琼脂糖电泳仪验证方案.(DOC)
琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量
琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量二．材料与方法1 材料RNA样品2 仪器、用具电泳仪、电泳槽、凝胶样品梳、微波炉、移液器等3 试剂(1) 1×TAE 电泳缓冲液(2) 溴化乙锭溶液（EB）[有毒，小心操作](3) 琼脂糖(4) 6×加样缓冲液4 方法(1) 选择孔径大小适合的点样梳，垂直架在胶版的一端，使点样梳底部离电泳槽水平面的距离为0.5-1mm。
(2) 称取0.25g琼脂糖，加入25ml 1×TAE电泳缓冲液中，微波炉加热使琼脂糖溶解均匀。
(3) 于50ml的离心管中加入1.25μl EB (10mg/ml)。
(4) 待凝胶冷却至50℃左右，将凝胶倒入50ml离心管中。
(5) 将离心管中的凝胶溶液轻轻倒入电泳凝胶板上，除去气泡。
(6) 待凝胶凝固后，小心取出点样梳。
(7) 在电泳槽中加入1×TAE 电泳缓冲液，将胶板放入电泳槽中（点样孔一端靠近电泳槽的负极），使电泳缓冲液没过胶面。
(8) 待测样品中加入1/6体积的6×上样缓冲液，混合后，移液枪点样，记录样品点样顺序及样量。
(9) 连接电泳槽与电泳仪之间的电源线，正极为红色，负极为黑色。
(10) 开启电源，开始电泳，最高电压不超过5V/cm。
(11) 当指示剂跑过胶板的2/3，可终止电泳；切断电源后，将电泳凝胶块放在凝胶成像仪中观察，拍照。
电泳检测：1%琼脂糖凝胶电泳，检测RNA完整性，观察18s、28s条带。
这里，RNA电泳要特别注意胶的浓度和质量。
首先，浓度不宜过高，1%-1.2%为宜。
其次，每次配胶不宜过多，最好现用现配，但是一次配100ml，3-5次可用完也可。
溶胶时一定要溶解彻底并且均匀，否则倒胶时产生气泡，影响电泳效果。
晾胶时，要以稍高于体温为佳，温度过高会导致胶体过软，给点样造成困难。
倒胶时，注意胶的厚度，原则是宁厚勿薄，胶板过薄点样孔盛放不下点样量，样品溢出导致弥散。
胶板如果很厚，一般要晾置20分钟以上，否则胶体晾置不彻底，拔掉梳子会破坏点样孔，同时胶体密度也会变得不均一，影响电泳效果。
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA【实验目的】通过实验掌握琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理与方法。
【实验原理】琼脂糖是从海藻中提取出来的一种杂聚多糖，是由D型和L型半乳糖以α-1，3和β-1，4糖苷键相连形成的线状高聚物（如下图所示）。
琼脂糖遇冷水膨胀，溶于热水成溶胶，冷却后成为孔径范围从50nm到大于200nm的凝胶。
琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段最为常用的方法之一，这种方法简便易行。
而且琼脂糖可以灌制成各种形状、大小和孔径，在不同的装置中进行电泳，如果有必要，还能够从凝胶中回收DNA谱带。
琼脂糖凝胶的分离范围较广，选择不同凝胶浓度和装置，从50个碱基对到几兆不同长度的DNA都可以实现分离。
使用电场强度和电泳方向恒定的水平板琼脂糖凝胶电泳的方法，可以很好的分离长度在50-20,000 bp 的DNA片段。
DNA在琼脂糖凝胶中的迁移率受多种因素影响。
例如DNA分子的大小；琼脂糖的浓度；所加电压等等。
DNA片段越长，泳动速度越慢，而且泳动速度与电场强度成正比。
一个给定大小的线性DNA片段，在不同浓度的琼脂糖凝胶中迁移率不同，DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。
用低浓度的荧光染料如溴化乙啶染色后，凝胶中的DNA可以直接被检测出来。
紫外灯下可以直接检测到20pg的双链DNA。
【实验材料】1. 实验器材水平板电泳槽；灌胶模具及梳齿；电泳仪；55℃水浴；沸水浴；微量移液器2.实验试剂（1）DNA样品；DNA标准分子量标记物；琼脂糖；1x电泳缓冲液TBE；6x样品缓冲液（2）溴化乙锭：水中加入溴化乙啶，搅拌数小时至溶解。
将配好的10 mg/ml溴化乙啶溶液装在棕色瓶中，室温保存，使用时稀释至0.5μg/ml。
缓冲溶液配制表【实验操作】1. 照厂家说明准备好灌胶模具，置于水平面上（实验操作示意图如下）。
2. 配制1%琼脂糖凝胶。
取250ml三角瓶，加入100ml TBE缓冲液，称取1克琼脂糖加入缓冲液中，沸水浴加热至完全溶解，然后在55℃水浴中保温。
琼脂糖凝胶电泳实验
琼脂糖凝胶电泳实验⼀、实验原理：琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA ⽚段的常⽤技术。
把DNA样品加⼊到⼀块包含电解质的多孔⽀持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。
由于DNA分⼦的双螺旋⾻架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。
在⼀定的电场强度下，DNA分⼦的迁移速度取决于分⼦筛效应。
具有不同的相对分⼦质量的DNA⽚段泳动速度不⼀样，因⽽可依据DNA分⼦的⼤⼩来使其分离。
凝胶电泳不仅可分离不同分⼦质量的DNA，也可以分离相对分⼦质量相同，⽽构型不同的DNA分⼦。
在电泳过程中可以通过⽰踪染料或相对分⼦质量标准参照物和样品⼀起进⾏电泳⽽得到检测。
相对分⼦质量标准参照物相对可以提供⼀个⽤于确定DNA⽚段⼤⼩的标准。
在凝胶中加⼊少量溴化⼄锭(ethidium bromide, EB)或者ＥＢ类似物，其分⼦可插⼊DNA的碱基之间，形成⼀种络合物，在254～365nm波长紫外光照射下，呈桔红⾊荧光，因此也可对分离的DNA进⾏检测。
⼀般琼脂糖凝胶电泳适⽤于⼤⼩在0.2kb～50kb范围内的DNA⽚段。
三种不同构型分⼦进⾏电泳时的迁移速度⼤⼩顺序为：超螺旋DNA>线性DNA>开环DNA正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的⽤来进⾏⼤⽚段核酸的电泳，⾼浓度的⽤来进⾏⼩⽚段分析。
低浓度胶易碎，⼩⼼操作和使⽤质量好的琼脂糖是解决办法。
注意⾼浓度的胶可能使分⼦⼤⼩相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液常⽤的缓冲液有TAE和TBE，⽽TBE⽐TAE有着更好的缓冲能⼒。
电泳时使⽤新制的缓冲液可以明显提⾼电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使⽤后，离⼦强度降低，PH 值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产⽣条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
Marker的选择DNA电泳⼀定要使⽤DNA Marker或已知⼤⼩的正对照DNA来估计DNA⽚段⼤⼩。
琼脂糖电泳仪验证方案
验证方案审批表验证方案审核验证方案批准目录1、概述2、验证目的3、验证项目4、职责4.1、质监部QC的职责4.2、QC主任的职责4.3、质量负责人的职责5、验证计划6、参考标准7、验证实施7.1、设计确认7.2、安装确认7.3、运行确认7.4、人员培训的确认7.5、文件的确认7.6、验证项目7.7、验证合格证书8、偏差分析与处理9、验证结论10、再验证周期的确定概述一、概述本公司采用MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪来检测供试品溶液。
按照GMP 的要求，需要对该仪器进行设计确认、安装确认、运行确认，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试的需要。
二、仪器基本情况验证目的验证该设备安装是否符合要求，能否持续、稳定地运行 能否满足验证可接受标准和检验分析测试工作的需要。
一、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪设计符合实验要求二、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪的安装符合要求，资料和文件齐全三、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪运行指标符合标准验证项目MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪一、设计确认二、安装确认三、运行确认职责一、质监部QC的职责负责性能确认方案的起草；负责相关指标的检测；负责原始记录的书写；负责原始记录的复核；负责性能确认报告的出具。
二、QC主任的职责审核以确保性能确认方案符合《药品生产质量管理规范(2010年修订)》和相关指导文件的标准；负责性能确认工作的实施；负责性能确认报告的复核。
三、质量负责人的职责批准性能确认方案；批准经性能确认符合规定的仪器投入使用。
验证计划验证计划验证立项时间： 年月日验证时间：年月日 ～年月日验证报告时间： 年月日参考标准《药品生产质量管理规范》（2010年修订）《中国药典》2010年版《药品GMP指南》验证实施一、设计确认确认仪器的设计符合要求，达到标准。
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告。
实验目的，通过琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA分子的大小和数量，以验证DNA的提取和纯度。
实验材料与方法：1. 实验材料，琼脂糖凝胶、TAE缓冲液、DNA样品、DNA分子量标准品、电泳槽、电泳仪等。
2. 实验步骤：a. 制备琼脂糖凝胶，按照比例将琼脂糖和TAE缓冲液混合煮沸后倒入电泳槽中，待凝固后形成琼脂糖凝胶。
b. 样品处理，将待测DNA样品加入适量的载体溶液，并在65°C水浴中恒温30分钟。
c. 电泳操作，将处理后的DNA样品和DNA分子量标准品加载至琼脂糖凝胶孔中，进行电泳操作。
实验结果与分析：经过琼脂糖凝胶电泳检测，观察到DNA样品在电场作用下向阳极迁移，形成明显的DNA条带。
通过对DNA条带的位置和长度进行分析，可以初步判断DNA的大小和纯度。
同时，与DNA分子量标准品进行比对，可以更准确地确定DNA的分子量。
实验结论：本次实验通过琼脂糖凝胶电泳技术成功检测了DNA样品的大小和纯度，验证了DNA的提取和纯度。
实验结果为后续的分子生物学研究提供了重要的数据支持。
实验注意事项：1. 实验过程中需注意琼脂糖凝胶的制备和电泳操作的细节，保证实验结果的准确性。
2. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，保持实验环境的整洁和卫生。
实验改进方向：1. 可以尝试不同浓度的琼脂糖凝胶和不同电泳条件，寻找更适合本实验的操作参数。
2. 可以尝试其他DNA检测技术，与琼脂糖凝胶电泳技术进行对比，寻找更准确、高效的检测方法。
总结：琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验是分子生物学实验中常用的技术手段，通过本次实验的学习和实践，对该技术有了更深入的了解，并为今后的科研工作打下了坚实的基础。
希望通过不断的实验探索和改进，能够为科学研究做出更大的贡献。
以上为琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告内容，如有不足之处，欢迎指正。
琼脂糖凝胶电泳检测
使用3 mg的DNA Marker DL 2,000（500 ng/条带） 进行1%的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下 分别为2kb，1Kb，750bp，500bp，250bp，100bp。
9. 用移液器吸起离心管中溶液，移入凝胶的 梳孔中； 10. 插上导线，打开电泳仪电源，按照需要调 节电压至100V，电泳开始，观察电流情况 或电泳槽中负极的铂金丝是否有气泡出现； 11. 等溴酚蓝泳动至凝胶前沿后，将电压（或 电流）回零，关闭电源，停止电泳； 12. 取出凝胶，在紫外观测仪上观察电泳结果； 13. 根据需要切下DNA条带，放入1.5ml Ep管 中，放于4℃保存，以备下周实验用。
琼脂糖凝胶电泳检测
1.了解琼脂糖凝胶电泳的原理 2. 掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳 的方法 3. 琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中 常规的实验方法，它能检测少量的 DNA（如用肉眼观察，可检测到10 ng的DNA），且检测的范围很广。
4. 琼脂糖凝胶电泳对DNA分子的检测，主要
基于在凝胶中加入溴化乙锭，这样溴化乙 锭分子就会嵌入DNA分子中形成络合物， 使DNA在紫外光下发射很强的荧光，而在 紫外光下DNA发出的荧光是可见光。 在溴化乙锭足够的情况下，荧光的强度正 比于DNA的含量，因而DNA的检测很方便。 如将已知大小和浓度的标准样品（Marker） 作电泳对照，就可估计出待测样品的大小 和浓度。
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琼脂糖凝胶制备步骤
1. 洗净电泳槽、制胶槽、梳子、挡板，晾 干； 2. 插好挡板、梳子； 3. 配制1 %的 Agrose琼脂糖凝胶液：根据实 验所需称取0.4克琼脂糖，放入制胶 的容器 中（一般用三角瓶），然后加入40ml电泳 缓冲液（1×TAE）； 4. 加热煮沸，使琼脂糖完全溶解；
实验：琼脂糖明胶电泳
OCDNA LDNA CC DNA
电 泳 方 向
含不同量琼脂糖的凝胶的分离范围
凝胶中的琼脂糖含量 [%（W/V）] 0.3 0.6 0.7 DNA/RNA分子的分离 范围（ kb ） 5—60 1—20 0.8—10
0.9 1.2
1.5
0.5—7 0.4—6
0.2—3
2
0.1—2
一、实验原理
一、实验原理
电泳是现在用于分离和纯化DNA/RNA片段的
最常用技术。当制备好的一块“胶”即一块包含电 解质的多孔支持介质并把它置于静电场中， DNA/RNA分子将向阳极移动，这是因为DNA/RNA 分子沿其双螺旋骨架两侧带有富含负电荷的磷酸根 残基。
一、实验原理
2.分类
DNA的凝胶电泳常使用两种支持介质：琼脂糖凝胶 和聚丙烯酰胺凝胶 分类 琼脂糖凝胶电泳 凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶 电泳 分离长度 200bp—近 50kb 5—500bp 分辨率高
电泳样品 DNA相对分子质量标准物 电泳缓冲液 沉降DNA并起指示作用 电泳支持介质 嵌入DNA中，在紫外灯下 显色
二、仪器、材料与试剂
1.琼脂糖凝胶电泳系统
二、仪器、材料与试剂
2.紫外投射仪
二、仪器、材料与试剂
3. DNA的染料 EB：即溴化乙锭，它能够插入DNA分子中的碱基对 之间而与DNA结合。由于EB分子的插入，在紫外光 的照射下，凝胶电泳中的DNA条带呈现出红色荧光 ，易于检测。可以检测10ng 的DNA 注意：EB是一种诱变剂，操作时一定要注意安全， 必须戴塑料或乳胶手套
10×：108g Tris碱 15.5mL 85%磷酸 40mL 0.5moL/L EDTA(PH8.0) 5×：54g Tris碱 27.5g硼酸 20mL 0.5moL/L EDTA(PH8.0)
琼脂糖凝胶电泳
分辨率与凝胶浓度的关系？ 3、DNA荧光染料的发光原理？
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分 子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分 子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子 量的对数值成反比关系。
溴化乙锭(EB)为扁平状分子，在紫外光照射下发射荧光。EB可与DNA分 子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度 大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的DNA。
（一）制胶
1、称取1.5g琼脂糖加入盛有100 ml 0.5TAE电泳缓冲液的250 ml三角瓶中， 摇匀，在微波炉上加热至琼脂糖完全溶 解。冷却到约60℃后，加入10 l的EB， 并摇匀。
2、将溶解的琼脂糖（约50℃）倒入制胶模 具中，直至厚度为4-6 mm，插入适当的 梳子，在室温下冷却凝固。
五、实验用具
移液器 吸管头若干 加样板 量筒100 ml1 三角瓶500 ml1
六、试剂
琼脂糖 50TAE电泳缓冲液 6 载样缓冲液 （loading buffer） 溴化乙锭(EB) DNA分子量标准（DNA marker）：Marker III
七、实验步骤
（一）制胶（1% agarose gel） （二）点样 （三）电泳 （四）观察
实验三、琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是分子克隆的核心技术之一，用于分 离、鉴定和纯化DNA片段。凝胶中DNA的位置可以用 低浓度的荧光插入染料染色直接观察。
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告引言：DNA是生物体中的重要遗传物质，通过检测和分析DNA可以揭示生物体的遗传信息。
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分析方法，本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA样品的大小和纯度。
实验材料与方法：1. 实验材料：- DNA样品- DNA标准品- TBE缓冲液- 碱基对应的引物- DNA扩增反应体系- 琼脂糖凝胶- DNA电泳仪2. 实验方法：1) 准备琼脂糖凝胶：a. 取适量琼脂糖粉末加入TBE缓冲液中，搅拌均匀。
b. 将混合液加热至溶解，然后冷却至室温。
c. 将琼脂糖凝胶液倒入电泳槽中，插入梳子，待凝固。
2) 准备DNA样品：a. 取DNA样品，加入适量的DNA扩增反应体系。
b. 在PCR仪中进行DNA扩增反应，得到待检测的DNA样品。
3) 进行电泳检测：a. 取一定量的DNA样品和DNA标准品，加入电泳槽中的样品槽。
b. 打开电泳仪，设定适当的电压和时间。
c. 开始电泳，观察DNA在琼脂糖凝胶中的迁移情况。
结果与讨论：通过琼脂糖凝胶电泳检测，我们可以观察到DNA样品在电场作用下在琼脂糖凝胶中的迁移情况。
根据DNA片段的大小，我们可以通过比较DNA样品与DNA标准品的迁移距离，确定DNA样品的大小。
在实验中，我们发现不同大小的DNA片段会以不同的速度迁移，较小的DNA片段迁移速度较快，较大的DNA片段迁移速度较慢。
这是因为琼脂糖凝胶的孔径大小会影响DNA片段的迁移速度，较小的孔径会使DNA片段迁移速度变慢。
此外，我们还可以通过观察琼脂糖凝胶中DNA样品的带状图案来评估DNA样品的纯度。
如果带状图案清晰且无杂带，说明DNA样品较纯；而如果带状图案模糊或有多个杂带，说明DNA样品可能存在杂质或降解。
总结：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分析技术，通过观察DNA片段在琼脂糖凝胶中的迁移情况，我们可以确定DNA样品的大小和纯度。
这种技术在生物学研究和医学诊断中具有重要意义，可以帮助科学家们更好地理解生物体的遗传信息。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是分子生物学实验中常用的技术之一，其目的主要包括以下几个方面：1、分离和鉴定 DNA 片段：通过电泳可以将不同大小的 DNA 片段在琼脂糖凝胶中按照分子量大小进行分离，从而能够直观地观察到DNA 样品的组成和纯度。
2、检测 DNA 的质量：通过观察电泳图谱中 DNA 条带的亮度、清晰度和完整性，可以评估 DNA 样品的质量，判断是否存在降解、杂质污染等情况。
3、定量分析 DNA 浓度：结合已知浓度的 DNA 标准品，通过比较样品条带与标准品条带的亮度，可以对 DNA 样品的浓度进行大致的估算。
二、实验原理琼脂糖是一种从海藻中提取的线性多糖聚合物。
当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固，会形成网状的凝胶结构。
由于琼脂糖凝胶具有分子筛效应，DNA 分子在电场中会向正极移动，其迁移速度取决于 DNA 分子的大小和构象。
较小的 DNA 分子在凝胶中受到的阻力较小，迁移速度较快；较大的 DNA 分子受到的阻力较大，迁移速度较慢。
因此，不同大小的 DNA 分子在琼脂糖凝胶中会被分离成不同的条带。
在电泳过程中，通常使用溴化乙锭（EB）等荧光染料对 DNA 进行染色。
EB 能嵌入DNA 分子的碱基对之间，在紫外线照射下发出荧光，从而使 DNA 条带得以显现。
三、实验材料与设备1、实验材料DNA 样品：本次实验使用的是经过提取和纯化的λDNA 样品。
琼脂糖：选用高纯度的琼脂糖粉末。
电泳缓冲液：5×TBE 缓冲液（Tris硼酸EDTA），使用时稀释至1×TBE 工作液。
上样缓冲液（Loading Buffer）：含有甘油、溴酚蓝等成分，用于增加样品密度，便于样品沉入加样孔，并指示电泳进程。
核酸染料：溴化乙锭（EB）溶液。
2、实验设备电泳仪：提供稳定的直流电源，用于产生电场。
水平电泳槽：放置琼脂糖凝胶，容纳电泳缓冲液。
凝胶成像系统：用于观察和拍摄电泳结果。
琼脂糖核酸电泳
琼脂糖核酸电泳
1、实验准备：
1）、仪器：核酸电泳仪、电泳槽、胶床、梳子
2）、试剂：琼脂糖、EB染料（1mg/ml）、TAE缓冲液、6*loading buffer、核酸样品、Marker
3）、器材：10ul枪及枪头
2、实验流程：
1、根据制胶量及胶浓度准确称量琼脂粉，加入适当的锥形瓶中（1%琼脂糖凝胶为1g琼脂糖粉溶于100ml1*TAE，一般一块小胶25ml即刻）
附：琼脂糖胶浓度与线性DNA的最佳分辨率范围
琼脂糖浓度最佳线性DNA分辨率范围（bp）
0.5% 1,000~30,000
0.7% 800~12,000
1.0% 500~10,000
1.2% 400~7,000
1.5% 200~3,000
2.0% 50~2,000
2、按配制比例加入电泳缓冲液TAE（加完后总液量不可超过锥形瓶的50%容量，以防加热过程中溢出）
3、锥形瓶口扣一培养皿，振荡混匀，于微波炉中加热融化琼脂糖，至溶液完全透明，一般加热2min。
4、将琼脂糖溶液至室温冷却至60℃左右（以不烫手为宜），加入溴化乙锭溶液（EB染料）1滴（其浓度为0.5ug/ml），注意EB染料有毒。
5、将制胶膜清洗干净，用1*TAE电泳缓冲液冲洗，干燥，在适当位置插上梳子，倒胶，胶层不宜过厚
6、在室温下使胶凝固（2~3h），置于电泳槽中电泳
7、上样（5ul样品+1ul6*loading buffer）
8、电泳（100~120V，500mA）（一般电压恒压140V，电流调至最大）
9、至样品跑至胶块的2/3时（超过1/3，但不超过2/3），停止电泳，一般25~30min。
10、在凝胶成像系统下观察，照相，切胶，进行后续实验。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳实验材料：实验器材：核酸电泳设备，琼脂糖凝胶制备槽，微量移液器，10微升枪头实验试剂：核酸染液（Biotium 10000ΧGelred），10ΧLoading buffer，TAE 电泳缓冲液，DNA Marker(天根)，琼脂糖实验步骤：1.制胶：a)准备干净的配胶板和电泳槽，根据样品量选择合适的制胶板及梳子并组装好；b)根据目的条带大小选择琼脂糖凝胶浓度，琼脂糖凝胶浓度选择参照如下：凝胶浓度（%质量/体积）线性DNA长度（bp）0.5 1000～300000.7 800～120001.0 500～100001.2 400～70001.5 200～30002.0 50～2000注意：对于需要DNA凝胶回收样品，不管分子量大小，都建议用0.8%琼脂糖凝胶以提高胶回收产率。
c)称取琼脂糖粉，放入锥形烧瓶中，加入相应体积的1ΧTAE溶液，用称量纸将瓶口覆盖严实，轻轻摇匀。
放入微波炉中，加热2分钟，小心取出，透过光看液体中是否有透明折光颗粒，若有说明琼脂糖融化不充分，需要继续加热片刻，直至充分溶解；d)根据体积按照1/10000加入核酸染料，摇匀，小心倾倒入制胶板中，待其自然冷却凝固后小心取出梳子连板一起放入电泳槽中（注意正反，样品向红色正极泳动），加入1ΧTAE溶液完全淹没凝胶。
2.上样、电泳：根据样品分子量大小选择合适的DNA Marker，每孔加入6-10ul。
将对照及样品与10Χ Loading Buffer混匀，依次加入凝胶上样孔中（动作轻柔快捷，防止样品逸散飘出）。
盖上盖子，120V恒压电泳25分钟，至样品指示带泳动至距胶另一端0.5-1cm以上结束电泳。
3.拍照（以Image Lab软件为例）：启动软件后，首先根据所用选择正确的核酸染料曝光程序放置，点击软件左下角“放置凝胶（Position Gel）”，在视野下摆正凝胶位置，然后点击“运行（Run Protocol）”4.结果导出：点击左上角”文件(file)”-“将结果导出以便发布”，一般导出图像为Tif格式，分辨率不小于300dpi。
琼脂糖凝胶电泳检测技术
琼脂糖凝胶电泳检测技术1 原理带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。
其中，凝胶电泳由于其操作简便、快速、灵敏等优点，使它成为分离、鉴定和提纯核酸的首选标准方法。
与蛋白质分子类似，核酸分子也是两性解离分子。
在pH3.5时，碱基上的氨基基团解离，而三个磷酸基团中只有第一个磷酸解离，整个分子带正电荷，在电场中向负极泳动；在pH 值为8.0-8.3时，碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电荷，向正极移动。
不同大小和构象的核酸分子的电荷密度大致相同，在自由泳动时，各核酸分子的迁移率区别很小，难以分开。
所以采用适应浓度的凝胶介质作为电泳支持物，发挥分子筛的功能，使不同分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大差异，达到分离的目的。
⑴影响泳动的四大因素：①影响泳动的首要因素是电泳样品的物理性质：包括电荷多少、分子大小、颗粒形状和空间结构。
一般来说颗粒带电荷的密度愈大，泳动速率愈快；颗粒物理形状愈大，与支持物的摩擦力越大，泳动速率越小。
即泳动率与颗粒的分子大小、介质粘度成反比；与颗粒所带电荷成正比。
②支持物介质：DNA的凝胶电泳常使用两种支持材料：琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶。
通过这两种介质的浓度变化调整所形成凝胶的分子筛网孔大小，分离不同分子量的核酸片断。
琼脂糖的孔径大，可以分离长度为100bp至60kb的核酸片断；聚丙烯酰胺凝胶的孔径小，可分离小片断（5-50bp）的核酸。
③电场强度：电泳场两极间单位支持物长度的电压降即为电场强度或电压梯度。
电场强度愈大，带电颗粒的泳动率愈快，但凝胶的有效分离范围随电压的增大而减小。
在低电压时，线性DNA分子的泳动率与电压成正比。
一般凝胶电泳的电场强度不超过5V/cm。
④缓冲液离子强度：缓冲液是电泳场中的导体，它的种类、pH值、离子浓度直接影响电泳的效率。
Tris·Cl缓冲体系中，由于Cl-的泳动速度比样品分子快得多，易引起带型不均一现象，所以常用TAE、TBE、TPE三种缓冲体系。
琼脂糖凝胶电泳检测
凝胶成像分析系统
Lambda DNA / EcoRI + HindIII Marker （Ferments）
一个已知分子质量的 DNA样品做最对照， 用来确定待测样品的 相对分子质量。
• 凝胶电泳系统和电泳图像分析系统(凝胶成 像系统)等。
• 琼脂糖、 1XTBE电泳缓冲液、溴化乙锭、 6X载样缓冲液 （ 6X loading buffer）和DNA 分子量标准（ Lambda DNA / EcoRI + HindIII Marker ）等。
凝胶电泳系统
美国Bio-rad伯乐 小型水平电泳槽Mini-Sub Cell GT Cell
（2 ）加样： 5μl质粒DNA+1μl loading buffer ，混匀
15μlPCR产物+3μl loading buffer，混匀 10μl酶切产物+2μl loading buffer，混匀
6μlDNAMark （每板胶加一孔）
（3 ）电泳：电压3-5V/cm，约80-90V，注意电极方向 （4 ）染色：EB染色约15min
• EB是诱变剂，使用时一定要戴手套。 EB废 液要经过处理才能丢弃。
• SYBR:新型低毒，高灵敏度染料，加入样品 中，价格较昂贵。
【五】实验步骤
1. 制备琼脂糖凝胶（1%） 2. 制备凝胶板 3. 加样 4. 电泳 5. 染色 6. 结果观察
（1）制备凝胶和胶板：
45ml(1×TBE)+0.4g琼脂糖（ 三角瓶 ）， 煮胶，溶解，冷却至60℃(不烫手)，倒板(46mm)，室温下充分凝固，竖直拔下梳子 。 胶板设计（44人）： • 每18孔胶板（5人X3样品+1marker），8胶板 • 每8孔胶板（2人X3样品+ 1marker ），2胶板
琼脂糖凝胶电泳实验
琼脂糖凝胶电泳实验2011-11-03 09:43:56 来源：生物秀评论：0 我要评论实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】（1）学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；（2）掌握使用水平式电泳仪的方法；（3）学习在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳的方法。
【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。
核酸是两性电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的…【注意事项与提示】（1）EB是强诱变剂并有中等毒性，易挥发，配制和使用时都应戴手套，并且不要把EB洒到桌面或地面上。
凡是沾污了EB的容器或物品必须经专门处理后才能清洗或丢弃。
简单处理方法为：加入大量的水进行稀释（达到0.5mg/mL以下），然后加入0.2倍体积新鲜配制的5%次磷酸（由50%次磷酸配制而成）和0.12倍体积新鲜配制的0.5mol/L 的亚硝酸钠，混匀，放置1天后，加入过量的1mol/L碳酸氢钠。
如此处理后的EB的诱变活性可降至原来的1/200左右。
（2）由于EB会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA，使DNA迁移率降低。
因此，如果要准确地测定DNA的分子量，应该采用跑完电泳后再用0.5μg/ml的EB溶液浸泡染色的方法。
（3）总RNA的分析：哺乳动物的RNA由28S rRNA、18S rRNA和mRNA以及其它小分子RNA组成，28S和18S rRNA处为明显的亮带（相当于4.5kb和1.9kb），28S/18S应为1.5-2.5/1；植物、昆虫、酵母和两栖动物的RNA带分布较小，约为0.5-3.0kb左右；假如28S/18S小于1/1，或者出现拖带，说明RNA已经有部分降解，如果28S和18S rRNA大部分已降解，则需重新制备。
【实验安排】只需一天：上午配试剂倒胶，下午跑电泳并观察拍照。
【实验报告要求与思考题】1、附上电泳结果的图片并进行正确的标注（如下图）M：1Kb DNA ladder；1：质粒DNA2、琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？3、如果样品电泳后很久都没有跑出点样孔，你认为有哪几方面的原因？电泳流程图：凝胶加样缓冲液缓冲液类型6×缓冲液贮存温度Ⅰ0.25%溴酚蓝4℃0.25%二甲苯青FF40%（W/V）蔗糖水溶液Ⅱ0.25溴酚蓝室温0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖(Ficoll400)Ⅲ0.25%溴酚蓝4℃0.25%二甲苯青FF30%甘油水溶液Ⅳ0.25%溴酚蓝4℃40%(W/V)蔗糖水溶液碱性加样缓冲液:使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。
对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广，尤其适于分离大片段DNA。
普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。
琼脂糖凝胶电泳操作流程准备干净的配胶板和电泳槽注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。
选择电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。
注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。
低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。
注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。
电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
电泳的合适电压和温度电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA 电泳，温度应该低于15℃。
注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。
琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量
琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量二．材料与方法1 材料RNA样品2 仪器、用具电泳仪、电泳槽、凝胶样品梳、微波炉、移液器等3 试剂(1) 1×TAE 电泳缓冲液(2) 溴化乙锭溶液（EB）[有毒，小心操作](3) 琼脂糖(4) 6×加样缓冲液4 方法(1) 选择孔径大小适合的点样梳，垂直架在胶版的一端，使点样梳底部离电泳槽水平面的距离为0.5-1mm。
(2) 称取0.25g琼脂糖，加入25ml 1×TAE电泳缓冲液中，微波炉加热使琼脂糖溶解均匀。
(3) 于50ml的离心管中加入1.25μl EB (10mg/ml)。
(4) 待凝胶冷却至50℃左右，将凝胶倒入50ml离心管中。
(5) 将离心管中的凝胶溶液轻轻倒入电泳凝胶板上，除去气泡。
(6) 待凝胶凝固后，小心取出点样梳。
(7) 在电泳槽中加入1×TAE 电泳缓冲液，将胶板放入电泳槽中（点样孔一端靠近电泳槽的负极），使电泳缓冲液没过胶面。
(8) 待测样品中加入1/6体积的6×上样缓冲液，混合后，移液枪点样，记录样品点样顺序及样量。
(9) 连接电泳槽与电泳仪之间的电源线，正极为红色，负极为黑色。
(10) 开启电源，开始电泳，最高电压不超过5V/cm。
(11) 当指示剂跑过胶板的2/3，可终止电泳；切断电源后，将电泳凝胶块放在凝胶成像仪中观察，拍照。
电泳检测：1%琼脂糖凝胶电泳，检测RNA完整性，观察18s、28s条带。
这里，RNA电泳要特别注意胶的浓度和质量。
首先，浓度不宜过高，1%-1.2%为宜。
其次，每次配胶不宜过多，最好现用现配，但是一次配100ml，3-5次可用完也可。
溶胶时一定要溶解彻底并且均匀，否则倒胶时产生气泡，影响电泳效果。
晾胶时，要以稍高于体温为佳，温度过高会导致胶体过软，给点样造成困难。
倒胶时，注意胶的厚度，原则是宁厚勿薄，胶板过薄点样孔盛放不下点样量，样品溢出导致弥散。
胶板如果很厚，一般要晾置20分钟以上，否则胶体晾置不彻底，拔掉梳子会破坏点样孔，同时胶体密度也会变得不均一，影响电泳效果。
琼脂糖电泳
1.将凝胶成形模具两端用医用胶布封好，水平放置，将选好的梳子放好，梳子底部与模具之间留1mm空间。
2.称取DNA电泳用琼脂糖0.8g放入250ml的三角烧瓶中，加入100ml 1×TAE缓冲液，混匀后，将烧瓶置于电炉上，加热煮沸，直至琼脂糖完全溶解。
3.关闭电炉，取下三角烧瓶，将其置室温下冷却至70℃左右(手握烧瓶可以耐受)，再加入溴化乙锭(10mg/ml)5μl，混匀后，即将凝胶溶液倒入胶板铺板。本实验所用制胶板约需胶液100ml。
4.室温下待凝胶完全凝固，需时约30分钟，揭去二端胶布，拔出梳齿，将胶板放入电泳槽中。
5.在电泳槽加入1×TAE缓冲液，以高出凝胶表面2mm为宜。
6.取Ep管三支，标号，如下表所示准备电泳样品
123源自样品λDNA/HindⅢ未酶解质粒
酶解质粒
10μl(1r)
10μl(～2r)
10μl(～2r)
6×点样液
2μl
2μl
2μl
7.将上面三管样品置震荡器上混匀，短暂离心。
8.用加样器吸取样品。依序分别加入三个点样孔中，注意加样器吸头应恰好置于凝胶点样孔中，不可刺穿凝胶，也要防止将样品溢出孔外。
9.接通电源，调节电压至50伏，电泳90分钟后，将凝胶板取出，在紫外灯下观察结果
琼脂糖电泳仪验证方案DOC
验证方案审批表目录1、概述2、验证目的3、验证项目4、职责4.1、质监部QC的职责4.2、QC主任的职责4.3、质量负责人的职责5、验证计划6、参考标准7、验证实施7.1、设计确认7.2、安装确认7.3、运行确认7.4、人员培训的确认7.5、文件的确认7.6、验证项目7.7、验证合格证书8、偏差分析与处理9、验证结论10、再验证周期的确定概述一、概述本公司采用MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪来检测供试品溶液。
按照GMP 的要求，需要对该仪器进行设计确认、安装确认、运行确认，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试的需要。
二、仪器基本情况验证目的验证该设备安装是否符合要求，能否持续、稳定地运行可接受标准和检验分析测试工作的需要。
一、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪设计符合实验要求二、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪的安装符合要求，资料和文件齐全三、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪运行指标符合标准验证项目MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪一、设计确认二、安装确认三、运行确认职责一、质监部QC的职责负责性能确认方案的起草；负责相关指标的检测；负责原始记录的书写；负责原始记录的复核；负责性能确认报告的出具。
二、QC主任的职责审核以确保性能确认方案符合《药品生产质量管理规范(2010年修订)》和相关指导文件的标准；负责性能确认工作的实施；负责性能确认报告的复核。
三、质量负责人的职责批准性能确认方案；批准经性能确认符合规定的仪器投入使用。
验证计划验证计划验证立项时间：年月日验证时间：年月日～年月日验证报告时间：年月日参考标准《药品生产质量管理规范》（2010年修订）《中国药典》2010年版《药品GMP指南》验证实施一、设计确认确认仪器的设计符合要求，达到标准。
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验证方案审批表
目录
1、概述
2、验证目的
3、验证项目
4、职责
4.1、质监部QC的职责
4.2、QC主任的职责
4.3、质量负责人的职责
5、验证计划
6、参考标准
7、验证实施
7.1、设计确认
7.2、安装确认
7.3、运行确认
7.4、人员培训的确认
7.5、文件的确认
7.6、验证项目
7.7、验证合格证书
8、偏差分析与处理
9、验证结论
10、再验证周期的确定
概述
一、概述
本公司采用MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪来检测供试品溶液。
按照GMP 的要求，需要对该仪器进行设计确认、安装确认、运行确认，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试的需要。
二、仪器基本情况
验证目的
验证该设备安装是否符合要求，能否持续、稳定地运行
可接受标准和检验分析测试工作的需要。
一、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪设计符合实验要求
二、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪的安装符合要求，资料和文件齐全
三、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪运行指标符合标准
验证项目
MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪
一、设计确认
二、安装确认
三、运行确认
职责
一、质监部QC的职责
负责性能确认方案的起草；
负责相关指标的检测；
负责原始记录的书写；
负责原始记录的复核；
负责性能确认报告的出具。
二、QC主任的职责
审核以确保性能确认方案符合《药品生产质量管理规范(2010年修订)》和相关指导文件的标准；
负责性能确认工作的实施；
负责性能确认报告的复核。
三、质量负责人的职责
批准性能确认方案；
批准经性能确认符合规定的仪器投入使用。
验证计划
验证计划
验证立项时间：年月日
验证时间：年月日～年月日验证报告时间：年月日
参考标准《药品生产质量管理规范》（2010年修订）
《中国药典》2010年版
《药品GMP指南》
验证实施
一、设计确认
确认仪器的设计符合要求，达到标准。
二、安装确认
确认资料齐全，安装符合规范，能满足该仪器的安装条件。
1、资料、文件确认
检查人：复核人：日期：2、环境、电源等(对照使用说明书要求)确认
温度15～35℃相对湿度35%-75%
检查人：复核人：日期：
安装确认结论：
三、运行确认
根据仪器使用说明书，确认仪器各功能模块运转协调，符合设计要求。
检查人：复核人：日期：
运行确认结论：
四、人员培训的确认
所有与本方案有关的人员应接受培训，并签名。
五、文件的确认
确认此确认所支持的文件齐全且均为现行版文件，并记录文件名称、版本号。
六、验证项目
1、运行确认
确认仪器在正常工作下能够正常开启及关闭，运行平稳、无异常噪音。
七、验证合格证书
对经确认合格的仪器由质量监督部颁发确认合格证书，附在性能确认报告后存档。
偏差分析与处理
验证结论
再验证周期的确定
当经历重大维修，或更换关键部件，仪器、设备的安装地点需要变化，软件或硬件升级，出现偏差、数据超出标准或数据趋势分析时，怀疑是仪器、设备造成的应重新确认，并报验委员会审核。
附件清单
人员培训确认记录
文件确认记录
运行确认记录
测试结果总结
安装的确认
资料齐全，安装符合规范，能满足该仪器的安装条件。
人员培训
所有与本方案有关的人员均已接受培训，并签名。
文件的确认
此验证所支持的文件并记录文件名称、版本号均为现行版本，准确无误。
仪器仪表的确认
仪器、仪表完好，经过校准且在有效期内，可以保证验证结果的准确性。
性能验证
运行确认
仪器在正常工作电压下能够正常开启，运行平稳、无异常噪音。
性能验证
电极和滴定液输出的准确度和精密度在可接受范围内，性能良好。
偏差情况
本确认过程中未出现偏差。
再确认周期
当经历重大维修，或更换关键部件，仪器、设备的安装地点需要变化，软件或硬件升级，出现偏差、数据超出标准或数据趋势分析时，怀疑是仪器、设备造成的。
应重新确认。
验证合格证书
对经验证合格的仪器，由质量监督部颁发确认合格证书，附在性能确认报告后存档。
验证报告的审核批准。