱柱系统 检测系统
数据记录处理系统
一、高压输液系统
高压输液泵
压力：150～350×105 Pa
非极性键合相型号（国产）： YWG-C18H37、YQG-C18H37、YWG-C6H5
1.化学键合相色谱法的固定相
（2）中等极性键合相
常见的有醚Байду номын сангаас键合相。
这种键合相可作为正相或反相色谱的固定相，视流动相
的极性而定。
（3）极性键合相
如氨基或氰基等，分别将氨丙硅烷基[-Si(CH2)3NH2 ]和
根据固定相和流动相相对极性的大小，液液分 配色谱法又可以分为
正相液液分配色谱法(normal-phase liquid-
liquid partitionn chromatography, NLLC)和反 相液液分配色谱法(reversed-phase liquidliquid partition chromatography ,RLLC)
选择流动相时应注意的几个问题：
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂 质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降 或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏 氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产 生沉淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用 紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。
二、 高效液相色谱法与气相色谱法的比 较