亲和层析柱使用说明
纯泰镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)使用说明书(完全版)[1]
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mM Tris·Cl，用高浓度HCl调节pH至6.3。 z 缓冲液G： 8 M Urea，100 mM NaH2PO4，100
mM Tris·Cl，用高浓度HCl调节pH至4.5。 各种溶液配制完毕后，最好进行脱气处理，0.45 μm滤膜过滤备用。 注：也可按照可溶性蛋白的缓冲液配制与操作方式 进行，只需在缓冲液中加入8M脲或6M盐酸胍。
让介质自然沉降。
3) 从上端管口将另一垫片缓慢推至介质沉降平
面，使介质表面保持水平状态，注意避免垫片
与介质接触面滞留气泡（如对实验要求并非十
分严格，为提高流速，可不覆盖上垫片）。
4) 在使用一段时间后，如果层析柱流速减慢，可
先用小镊子沿边缘将垫片推翻，夹出垫片，倒
出介质，清洗或更换新的垫片后，按2）、3）所
层析柱中；静置30min，让介质自然沉降。
3) 从上端管口将转换杆出液端缓慢推至介质沉降
平面，使介质表面保持水平状态，注意避免转
换杆与介质接触面间滞留气泡。
4) 在使用一段时间后，如果流速减慢，可先卸下
上转换杆，将介质倒出，再取出下转换接头中
滤网，清洗或更换后重新装柱。
4. 过柱：
1) 用5~10倍介质体积的缓冲液A平衡亲和柱；
六、 实验实例
1. Ni-NTA Agarose 纯化 His-tag 蛋白 z 层析介质：纯泰®NTA 1ml；对照介质（国际领
先品牌）1ml z 样品：表达可溶性 His-tag 融合 thioredoxin 的
大肠杆菌 BL21 裂解液 z 结合缓冲液：10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，
3. 操作步骤：
cytivagst亲和层析柱中文说明书
cytivagst亲和层析柱中文说明书CyTiva GST亲和层析柱是一种常用的色谱柱，用于蛋白质的纯化和分离。
亲和层析是一种基于蛋白质与特定配体之间的非共价相互作用而进行的纯化方法。
本文将详细介绍CyTiva GST亲和层析柱的原理、优点、使用方法和注意事项。
一、原理CyTiva GST亲和层析柱采用谷氨酸-S-转移酶(Glutathione-S-Transferase，GST)作为亲和配体。
GST是从谷胱甘肽(glutathione)中分离得到的一种蛋白质。
该配体与GST融合的蛋白质有很高的亲和力，可被其特异性地捕获。
在层析过程中，样品与柱填料表面的GST结合形成复合物。
通过洗脱缓冲液中pH、盐浓度或添加特定配体等的调节，使复合物分离并得到目标蛋白质。
二、优点1.高选择性：CyTiva GST亲和层析柱具有很高的选择性，可以高效地分离和纯化GST融合的目标蛋白质。
2.高纯度：层析过程中，非特异性结合蛋白质可被洗脱掉，从而得到高纯度的目标蛋白质。
三、使用方法1.准备工作：柱前洗脱，根据柱填料要求进行预处理。
2.样品处理：目标蛋白质表达并纯化后，与GST融合的载体进行融合。
此后，将样品溶液等体积注入已平衡的柱中。
3.洗脱条件的选择：根据样品的属性，选择适宜的洗脱缓冲液，进行洗脱。
可以按照pH、盐浓度、添加特定配体等来调节洗脱条件。
4.目标蛋白质洗脱：将目标蛋白质从柱中洗脱出来，收集洗脱液。
四、注意事项1.样品的处理：目标蛋白质应表达和纯化得到GST融合蛋白质。
2.柱前处理：根据柱填料的要求，进行柱前洗脱处理。
3.洗脱缓冲液的调节：根据样品的特性和所需的洗脱条件进行调节。
常用的洗脱条件包括调节pH、盐浓度、添加特定配体等。
4.洗脱收集：在洗脱过程中，及时收集洗脱液。
总结：CyTiva GST亲和层析柱是一种常用的蛋白质纯化和分离工具，基于GST与目标蛋白质的非共价相互作用。
它具有高选择性和高纯度的优点，可广泛应用于生物医药研究领域。
亲和层析原理和步骤
亲和层析原理和步骤亲和层析（affinity chromatography）是一种常用的分离和纯化靶标蛋白的方法。
它利用配体与目标蛋白的高亲和力来实现目标蛋白的选择性结合和纯化。
亲和层析的原理和步骤如下。
一、亲和层析的原理亲和层析的原理基于配体与目标蛋白之间的特异性结合。
配体是一种具有特异性反应性的化合物，可以和目标蛋白的结构域或位点发生特异性作用。
在亲和层析中，配体被固定在固定相上，也可以被连接到大分子载体上，形成亲和层析介质。
当样品通过亲和层析柱时，目标蛋白会与配体发生选择性结合，而其他非目标蛋白则不结合或弱结合，从而实现了目标蛋白的分离和纯化。
亲和层析的步骤通常包括以下几个方面：2.固定配体：将配体固定在固定相上是亲和层析的关键一步。
固定相可以是固定在柱子内壁的小分子配体，也可以是连接在大分子载体上的配体。
常用的固定剂包括琼脂糖、丙烯酰胺凝胶、硅胶等。
3.样品准备：在进行亲和层析之前，需要对样品进行准备。
通常包括细胞裂解、蛋白质提取、预处理等步骤。
样品中的废物和干扰物需要被去除，以便目标蛋白的有效分离和纯化。
4. 亲和层析操作：样品通过亲和层析柱时，目标蛋白与配体发生特异性结合。
通常需要选择适当的Buffer、pH值和盐浓度等条件来提高结合效率。
非目标蛋白会通过柱子流失，而目标蛋白则留在柱子中。
目标蛋白可以通过洗脱步骤从柱子中进行脱附。
5.洗脱与纯化：在洗脱过程中，目标蛋白从亲和层析柱中脱附。
洗脱条件需要根据结合强度和目标蛋白的特性来选择。
常用的洗脱方法包括pH值的调节、离子浓度的变化、配体浓度的变化等。
洗脱后的目标蛋白可以通过浓缩和纯化步骤得到纯品。
二、亲和层析的优缺点亲和层析作为一种分离和纯化方法，具有以下优点：1.特异性：亲和层析可以选择性地结合目标蛋白，从而实现与其他非目标蛋白的分离。
2.高纯度：亲和层析可以显著提高目标蛋白的纯度，使其达到实验或工业应用的要求。
3.选择性：亲和层析可以基于不同的配体，实现对不同蛋白的选择性结合和纯化。
亲和层析柱
亲和层析柱亲和层析柱是一种重要的分离分析器，广泛应用于药物分析、环境分析、生物分析、营养分析等领域。
目前，亲和层析技术已成为色谱分析中不可缺少的一部分。
亲和层析柱是一种特殊类型的色谱填料，采用高致密度填料，由类大分子有机物组成，能够吸附易溶物。
它主要由填料、结承元和活性室组成，填料称为亲和吸附层，结承元称为解吸层。
它是利用被分离物与填料之间的亲和力或电性复合作用，使其位移到活性室的方法，从而实现分离的一种柱色谱分析方法。
亲和层析柱有许多优点，它拥有较强的分离能力：由于它提供了强烈的亲和力，可以有效地把被分离物吸附在填料表面上，使分离更加高效。
其次，它有极高的选择性，可以实现精细的分离：由于它由各种类型的类大分子有机物组成，使它具有特异性，可以有效地把类似的物质分离开来，从而提高分离的准确度和效率。
此外，它的容量很大：由于它的色谱填料具有高致密度，因此能够吸附大量的溶解物，拥有更大的容量。
尽管亲和层析柱具有优点，但也有一些缺点，其中最大的缺点就是混合物的分离效率低：由于不同类型的溶解物之间的强烈亲和力，使得它们难以实现有效分离，因此分离效率较低。
此外，它的分析时间长：由于被分离物必须充分地附着到填料表面，因此分析时间长。
无论如何，亲和层析柱仍然是色谱分析中不可或缺的一个重要组成部分。
它仍然是药物分析、环境分析、生物分析和营养分析等领域的重要工具。
在未来，亲和层析柱将被用于更多的科学研究，以满足今天越来越高的分析要求。
总之，亲和层析柱是色谱分析中重要的一部分，它拥有较强的分离能力和极高的选择性，而且容量大，能够满足许多研究领域的分析要求。
此外，随着科学技术的不断发展，亲和层析柱将被用于更多的科学研究，以期取得更高的效率和更好的精确度。
亲和层析柱使用说明
亲和层析柱使用说明货号名称规格说明DS0101亲和层析柱1ml 含1个空管柱，上下盖和2个筛板（亲水性，孔径50um）DS0103亲和层析柱3ml DS0106亲和层析柱6ml DS0110亲和层析柱10ml DS0130亲和层析柱30ml DS0150亲和层析柱50ml一、产品说明亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。
它是利用生物分子间存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。
本公司提供的亲和层析柱工具可应用于如下方面：①纯化重组蛋白；②纯化抗原和抗体；③纯化多肽；④纯化DNA；⑤糖蛋白的纯化；⑥纯化磷酸化蛋白和肽；⑦DNA 结合蛋白的纯化；⑧去除内毒素，等。
亲和层析柱空柱管的材质为医疗级的聚丙烯，这种工程材料通过大量的应用证明具有清洁无毒，不与生物分子结合和低溶解度的优点。
亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWM-PE （超高分子量聚乙烯）为原料，经独特的工艺加工而成，具有亲水性。
筛板在装填时安置在填料基质的上下端，以阻挡昂贵的基质渗出。
亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWM-PE 生产技术，该筛板能保证使用重力法时的流速为1-2ml/分钟或1-2滴/秒。
同时，该筛板和其它同类产品相比，不会由于亲水性基团的引入而对蛋白质产生吸附。
另外，该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡，气泡会使流速降低，液体通过基质不均匀。
二、产品应用1，抗体纯化纯化抗体一般用Protein A作为纯化的配体，也可以用Protein G或Protein L或异源性抗体作为配体。
2，小分子物质提取（以提取黄曲霉毒素M1为例）试样通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素M1被提取。
亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上,当样品通过亲和柱时,抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体一抗原复合体。
亲和柱层析操作(可溶性蛋白)
亲和柱层析操作规程（可溶性蛋白）1.装柱：1.1 取出层析柱，用去离子水冲洗干净，连接好管子后固定柱子；1.2用水冲洗层析柱3-5次，每次10ml去离子水；1.3取出填料，静止至室温后，根据需要用移液器取出3-5ml的填料进行装柱，1.4用去离子水冲洗填料5个柱体积；2.柱的平衡与上样：2.1用0.02M PB bufferA 缓冲液(PH8.0)平衡Ni柱，直至流出液的pH为8.0；2.2对处理的样品进行过滤后，缓慢上样让蛋白充分结合；3洗杂蛋白：3.1用0.02M PB bufferA 缓冲液(PH8.0)过柱，清洗没有结合到层析柱上的杂蛋白，至流出液与缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含5mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含5mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.3用含10mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含10mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.4用含20mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含20mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.5用含40mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含40mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.6用含50mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含50mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）4解离目的蛋白：4.1用含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.2 用含200mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含200mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.3 用含500mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含500mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.4用含1000mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含1000mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul 做SDS-PAGE检测；（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）5.柱的清洗与保存：5.1用含500mM咪唑的缓冲液A（pH8.0）以冲洗层析柱，共冲洗30ml；5.2用浓度为1.5M的NaCl溶液冲洗层析柱，共冲洗30ml；5.3用过滤去离子水冲洗50ml；5.4用20%乙醇冲洗30ml后于4℃20%乙醇中保存。
His标签蛋白纯化亲和层析介质-纳微
His标签蛋白纯化亲和层析介质使用说明书Uni®IDA-80NiUni®NTA-80NiUni®IDA-80LUni®NTA-80L全国咨询热线：400-828-1622苏州纳微科技有限公司中文网站：English Website: /E-mail：info@公司总部地址：苏州工业园区百川街2号苏州中国通用缩略术语：280 nm：在指定波长的紫外吸收M：物质的量的浓度单位，mol/l的简写mM: 物质的量的浓度单位，mmol/l的简写BV：柱体积，bed volume的简写Mr：相对分子量MPa：兆帕斯卡Bar：压强单位，工程上“公斤力”的单位psi：压强单位，磅每平方英寸压强单位之间换算：1 MPa = 10 bar ≈ 145 psi索引目录1. 标签蛋白纯化亲和层析产品简介 (4)2. 层析纯化操作步骤 (4)2.1 层析柱装填 (4)2.2 柱效评价 (5)2.3 清洗 (5)2.4 平衡 (5)2.5 金属螯合 (5)2.6上样 (6)2.7洗脱 (6)2.8 再生 (6)2.9 在位清洗 (6)3. 储存 (7)4. 故障排除 (7)5. 订购信息 (8)1.标签蛋白纯化亲和层析产品简介重组蛋白的富集和纯化一般采用已知大小的标签，通过重组表达之后，利用标签和填料的特异性相互作用，达到分离纯化效果。
固定金属离子或金属螯合亲和层析（MAC）利用蛋白表面的某些氨基酸（如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等）和固定在层析介质上的过渡金属离子（Ni2+，Cu2+，Zn2+，Co2+，Fe3+等）以配位键结合，从而实现对不同标签蛋白质的分离。
影响蛋白质与金属离子鳌合作用大小的因素，主要是蛋白质表面可结合的氨基酸（种类、数目和分布）、金属离子的种类和密度、层析条件（pH、盐的种类和浓度、添加剂等）。
固定金属离子亲和层析介质具有吸附容量大、选择性好、分辨率高、易于再生、成本较低等优点，广泛用于生物制药和生物制品的下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化，尤其是组氨酸标记(His-Tag)蛋白质的分离纯化。
JNC Corporation Cellufine Sulfate V7_C微型柱操作说明说明书
JNC CORPORATION操作说明微型柱Cellufine Sulfate1. 简介微型柱Cellufine Sulfate 是一种用于Cellufine Sulfate 亲和层析的易用预装柱，Cellufine Sulfate 是一种亲和介质，用于病毒、病毒外壳、微生物抗原及特异性蛋白的浓缩、净化和除热原。
Cellufine Sulfate 微型柱以Cellufine Sulfate 凝胶填充。
这种凝胶基于球状纤维素珠体，使用低浓度硫酸酯进行处理。
低浓度 Sulfate 基团为凝胶提供了独特的色谱选择性，在某些情况下，这种色谱选择性类似于固定肝素。
由于Cellufine Sulfate 的排阻限较低（3 kD ），大分子主要通过填料外层吸收，缩短了吸收和解吸时间。
其优异的硬度表现提高了流速，进而缩短了处理时间。
由于热原对Cellufine Sulfate 没有亲和性，通常可以用几个柱体积的已除热纯净水对凝胶除热原。
层析柱Cellufine 微型柱由聚丙烯管和超高分子量聚乙烯筛板制成。
该类柱采用10-32UNF 螺纹连接1/16英寸外径管，可以与色谱系统连接。
表1. 微型柱Cellufine Sulfate 特征柱体积1毫升与5毫升柱规格（内径×长） 6.7 毫米×30毫米(1毫升) 14.6毫米×30毫米(5毫升) 配基 Sulfate饱和度 700微克/干 凝胶 结合载量 3毫克/毫升 粒径 约40-130微米 珠体基质 球形纤维素 压力范围0.4 MPa (4巴)建议流速 0.1 - 1.0毫升/分钟(1毫升) 0.1 - 5.0毫升/分钟(5毫升) pH 稳性 3-12存储20%乙醇，置于阴凉处2. 操作指南 常规操作（1）用吸附缓冲液平衡色谱柱（2）上样（样品应调整到吸附缓冲液的组成）（3）用数个床体积的吸附缓冲液洗涤，除去未结合物质。
（4）用解吸缓冲液洗脱结合物。
黄曲霉毒素 M1M1 免疫层析亲和柱产品说明书 M1M1 免疫层析亲和柱 产品说明书
PriboFast IAC 中文说明书产品产品用途用途用途：：免疫亲和层析柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1，从而对黄曲霉毒素M1样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于液相进行黄曲霉毒素M1含量的检测。
亲和层析柱与HPLC 配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
产品产品概述概述概述：：黄曲霉毒素（AFT ）是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡, 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。
牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。
反应反应原理原理原理：：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用甲醇洗脱黄曲霉毒素M1，然后注入到分析仪器中用于检测。
适用范围及性能 适用于定性、定量检测牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等样品中黄曲霉毒素M1的样品前处理。
柱容量柱容量≥≥200ng 200ng 回收率回收率≥≥90% 产品产品包装组成包装组成包装组成：：每一个盒中包括25支/50支黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱及1份说明书。
需要的材料但盒中不提供需要的材料但盒中不提供：： 设备 器皿耗材 试剂 HPLC 泵流操作架 空气泵 天平 匀质器 高速粉碎机 超声波发生器 100ml/10mL 量筒 50ml 漏斗 玻璃针筒 样品瓶 100ml/1L 容量瓶 移液器或移液管 50ml 离心管 定量滤纸 玻璃纤维滤纸 圆孔筛 氯化钠(分析纯) 氢氧化钠浓盐酸(分析纯)色谱甲醇色谱乙腈蒸馏水或去离子水 黄曲霉毒M1标准品 石油醚注意事项注意事项：： ----黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。
nta亲和柱层析原理
nta亲和柱层析原理NTA亲和柱层析原理是一种分离和纯化蛋白质的方法，它采用了某些分子对目标蛋白的亲和作用来实现分离。
本文将对NTA亲和柱层析原理进行详细的介绍，包括定义、原理、优缺点以及应用等方面。
一、定义NTA全称为Nitrilotriacetic acid，是一种由三个羧基和一个胺基构成的有机酸，可用于制备能够结合在金属或半金属离子上的树脂，常用的是镍离子（Ni2+）。
NTA亲和柱层析是一种利用由NTA配体修饰的树脂来捕获和纯化蛋白质的技术，其原理就是基于配体与目标蛋白之间的特异性结合。
二、原理NTA亲和柱层析原理的基本步骤如下：1. 准备NTA树脂，将镍离子与NTA配体修饰的树脂混合。
2. 样品制备，要提取目标蛋白，通常需要对细胞或组织进行破碎，以释放蛋白质。
3. 柱平衡，用缓冲液进行平衡，通常使用含有金属离子（如Ni2+）的缓冲液，以使NTA树脂与镍离子形成配合物。
4. 加样，将样品加入NTA亲和柱中，目标蛋白与NTA树脂上的镍离子发生亲和作用，结合在一起。
5. 洗脱，用一定的缓冲液和浓度的镍离子进行洗脱，以去除非特异性结合的蛋白质和杂质。
6. 再洗脱，使用更高浓度的镍离子或其他洗脱剂再次洗脱，得到高纯度的目标蛋白。
三、优缺点优点：1. 特异性强：NTA树脂基于配体与目标蛋白的特异性结合，在选择性方面具有很好的特异性。
2. 解析度高：NTA亲和柱层析技术可以在一定程度上保留目标蛋白的构象和活性，具有较好的分离效果。
3. 操作简便：操作简单、快速、易于扩展，适合快速提取目标蛋白的应用。
1. 成本较高：采用NTA亲和柱层析的成本相对较高，需要用到昂贵的配体、镍离子等。
2. 染色质污染：在发生结合的过程中，染色质中的蛋白质也会被捕获，导致可能无法产生纯净的目标蛋白。
3. 离子抑制：在一些条件下（如浓度较高、PH值过低等），离子可能会抑制结合，从而影响洗脱蛋白的效果。
四、应用NTA亲和柱层析技术可以在许多生物领域中得到广泛应用，如下：1. 纯化蛋白质：NTA亲和柱层析技术可以用于纯化目标蛋白质，特别是带有His标签或其他标签的蛋白质。
亲和层析的步骤
亲和层析的步骤一、简介亲和层析是一种常用于生物化学和分子生物学研究中的实验方法，用于研究蛋白质与其他分子之间的相互作用。
本文将介绍亲和层析的步骤以及其在科研领域中的应用。
二、样品制备在进行亲和层析实验之前，需要准备好待测的样品。
样品可以是纯化的蛋白质、细胞提取物或其他含有待测蛋白质的混合物。
样品的制备需要根据具体的实验目的进行。
可以通过离心、超声波处理、破碎细胞壁等方法来获得所需的样品。
三、亲和柱的选择亲和柱是亲和层析实验中的重要组成部分，用于捕获待测蛋白质。
选择合适的亲和柱取决于待测蛋白质的性质和与之结合的分子。
常用的亲和柱包括亲和树脂柱、亲和抗体柱和亲和金属柱等。
在选择亲和柱时，需要考虑其亲和剂的选择、柱的容量和耐受性等因素。
四、亲和柱的平衡与洗脱在将样品加载到亲和柱之前，需要先将亲和柱平衡。
平衡的目的是使亲和柱与平衡缓冲液达到一定的化学平衡，并减少非特异性结合。
平衡缓冲液的选择应根据具体实验进行。
之后，样品可以被加载到亲和柱上。
加载后，通过洗脱来去除非特异性结合的物质。
洗脱的方法可以使用不同浓度的盐溶液、pH值变化或添加竞争性亲和剂等。
五、收集纯化的蛋白质经过洗脱后，目标蛋白质可以被收集下来。
收集的方法可以根据蛋白质的性质来选择。
常用的方法包括溶液浓缩、离心和冰冻等。
收集后的蛋白质可以进行进一步的实验或分析。
六、应用领域亲和层析在生物化学和分子生物学研究中有广泛的应用。
例如，可以用亲和层析来纯化特定的蛋白质，以便进一步研究其功能和作用机制。
此外，亲和层析还可以用于筛选药物靶点、研究蛋白质相互作用网络等。
亲和层析的应用领域非常广泛，可以为科研工作者提供许多有价值的信息。
七、总结亲和层析是一种常用的实验方法，用于研究蛋白质与其他分子之间的相互作用。
本文介绍了亲和层析的步骤，包括样品制备、亲和柱的选择、亲和柱的平衡与洗脱、收集纯化的蛋白质以及亲和层析的应用领域。
亲和层析在生物化学和分子生物学研究中具有重要的意义，为科研工作者提供了一种有效的工具来研究蛋白质的功能和相互作用。
亲和层析原理和方法
亲和层析原理和方法引言亲和层析是一种常用的分离纯化生物大分子的方法，广泛应用于生物工程、生物医学和生物化学等领域。
本文将介绍亲和层析的基本原理和常用方法。
一、亲和层析的基本原理亲和层析是利用化学结合的特异性，将目标分子与固定在层析柱上的亲和配体结合，从而实现目标分子的分离纯化。
其基本原理如下：1. 亲和配体选择性结合目标分子：亲和配体是一种具有特异性结合目标分子的生物大分子或化学物质。
通过选择合适的亲和配体，可以实现对目标分子的选择性结合。
2. 层析柱固定亲和配体：亲和配体通常通过共价键或非共价键的方法固定在层析柱的填料上。
固定亲和配体后，层析柱具有了对目标分子的特异性结合能力。
3. 样品溶液通过层析柱：样品溶液中含有目标分子和其他杂质分子。
当样品溶液通过层析柱时，目标分子会与层析柱上的亲和配体结合，而杂质分子则流经层析柱。
4. 目标分子的洗脱和回收：通过改变洗脱缓冲液的条件，可以使目标分子与亲和配体解离，从而实现目标分子的洗脱和回收。
二、常用的亲和层析方法亲和层析方法根据亲和配体的性质和结合方式的不同，可以分为多种不同的方法。
以下是几种常用的亲和层析方法：1. 金属离子亲和层析：利用金属离子与亲和配体之间的配位作用，实现对目标分子的选择性结合。
常用的金属离子包括Ni2+、Cu2+和Zn2+等。
2. 免疫亲和层析：利用抗体与抗原之间的特异性结合，实现对目标分子的选择性结合。
免疫亲和层析广泛应用于生物医学领域，用于分离纯化抗体和抗原。
3. 亲和色谱层析：利用染料、受体或配体等分子与目标分子之间的特异性结合，实现对目标分子的选择性结合。
常用的亲和色谱层析方法有离子交换层析、亲和柱层析等。
4. 亲和吸附层析：利用亲和吸附剂与目标分子之间的特异性结合，实现对目标分子的选择性结合。
常用的亲和吸附层析方法有亲和蛋白A/G层析、亲和葡萄糖层析等。
三、亲和层析的应用领域亲和层析作为一种常用的分离纯化方法，广泛应用于生物工程、生物医学和生物化学等领域。
金属螯合预装柱5ml说明书-Ni-20120202
金属螯合预装柱（5ml）说明书1. 简介金属螯合亲和层析，又称固定化金属离子亲和层析（Immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC）。
该法利用蛋白质表面的某些氨基酸（如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等）和金属离子（Cu2+、Zn2+、Ni2+等过渡金属离子）发生特殊的相互作用的原理，从而实现蛋白质的分离。
琼脂糖金属螯合介质（Ni-IDA QZT 6FF）是将亚氨基二乙酸（IDA）键合在高流速、高强度的琼脂糖微球上，并螯合金属离子Ni2+而形成的一种亲和层析介质，广泛用于蛋白质、核酸及多肽，尤其是组氨酸标签蛋白质的分离纯化。
2. 产品概述金属螯合预装柱预装了5 ml的Ni-IDA QZT 6FF亲和介质，可直接用于组氨酸标签蛋白质等生物分子的分离纯化，具有使用方便、操作简单、分离纯化效率高的特点。
Ni-IDA QZT 6FF亲和介质具有良好的稳定性、生物相容性和溶剂相容性，这不仅有利于保持产品的生物活性和提高产品的收率，还有利于扩大层析操作条件的选择范围。
Ni-IDA QZT 6FF亲和介质的理化性质和溶剂相容性分别如表1和表2所示。
表1. Ni-IDA QZT 6FF预装柱的理化性质及特征参数参数指标基质6%交联琼脂糖凝胶配基-N(CH2COOH)2 (IDA)形状球形平均粒径90 μm (45~165)金属离子密度~40 μmol Zn2+/ml wet gel动态载量a~25-30 mg蛋白(LDH)/ml wet gel柱体积1ml或5ml柱尺寸（内径x高度）0.9*1.57 cm (1ml柱子) 0.9*1.57 cm (5ml柱子)推荐流速b1ml/min (1ml柱子)或5ml/min (5ml柱子)地址：北京市海淀区中关村北二条1号中国科学院过程工程研究所最高流速b4ml/min (1ml柱子)或20ml/min (5ml柱子) 最高耐压b0.3 MPa (3 bar)化学稳定性c 避免使用的试剂0.01M HCl、0.1 M NaOH（37 °C, 7天）；1M NaOH、70%乙酸（12 h）；30%异丙醇（30 min）；2% SDS（1 h）螯合剂，如EDTA、EGTA、柠檬酸等pH稳定性c2-14（短期，2 h）；3-12（长期，7天）储存条件20%乙醇，4-30 o C动态载量a：样品：平衡缓冲液中含1mg/ml histidine-tagged LDH（Mr 140000）；计算方法：根据10%穿透点计算介质动态载量（Q B, 10%）；柱体积：1 ml或5 ml；流速：0.5 ml/min或2.5 ml/min；平衡缓冲液：20mM PB + 0.1M NaCl + 50 mM 咪唑, pH 7.4；洗脱缓冲液：20mM PB + 0.1M NaCl + 0.5 M 咪唑, pH 7.4；注意：动态载量与蛋白种类和操作条件密切相关。
纳微科技NMabTM Pro Protein A 亲和层析介质使用说明书
NMab TM Pro Protein A亲和层析介质产品使用说明书文件编号：NM-W-DF-0603版本号：A2NMab TMPro 层析介质使用说明产品简介Protein A 亲和层析是利用Protein A 配基与目标抗体具有专一结合力作用从而达到分离纯化抗体的目的。
Protein A 亲和层析大大简化抗体下游分离纯化工艺，成为抗体分离纯化的标准。
目前市场上的Protein A 亲和层析介质主要分为以多糖（琼脂糖、葡聚糖、纤维素）为基质和以合成高分子（聚丙烯酸酯，丙烯酰胺）为基质两大类。
琼脂糖基质在溶胀状态下具有网状结构，比表面积大，因而亲和载量比较高，但机械强度不高、耐压低。
随着上游发酵技术的进步，抗体表达量越来越高，下游亲和捕获成为抗体生产瓶颈，因此对下游Protein A 亲和层析介质的载量要求越来越高。
为了因应这一需求，纳微科技以琼脂糖为基球，利用特有的微球改性技术以增强其机械强度，并结合自主产权的Protein A图1. NMab TM Pro Protein A 亲和层析介质电镜图配基技术，在NMab TM Protein A 的基础上成功开发出比其具有更高载量的NMab TM Pro Protein A 亲和层析介质。
除了高载量外，NMab TM Pro 延续了其优良的结合特异性、耐碱性以及压力-流速特性，是抗体客户降低单抗纯化成本的最佳选择。
下表1是NMab TM Pro Protein A 层析介质的基本性质参数。
相较市场同类产品有如下独特优势：(a) 载量高：一般单抗项目平均动态载量约60-80 mg/mL ；(b) 耐碱性强：0.5 M NaOH 浸泡下24小时载量只下降20%；(c) 配基脱落低：小于20 ppm ；(d) 宿主蛋白（HCP ）残留低：一般在1000 ppm 以内，表现不亚于Prism A ； (e) 回收率高：大于90%；(f) 纯度高：亲和洗脱液纯度99 %以上；(g) 压力流速好：明显强于传统4FF/6FF 系列介质；表1. 纳微科技NMab TM Pro Protein A 亲和层析介质技术参数压力流速曲线测试不同流速下压力变化如下，此压力-流速特性可满足工业生产上对填料流速要求，优于传统4FF/6FF 软胶系列填料。
实验亲和层析纯化IgG
实验步骤 1. Protein A纯化：
3）冲洗：加2倍柱体积冲洗缓冲液，打开止水夹，控制流出
速度为2ml/min，并用试管收集流出液(记为W)，在床表面仅 有1毫米左右液层时，关止水夹，再加入2倍柱体积平衡缓冲
液冲洗填料，床表面仅有1毫米左右液层时，关止水夹， 。
4）洗脱收集：取刻度试管2支编号，柱床上面加3倍柱体积 洗脱缓冲液，控制止水夹流出1倍柱体积洗脱液后，关止水 夹，室温下柱料与洗脱液孵育15min，打开止水夹控制流出 速度为1ml/min收集2倍柱体积（记为E1），待床表面仅有1 毫米左右液层时再加入3倍柱体积洗脱缓冲液， 收集2倍柱体 积记为E2。 5）收集结束后，加入清洗液（6M NaOH）洗涤2cv，平衡 液5cv。
三、实验材料——SDS-PAGE
试剂： 1. 2x样品缓冲液 2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺 0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml，过滤。 3. pH8.9分离胶缓冲液： Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重 蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml， 4℃保存。 4. pH6.7浓缩胶缓冲液： Tris 5.98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重 蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml， 4℃保存。 5. TEMED（四乙基乙二胺）原液 6.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制） 7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g， 加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。置4℃ 保存，临用前稀释10倍（减半配制）。 8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于 200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到 250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。 器材： 电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。
小鼠单抗腹水纯化步骤
小鼠单抗腹水纯化步骤小鼠单抗是一种通过免疫响应体外制备的抗体，通常通过腹水提取方式来获得。
下面是小鼠单抗腹水纯化的一般步骤：1.小鼠免疫将小鼠注射目标抗原，通常使用免疫佐剂将抗原与免疫系统刺激起来。
免疫期间要注意小鼠的饮食和生活环境，保证其健康状态。
2.收集腹水在免疫后，根据小鼠的体重和免疫剂量，使用注射器从小鼠的腹腔中收集腹水。
使用无菌器具，注意操作过程要无菌。
3.储存和预处理腹水收集到的腹水用离心机离心，去除其中的杂质和细胞。
然后将澄清的腹水分装入无菌离心管中，并进行储存。
4.蛋白质浓缩和沉淀将腹水进行浓缩，可以使用离心或超滤等方法。
浓缩过程中要注意温度和时间的控制，以避免蛋白质降解。
浓缩后的腹水可以进一步进行封冻保存。
5.抗原亲和纯化使用亲和层析柱，将浓缩的腹水与目标抗原相互作用。
亲和层析柱可以选择已经与目标抗原结合的树脂，或者通过动态亲和层析的方法进行柱填充。
6.纯化和洗脱将亲和层析柱上结合的抗原-抗体复合物进行洗脱。
可以使用洗脱液来改变物质之间的亲和力，以实现复合物的解离。
洗脱后的洗脱液可以进行进一步的分析和检测。
7.鉴定和分析对纯化后的抗体进行鉴定和分析，可以使用免疫层析、SDS-、Western blot等方法。
这些方法可以检测纯化后的抗体的纯度、抗体滴度和特异性。
8.储存和保存将纯化后的抗体进行分装并储存，通常以冷冻的形式保存。
在保存的过程中要注意使用无菌的存储容器，避免污染和降解。
以上是小鼠单抗腹水纯化的一般步骤。
根据实际需求和具体实验条件的不同，可能会有所调整。
另外，为了保证实验的安全和可重复性，建议在进行实验前充分了解相关实验操作和操作流程，并遵守实验室安全规范。
Protein A亲和层析柱亲和层析纯化人IgG1类嵌合抗体
技术方法名称:Protein A sepharose 4 fast flow亲和层析柱纯化人IgG1类嵌合抗体基本原理：葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A）在pH值中性或碱性条件下与多种哺乳类动物IgG分子的Fc段特异结合，而在酸性条件下可以解离，可用于纯化人和小鼠IgG及其亚类（IgG3除外）。
sepharose 4 fast flow是高度交联的4%的agarose衍生物，具有很好的动力学，在固相亲合吸附中有很好的层析质量，其刚性使其可理想地用于生产规模。
Protein A sepharose 4 fast flow是protein A 与固相基质sepharose 4 fast flow的结合，是高特异、高稳定性凝胶，当凝胶装填柱床后，能够特异性捕获目的抗体。
用途及受限因素：1、Protein A sepharose 4 fast flow的IgG高载量和允许样品通过的高流速，使其成为实验室和生产规模制备抗体的理想凝胶。
2、Protein A sepharose 4 fast flow在纯化过程中会有少量集团脱落，如需去除用离子交换Q Sepharose HP或凝胶过滤superdex 200。
3、在不同IgG亚类之内，甚至在相同亚类之内，都存在着天然的多样性，因此对于每个待纯化的单抗都必须首先优化选择结合和洗脱系统。
4、层析几批样品之后，尤其流速明显减慢之后，需重装柱子。
实验材料：1.1ml Protein A Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱生产厂商：pharmacia公司2.有抗体分泌的细胞上清（本实验室构建的嵌合抗体为人IgG1类嵌合抗体，宿主细胞CHO）3.柱体平衡液：0.1M PB缓冲液（PH7.0）4.抗体洗脱液：0.1mol/L柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（PH3.0）5.1mol/L Tris碱溶液（不调PH）6.透析液：0.01M PBS （PH7.4）7.20%乙醇8.0.45μm滤器9.真空泵（本操作流程操作程序以1ml凝胶为例）实验设计：1．样品处理：●取一定体积的有抗体分泌的细胞培养上清。
蛋白质纯化柱-ni
网址：
合蛋白； 4) 用缓冲液B和缓冲液C配制的不同浓度缓冲液D
洗脱； 9 最高纯度洗脱方案：用含0、60、100、150、
200、250mM 咪唑的缓冲液D分步洗脱，每 个梯度2~3倍介质体积洗脱； 9 最高收率洗脱方案：先用5~10倍介质体积 含20mM咪唑的缓冲液D洗脱，再用5~10倍 介质体积含250mM咪唑的缓冲液D洗脱。 注：纯化过程流速不宜过快，对于1ml介质，流速 保持在0.5ml/min为宜。 5. 介质清洗与再生： 如果使用一段时间以后，介质上有杂质沉积导 致介质颜色改变和蛋白结合能力下降，需对介质进 行清洗或再生。 z 介质清洗： 1) 用10倍介质体积0.5M NaOH过柱，适当调整流 速，或洗脱至10倍介质体积时停30min后继续洗 脱，保证介质与NaOH溶液接触时间达到30min 以上。 2) 用10倍介质体积去离子水洗去层析柱中的碱 液。 3) 用10倍介质体积缓冲液A平衡层析柱。 z 介质再生： 1) 用2~5倍介质体积脱镍缓冲液（50mM Na3PO4， 300mM NaCl，100mM EDTA，pH 8.0）过柱； 2) 用5-10倍介质体积0.5M NaOH过柱，适当调整 流速，如流速较快，则洗脱至10倍介质体积时 停30min后继续洗脱，保证介质与NaOH溶液接 触时间达到30min以上； 3) 用10倍介质体积去离子水洗柱； 4) 用3倍介质体积10mM Na3PO4，1M NaCl，pH 7.4 缓冲液平衡层析柱； 5) 用3倍介质体积20mM NiCl2或NiSO4 (溶于去离 子水)过柱； 6) 用3倍介质体积10mM Na3PO4，1M NaCl，pH 7.4 缓冲液洗柱； 7) 用5倍介质体积缓冲液A平衡层析柱。
网址：
分离His融合蛋白及能被金属离子吸附的多肽、 蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白。
亲和层析重力柱
亲和层析重力柱
亲和层析重力柱是一种用于分离和纯化生物大分子的技术，如蛋白质、核酸等。
它结合了亲和层析和重力柱的优点，具有高分辨率、高选择性和高通量的特点。
亲和层析是一种利用待分离物质与固定在支持物上的配体之间的特异性相互作用来实现分离的方法。
在这个过程中，待分离物质会与配体结合，形成复合物，而其他物质则会被洗脱下来。
通过改变洗脱条件，可以实现对不同物质的分离。
重力柱是一种利用重力作用来实现分离的设备。
在重力柱中，待分离物质会在重力作用下向下移动，从而实现分离。
重力柱通常具有较高的分辨率和通量，但选择性较差。
亲和层析重力柱将这两种技术结合起来，既保留了亲和层析的高选择性，又提高了重力柱的分辨率和通量。
在亲和层析重力柱中，待分离物质首先与固定在支持物上的配体结合，然后通过重力作用向下移动，实现分离。
这种方法可以应用于生物制药、生物技术等领域，对于提高产品质量和生产效率具有重要意义。
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亲和层析柱使用说明货号
名称规格说明DS0101
亲和层析柱1ml 含1个空管柱，上下盖和2个筛板（亲水性，孔径50um）
DS0103
亲和层析柱3ml DS0106
亲和层析柱6ml DS0110
亲和层析柱10ml DS0130
亲和层析柱30ml DS0150
亲和层析柱50ml 一、产品说明
亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。
它是利用生物分子间
存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶
和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有
亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质
上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另
一个分子进行分离纯化。
提供的亲和层析柱工具可应用于如下方面：
①纯化重组蛋白；②纯化抗原和抗体；③纯化多
肽；④纯化DNA；⑤糖蛋白的纯化；⑥纯化磷酸
化蛋白和肽；⑦DNA 结合蛋白的纯化；⑧去除内毒素，等。
亲和层析柱空柱管的材质为医疗级的聚丙烯，这种工程材料通过大量的应用证明具有清洁无毒，不与生物分子结合和低溶解度的优点。
亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWM-PE（超高分子量聚乙烯）为原料，经独特的工艺加工而成，具有亲水性。
筛板在装填时安置在填料基质的上下端，以阻挡昂贵的基质渗出。
亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWM-PE 生产技术，该筛板能保证使用重力法时的流速为1-2ml/分钟或1-2滴/秒。
同时，该筛板和其它同类产品相比，不会由于亲水性基团的引入而对蛋白质产生吸附。
另外，该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡，气泡会使流速降低，液体通过基质不均匀。
二、产品应用
1，抗体纯化
纯化抗体一般用Protein A作为纯化的配体，也可以用Protein G或Protein L或异源性抗体作为配体。
2，小分子物质提取（以提取黄曲霉毒素M1为例）
试样通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素M1被提取。
亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上,当样品通过亲和柱时,抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体一抗原复合体。
用水洗柱除去柱内杂质,然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1,收集洗脱液。
用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。
3，重组蛋白纯化
近年来，随着生物技术，特别是基因工程技术的迅猛发展，重组蛋白表达和纯化越来越容易。
常用的重组蛋白表达策略是把蛋白与亲和标签融合表达，利用亲和标签一步纯化出目标蛋白。
此方法无需了解蛋白质的生化特性或生理活性，就可通过带标签的重组融合蛋白选择性地与层析基质上的配体结合，从而得以纯化任何蛋白质。
此方法与常规的层析方法不同之处在于，无需针对不同的蛋白质开发特定的配体和方法。
采用保护蛋白质结构和功能完整性的温和条件，可一步亲和层析从粗提物中纯化出重组蛋白，纯度可达90％以上。
亲和标签已成为后基因组学时代纯化重组蛋白常用手段。
亲和标签系统一般具有以下特征：(a)一步的吸附纯化；(b)对三级结构和生物活性影响小；(c)可方便且专一的去除以产生天然蛋白质；(d)在纯化过程中重组蛋白的分析简便准确；(e)适用于大量的不同蛋白质。
但是没有哪个标签是完美的，只能根据实际需要去自己筛选，下表是分的标签以及纯化的方案。
三、装柱步骤：
1，装下筛板
把筛板浸泡于水中，用超声或振荡赶掉筛板空隙中的空气，备
用。
用装柱工具把筛板顶入柱体，再用装柱工具把筛板平推到柱体
底部。
2，加装填料
将填料和适量的缓冲液加入小烧杯中，制成混悬液。
盖上柱体
的下盖，用吸管取混悬液加入柱体中，当混悬液体积多于柱体体积时，取掉下盖放掉部分缓冲液，静置使填料沉到柱体底部。
3，装上筛板
保持柱体垂直，用装柱工具把筛板顶入柱体，再用装柱工具把筛板平推到填料上表面，盖上上盖。
注意：某些应用需要在填料上表面和上筛板之间留适当空隙。