2015年版药典 无菌检查法

热 溶 化 后 ，再 加 入 葡 萄 糖 ，摇 勻 ，分 装 ，灭 菌 。
培养基的适用性检査
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中 国 药 典 201'5年版
歌渝公 ｌ郁蓄ｏｕｒｙａｏ · ｃｏｍ
1101 无 菌 检 查 法
无菌检査用的硫乙醉酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培 养 基 等 应 符 合 培 养 基 的 无 菌 性 检 査 及 灵 敏 度 检 査 的 要 求 。本 检 查可在供试品的无菌检査前或与供试品的无菌检査同时进行。
超 过 培 养 基 深 度 的 1/5，否 则 ，须 经 100°C水 浴 加 热 至 粉 红
色 消 失 （不 释 过 2 0 分 钟 ），迅 速 冷 却 ，只 限 加 热 一 次 ，并防
止被污染。 除 另 有 规 定 外 ，硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 置 3 0 〜 3 5 C
培养。
2.胰酪大豆胨液体培养基
如 需 要 ，可 在 上 述 稀 释 液 或 冲 洗 液 的 灭 菌 前 或 灭 菌 后 加
人表面活性剂或中和剂等。
方法适用性试验
进 行 产 品 无 菌 检 查 时 ，应 进 行 方 法 适 用 性 试 验 ，以确认 所 采 用 的 方 法 适 合 于 该 产 品 的 无 菌 检 查 。若检验程序 或 产 品 发 生 变 化 可 能 影 响 检 验 结 果 时 ，应 重 新 进 行 方 法 适 用 性 试 验 。
无 菌 性 检 查 每 批 培 养 基 随 机 取 不 少 于 5 支 ( 瓶 ），置各 培 养 基 规 定 的 温 度 培 养 1 4 天 ，应 无 菌 生 长 。
灵敏度检査 菌 种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代(从 菌 种 保 存 中 心 获 得 的 干 燥 菌 种 为 第 0 代 ），并 采 用 适 宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验 菌株的 生物 学特 性。 金 黄 色 葡 萄 球 菌 （Staphylococcus aureus ) C C M C C (B) 26 003〕 铜 绿 假 单 胞 菌 （Pseudomonas aeruginosa ) C C M C C ( B) 10 104〕 枯 草 芽 孢 杆 菌 仏 5)〔C M C C ( B ) 6 3 501〕 生 抱 梭 菌 sporogenes) C C M C C ( B ) 64 941〕 白 色 念 珠 菌 albicans) C C M C C ( F ) 98 001〕 黑 曲 霉 n ig e r) C C M C C ( F ) 98 003〕 苗 液 制 备 接 种 金 黄 色 葡 萄 球 菌 、铜 绿 假 单 胞 菌 、枯草 芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大 豆 胨 琼 脂 培 养 基 上 ，接 种 生 孢 梭 菌 的 新 鲜 培 养 物 至 硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 中 ，30〜 35°C培 养 18〜 2 4 小 时 ；接 种 白 色 念 珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖 琼 脂 培 养 基 上 ，20〜 25°C培 养 24〜 4 8 小 时 ，上 述 培 养 物 用 PH7. 0 无 菌 氣 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9% 无 菌 氣 化 钠 溶 液 制 成 每 l m l 含 菌 数 小 于 lOOcfu( 菌 落 形 成 单 位 ）的 菌 悬 液 。接 种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上， 20〜25*C培 养 5〜7 天 ，加 人 3〜 5 m l含 a 0 5 % (m l/m l) 聚山 梨 酯 8 0 的 pH7. 0 无 菌 氣 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9 % 无 菌 氣 化 钠 溶 液 ，将 孢 子 洗 脱 。然 后 ，采 用 适 宜 的 方 法 吸 出 孢 子 悬 液 至 无 菌 试 管 内 ，用 含 0.05% ( m l/m l) 聚 山 梨 醋 8 0 的 pH7. 0 无 菌 氣 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9 % 无 菌 氣 化 钠 溶 液 制 成 每 l m l 含 孢 子 数 小 于 lOOcfu的 孢 子 悬 液 。 菌 悬 液 若 在 室 温 下 放 置 ，应 在 2 小 时 内 使 用 ；若 保 存 在 2〜8°C可 在 2 4 小 时 内 使 用 。黑 曲 霉 孢 子 悬 液 可 保 存 在 2 〜 8°C，在 验 证 过 的 贮 存 期 内 使 用 。 培 养 基 接 种 取 每 管 装 量 为 12ml的硫乙醇酸盐流体培 养 基 7 支 ，分 别 接 种 小 于 lO O c fu 的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 、铜 绿 假 单胞菌、生 孢 梭 菌 各 2 支 ，另 1 支 不 接 种 作 为 空 白 对 照 ，培 养 3 天 ；取 每 管 装 量 为 9 m l的 胰 酪 大 豆 胨 液 体 培 养 基 7 支 ，分 别接种小 于lOOcfu的 枯 草 芽 孢 杆 菌 、白 色 念 珠 菌 、黑 曲 霉 各 2 支，另 1 支不接种作为空白对照，培 养 5 天 。逐 日观 察结果。 结 果 判 定 空 白 对 照 管 应 无 菌 生 长 ，若 加 菌 的 培 养 基 管 均 生 长 良 好 ，判 该 培 养 基 的 灵 敏 度 检 查 符 合 规 定 。
3.56g，无 水 磷 酸 氢 二 钠 5 .7 7 g ,氣 化 钠 4.30g, 蛋 白 胨
l.OOg，加 水 1 0 0 0 m l,微 温 溶 解 ，滤 清 ，分 装 ，灭 菌 。
根 据 供 试 品 的 特 性 ，可 选 用 其 他 经 验 证 过 的 适 宜 的 溶 液
作 为 稀 释 液 、冲 洗 液 ( 如 0 .9 % 无 菌 氣 化 钠 溶 液 ）。
溶 液 ，摇 匀 ，调 节 p H , 使 灭 菌 后 在 25°C的 p H 值为
7.1 土0 . 2 。分 装 至 适 宜 的 容 器 中 ，其 ห้องสมุดไป่ตู้ 量 与 容 器 高 度 的 比 例
应 符 合 培 养 结 束 后 培 养 基 氧 化 层 （粉 红 色 )不 超 过 培 养 基 深 度 的 1/2。灭 菌 。在 供 试 品 接 种 前 ，培 养 基 氧 化 层 的 高 度 不 得
的 灭 菌 程 序 灭 菌 。制 备 好 的 培 养 基 应 保 存 在 2 〜 25°C、避光
的 环 境 ，若 保 存 于 非 密 闭 容 器 中 ，一 般 在 3 周 内 使 用 ；若保
存 于 密 闭 容 器 中 ，一 般 可 在 一 年 内 使 用 。
1. 硫 乙 酵 酸 盐 流 体 培 养 基
胰酪胨 大豆木瓜蛋白酶水解物
1 7 .0g 3. 0g
氣化钠 磷酸氢二钾
5.0g 2. 5g
葡 萄 糖 /无 水 葡 萄 糖 2. 5g/2. 3g
水
1000m l
除 葡 萄 糖 外 ，取 上 述 成 分 ，混 合 ，微 温 溶 解 ，滤 过 ，调 节 p H 使 灭 菌 后 在 2 V C 的 p H 值 为 7. 3 ± 0 . 2 ，加 入 葡 萄 糖 ，
1101 无 菌 检 查 法
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中 画 药 典 2 0 1 5 年版
1 1 0 0 生物检查法
1 1 0 1 无菌检查法
无 菌 检 查 法 系 用 于 检 査 药 典 要 求 无 菌 的 药 品 、生物制 品 、医 疗 器 具 、原 料 、辅 料 及 其 他 品 种 是 否 无 菌 的 一 种 方 法 。若 供 试 品 符 合 无 菌 检 查 法 的 规 定 ，仅 表 明 了 供 试 品 在 该 检验条件下未发现微生物污染。
稀释液、冲洗液及其制备方法
稀 释 液 、冲 洗液配 制后 应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
1, 0.1% 无 菌 蛋 白 胨 水 溶 液 取 蛋 白 胨 l.O g ，加 水
1 0 0 0 m l,微 温 溶 解 ，滤 清 ，调 节 p H 值 至 7.1 士 0 .2 ，分 装 ，
灭菌。 2.
、 pH 7.0无 苗 氣 化 钠 - 蛋 白 胨 缓 冲 液 取 磷 酸 二 氢 钾
培养基
硫 乙醇 酸盐 流 体 培 养基主要 用于厌氧菌的 培养 ，也可用于
需 氧 菌 的 培 养 ；胰 酪 大 豆 胨 液 体 培 养 基 用 于 真 菌 和 需 氧 菌 的
培养。
培养基的制备及培养条件
培 养 基 可 按 以 下 处 方 制 备 ，亦 可 使 用 按 该 处 方 生 产 的 符
合 规 定 的 脱 水 培 养 基 或 成 品 培 养 基 。配制后应采用验 证合格
分 装 ，灭 菌 。 胰酪大豆胨液体培养基置20〜2 5 1 培 养 。
3 . 中和或灭活用培养基
按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基
的 处 方 及 制 法 ，在 培 养 基 灭 菌 或 使 用 前 加 入 适 宜 的 中 和 剂 、
灭 活 剂 或 表 面 活 性 剂 ，其 用 量 同 方 法 适 用 性 试 验 。 4. 0 .5 % 葡 萄 糖 肉 汤 培 养 基 (用 于 硫 酸 链 霉 素 等 抗 生 素 的
后 ，摇 匀 ，分 装 ，灭 菌 。
6 . 沙氏葡萄糖液体培养基
动物组织胃蛋白酶水解物
水
1000m l
和 胰 酪 胨 等 量 混 合 物 10. 0g
葡萄糖
20.0g
除 葡 萄 糖 外 ，取 上 述 成 分 ，混 合 ，微 温 溶 解 ，调 节 p H 使 灭 菌 后 在 25°C的 p H 值 为 5. 6 士0 . 2 ，加 人 葡 萄 糖 ，摇 匀 ，
胰酪胨
15_ 0g 氣 化钠
2. 5g
酵母浸出粉
5. 0g 新 配 制 的 0. 1 % 刃天
无水葡萄糖
5.0g
青溶液
1.0m l
L-胱氨酸
0. 5g 琼脂
0. 75g
硫乙醇酸钠
0.5g 水
1000ml
(或硫乙醇酸）
（0_3ml)
除 葡 萄 糖 和 刃 天 青 溶 液 外 ，取 上 述 成 分 混 合 ，微 温 溶 解 ，调 节 p H 为 弱 碱 性 ，煮 沸 ，滤 清 ，加 人 葡 萄 糖 和 刃 天 青
5 .胰酪大豆胨琼脂培养基
胰酪胨
15.0g
琼脂
1 5 . 0g
大豆木瓜蛋白酶水解物
5.0g
水
1000m l
氣化钠
5.0g
除 琼 脂 外 ，取 上 述 成 分 ，混 合 ，微 温 溶 解 ，调 节 p H 使 灭 菌 后 在 25°C的 p H 值 为 7_3士0.2，加 人 琼 脂 ，加 热 溶 化
无 菌 检 查 应 在 无 菌 条 件 下 进 行 ，试 验 环 境 必 须 达 到 无 菌 检 査 的 要 求 ，检 验 全 过 程 应 严 格 遵 守 无 菌 操 作 ，防止 微 生 物 污 染 ，防 止 污 染 的 措 施 不 得 影 响 供 试 品 中 微 生 物 的 检 出 。单 向 流 空 气 区 、工 作 台 面 及 环 境 应 定 期 按 医 药 工 业 洁 净 室 （区 ） 悬 浮 粒 子 、浮 游 菌 和 沉 降 菌 的 测 试 方 法 的 现 行 国 家 标 准 进 行 洁 净 度 确 认 。隔 离 系 统 应 定 期 按 相 关 的 要 求 进 行 验 证 ，其内 部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。 日常检验还需对试 验环境进行监控。
分 装 ，灭 菌 。 7 . 沙 氏葡萄糖琼脂培养基
动物组织胃蛋白酶水解物
琼脂
15.0g
和 胰 酪 胨 等 量 混 合 物 1 0 .0g
水
葡萄糖
40.0g
1000m l
除 葡 萄 糖 、琼 脂 外 ，取 上 述 成 分 ，混 合 ，微 温 溶 解 ，调 节 p H 使 灭 菌 后 在 25°C的 p H 值 为 5. 6 士0. 2 ，加 人 琼 脂 ，加
无菌检查） 胨 牛肉浸出粉
1 0 .0g 3 . 0g
氣化钠 水
5 . 0g
1000m l
葡萄糖
5. Og
除 葡 萄 糖 外 ，取 上 述 成 分 混 合 ，微 温 溶 解 ，调 节 p H 为
弱 碱 性 ，煮 沸 ，加 入 葡 萄 糖 溶 解 后 ，摇 勻 ，滤 清 ，调 节 p H 使 灭 菌 后 在 25°C的 p H 值 为 7. 2 士0 . 2 ，分 装 ，灭 菌 。