提高耐缺氧耐受力功能学检验方法

提高耐缺氧耐受力功能学检验方法

1常压耐缺氧实验：

1．1原理缺氧对机体是一种紧张性刺激，影响机体各种代谢，特别是影响机体的氧化功能，最终会导致机体的心、脑等主要器官缺氧功能不足而死亡。

1．2材料：250ml磨口瓶秒表凡士林钠石灰

1．3实验动物单一性别成年小鼠，18-22g，每组10-15只。

1．4剂量分组及受试样品给予时间

实验设置三剂量组和一个阴性对照组，一推荐人体的10倍为其中一个剂量组，另设两个剂量组，必要时设置阳性对照组，受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

1.5 实验步骤

各剂量组经灌胃联系给予不同剂量浓度受试样品，对照组给予同等剂量溶剂，于末次灌胃1h后，各组动物分别放入盛有钠石灰的250ml磨口瓶内，每瓶一只，用凡士林封口。盖严，使之不漏气，立即计时，一呼吸停止位指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。

1.6 统计方法及结果判定

缺氧时间为计量数据，采用方差分析，但需要方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F<0.05,结论：各组数据差异无显著性；F≥0.05，P≤0.05，采用德国实验组和一个对照组拘束的两两比较进行统计，对非正态方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后还未达到正态或方差的目的，改用秩和检验进行统计。

计算小鼠耗氧量

将小鼠放入广口瓶内，塞好瓶塞，关闭通气管，使装置密闭，立刻记录实验开始时间，小鼠吸入O2 呼出CO2，CO2 被钠石灰吸收，装置内气体压力降低，

烧杯内的水在移液管内上升。随时读取移液管内液面上升高度，即为小鼠在不同时间的耗氧量，以mL 为单位。

1．7 注意事项

每个磨口瓶内最好只放一只小鼠，一防止相互干扰影响缺氧能力的测定。

磨口瓶一定要密闭封严，否则会影响结果。

磨口瓶必需等容量，实验前先用水加以校正。每批次是按动物的体重尽量保持一致。

亚硝酸钠中毒存活实验

2。.1 原理

亚硝酸钠使正常的二价铁血红蛋白转变为三价铁血红蛋白，破坏血红蛋白携氧能力，造成组织缺氧而死亡。

2。.2 材料

亚硝酸钠秒表1ml 注射器

2。.3 实验动物

成年小鼠，单一性别18-22g 每组10-15只

2。.4 剂量分组

实验设置三剂量组和一个阴性对照组，一推荐人体的10倍为其中一个剂量组，另设两个剂量组，必要时设置阳性对照组，受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

2.5实验步骤

各剂量组经灌胃连续给予不同剂量浓度受试药物，

对照组给予等剂量溶剂，于末次灌胃后1h，每组动物按200-240mg/kgBW剂量注射亚硝酸钠，注射剂量为0.1ml/10g，立即计时，记录动物存活时间。

2.6

缺氧时间为计量数据，采用方差分析，但需要方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F<0.05,结论：各组数据差异无显著性；F≥0.05，P≤0.05，采用德国实验组和一个对照组拘束的两两比较进行统计，对非正态方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后还未达到正态或方差的目的，改用秩和检验进行统计。

受试样品与对照组比较，存活时间延长，并具有统计学意义，判断结果为阳性。

急性脑缺氧实验，动物端头后，由于脑供血终止，在短时间中原有的血液和营养物质尚能使脑功能维持时间，显示出有规律地张口，以喘息时间为指标，可观测药物对脑缺血性缺氧的保护作用，凡能使脑耗氧降低，均能延长动物传奇时间。

3。.2 材料

剪刀秒表

3.3 实验动物

3。.4

剂量分组

3。.5 实验步骤

各剂量组经口连续性给予不同浓度受试药品，对照组给予同等剂量溶剂，于末次灌胃后1h，各组动物自劲部逐只断头后，立即按秒表记录断头后至张口喘息停止时间

3。.6统计分析结果

喘息时间为计量数据，采用方差分析，但需要按方差，方差齐，计算F<0.05,结论：各组数据差异无显著性；F≥0.05，P≤0.05，采用德国实验组和一个对照组拘束的两两比较进行统计，对非正态方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后还未达到正态或方差的目的，改用秩和检验进行统计。

3。.7 结果判断

常压缺氧实验、亚硝酸钠中毒存活实验、急性脑中毒实验三项实验中任一二项实验结果阳性，可判断该受试样品具有提高缺氧功能的作用。