第五章 补体参与的反应

第五章补体参与的反应

内容

一、溶血试验

二、补体结合试验

一、溶血试验

当红细胞与相应抗体相结合，在电解质存在时，可使红细胞产生凝集现象；若同时加入新鲜动物血清，则血清中的补体可与红细胞及其抗体（溶血素）形成的免疫复合物结合，从而激活补体导致红细胞溶解，产生溶血现象。

【材料】

1、抗原：2%绵羊红细胞（简称SRBC）。

2、抗体：溶血素即（SRBC抗体）。

3、补体，新鲜豚鼠血清。

4、生理盐水。

5、小试管、刻度吸管、试管架、37℃水溶箱等。

【方法】

1、取小试管3支，编号后按下表加入各物（容量单位均为ml）

溶血试验加样表（表2—1）单位ml

管号2％红血球溶血素（2单位）补体（2单位）生理盐水结果

1 0.5 0.5 0.5 0.5

2 0.5 0.5 - 1.0

3 0.5 - 0.5

1.0

2、将试管摇匀后置37℃水箱内：15—30分钟，取出观察有无溶血现象；

3、结果观察：管底无血球沉淀，液体红色透明管为溶血。

注意分析结果及其意义，了解补体的性质与作用。

二、补体结合试验

凝集反应和沉淀反应分别是颗粒性抗原、可溶性抗原与特异抗体结合的结果。补体结合试验，则是基于抗原抗体复合物可以结合补体的原理，在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统来检测抗原或抗体是否发生特异性结合的一种抗原抗体反应。

补体结合试验有两个系统共五个成分参加：检测系统的已知抗原（或抗体）与持检抗体（或抗原）、补体、指示系统的绵羊红细胞和溶血素。依次加入检测系统成分与补体作用后再加指示系统，若不出现溶血，即为补体试验阳性，表示检测系统中抗原抗体相对应（待检标本中有相应抗体或抗原），形成抗原体复合物并结合了补体，指示系统因缺乏补体而不发生溶血；反之若出现溶血，则为补体试验阴性，表示检测系统的抗原抗体不对应（持检标本中无相应抗体或抗原），不能结合补体，游离的补体与后加入的指示系统结合，导致绵羊红细胞溶解。

补体结合试验敏感性和特异性均较高，可用于检测梅毒，立克次体病和病毒感染等患者体液中的抗体或抗原以辅助诊断，还可用于某些病毒的分型。但本试验操作繁琐，影响因素甚多，各种参与成分均需适量（在正式试验之前必须通过一系列预备试验来滴定补体、溶血素、抗原或抗体的单位，以确定其使用量），并需设立多种对照和使用洁净试管等，才能保证实验结果的可靠性。因此，近年来其应用日趋减少，而为其它新的免疫学方法所取代。

【材料】

1、抗原：（已知，并已经滴定调定）。

2、灭活的持检血清。阳性血清和阴性血清（56℃×30' 灭活）。

3、补体（2个使用单位）。

4、2％绵羊红细胞。

5、溶血素（2个单位）。

6、生理盐水。

7、洁净的刻度吸管和小试管、试管架。橡皮吸头、37℃水浴箱等。

【方法】

1、取小试管8支，分明住明管号。

2、按表2-2次序分别将血清标本、生理盐水、抗原及补体加入各管，摇匀，置37℃水浴中30分钟；

3、将各管取出，再接表2-2分别加入溶血素和绵羊红细胞，摇匀后再次置37℃水浴30分钟，然后取出观察结果。

【结果观察】

观察各管溶血（或血球凝集、下沉）情况，记录分析其意义。

【注意事项】

1、观察结果时，首先注意各对照管反应是否正确，在反应正常的情况下才能断定待检血清管的反应，从而做出正确判断。

2、本实验以定性检测为例，若作定量试验则应将待检血清配成多个相应稀释度，再与标准血清所制标准曲线比较而定量。

3、上述方法主要用于临床检测抗体，若用于检测抗原，则应以标准特异抗血清为已知材料，加入待检抗原，补体及指示系统进行试验；

4、补体性质不稳定，补体滴定后应放低温保存，操作时尽量减少在室温停留的时间。