提高缺氧耐受力功能评价与衡量方法(征求意见稿子)及修订说明书
功能范围调整方案起草说明（上网征求意见）
关于《保健食品功能范围调整方案(征求意见稿)》有关情况的说明为贯彻落实《食品安全法》及其实施条例对保健食品实行严格监管的要求，严格保健食品准入管理，切实提高准入门槛，自2009年2月以来，国家食品药品监督管理局（下称国家局）组织开展了调整保健食品功能范围、提高保健食品功能评价方法的各项工作，并形成了《保健食品功能范围调整方案（征求意见稿）》。
现将有关情况说明如下：一、工作开展情况根据国家局工作要点和工作安排，主要从以下两个方面展开保健食品功能范围调整工作以及功能学评价程序与检验方法的修订工作。
一是深入调研，反复论证。
根据监管工作实际和社会各界反映，从2009年2月开始，国家局食品许可司（现已更名为保健食品化妆品监管司，下称保化司）先后组织召开了20次专家、监管部门和企业座谈会、研讨会，主要邀请了食品科学与工程、公共卫生与预防医学、中医学、中西医结合、药学、中药学、临床医学等相关领域的专家，以及部分国内大、中型保健食品生产企业和有关研发企业，就保健食品功能设置和调整的原则、功能范围及其合理性、保健食品功能评价方法及相关指标、判断标准的科学性等方面进行了深入调研、研讨。
在此期间，很多专家、企业和行业协会对功能调整思路、改进方法和判断标准等提出了很多意见和建议，特别是对拟取消的功能，企业非常关注。
国家局保化司会同国家局保健食品审评中心，对保健食品功能设置原则、功能调整原则以及功能调整的思路与部分专家、企业和行业协会进行了反复、深入的交流和讨论，充分考虑了《食品安全法》及其实施条例对保健食品实行严格监管的要求和当前保健食品监管工作实际，从保障公众饮食安全、维护社会稳定的高度，统一思想，提高认识。
大家普遍认为，既要采取果断措施，该取消的功能坚决取消，又要做到平稳过渡，逐步推进，重在改进和完善评价方法，提高判断标准。
经反复修改，数易其稿，形成了《保健食品功能范围调整方案（征求意见稿）》，该方案得到了绝大多数专家、监管部门、企业以及行业协会的认同。
苏格木勒-10味等6种方剂对小鼠缺氧忍耐性试验
\#3=$ K"+-+$ E++Yn 71+-+?: K?+-+$ : EH3=$ D+)#8: /6$ b3+")$ E+4O C3+d+N5 !& O EH0#8: /6$ !&)+$ !"#8: \+3?:F ;+-+$ ;&9Y /"=,8&W &+32 &4 /01+$ &+8+?: ): A+"ZB:F VC3+$ !&)+$ 4 73&"-+N5O \##")+-: VC3+$ !&)+$ &&+' VC'5 ="CI8: /=>WF ZZ"&+YF \+Z45 &&$ (+"&8:F C"$ ;#39?64 E+%8: &+32 /6$ V3&")#B:F ;&)+. G4 b"64 &4
《 允许保健食品声称的保健功能目录 非营养素补充剂(2023年版)》及配套文件解读
《允许保健食品声称的保健功能目录非营养素补充剂（2023年版）》及配套文件解读一、起草情况《中华人民共和国食品安全法》规定，允许保健食品声称的保健功能实行目录管理。
2019年发布的《保健食品原料目录与保健功能目录管理办法》对保健功能目录的制定程序、纳入标准和后续调整等内容作出了规定。
为推动保健功能目录制定，与原保健食品功能管理制度衔接，规范保健功能声称管理，市场监管总局组织权威技术机构，围绕功能声称、评价方法等内容开展专项研究。
2019年3月、2020年11月分别发布《关于征求调整保健食品保健功能意见的公告》和《关于征求〈允许保健食品声称的保健功能目录非营养素补充剂〉及其配套文件意见的公告》，在综合社会反馈意见和专家论证意见基础上，制修订《保健食品功能检验与评价技术指导原则》《保健食品功能检验与评价方法》《保健食品人群试食试验伦理审查工作指导原则》等保健功能目录配套文件，进一步建立完善保健功能技术评价支撑体系。
在此基础上，市场监管总局于2022年1月再次公开征求《关于发布〈允许保健食品声称的保健功能目录非营养素补充剂〉及配套文件的公告（征求意见稿）》意见，根据征求意见情况修改完善后，依法会同国家卫生健康委和国家中医药局发布《允许保健食品声称的保健功能目录非营养素补充剂（2023年版）》（以下简称《功能目录非营养素补充剂（2023年版）》）及配套文件和解读。
二、《保健食品功能检验与评价方法（2023年版）》的定位《保健食品功能检验与评价方法（2023年版）》为《功能目录非营养素补充剂（2023年版）》配套的检验与评价方法，按照现有保健功能定位系统梳理1995年以来已批准注册的保健功能及配套评价方法，尤其是原卫生部发布的《保健食品检验与评价技术规范（2003年版）》和原食品药品监管局2012年修订发布的《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知》，围绕功能声称、评价方法等内容修订形成新版检验与评价方法，并由强制性方法改为推荐性方法。
保健食品注册申报法规及实操讲解
Page 23
《保健食品注册管理办法》的主要内容
共分两个部分：
一、正文，共九章
第一章 总则 第二章 申请与审批 第三章 原料与辅料 第四章 标签与说明书 第五章 试验与检验 第六章 再注册 第七章 复审
第八章 法律责任
第九章 附则
二、附件
1. 产品注册申请申报资料项目 3. 技术转让产品注册申请 申报资料项目 2. 变更申请申报资料项目 4. 再注册申报资料项目
• • • •
卫生部健康相关产品评审委员会章程； 卫生部健康相关产品检验机构工作制度； 卫生部健康相关产品检验机构认定与管理办法； 卫生部健康相关产品审批工作人员守则。
卫生部保健食品申报与受理规定（卫法监发[1999]第150号） 卫生部关于规范健康相关产品审批工作的通知（卫法监发[1999]第233号） 卫生部关于调整保健食品功能受理和审批范围的通知（卫法监发[2000]第20号 ） 卫生部健康相关产品命名规定（卫法监发[2001]109号，2009发新规定） 卫生部关于规范保健食品技术转让问题的通知（卫法监发[2001]71号）
Page 19
重点介绍：国家食品药品监督管理局保健食品审评中心
2004年6月16日正式挂牌（中保办加挂）。 主要职责：（1） 负责组织保健食品的技术审查和审评工作。（2）配合国家局制定 或修订保健食品技术审评标准、要求及工作程序。（3）协助国家局制定保健食品 检验机构工作规范并进行检查。 人员编制：50名，其中20名用于保健食品审评工作。 组织结构：负责人：中心主任，设保健食品事务主任助理一名，负责协调工作。下 设三个处： 一处职责：负责保健食品产品配方的技术审评； 制定保健食品审评计划及进度 协调；负责保健食品审评意见的审核；负责上报保健食品的审核； 负责审评产品档 案的管理。 二处职责：负责保健食品功能学、毒理学、安全 性评价资料的技术审评。
多方位呼吸功能改善对慢阻肺患者护理满意度的提升评价
多方位呼吸功能改善对慢阻肺患者护理满意度的提升评价【摘要】目的：研讨慢阻肺患者对其采取多方位呼吸功能改善护理对护理满意度的提升作用。
方法：研究纳入了在2021年9月至2022年9月时间段内，自行前往我院的慢阻肺患者，共计有68例，分组方式为随机数字表法，各34例，对比组实行常规护理，干预组实行多方位呼吸功能改善护理，干预组与对比组的护理满意度情况实施组间对照。
结果：干预组（94.12%）的慢阻肺患者护理满意度低于对比组（73.53%）的患者，P＜0.05，有差异。
结论：慢阻肺患者对其采取多方位呼吸功能改善护理效果显著。
【关键词】慢阻肺；多方位呼吸功能护理；满意度慢性阻塞性肺疾病是一种进行性疾病，严重影响患者的生活质量和预期寿命，因此，对慢阻肺患者进行全面、科学的护理具有重要意义，慢阻肺的护理目标包括减轻症状、改善运动耐受力、预防急性加重和改善生活质量[1]。
目前慢阻肺患者对疾病及治疗认识水平有待提高，患者自我管理能力不足，缺乏对疾病的正确认识和有效的自我管理技能，由于各种原因无法获得有效的护理服务。
对此，本研究针对慢阻肺护理方案进行分析，讨论多方位呼吸功能改善护理的应用效果。
1临床资料与方法1.1临床资料研究纳入了在2021年9月至2022年9月时间段内，自行前往我院的慢阻肺患者，共计有68例，分组方式为随机数字表法，各34例。
干预组男18例、女16例。
慢阻肺年龄43-87（65.84±10.26）岁。
对比组男20例、女14例。
慢阻肺年龄43-88（65.87±10.28）岁。
就干预组与对比组慢阻肺患者年龄、性别对照统计结果为p＞O.O5，可以对比。
1.2方法对比组实行常规护理，干预组实行多方位呼吸功能改善护理，物理治疗：肺功能康复训练是慢阻肺治疗的重要组成部分，包括有氧运动、肌力训练和呼吸训练等，通过锻炼提高肺部功能和全身耐受力，促进康复和预防加重[2]。
慢阻肺患者常伴有低氧血症，氧疗是改善患者生存质量的关键手段，氧疗可以减轻缺氧症状、改善睡眠质量和体力活动能力，减少肺动脉高压等并发症的发生。
提高缺氧耐受力功能评价方法及修订说明
提高缺氧耐受力功能评价方法(征求意见稿)及修订说明(总14页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--附件5：提高缺氧耐受力功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items, Principles and Result Assessment1 试验项目体重常压耐缺氧实验：存活时间常压缺氧模型实验：红细胞数和血红蛋白，丙二醛（MDA），总抗氧化能力（T-AOC）亚硝酸钠中毒缺氧实验：缺氧损伤实验: 高铁血红蛋白含量（MetHb）缺氧存活实验: 存活时间2 试验原则所列指标均为必做项目3 结果判定常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒缺氧实验、常压缺氧模型实验三项实验中任两项结果阳性可判定受试样品具有提高缺氧耐受力功能。
其中缺氧存活实验、缺氧损伤实验的结果均为阳性可判定亚硝酸钠中毒缺氧实验结果阳性。
提高缺氧耐受力功能检验方法Method for the Assessment ofEnhancing Anoxia Endurance Function1.常压耐缺氧实验原理缺氧对机体是一种紧张性刺激，影响机体各种代谢，特别是影响机体的氧化供能，最终会导致机体的心、脑等主要器官缺氧供能不足而死亡。
材料250mL磨口瓶、秒表、凡士林、钠石灰（或等量氢氧化钠和碳酸钙）。
实验动物推荐用近交系成年小鼠，单一性别，小鼠体重18－22克，每组10-15只。
实验方法剂量和分组至少设三个剂量组，同时设对照组。
以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，最高剂量不得超过人体推荐量的30倍。
受试样品的给予经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试样品掺入饲料，并记录每只动物的饲料摄入量。
受试样品给予时间30天，必要时可以延长至45天。
实验步骤每日经口灌胃给予受试样品，对照组给予纯净水。
将动物每周称重两次，按体重调整给予受试样品的量。
各组于末次灌胃后1小时，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250mL磨口瓶内（每瓶1只），用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，记录小鼠死亡的时间。
不同麻醉药对小鼠缺氧耐受性的影响及机制研究
不同麻醉药对小鼠缺氧耐受性的影响及机制研究目的研究不同麻醉药物（戊巴比妥钠、三溴乙醇、乌拉坦和水合氯醛）对小鼠缺氧耐受性的影响及相关机制。
方法小鼠随机分成6组：生理盐水对照组、普萘洛尔对照组、戊巴比妥钠组、三溴乙醇组、乌拉坦组、水合氯醛组。
腹腔注射给药，缺氧瓶法测定小鼠缺氧耐受时间及耗氧率，并利用生物信号采集处理系统记录心率变化。
观察常温下不同药物对小鼠缺氧耐受时间的影响，并分析缺氧耐受时间与耗氧率、心率之间的关系。
结果戊巴比妥钠、三溴乙醇、乌拉坦和水合氯醛均显著延长小鼠的缺氧耐受时间（P＜0.01），其中三溴乙醇和水合氯醛作用明显高于其他组。
戊巴比妥钠、三溴乙醇、乌拉坦和水合氯醛均降低小鼠的耗氧率（P＜0.05），其中三溴乙醇和水合氯醛的降低作用最显著。
三溴乙醇、水合氯醛除降低小鼠耗氧率外，还显著降低小鼠心率（P＜0.05）。
结论缺氧耐受性与耗氧率和心率有关。
戊巴比妥钠、乌拉坦可通过降低小鼠耗氧率增强缺氧耐受性，而三溴乙醇和水合氯醛通过降低耗氧率和降低心率增强小鼠缺氧耐受性。
标签：麻醉药；缺氧耐受性；小鼠缺氧是常见的病理生理过程，缺氧耐受性差的器官如心、脑等，更容易发生缺血-再灌注损伤（ischemia reperfusion injury），心脑血管疾病手术特别是冠脉搭桥术和心脏移植手术等的广泛开展，均涉及缺血-再灌注过程。
近年来研究显示，麻醉药除了其麻醉效能外，还能明显减轻缺血再灌注损伤，但其机制复杂，尚不完全清楚[1-3]。
目前研究主要集中在离体细胞和单个器官上，关于麻醉药预处理对全身缺血缺氧损伤的保护作用研究很少[4]。
因此，研究麻醉药物对机体缺氧耐受性的影响具有重要临床意义，本实验拟通过不同麻醉药物对小鼠缺氧耐受性的影响及相关机制研究，以期为临床相关缺血-再灌注疾病的治疗提供理论依据，对于改善患者预后具有重要价值。
1 材料与方法1.1 动物和试剂健康成年ICR（institute of cancer research）小鼠，体重（20±2）g，购自苏州大学实验动物中心。
保健食品注册检验机构资格认定规范(征求意见稿)
保健食品注册检验机构资格认定规范（征求意见稿）第一章总则第一条为规范保健食品注册检验机构的资格认定工作，依据《保健食品注册检验机构资格认定管理办法》（以下称《认定管理办法》），制定本规范。
第二条本规范适用于保健食品注册检验机构（以下称注册检验机构）资格认定工作。
本办法所称注册检验机构是指经国家食品药品监督管理局资格认定，承担保健食品注册检验、产品质量复核检验（以下分别称注册检验、复核检验）工作，并出具保健食品注册检验、复核检验报告（以下均称检验报告）的检验机构。
第三条本规范包括注册检验机构的资格认定条件、认定程序及相关要求。
第二章认定条件第四条注册检验机构应当具备《认定管理办法》第八条的基本条件，同时根据注册检验类别的不同具备承担相应检验项目（见表1）的能力。
（一）安全性毒理学试验应当至少具备急性毒性试验、Ames试验、骨髓细胞微核试验、哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠精子畸形试验、睾丸染色体畸变试验、30天喂养试验、致畸试验、90天喂养试验9个项目的能力。
（二）功能学动物试验应当至少具备5个项目的能力。
（三）功能学人体试食试验应当至少具备4个项目的能力。
（四）功效成分或标志性成分检测应当至少具备维生素矿物质部分80%以上项目、原料或功能相关的标志性成分部分70%以上项目和微生物部分全部项目的能力。
（五）卫生学、稳定性试验应当至少具备理化部分90%以上项目和微生物部分全部项目的能力。
（六）国家食品药品监督管理局规定的其他项目。
第五条检验项目原则上不能分包，确因特殊情况需要分包的，申请时应予注明。
分包项目不超过申请项目总数的5％，其中安全性毒理学试验、功能学动物试验、功能学人体试食试验分包项目分别不得超过1项。
除功效成分或标志性成分检测、卫生学、稳定性试验外，其他试验不得以项目为单位向外分包。
被分包方应当是国家食品药品监督管理局认定的具有相应能力的注册检验机构。
第六条注册检验机构应当具有与检验项目及检验能力相适应的仪器设备（见表2）和标准物质，配备率达95%以上，并保证运行良好，有完整的仪器设备档案。
保健食品功能范围调整方案(上网征求意见)食药监保化函[2011]322号
![保健食品功能范围调整方案(上网征求意见)食药监保化函[2011]322号](https://img.taocdn.com/s3/m/5757721bb7360b4c2e3f64a3.png)
保健食品功能范围调整方案（征求意见稿）为贯彻落实《食品安全法》及其实施条例对保健食品实行严格监管的要求，进一步完善功能评价方法，提高判断标准，规范功能声称，严格准入门槛，现对保健食品功能范围调整提出以下方案：一、功能设置原则(一)以中国传统养生保健理论和现代医学理论为指导，以满足群众保健需求、增进人体健康为目的。
(二)功能定位应为调节机体功能，降低疾病发生的风险因素，针对特定人群，不以治疗疾病为目的。
(三)功能声称应被科学界所公认，具有科学性、适用性、针对性，功能名称应科学、准确、易懂。
(四)功能评价方法和判断标准应科学、公认、可行。
(五)功能调整和管理应根据科学发展、社会需求和监管实际，按照相关程序，实施动态管理。
二、功能调整原则(一)符合保健食品功能设置的原则。
(二)对现有功能进行调整，坚持平稳过渡，逐步推进，暂不增加新功能。
(三)合并相近功能，规范功能名称，使其更符合保健食品功能特性，更具针对性。
(四)根据科学发展，完善评价方法，适当提高判断标准，强化人体试食试验和科学文献依据。
(五)取消或调整功能定位不够准确、声称科学性不强、易与疾病治疗相混淆和易误导消费者的功能；取消缺乏客观指标评价、缺乏社会需求的功能。
(六)根据功能定位和评价方法，调整适宜人群范围。
三、具体调整方案根据上述功能设置和调整的原则，现有27项功能取消5项，涉及胃肠道功能的4项合并为1项、涉及改善面部皮肤代谢功能的2项合并为1项，予以保留，最后确定为18项功能。
具体调整情况如下：建议保留的功能：(一)增强免疫力保留理由：1.功能名称修改为有助于增强免疫力。
2.免疫功能评价试验采用小鼠淋巴细胞转化试验、迟发性变态反应、抗体生成细胞、血清溶血素试验、小鼠碳廓清、NK细胞活性的等项免疫检测指标，与当前免疫学的基础理论相一致，涵盖细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫等机体免疫功能的主要机制，所选择的模型和指标在国内外广泛应用，在有关功效评价中的可行性也得到普遍认可。
《燃料电池用空气压缩机耐久性试验方法》征求意见稿
4.1 设备仪器精度............................................................................................................................................. 2 4.2 压力测量..................................................................................................................................................... 2 4.3 温度测量.................................................................................................................................................
红景天软胶囊提高缺氧耐受力功能实验研究
受试 液 ，供 各剂 量组灌 胃。对 照组 给予等 体积 动物 食 用油 。每 日灌 胃一 次 ，灌 胃量 为 ０１ ／０ ・ｗ，连 续 ．ｍｌ ｇ ｂ １ ３ 天 。实验期 间动 物 自由摄取 饮水 。每 天观察 动物 的 ０
活动 及生长 情况 。
１５ 仪 器 与 试 剂 ．
次灌 胃后 ｌ ，各 组动 物 自颈 部逐 只断头 ，立 即按秒表 ｈ
ＣＯ Ｅ Ｕ Ｕ Ｕ Ａ Ｙ Ｍ ＹＸ
２ １第 期 总 １ 期 草 业 与 畜牧 ０年 ７ 第８ １ ８
何正 军， 贾国夫 ，尼科 ，郭敏
（ 四川 省 草原 科 学研 究 院 ，四川 成都 ６ １３ ） １ ７ １
摘
要 ：利 用新研 制的红景天软胶囊 ，按照 《 保健食品检验与评价技术规范》进行 了小鼠常压耐缺氧实验、亚硝酸
钠 中毒存活试验和急性脑缺血性缺氧 实验研究 ，结果表明，红景天软胶 囊具有提 高缺氧耐 受力作用，对红景天软胶 囊申
报 保健 食 品 批 准 文号 、投 产 销 售具 有 重要 的 意 义 。 关 键词 ：红 景 天软 胶 囊 ；缺 氧 实验
中图分类号：Ｒ ６ － ９ ５２
文献标识码 ：Ａ
记 录小 鼠断头后 至张 口喘气停止 时 间。
１ ． 统 计 分 析 处 理 ７
电子 天平 、２ ０ｍ 磨 口瓶 、亚 硝 酸钠 、钠 石 灰 、 ５ ｌ 医用 凡 士林 、手术 剪 、秒 表 、镊 子 、药勺 、ｌ ｌ 射 ｍ注
器等 。
１６ 实验 方 法 ．
用 Ｓ Ｓ １ ．软件进 行数 据转化 和统计 分析 。分析 Ｐ Ｓ ０ １ 时 ，先 对数 据进 行方 差齐性 检 验 ，若 方差 齐 ，采 用单
提供 的红景天 软胶囊 ，按 照 《 健食 品检 验 与评 价技 保 术规 范》 要求 ，开展 提 高缺 氧 耐受力 功 能评 价实 验 。 本 文对上 述实验 数据进 行搜 集总 结 ，为促 进川 西北 高 原 红景 天产业 的发展 和红景 天软胶 囊取得 国家 保健食 品批准 文号投产 上市 销售 ，繁荣保 健食 品市场提 供依 据。 １ 材 料与方法
提高缺氧耐受力的红景天口服液的实验评价
ｔ ｉ ｌｇ ａ ａｓｓｍ ｎ ｎｓｆ ｙ ｔｅ ｃ ｔ ｏａ Ｍ Ｄｖｌｅ ｆａ ｎ ｉ ｅ ｒａｅ ｔａ ５ｇ（ 。ｗ． ｏ ｃ ｏｉ ｌ ｓｅｓ ｅｔ ａ ｔ，ｈ ｕｅ ｒ Ｔ ａ ｓ ｔ ａｄｍｃ ｗ ｒ ｇｅｔ ｎ１ ｋ ｂ ） ｘ ｏ ｃ ｏ ｅ ａ ｌ ｕ ｏ ｒｓ ｅ ｅ ｒｈ ／ｇ
ＬＵ Ｈｎ， ｉｃ ｕ ＧＵ ｎ， Ｉ Ｉ ＭＯ Ｌ— ｈ ｎ， Ｏ Ｙａ Ｘ ＡＮＧ Ｊ —ｏ ｇ， Ｅ ａ －ｕ ｉ ｌｎ Ｚ ＮＧ Ｆ ｎ ｊｎ， ｎ （． ｐ ｒ ｎ ｆ ｏ ｄＳ ｉｎ ｅ Ｓｃ ｕ ｎＵ ｉｅｓｔ， ｈ ｎ ｄ １ ０ ５ Ｓｃ ｕ ｎ Ｃ ｉａ ２Ｓｃ ｕ ｎＣ ｎｅ ｒ ｉｅ ｓ １ Ｄｅ ａｔ ｔ ｏ ｃｅ ｃ ， ｉｈ ａ ｎｖ ｒｉ Ｃ ｅ ｇ ｕ６ ０ ６ ， ｉｈ ａ ， ｈｎ ； ．ｉｈ ａ ｅ ｔｒ ｏ ｓａ ｅ ｍｅ ｏ Ｆ ｙ ｆ Ｄ
１ 产 品工艺和配 方
红景天能提 高机体组织 氧的利用率 ， 增加有 氧氧 化 酶 的活性 ， 高机体 的带 氧和供 氧能 力 ， 实现 抗 提 来 缺 氧作 用。在缺 氧环境 枸杞 多糖对心 、 、 、 、 肝 肺 脑 肌组
天甙和酪醇［ １ １ 。红景天具有抗缺氧 、 抗疲 劳翻 等功能 ， 临 床上红景 天可用 于预防高原 反应 的辅 助用 药［ ３ １ 景 。红
当人 体组织得 不到充 足的氧 ， 或不能 充分利 用氧
时， 细胞 、 组织 、 器官 的代 谢 、 能 、 机 甚至形 态结构都 可 能发 生异常变化 ， 这一病 理过程就 称为缺 氧 。缺 氧多 见于 空气 稀薄 的高原地 区 ， 一些低 氧场所 ， 如商场 、 办 公楼 、 铁 、 地 隧道 、 地下设 施等 。一 些特殊人 群也易 发 生缺 氧症 状 ， 如利用 氧 的效率 下 降 的老年 人 、 脑力 劳 动者及运动员 。因此开发具有缺氧耐 受力 的保健食 品 具有重要 的意义 。红景天 为保健食 品可用资 源 ， 景 为 天科红景 天属多 种植物 的根及根茎 ， 主要成 分有红 景
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
附件5：提高缺氧耐受力功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items, Principles and Result Assessment1 试验项目1.1 体重1.2 常压耐缺氧实验：存活时间1.3常压缺氧模型实验：红细胞数和血红蛋白，丙二醛（MDA），总抗氧化能力（T-AOC）1.4 亚硝酸钠中毒缺氧实验：1.4.1 缺氧损伤实验: 高铁血红蛋白含量（MetHb）1.4.2 缺氧存活实验: 存活时间2 试验原则所列指标均为必做项目3 结果判定3.1常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒缺氧实验、常压缺氧模型实验三项实验中任两项结果阳性可判定受试样品具有提高缺氧耐受力功能。
3.2其中缺氧存活实验、缺氧损伤实验的结果均为阳性可判定亚硝酸钠中毒缺氧实验结果阳性。
提高缺氧耐受力功能检验方法Method for the Assessment ofEnhancing Anoxia Endurance Function1.常压耐缺氧实验1.1 原理缺氧对机体是一种紧性刺激，影响机体各种代，特别是影响机体的氧化供能，最终会导致机体的心、脑等主要器官缺氧供能不足而死亡。
1.2 材料250mL磨口瓶、秒表、凡士林、钠石灰（或等量氢氧化钠和碳酸钙）。
1.3 实验动物推荐用近交系成年小鼠，单一性别，小鼠体重18－22克，每组10-15只。
1.4 实验方法1.4.1 剂量和分组至少设三个剂量组，同时设对照组。
以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，最高剂量不得超过人体推荐量的30倍。
1.4.2受试样品的给予经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试样品掺入饲料，并记录每只动物的饲料摄入量。
受试样品给予时间30天，必要时可以延长至45天。
1.4.3 实验步骤每日经口灌胃给予受试样品，对照组给予纯净水。
将动物每周称重两次，按体重调整给予受试样品的量。
各组于末次灌胃后1小时，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250mL磨口瓶（每瓶1只），用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，记录小鼠死亡的时间。
1.4.4 检测指标小鼠因缺氧而死亡的时间。
1.5 数据处理数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值>F0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
1.6 结果判定受试样品组与对照组比较，存活时间延长，并具有统计学意义，则判定该实验结果阳性。
1.7 注意事项：1.7.1每个磨口瓶只放1只小鼠。
1.7.2磨口瓶一定要密闭封严，以防漏气，否则会影响实验结果。
1.7.3磨口瓶必须等容量(误差 1ml)，实验前先用水加以校正。
1.7.4每批实验动物的体重应尽量保持一致。
2 常压缺氧损伤模型实验2.1 原理在总大气压保持不变的情况下，降低空气中氧的百分含量，机体吸入氧量降低，导致血液中氧含量降低，组织细胞不能从血液中获得充足的氧而使能量代障碍，导致重要脏器组织细胞的损伤。
2.2 仪器低氧分压呼吸效应实验系统、血细胞分析仪、可见光分光光度计、酶标仪、微量加样器、恒温水浴锅、普通离心机、混旋器、具塞离心管、组织匀浆器。
2.3 实验动物推荐用近交系成年小鼠，单一性别，体重18－22g，每组10-15只。
2.4 实验方法2.4.1 剂量和分组至少设三个剂量组，同时设阴性对照组和模型对照组二个对照组。
以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，最高剂量不得超过人体推荐量的30倍。
2.4.2受试样品的给予经口灌胃给予受试样品，受试样品给予时间30天，必要时可以延长至45天。
2.4.3 实验步骤2.4.3.1造模方法每日经口灌胃给予受试样品，阴性对照组和模型对照组给予同等容量溶剂。
将动物每周称重两次，以调整受试样品剂量。
每次给予样品后，将模型对照组与各剂量组的实验动物依次放入常压缺氧装置中，通过充入氮气方法把装置的氧含量从21%大气氧含量调整下降至10.0±0.5 % 氧含量，维持此低氧含量处理样品组和模型对照组动物6～8 h/天，每周5～6次，连续2～3周。
末次缺氧处理后，采血并取脑进行各项指标的检测。
2.4.4指标检测体重、血红蛋白含量（Hb）、脑匀浆丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（T-AOC）。
2.4.4.1血红蛋白含量测定方法EDTA·K2能与血液中的钙离子结合成为螯合物，从而阻止血液凝固，全血抗凝后用一般血常规检验的血细胞分析仪检测(仪器法)。
2.4.4.1.1试剂配制乙二胺四乙酸二钾（EDTA·K2·2H2O，MW404.47）,称量8mg EDTA·K2加纯净水至100ml制成抗凝剂，50μl抗凝剂可抗凝1ml小鼠全血。
1.5～2.2mg的EDTA·K2可阻止1ml血液凝固。
2.4.4.1.2 采血以摘除小鼠眼球的方法采集全血，采用干净无菌的眼科镊子摘取小鼠一侧或双侧眼球，让血液自由滴入装有抗凝剂的1.5ml离心管（或商品化的抗凝管）中，采血过程中不断混匀血液与抗凝剂防止血液凝固，每只动物采集抗凝全血约1ml。
2.4.4.1.3 检测分析上机前血液颠倒混匀，注意检查是否存在凝块。
在24h以全血细胞分析仪检测血液红Hb。
上机操作参照仪器说明书。
2.4.4.2组织中过氧化脂质降解产物丙二醛（MDA）含量测定2.4.4.2.1 原理MDA（malondiadehycle）是细胞膜脂质过氧化的终产物之一，测其含量可间接估计脂质过氧化的程度。
1个丙二醛（MDA）分子与2个硫代巴比妥酸（TBA）分子在酸性条件下共热，形成粉红色复合物。
该物质在波长532nm有极大吸收峰。
可用分光光法进行测定。
2.4.4.2.2试剂0.2M乙酸盐缓冲液pH3.50.2M乙酸溶液185mL0.2M乙酸钠溶液15mL1mmol/L四乙氧基丙烷（贮备液，4℃保存3个月），临用前用水稀释成40nmol/mL8.1%十二烷基硫酸钠SDS0.8%硫代巴比妥酸TBA0.2M磷酸盐缓冲液pH7.40.2M磷酸氢二钠1920mL0.2M 磷酸二氢钾480mL2.4.4.2.3 实验步骤2.4.4.2.3.1 样品制备组织匀浆样品：取一定量的大脑组织，生理盐水冲洗、拭干、称重，置匀浆器中，加入0.2M磷酸盐缓冲液，以20000r/min匀浆10s，间歇30s，反复进行3次，制成10％组织匀浆（W/V），3000r/min离心5－10min，取上清液待测。
2.4.4.2.3.2样品测定试剂空白管样品管标准管10％脑组织匀浆0.2mL40nmol/mL四乙氧基丙烷0.2mL8.1%SDS 0.2mL 0.2mL 0.2mL0.2M乙酸盐缓冲液 1.5mL 1.5mL 1.5mL0.8%TBA 1.5mL 1.5mL 1.5mLH2O 0.8mL 0.7mL 0.7mL混匀，避光沸水浴60min，流水冷却，于532nm比色注：如用试剂盒，可按试剂盒的操作要求进行2.4.4.2.3.3计算B - A B- A 1过氧化脂质含量＝————×C×K = ———×40×————————（nmol/mg组织） F - A F - A 0.2×10%×1000A: 空白管吸光度B：样品管吸光度F：四乙氧基丙烷吸光度C：四乙氧基丙烷浓度（40nmol/mL）K：稀释倍数2.4.4.3 组织中总抗氧化能力（T-AOC）测定方法2.4.4.3.1 原理机体中有许多抗氧化物质，能使Fe2+还原成Fe3+，后者可与菲啉类物质形成稳定的橙黄色络合物，通过在520nm比色可测出其抗氧化能力的高低。
2.4.4.3.2 试剂采用商品试剂盒：抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒。
2.4.4.3.3 样品制备准确称取脑组织重量，按重量体积比加9倍生理盐水，以20000r/min匀浆10s，间歇30s，反复进行3次，制成10％组织匀浆（W/V），2000～2500r/min 离心10min，取上清液待测。
同时用双缩脲试剂测定10%脑组织匀浆蛋白。
2.4.4.3.4 样品测定：按试剂盒的操作要求进行。
如：试剂对照管（mL）样品管（mL）10％脑组织匀浆ａ*试剂一 1.0 1.0试剂二 2.0mL 2.0mL试剂三应用液0.5mL 0.5mL漩涡混匀器充分混匀，37℃水浴30分钟试剂四0.2mL 0.2mL待测样本ａ*试剂五0.2 mL 0.2 mL混匀，放置10分钟，蒸馏水调零1cm光径，520nm测各管吸光度。
* 参考取样量：10%组织匀浆参考取样量：0.1～0.2ml2.4.4.3.5计算OD U-OD C总抗氧化能力＝——————÷30×N÷C prot（单位/mg蛋白） 0.01OD U: 测定管吸光度OD C：对照管吸光度N：反应体系稀释倍数（反应液总体积/取样量）C prot：稀释倍数待测样本蛋白浓度（mg/ml）2.5 数据处理数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验。
方差齐，计算F值，F值< F0.05，各组均数间差异无显著性；F值>F0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。
对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
2.6 结果判定模型对照组与阴性对照组比较， Hb、MDA升高、T-AOC含量降低有统计学显著性意义（P<0.05），表示模型成立。
在模型成立的前提下，受试样品组MDA含量降低或T-AOC含量升高有统计学意义（P<0.05），且Hb＜210g/L，判定该项实验结果阳性。
注: 红细胞增多症评价标准参考值Hb＞210g/L。
3 亚硝酸钠中毒缺氧实验3.1 原理亚硝酸钠使二价铁血红蛋白转变为三价铁血红蛋白，生成高铁血红蛋白（MetHb），破坏血红蛋白携氧能力，造成组织细胞缺氧，随着亚硝酸钠剂量的增加，MetHb含量增加，导致组织缺氧直至死亡。
3.2 实验动物推荐使用近交系成年雄性小鼠，体重18～22g，每组10～15只。
3.3 材料亚硝酸钠, 20μl毛细管, 1ml注射器，秒表。
3.4 剂量分组实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设两个剂量组。
受试样品给予时间30天。