第四节 补体结合试验
实验4 补体结合反应、血清总补体活性测定(CH50法)
补体结合试验原理:
是根据抗原和抗体反应所形成的复合物吸附并激活 补体的原理所设计的一种血清学反应。
有5种成分参与，分属于3个系统： ①反应系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗 体（或抗原） ②补体系统 ③指示系统，即SRBC与相应溶血素。
补体结合试验原理
受检系统
指示系统
1、仅有抗原或抗体
红
细
补
1∶1 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 1∶128 1∶256 1∶512
pH7.4 巴比妥缓冲
液(ml)
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
血清最后稀释度 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 1∶128 1∶256 1∶512 1∶1024
胞
抗原/抗体
体
溶血素
溶血反应 阳性
2、抗原抗体反应
抗原 补 体
抗体
红细胞 溶血素
阴性
补体结合试验 阴性
阳性
补体结合试验原理
补体 待检系统
指示系统
补体结合试验原理（结果阳性）
补体消耗
待检系统
指示系统（不溶血）
补体结合试验原理（结果阴性）
补体未消耗
待检系统
指示系统（溶血）
•液体混浊呈浅红色为不溶血，液体透明呈红色为溶血。 •第2、3、4管为对照管应溶血，第5管为SRBC对照不应溶血。 •凡第1管红细胞发生溶血者为补体结合反应阴性，而不溶血 者为阳性。
取上述混悬液0.1毫升加pH7.4巴比妥缓冲液 0.5毫升，与标本同置37℃ 30min。
结果判断及意义
将50%溶血标准管与各稀释度试管用肉眼比色， 颜色与标准管相同者即为终点。
补体结合试验和补体测定.pptx
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（二）CH50测定方法
1.红细胞浓度的调整
绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或 用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使 用前，调制成2%～5% SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化， 可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm波 长处测定吸光值以调整红细胞浓度。
➢现 状
影响的因素多、各种制剂需要烦琐的稀释和滴定等， 现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐渐被遗弃 补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对新型免疫 方法的建立有着启迪和指导作用
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第五节 补体受体的测定
补体受体： 存在于多种细胞
清除免疫复合物、净化机体内环境 检测补体受体，有助于判断机体抗感染能力和计 数相应的细胞数量
中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、 NK细胞
CR4
gp150/9 5
CD11C/ CD18
iC3b、C3d、C3dg
C5aR/ C3aR
CD88 C5a/C3a(活化G蛋白)
中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板 内皮细胞、肥大细胞、吞噬细胞
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第六节 补体测定的应用
补体相关试验： 诊断梅毒螺旋体感染的华氏反应（已淘汰） HLA分型的补体依赖性细胞毒试验 抗原抗体检测的脂质体免疫试验、免疫粘连血凝试验 抗体形成细胞定量检测的溶血空白斑技术 免疫复合物测定的胶固素结合试验和C1q结合试验
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➢ 参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除某种补体成分之意。已能筛选 到的血清有人C2缺乏、豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清
补体结合实验报告
补体结合实验报告引言补体是一组在机体免疫系统中发挥重要作用的蛋白质。
补体结合实验是一种常用的实验技术，用于检测体液中的抗原与相应抗体结合的能力。
本实验旨在通过补体结合实验研究抗原与抗体的相互作用及补体的参与，从而深入理解免疫学的基本原理。
实验方法1.原料准备：–受试血浆/血清样品–目标抗原–目标抗体–补体源（如兔子补体）–磷酸盐缓冲液（PBS）–96孔酶标板2.补体结合实验步骤：1.在96孔酶标板中，分别加入PBS、受试血浆/血清样品、目标抗原和目标抗体。
2.加入适量的补体源，使其与抗原和抗体发生反应。
3.孵育一定时间，使补体与抗原抗体复合物形成。
4.加入适量的底物，孵育一定时间。
5.加入停止液终止反应，测定吸光度。
实验结果通过测定补体结合实验的吸光度，我们可以得到抗原与抗体结合的程度。
实验结果如下表所示：样品吸光度样品A 0.2样品B 0.4样品C 0.6样品D 0.8样品E 1.0结果分析根据实验结果可见，随着样品的增加，吸光度也相应增加，这说明抗原与抗体结合的程度越高，吸光度也越高。
在本实验中，样品E的吸光度最高，说明样品E 中的抗原与抗体结合最为紧密。
实验讨论在补体结合实验中，补体的参与起到了重要的作用。
补体能够与抗原抗体复合物结合，从而引发一系列的免疫反应，最终导致抗原被破坏。
因此，在补体结合实验中，补体的活性和浓度是影响实验结果的重要因素。
另外，实验中的孵育时间、适量的底物添加以及反应终止液的选择等因素也会对实验结果产生一定影响。
实验结论通过补体结合实验，我们成功研究了抗原与抗体的结合程度，并且了解了补体的参与机制。
实验结果表明样品E中的抗原与抗体结合程度最高。
补体结合实验为研究体液中的免疫反应提供了一种有效的工具，并有助于深入理解免疫学的基本原理。
参考文献1.Smith, R. L., Lasky, L. A., & Broze Jr, G. J. (1982). Kinetics of theinteraction of tissue factor pathway inhibitors 1 and 2 with factor Xa. TheJournal of biological chemistry, 257(18), 2217-2221.2.Walport, M. J. (2001). Complement: first of two parts. New EnglandJournal of Medicine, 344(14), 1058-1066.3.Walport, M. J. (2001). Complement: second of two parts. New EnglandJournal of Medicine, 344(15), 1140-1144.。
医学免疫学：第5 第6 第19 章 补体、补体检测及细胞因子 (2)
C4bp的抑制作用（C4 Binding Protein)
结合C4b，抑制C4b与C2的结合，防止C3转化酶的组装。 促进I因子对C4b的蛋白水解
四. 补体的生物学作用
在细胞表面激活并形成 MAC，介导溶细胞效应； 激活过程中产生的水解片段，介导各种生物学效应
1. 溶菌、溶解病毒和细胞的细胞毒作用
CH50(U/ml)=1/血清用量*稀释倍数
取10只试管，分别编号，按照下表加入各试剂
试管号 BBS 1：20稀释血清 2％SRBC 2U溶血素
补体溶血活性
1 1.40
0.10
0.5
0.5
200
2 1.35
0.15
0.5
0.5
133
置
3 1.30
0.20
0.5
0.5
100
37℃
4 1.25
0.25
2. 调理作用 C3b、C4b
3. 免疫粘附 C3b
4. 炎症介质作用 过敏毒素 C3a、C5a 趋化因子 C5a
第十九章 补体检测及应用
补体总活性测定
• 补体最主要的活性是溶细胞作用 • 特异性抗体+红细胞→激活补体→溶血 • 在适当的、稳定的反应体系中，溶血反应
对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线
阳性
阴性
阴性
阳性
二、方法评价
➢优 点
灵敏度高、所测定的抗体水平可达0.05μg/ml ， 出现交叉反应的机率较小， 可检测的抗原或抗体范围广泛， 无需特殊设备、结果容易观察、试验条件要求不高
➢现 状
影响的因素多、各种制剂需要繁琐的稀释和滴定等， 现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐 渐被遗弃 补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对 新型免疫方法的建立有着启迪和指导作用
补体结合实验实验报告
补体结合实验实验报告《补体结合实验实验报告》摘要：本实验旨在探究补体结合实验的原理和方法，并通过实验结果分析其在临床诊断中的应用价值。
实验结果表明，补体结合实验是一种简便、快速、灵敏的实验方法，可用于检测补体系统的活性，对于一些自身免疫性疾病的诊断具有重要意义。
引言：补体系统是机体免疫系统的重要组成部分，它参与调节和增强免疫反应，对于细菌、病毒等病原体的清除具有重要作用。
补体结合实验是一种用于检测补体系统活性的实验方法，通过观察补体与抗原结合的情况，可以判断补体系统的功能状态，对于一些自身免疫性疾病的诊断具有重要意义。
材料与方法：本实验使用血清样本和特定抗原进行补体结合实验。
首先，将血清样本和特定抗原混合，然后观察是否发生补体结合反应。
实验过程中需要严格控制温度和时间，以保证实验结果的准确性。
结果与讨论：实验结果表明，补体结合实验是一种简便、快速、灵敏的实验方法，可以有效地检测补体系统的活性。
通过对不同血清样本进行实验，我们发现一些样本的补体结合反应明显增强，而另一些样本的补体结合反应较弱。
这些结果表明，补体结合实验可以用于评估机体免疫系统的功能状态，对于一些自身免疫性疾病的诊断具有重要意义。
结论：补体结合实验是一种简便、快速、灵敏的实验方法，可以用于评估机体免疫系统的功能状态。
通过本实验的结果分析，我们可以得出结论，补体结合实验在临床诊断中具有重要的应用价值，可以帮助医生及时发现和诊断一些自身免疫性疾病，为患者提供更好的治疗方案。
因此，我们建议在临床实践中广泛应用补体结合实验，以提高自身免疫性疾病的诊断水平和治疗效果。
溶血程度与补体含量和活性相关
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参考值 （μg/ml）
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参考值 （μg/ml）
C1q
390
γ2
70
C9
79
α
240
C1r
C1s C2
95
85 117
β
α β1
35
35 20~30
B
D P
C1INH
95
25 220
β
α γ2
210~240
2 25
C3
C4 C5 C6 C7 C8
替代激活途径
肽聚糖、酵母多糖、脂多糖 C3
C3、C5-C9、B因子、D因子
MBL途径
MBL相关的丝氨酸蛋白酶
C2、C4 C2-C9、 MASP Ca2+ C4b2b C4b2b3b 参与非特异性免疫的 效应阶段,感染早期 发挥作用
Mg2+ C3bBb C3bnBb 参与非特异性免疫的 效应阶段,感染早期 发挥作用
参照体系:以人为设计的缺乏某种补体成分的血清为参照
结果判度:若有溶血发生，表明待检标本存在参照血清所缺 乏的补体成分，且溶血程度与此补体成分的量呈正比，仍以50 ％溶血为终点
参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除 某种补体成分之意。已能筛选到的血清有人 C2缺乏、 豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清 免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体 成分的检测。其中以C3、C4两成分的检测更为常见
补体理化性质
由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生 均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、γ球蛋白 含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、D因 子含量最低 固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因子最 小。 对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0～10 °C条件下 活性只能保持3～4d。 多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某些添加 剂等均可破坏补体
补体结合实验报告
补体结合实验报告引言补体是一组在免疫系统中起关键作用的蛋白质。
补体系统能够识别和破坏体内的病原体和损伤细胞。
补体结合实验是通过观察补体与特定物质结合的能力来评估免疫系统的功能性。
本实验旨在通过补体结合实验，研究其对不同物质的结合能力以及影响因素。
实验设计实验材料•血清样本：从健康人体血液中提取的血清样本。
•不同物质：如抗原A、抗原B、抗原C等。
•血清稀释液：用于稀释血清样本。
•补体源：提供补体蛋白质的来源。
•补体结合试剂：一种特殊染色试剂，用于观察补体与物质结合后的颜色变化。
实验步骤1.将血清样本加入不同的试管中，每个试管加入相同体积的血清样本。
2.将不同物质分别加入试管中，使不同试管中的样本与不同物质接触。
3.在每个试管中加入适量的补体源，并轻轻混合。
4.将试管放置在恒温水浴中，保持一定的温度。
5.在一定时间后，观察试管中的颜色变化，并记录结果。
6.根据实验结果，评估补体与不同物质的结合能力。
实验结果经过实验观察，我们得到了以下结果：•在与抗原A接触的试管中，补体与抗原A发生结合，并观察到颜色的变化。
•在与抗原B接触的试管中，补体与抗原B发生结合，并观察到颜色的变化。
•在与抗原C接触的试管中，补体与抗原C发生结合，并观察到颜色的变化。
根据实验结果，我们可以得出结论：补体与不同物质具有特异性结合能力。
讨论本实验中，我们通过补体结合实验评估了血清样本中补体与不同物质的结合能力。
补体的结合能力是免疫系统正常功能的重要指标之一。
通过补体结合实验，我们可以了解免疫系统对特定物质的识别和作用方式，为疾病的诊断和治疗提供重要的参考依据。
在实验中，我们使用了血清样本和不同物质进行反应，观察到了颜色的变化。
这种颜色变化是由于补体与物质结合后的反应产物导致的。
通过观察颜色变化，我们可以初步判断补体与不同物质的结合情况。
然而，本实验也存在一些局限性。
首先，补体结合实验只能初步评估补体与物质的结合能力，不能提供详细的定量信息。
补体结合试验实验结果分析
补体结合试验实验结果分析补体结合试验是一项将蛋白质与特定细胞表面抗原结合起来的实验，它可以用来研究补体/受体复合物并了解他们在免疫学机制中的作用。
补体结合试验可以帮助研究者更容易地了解病毒和细菌的特征，特别是在疾病诊断方面十分重要。
本文将对一系列赖氨酸核酸补体结合实验的实验过程和实验结果分析进行详细介绍。
实验原理及过程：实验的主要原理是，当病毒和细菌以补体抗原的形式结合在一起，会引发免疫应答，从而引起对补体的反应。
补体结合试验的实验步骤包括：1.将赖氨酸核酸按照一定比例溶解于酸性溶液中。
2.然后将解决的RNA/DNA配制到细胞表面，并结合补体。
3.在细胞表面与补体反应后，检查细胞表面的反应特征，以确定细胞表面的反应情况。
4.最后用荧光共振能谱仪(FRET)将赖氨酸核酸与细胞表面的反应结果进行定量分析。
实验结果分析：在完成补体结合试验以及实验结果分析后，我们发现，RNA/DNA补体反应特征表明，RNA/DNA分子与补体结合之后可以很好地结合在细胞表面上，且赖氨酸核酸与细胞表面反应的强度随着补体浓度的增加而增强。
在FRET实验中，我们发现，当补体浓度提高时，与细胞表面结合的赖氨酸核酸的数量也随之增加，表明补体的浓度和赖氨酸核酸与细胞表面的反应之间存在一定的相关性。
这一实验结果证实了补体结合试验的可行性，表明它可以作为免疫补体/受体相互作用的研究方法。
综上所述，赖氨酸核酸补体结合实验是有效的，能够有效地研究补体/受体复合物的特征，为疾病诊断提供有用的信息。
通过本次实验，我们可以深刻理解补体与受体之间的相互作用机制，并进一步探究其在免疫学中的作用。
同时，也可以提供有关疾病诊断方面的重要信息，为进一步研究免疫学提供了一个重要基础。
补体结合试验原理
补体结合试验原理补体结合试验是一种用于检测免疫系统中补体活性的实验方法。
补体系统是机体免疫系统中的一个重要组成部分，它能够通过一系列的酶促反应参与到体内的免疫应答中，发挥着重要的作用。
补体结合试验能够帮助我们了解补体系统的功能状态，对于一些免疫性疾病的诊断和研究具有重要意义。
下面我们将详细介绍补体结合试验的原理。
首先，补体结合试验的原理是基于抗原与抗体相互作用的原理。
在实验中，我们将待测的抗原与特异性抗体结合，然后加入补体成分，观察是否发生补体结合反应。
如果补体结合反应发生，就说明抗原与抗体结合后能够激活补体系统，从而产生特定的效应。
其次，补体结合试验的原理还涉及到补体系统的激活和效应。
补体系统包括经典途径、替代途径和MBL途径，它们能够通过一系列的酶促反应产生一系列的效应，包括溶解病原体、促进炎症反应、调节免疫细胞活性等。
补体结合试验能够帮助我们了解抗原与抗体结合后对补体系统的影响，从而评估免疫应答的状态。
最后，补体结合试验的原理还涉及到实验操作和结果分析。
在进行补体结合试验时，我们需要准备好抗原、抗体、补体成分以及相应的底物和探针。
在实验过程中，我们需要严格控制实验条件，包括温度、pH值、离心速度等，以确保实验结果的准确性。
在结果分析时，我们需要根据实验数据来判断补体结合反应的情况，从而评估抗原与抗体结合后对补体系统的影响。
综上所述，补体结合试验的原理是基于抗原与抗体相互作用、补体系统的激活和效应以及实验操作和结果分析等多个方面。
通过对补体结合试验原理的深入了解，我们能够更好地理解免疫系统中的补体系统，为免疫性疾病的诊断和研究提供重要的实验依据。
补体结合试验
补体结合试验(CFT)
补体结合实验(CFT)
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补体结合实验
一、原理 CFT是根据任何抗原抗体复合物可激活、固定补 体的特性，用一定量的补体与致敏红细胞来检测 抗原、抗体间有无特异性结合的一类实验。 1、参与本实验的成分包括 ①已知抗原（或抗体） ②待检抗体（或抗原） ③SRBC ④SRBC相应的溶血素 ⑤补体
补体结合实验
②各管中加SRBC0.2ml、溶血素0.2ml,37度水浴箱 15-30分钟 ③观察结果 四、结果 试管号 名称 结果 1 2 3 4 5 6 试验管 特异性对照 血清对照 抗原对照 补体对照 溶血素对照 不溶血 溶血 溶血 溶血 溶血 不溶血
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******
****** 0.2ml ******
0.2ml
****** ****** ******
0.2ml ******
0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.4ml
6
******
******
******
****** 0.6ml
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补体结合实验
三、操作方法 ①加样(如下图),37度水浴箱15分钟 试管号 伤寒血清 伤寒杆菌 痢疾杆菌 1 0.2ml 0.2ml ****** 补体 NS
0.2ml ******
2
3 4 5
0.2ml
0.2ml ****** ******
补体结合实验
（Ag+Ab）+补体
双方相对应形成IC 激活并固定补体 不能激活并固定补体 双方不相对应（或缺少 一方）形不成IC
加入SRBC和溶血素
加入SRBC和溶血素 不出现溶血 出现溶血
高美华医学免疫学-补体结合实验
60×0.2
X＝─────＝75
0.08×2
即将豚鼠血清用pH 7.4巴比妥缓冲液作1:75稀释后，每 0.2ml中含2个实用单位的补体。
3、抗原和抗体的滴定：
一般采用方阵滴定法，选择抗原与抗体均呈强 阳性反应的最高稀释度作为抗原和抗体的效价 （或单位）。正式试验时，抗原一般用2~4个 单位，抗体采用4个单位。
反应、指示系统竞争结合补体系统。先加入反应 系统，优先结合补体。若反应系统中待测的Ab（或 Ag）与已知Ag（或Ab）相对应，则Ag与Ab形成IC后 可结合补体；再加入指示系统时，因已没有游离的补 体而不出现溶血，为补体结合试验阳性。若不相对应， 将会有游离的补体参与指示系统的反应，最终会出现 溶血现象，为阴性。
8 1:1600│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │分│微溶
9 1:2000│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │钟│微溶
1. 10 1:2400│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │ │不溶
2. 11 1:3200│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │ │不溶
4、补体结合正式试验 按照讲义的表操作
应作抗原或血清对照管，SRBC、溶血素 对照管。
四、结果观察
1、管内液体混浊呈浅红色为不溶血，管内 液体透明呈红色为溶血。
2、第2、3、4管为对照管均应溶血，第5 管为绵羊红细胞对照不应溶血。凡第1管 红细胞发生溶血者为补体结合反应阴性， 而不溶血者为阳性。
3. 12 1:4000│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │ │不溶
4. 13 1:4800│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │ │不溶
补体结合试验原理
补体结合试验原理补体结合试验是一种常用的免疫学实验方法，用于检测补体系统的活性和功能。
补体系统是机体免疫系统中重要的组成部分，它能够识别和清除病原微生物、调节免疫反应，并参与炎症过程。
补体结合试验的原理是利用补体与抗原-抗体复合物结合的特性，通过观察补体活性的变化来评估抗原-抗体反应的强度和免疫系统的功能状态。
首先，补体结合试验需要准备好一定浓度的抗原和抗体。
抗原是诱导免疫应答的物质，可以是病原微生物、细胞表面分子或其他生物大分子，而抗体则是机体对抗原产生的特异性免疫蛋白。
在实验中，将抗原与抗体混合，形成抗原-抗体复合物。
其次，将补体加入到抗原-抗体复合物中，观察补体活性的变化。
正常情况下，补体能够与抗原-抗体复合物结合，激活补体级联反应，最终导致病原微生物的溶解和清除。
因此，补体结合试验可以通过监测补体活性的变化来评估抗原-抗体反应的强度和免疫系统的功能状态。
补体结合试验的结果可以反映出免疫系统对特定抗原的应答情况。
如果补体活性显著增加，说明抗原-抗体反应强烈，免疫系统功能良好；反之，若补体活性减弱或消失，则可能表示免疫系统存在缺陷或异常。
因此，补体结合试验不仅可以用于诊断某些免疫系统疾病，还可以用于评估免疫系统的功能状态和药物的免疫毒性。
总之，补体结合试验是一种重要的免疫学实验方法，通过观察补体活性的变化来评估抗原-抗体反应的强度和免疫系统的功能状态。
它在临床诊断、免疫学研究和药物安全性评价中具有重要的应用价值，对于促进免疫学领域的发展和疾病诊断具有重要意义。
希望本文能够帮助读者更加深入地了解补体结合试验的原理和应用，为相关领域的研究和实践提供参考。
补体结合试验
补体结合试验补体是一组正常血清蛋白成分，可被免疫复合物激活产生具有裂解细胞壁的因子。
如果该过程发生在红细胞表面上则导致红细胞裂解而出现溶血。
利用这种反应来检测血清中的抗体或(抗原)，称作补体结合试验(Complement Fixation Test，CFT)。
CFT准确性高，容易判定，对抗原纯化要求不严格，因而普遍用于传染病的诊断。
该试验的不足之处是操作繁锁，尤其是对所用试剂的准备和量化要求较严。
(一) 原理CFT包括两个系统，第一为反应系统，又称溶菌系统，即已知抗原(或抗体)，被检血清 (或抗原)和补体。
第二系统为指示系统(亦称溶血系统)，即溶血素＋绵羊红细胞，溶血素即抗绵羊红细胞抗体。
补体常用豚鼠血清，它对红细胞具有较强的裂解能力。
补体只能与抗原－抗体复合物结合并被激活产生溶血作用。
因此，如果试验系中的抗原和抗体是对应的，形成了免疫复合物，定量的补体就被结合，这时加入指示系统，由于缺乏游离补体，就不产生溶血，即为阳性反应。
反之试验系中缺乏抗原或特异性抗体，不能形成免疫复合物，补体就游离于反应液中，被指示系统，即溶血素＋绵羊红细胞免疫复合物激活，而发生溶血，即阴性反应。
为了测定阳性血清中抗体的效价，可将血清作系列稀释，其结果是由完全不溶血逐步达到完全溶血，发生50%溶血的血清最高稀释倍数为该血清的抗体效价。
在进行CFT主试验之前，抗原、补体、绵羊红细胞和溶血素必须经仔细测定。
所加补体的量必须准确，补体少导致不完全溶血，出现假阳性结果；反之，超量的补体不能被反应系统的免疫复合物完全结合从而出现假阴性结果。
超量的抗原影响补体的结合，抗原不足不能完全结合补体。
在CFT操作中，经常遇到的一个问题是被检血清存在“抗补体作用”。
即被检血清在无抗原存在的情况下结合补体。
这有多种可能的原因，主要原因是血清取自感染动物，在血清中存在免疫复合物；或者血清被细菌污染，通过其它途径激活了补体。
(二) 分类补体结合试验分直接法、间接法和固相法。
补体结合实验(CFT)
补体结合实验
三、操作方法 加样(如下图 如下图),37度水浴箱 分钟 度水浴箱15分钟 ①加样 如下图 度水浴箱 试管号 伤寒血清 伤寒杆菌 痢疾杆菌 1 2 3 4 5 6 0.2ml 0.2ml 0.2ml ****** ****** ****** 0.2ml ****** ****** 0.2ml ****** ****** ****** 0.2ml ****** ****** ****** ****** 补体 NS
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0.2ml ****** 0.2ml ****** 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.4ml ****** 0.6ml
©2001RBC0.2ml、溶血素0.2ml,37度水浴箱 15-30分钟 ③观察结果 四、结果 试管号 名称 结果 1 2 3 4 5 6 试验管 特异性对照 血清对照 抗原对照 补体对照 溶血素对照 不溶血 溶血 溶血 溶血 溶血 不溶血
补体结合实 补体结合实验(CFT)
新乡医学院免疫学教研室
补体结合实验
一、原理 CFT是根据任何抗原抗体复合物可激活、固定补 体的特性，用一定量的补体与致敏红细胞来检测 抗原、抗体间有无特异性结合的一类实验。 1、参与本实验的成分包括 、 ①已知抗原（或抗体） ②待检抗体（或抗原） ③SRBC ④SRBC相应的溶血素 ⑤补体
补体结合实验
（Ag+Ab）+补体
双方相对应形成IC 激活并固定补体 不能激活并固定补体 加入SRBC和溶血素 加入SRBC和溶血素 不出现溶血 出现溶血 双方不相对应（或缺少 一方）形不成IC
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补体结合实验
二、材料 Ag：1:10稀释的伤寒杆菌 1:10稀释的痢疾杆菌 Ab: 1:10稀释的伤寒诊断血清 补体 2%SRBC 溶血素
补体结合实验的原理及应用
补体结合实验的原理及应用1. 原理补体结合实验是一种常用的实验方法，用于检测抗原与抗体之间的结合情况。
补体是一种由血浆中的多种蛋白质组成的体液免疫系统的重要组成部分，参与了机体的非特异性防御反应和特异性免疫反应。
补体结合实验主要包括补体结合免疫沉淀实验和补体结合裂解实验两种常见方法。
1.1 补体结合免疫沉淀实验补体结合免疫沉淀实验是通过观察抗原与抗体结合后，补体与免疫复合物结合并沉淀的现象来判断结合是否发生。
该实验常用于检测血清中的抗体，可以用于诊断某些疾病和监测免疫应答。
具体步骤如下： - 将待测抗原添加到含有抗原特异性抗体的试管中； - 孵育一段时间，使抗原与抗体发生结合； - 加入新鲜补体，孵育一段时间，补体与免疫复合物结合，形成沉淀； - 观察是否有沉淀产生，证明抗原与抗体发生了结合。
1.2 补体结合裂解实验补体结合裂解实验是通过观察抗原与抗体结合后，是否能引起补体的激活与溶解来判断结合是否发生。
该实验常用于研究免疫复合物的免疫学特性和机制。
具体步骤如下： - 将待测抗原添加到含有抗原特异性抗体的试管中； - 孵育一段时间，使抗原与抗体发生结合； - 加入补体，并孵育一段时间，观察有无溶解现象； - 观察是否有溶解现象产生，证明抗原与抗体发生了结合。
2. 应用补体结合实验在临床实践中广泛应用于免疫学研究和临床诊断，具有以下应用价值：2.1 诊断疾病补体结合实验可以用于诊断多种疾病。
例如，在乙型肝炎病毒感染的诊断中，可以通过补体结合实验检测血清中的抗原与抗体的结合情况，进而发现是否存在病毒感染。
2.2 监测免疫应答补体结合实验可以用于监测机体的免疫应答情况。
补体是免疫反应的关键组成部分，参与了机体的免疫防御和免疫调节过程。
通过补体结合实验，可以评估机体的免疫功能是否正常，从而提供临床诊断和治疗的参考依据。
2.3 研究免疫复合物的特性及机制补体结合实验也可以用于研究免疫复合物的特性及机制。
通过观察抗原与抗体结合后补体的激活与溶解情况，可以深入了解免疫复合物与机体免疫系统的相互作用过程，为研究免疫学机制提供重要的实验手段。
临床检验师-补体检测及应用考点总结
补体检测及应用考点总结第一节概述补体是一组存在于人和脊椎动物血清、组织液或某些细胞膜上的具有酶样活性、不耐热的糖蛋白。
一、补体成分的含量与理化特性（一）补体成分的含量：补体大多为糖蛋白，属于β球蛋白，C1q、C8等为γ球蛋白，C1s、C9为α球蛋白。
C3含量最高。
（二）补体的理化特性：补体的性质不稳定，易受各种理化因素的影响，加热、紫外线照射、机械振荡、酸碱和酒精等因素均可破坏补体。
在-10℃活性保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性，加热56℃30分钟灭活（灭能），故补体活性检测应尽快进行。
标本保存应置于-20℃以下。
体内合成补体成分以肝脏、脾脏、小肠等组织和巨噬细胞、上皮细胞、血小板等细胞为主。
二、补体的活化途径1.经典途径：以抗原-抗体复合物结合C1q启动激活，是抗体介导的体液免疫应答的主要效应方式。
2.MBL途径：是甘露聚糖结合凝集素（MBL）结合至细菌启动的途径。
其诱导物或激活剂是机体的炎症反应急性期时相性蛋白产生的MBL和C反应蛋白等，后者与病原体结合而启动绕过C1的MBL途径。
3.旁路途径：是通过微生物表面等膜性物质，从C3开始，由B因子、D因子参与激活过程，也称第二途径、旁路途径。
这种激活方式不依赖于特异性抗体的形成，在感染早期可为机体提供有效的防御机制。
在机体抗感染过程中，首先活化和发挥作用的补体途径，是不依赖抗体的旁路途径和MBL途径。
而在特异性抗体产生时，经典途径方可发挥作用。
第二节补体总活性测定血清补体总活性的测定，是对激活后补体最终效应的检测方法，可借此反映补体的整体功能。
以红细胞的溶解为指示，以50%溶血为判断终点，故称CH50。
包括：基于经典途径的CP-CH50和应用于C3旁路检测的AP-CH50。
CP-CH50是临床常规进行的补体总活性检测项目。
通常述及的CH50系指CP-CH50。
一、CH50测定法的原理特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致溶血。
补体溶血程度与补体的活性相关，但非直线关系。
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第十一章血清学试验
第四节补体结合试验
补体结合试验（complement fixation test）是应用可溶性抗原，如蛋白质、多糖、类脂、病毒等，与相应抗体结合后，其抗原-抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，如再加入致敏红细胞（溶血系统或称指示系统），既可根据是否出现溶血反应，判定反应系统中是否存在相应的抗原和抗体。
参与补体结合反应的抗体称为补体结合抗体。
补体结合抗体主要为IgG和IgM，IgE和IgA 通常不能结合补体。
通常是利用已知抗原检测未知抗体。
一、基本原理
本试验包括两个系统共五种成分：一为检测系统（溶菌系统），即已知的抗原（或抗体）、被检的抗体(或抗原)和补体；另一为指示系统（溶血系统），包括绵羊红细胞、溶血素和补体。
抗原与血清混合后，如果两者是对应的，则发生特异性结合，成为抗原-抗体复合物，这时如果加入补体，由于补体能与各种抗原-抗体复合物结合（但不能单独和抗原或抗体结合）而被固定，不再游离存在。
如果抗原-抗体不对应或没有抗体存在，则不能形成抗原-抗体复合物，加入补体后，补体不被固定，依然游离存在。
由于许多抗原是非细胞性的，而且抗原、抗体和补体都是用缓冲液稀释的比较透明的液体，补体是否与抗原-抗体复合物结合，肉眼看不到，所以还要加入溶血系统。
如果不发生溶血现象，就说明补体不游离存在，表示溶菌系统中的抗原和抗体是对应的，它们所组成的复合物把补体结合了。
如果发生了溶血现象，则表明补体依然游离存在，也就表示溶菌系统中的抗原和抗体不相对应，或者两者缺一，不能结合补体（图11-7）。
二、补体结合试验的基本过程及应用
试验分两步进行。
第一步为反应系统作用阶段，由倍比稀释的待检血清加最适浓度的抗原和补体。
混合后37℃水浴作用30～90min或4℃冰箱过夜。
第二步是溶血系统作用阶段，在上述管中加入致敏红细胞，置37℃水浴作用30～60min，观察是否有溶血现象。
若最终表现是不溶血，说明待检的抗体与相应的抗原结合了，反应结果是阳性；若最终表现是溶血，则说明待检的抗体不存在或与抗原不相对应，反应结果是阴性。
补体结合反应操作繁杂，且需十分细致，参与反应的各个因子的量必须有恰当的比例。
特别是补体和溶血素的用量。
补体的用量必须恰如其分，例如，抗原抗体呈特异性结合，吸附补体，不应溶血，但因补体过多，多余部分转向溶血系统，发生溶血现象。
又如抗原抗体为非特异性，抗原抗体不结合，不吸附补体，补体转向溶血系统，应完全溶血，但由于补体过少，不能全溶，影响结果判定。
此外，溶血素的量也有一定影响，例如阴性血清应完全溶血，但溶血素量少，溶血不全，可被误以为弱阳性。
而且这些因子的量又与其活性有关：活性强，用量少；活性弱，用量多。
故在正式试验前，必须准确测定溶血素效价、溶血系统补体价、溶菌系统补体价等，测定活性以确定其用量。
补体结合试验具有高度的特异性和一定的敏感性，是诊断人畜传染病常用的血清学诊断方法之一。
不仅可用于诊断传染病，如结核、副结核、鼻疽、牛肺疫、马传染性贫血、乙型脑炎、布氏杆菌病、钩端螺旋体病、锥虫病等。
也可用于鉴定病原体，如对流行性乙型脑炎病毒的鉴定和口蹄疫病毒的定型等。