亲和层析柱使用说明

亲和层析柱使用说明货号

名称规格说明DS0101

亲和层析柱1ml 含1个空管柱，上下盖和2个筛板（亲水性，孔径50um）

DS0103

亲和层析柱3ml DS0106

亲和层析柱6ml DS0110

亲和层析柱10ml DS0130

亲和层析柱30ml DS0150

亲和层析柱50ml 一、产品说明

亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。它是利用生物分子间

存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶

和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有

亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质

上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另

一个分子进行分离纯化。

提供的亲和层析柱工具可应用于如下方面：

①纯化重组蛋白；②纯化抗原和抗体；③纯化多

肽；④纯化DNA；⑤糖蛋白的纯化；⑥纯化磷酸

化蛋白和肽；⑦DNA 结合蛋白的纯化；⑧去除内毒素，等。

亲和层析柱空柱管的材质为医疗级的聚丙烯，这种工程材料通过大量的应用证明具有清洁无毒，不与生物分子结合和低溶解度的优点。

亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWM-PE（超高分子量聚乙烯）为原料，经独特的工艺加工而成，具有亲水性。筛板在装填时安置在填料基质的上下端，以阻挡昂贵的基质渗出。亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWM-PE 生产技术，该筛板能保证使用重力法时的流速为1-2ml/分钟或1-2滴/秒。同时，该筛板和其它同类产品相比，不会由于亲水性基团的引入而对蛋白质产生吸附。另外，该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡，气泡会使流速降低，液体通过基质不均匀。

二、产品应用

1，抗体纯化

纯化抗体一般用Protein A作为纯化的配体，也可以用Protein G或Protein L或异源性抗体作为配体。

2，小分子物质提取（以提取黄曲霉毒素M1为例）

试样通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素M1被提取。亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上,当样品通过亲和柱时,抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体一抗原复合体。用水洗柱除去柱内杂质,然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1,收集洗脱液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。

3，重组蛋白纯化

近年来，随着生物技术，特别是基因工程技术的迅猛发展，重组蛋白表达和纯化越来越容易。常用的重组蛋白表达策略是把蛋白与亲和标签融合表达，利用亲和标签一步纯化出目标蛋白。此方法无需了解蛋白质的生化特性或生理活性，就可通过带标签的重组融合蛋白选择性地与层析基质上的配体结合，从而得以纯化任何蛋白质。此方法与常规的层析方法不同之处在于，无需针对不同的蛋白质开发特定的配体和方法。采用保护蛋白质结构和功能完整性的温和条件，可一步亲和层析从粗提物中纯化出重组蛋白，纯度可达90％以上。

亲和标签已成为后基因组学时代纯化重组蛋白常用手段。亲和标签系统一般具有以下特征：(a)一步的吸附纯化；(b)对三级结构和生物活性影响小；(c)可方便且专一的去除以产生天然蛋白质；(d)在纯化过程中重组蛋白的分析简便准确；(e)适用于大量的不同蛋白质。但是没有哪个标签是完美的，只能根据实际需要去自己筛选，下表是分的标签以及纯化的方案。

三、装柱步骤：

1，装下筛板

把筛板浸泡于水中，用超声或振荡赶掉筛板空隙中的空气，备

用。用装柱工具把筛板顶入柱体，再用装柱工具把筛板平推到柱体

底部。

2，加装填料

将填料和适量的缓冲液加入小烧杯中，制成混悬液。盖上柱体

的下盖，用吸管取混悬液加入柱体中，当混悬液体积多于柱体体积时，取掉下盖放掉部分缓冲液，静置使填料沉到柱体底部。

3，装上筛板

保持柱体垂直，用装柱工具把筛板顶入柱体，再用装柱工具把筛板平推到填料上表面，盖上上盖。

注意：某些应用需要在填料上表面和上筛板之间留适当空隙。