免疫学原理及检测
免疫学检测原理及临床应用
免疫学检测原理及临床应用免疫学检测是一种通过检测体内免疫系统的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断技术。
其基本原理是利用体内自身的免疫系统对外来物质（如细菌、病毒或人工合成物质）做出特异性反应，产生特异性抗体或细胞免疫反应，并将其检测出来。
免疫学检测可分为血清学检测和细胞免疫学检测两种。
血清学检测是指通过检测血清中特异性抗体的存在来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有ELISA、免疫荧光、免疫印迹等方法。
其基本原理是将目标抗原或建立细胞突变株制备成特异性抗原，与患者血清中的特异性抗体结合，用酶、荧光或其他标记物检测出来。
例如，ELISA是一种广泛应用的免疫学检测技术，用于检测抗体和抗原的相互作用。
它的原理是将抗原吸附到多孔板上，在体外将待测样本加入其中，样品中如有特异性抗体，则与抗原结合，未结合的抗体被洗掉，再加入标记抗体，标记物与抗原相互结合形成复合物，可以根据标记物的性质来检测复合物的形成。
细胞免疫学检测是指通过检测免疫细胞的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有淋巴细胞转化试验（LTT）、流式细胞术等方法。
其基本原理是将血液或其他体液样本中的免疫细胞与特异性抗原共同孵育，在体外激活免疫细胞产生抗体或细胞反应，使用流式细胞术分离、检测不同类型的免疫细胞。
例如，LTT可用于检测细菌或病毒等病原体感染及免疫功能异常等疾病。
其原理是将血液或其他体液样本加入培养基中，与特定抗原刺激后，在体外培养一段时间，测定培养物中的淋巴细胞增殖情况，反映细胞免疫应答功能的多样性和复杂性。
免疫学检测在临床实践中的应用非常广泛。
它被用来诊断多种感染性疾病，例如乙型肝炎、艾滋病、结核病等。
通过检测患者体内是否存在相应的抗体或细胞反应，可以确定疾病病原体是否存在以及疾病的严重程度。
此外，免疫学检测还被用于诊断自身免疫性疾病，例如狼疮、风湿性关节炎等。
通过检测患者体内是否存在特定的自身抗体，可以确定患者的疾病类型和严重程度。
免疫检测原理
免疫检测原理免疫检测是一种常用的生物学实验技术，通过检测抗体与抗原之间的相互作用来确定特定物质的存在。
这种检测方法通常用于诊断疾病、监测生物分子的表达水平以及研究生物分子相互作用等领域。
免疫检测的原理主要基于免疫学中的抗体-抗原相互作用原理，下面将详细介绍免疫检测的原理及其应用。
1. 免疫检测的原理免疫检测的原理基于抗体与抗原之间的特异性相互作用。
抗体是免疫系统产生的一种蛋白质，可以识别并结合特定的抗原分子。
当抗体与抗原结合时，会发生特定的免疫反应，形成抗原-抗体复合物。
免疫检测利用这种抗原-抗体相互作用来检测特定的生物分子。
常见的免疫检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹（Western blot）、免疫荧光等。
2. ELISA检测原理ELISA是一种常用的免疫检测方法，其原理基于酶与底物之间的特异性相互作用。
在ELISA实验中，首先将待检测的抗原或抗体吸附在微孔板上，然后加入特异性抗体或抗原，使其与待检测物相结合。
接着加入与特异性抗体结合的酶标记二抗，形成抗原-抗体-酶标记二抗复合物。
最后加入底物，酶与底物发生反应产生可测量的信号，通过测量信号强度来确定待检测物的存在量。
3. Western blot检测原理Western blot是一种用于检测蛋白质的免疫检测方法，其原理基于蛋白质的分子量和特异性抗体的结合。
在Western blot实验中，首先将待检测的蛋白质经电泳分离并转移到膜上，然后将膜与特异性抗体结合，形成蛋白质-抗体复合物。
接着加入与特异性抗体结合的辅助抗体，再加入底物产生可视化的信号，通过检测信号强度来确定待检测蛋白质的存在量。
4. 免疫检测的应用免疫检测在医学诊断、生物学研究和生物工程等领域有着广泛的应用。
在医学诊断中，免疫检测可以用于检测病毒、细菌和肿瘤标志物等，帮助医生诊断疾病。
在生物学研究中，免疫检测可以用于检测蛋白质表达水平、研究蛋白质相互作用等。
在生物工程中，免疫检测可以用于检测重组蛋白质的纯度和活性等。
免疫学检验
免疫学检验概述免疫学检验是一种通过检测人体免疫系统的功能和状态来评估健康状况的方法。
免疫学检验主要用于检测和诊断免疫相关疾病、监测免疫治疗效果和评估免疫功能。
在免疫学检验中，通常使用抗体和抗原相互作用的原理进行检测。
抗体是一种由免疫系统产生的特异性蛋白质，可以与抗原结合，形成免疫复合物。
通过检测免疫复合物的形成和浓度变化，可以获得相关信息和数据来评估免疫系统的功能和状态。
常见的免疫学检验方法免疫荧光检测免疫荧光检测是一种常用的免疫学检验方法。
它利用荧光标记的抗体与目标分子（如抗原、细胞表面分子等）发生特异性结合，然后使用荧光显微镜观察荧光信号的强度和分布情况。
免疫荧光检测具有高灵敏度和特异性的优势，可以用于检测抗体、抗原和免疫细胞的分布和表达情况。
在临床诊断中，免疫荧光检测常用于检测自身抗体、病毒抗体和细胞免疫功能等方面。
免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常见的免疫学检验方法。
它基于酶标记的抗体与抗原特异性结合的原理，利用酶催化的反应产生可测量的信号。
ELISA具有高精确性和灵敏度的特点，可用于检测抗体、抗原和细胞因子的浓度。
在临床检验中，ELISA常用于检测病毒感染、风湿性疾病和免疫调节等方面。
流式细胞术流式细胞术是一种免疫学检验方法，可以同时检测和分析多种免疫细胞类型和功能的改变。
它基于细胞表面标志物的特异性结合和荧光标记的抗体的检测，通过流式细胞仪实现高通量的细胞检测和分析。
流式细胞术广泛应用于免疫学研究和临床诊断中。
它可以用于检测细胞表面分子的表达情况、分析细胞亚群的比例和功能状态，并可进行细胞分选和细胞功能实验等。
免疫学检验的临床应用免疫学检验在临床诊断和治疗中具有重要的应用价值。
它可以用于检测和诊断多种免疫相关疾病，如自身免疫病、感染性疾病和免疫缺陷病等。
在自身免疫病的诊断中，免疫学检验可以检测自身抗体的产生和水平变化，帮助确定疾病类型和活动度。
免疫学检测技术基本原理
荧光免疫检测技术(FI)的基本原理
荧光免疫检测技术与FIA类似，但是不需要标记酶和底物，而是直接标记荧光染料，通过检测荧光信号 随时间变化的曲线来判断样品中免疫分子的存在和浓度。
无需酶标记
荧光免疫检测不需要使用 酶标记荧光素酶，避免了 潜在的酶和底物污染。
高通量检测
荧光免疫检测可以在低浓 度下完成快速检测，适用 于高通量和大规模的样品，可以 标记多种不同的免疫分子， 提高检测的多元性和特异 性。
放射免疫检测技术(RIA)的基本原理
放射免疫检测技术利用放射性标记的免疫分子来检测样品中目标免疫分子的存在和浓度。
1
放射性标记
将免疫分子与放射性元素标记如131I、125I等结合。
2
孵育和分离
将标记的免疫分子与待测样品反应孵育，通过分离获得实验的反应产物。
免疫学检测技术基本原理
免疫学检测技术是一种检测生物体内免疫分子的方法，应用广泛于临床诊断、 生命科学、农业、环境监测和食品安全等领域。
免疫学检测技术的定义和概述
免疫分子的来源
免疫分子包括抗体、补体和细 胞因子等，都是免疫系统特异 性抗原识别和应对的产物。
检测方法的基本原理
通过与特定抗原或抗体结合来 检测样品中目标免疫分子的存 在和浓度。
免疫学检测技术的应用
广泛应用于疾病诊断、药物开 发、生物学研究和疫苗制备等 领域，成为现代生物技术发展 的重要手段。
免疫学检测技术的常见方法
直接法
直接使用标记的抗体或抗原检测样品中的免 疫分子。
间接法
利用未标记的抗体与样品中的免疫分子结合， 再使用标记的二抗或蛋白A/G结合物检测。
竞争法
利用抗原或抗体与样品中的免疫分子竞争结 合，测定中目标免疫分子的含量。
免疫学检测方法及其原理
原理：利用抗原抗体特异性结合 的原理，通过酶催化底物产生颜 色反应，检测抗原或抗体的存在。
步骤：将抗原或抗体固定在固相 载体上，加入待测样品，再加入 酶标记的抗体或抗原，最后加入
底物，产生颜色反应。
优点：灵敏度高，特异性强，操 作简便，可定量检测。
应用：广泛应用于免疫学检测、 疾病诊断、药物研发等领域。
评估药物的疗效和安全性
03
检测方法：使用免疫细胞进 04
筛选结果：根据检测结果，
行药物筛选，如ELISA、流
选择具有治疗效果的药物进
式细胞术等
行进一步研究
科学研究
01
免疫学检测在科学
研究中的应用
02 免疫学检测在生物
医学研究中的应用
03
免疫学检测在生物
技术研究中的应用
04 免疫学检测在生物
制药研究中的应用
2 免疫学检测原理
抗原抗体特异性结合
抗原：能够引起免疫反应的物质，如病毒、细菌 等
抗体：由B细胞产生的，能够识别并结合抗原的 蛋白质
特异性结合：抗原与抗体之间具有高度特异性， 即一种抗原只能与一种抗体结合
结合原理：抗原与抗体结合后，形成抗原抗体复 合物，从而激活免疫系统，产生免疫反应
信号放大技术
免疫学检测方法及其 原理
演讲人
目录
01. 免疫学检测方法 02. 免疫学检测原理 03. 免疫学检测应用
1 免疫学检测方法
抗原抗体反应
01
抗原：能够引起 免疫反应的物质， 如病毒、细菌等
02
抗体：由免疫系 统产生的，能够 识别和结合抗原 的蛋白质
03
反应原理：抗原 与抗体结合，形 成抗原抗体复合 物，引发免疫反 应
免疫学检测技术基本原理
1:8
1:16
Ag
Ab
扩散
免疫学检测技术基本原理
15
免疫学检测技术基本原理
16
３、免疫电泳 （immuno electrophoresis)
+
-
标本先电泳
**** **** ****** **** ***** ***
两侧挖槽加Ab孵 育后出现肉眼可
见沉淀
免疫学检测技术基本原理
17
免疫学检测技术基本原理
抗体直接结合所出现的凝集现象 ：
（1）玻片法—定性试验：已知 Ab 未知 Ag(?) ABO血型鉴定， 细菌种属抗原型别的鉴定
+
免疫学检测技术基本原理
10
（2）试管法—半定量试验： 诊断伤寒副伤寒的“肥达氏反应”
病人血清 倍比稀释
伤寒细菌悬液
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 对照
1、免疫荧光技术
（immunofluorescence techniques）
利用荧光素标记抗体或抗抗体以检测细胞表面或 细胞内抗原的技术。
免疫学检测技术基本原理
21
1、免疫荧光技术 （immunofluorescence techniques）
直接法
间接法
免疫学检测技术基本原理
22
免疫学检测技术基本原理
23
间接免疫荧光检测自身抗核抗体
免疫学检测技术基本原理
24
2、免疫酶标技术： 免疫酶标技术：酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）
用酶标记Ab(或Ag)与标本中的Ag(或Ab)发生 特异性结合
加入酶的底物，在酶作用下产生有色物质 根据颜色可作出判断或测量光密度值
免疫学检测方法与操作规范
免疫学检测方法与操作规范免疫学检测方法一直是生物医学领域中的重要技术之一，广泛应用于免疫学研究、临床诊断和治疗监测等方面。
本文将介绍免疫学检测方法的基本原理、常用实验步骤以及操作规范，旨在为科研人员和实验室从业人员提供参考。
一、免疫学检测方法简介免疫学检测方法是通过检测人体免疫系统特异性抗原与抗体之间的相互作用来实现。
其原理基于人体免疫系统对外界病原体的免疫应答，通过检测抗原-抗体反应可以确定某种特定的抗原或抗体是否存在于样本中。
免疫学检测方法常见的类型包括ELISA（酶联免疫吸附测定法）、免疫印迹、流式细胞术等。
每种方法都有其特定的优势和适用范围，具体选择方法要根据实验目的和样本特点来确定。
二、常用免疫学检测方法及操作步骤1. ELISA方法ELISA是一种定性和定量检测抗原或抗体的常用方法。
其操作步骤包括：（1）涂底板：将包含目标抗原的溶液加入微孔板中，并在相应孔中加入阴性对照和阳性对照，孵育后洗涤；（2）加入特异性抗体：将标记有酶的特异性抗体加入孔中，并进行孵育和洗涤；（3）底物反应：加入酶底物，允许产生显色反应；（4）终止反应：加入终止液停止底物反应；（5）测定吸光度：使用酶标仪测定吸光值，计算样品中目标抗原或抗体的浓度。
2. 免疫印迹方法免疫印迹是一种用于检测特异性抗原和抗体的方法，常用于蛋白质的鉴定和定量。
操作步骤包括：（1）蛋白质分离：将待测蛋白经SDS-PAGE电泳分离；（2）膜转移：将分离后的蛋白转移到膜上，如PVDF或NC膜；（3）阻断：用蛋白阻断剂阻断膜上非特异性结合位点；（4）孵育抗体：使用特异性抗体孵育膜，结合目标蛋白；（5）洗涤：洗去未结合的抗体；（6）显色：加入特定底物进行显色反应；（7）图像分析：使用成像系统记录和分析显色结果。
3. 流式细胞术流式细胞术常用于分析和鉴定细胞表面标记物的表达情况，以及细胞在不同状态下的功能。
操作步骤包括：（1）细胞准备：对待测细胞进行处理，包括细胞培养、致死和洗涤等步骤；（2）标记抗体：使用荧光标记的特异性抗体孵育待测细胞，与目标表面标记物结合；（3）洗涤：洗涤去除未结合的抗体；（4）流式细胞仪分析：将标记后的细胞放入流式细胞仪中进行荧光检测和数据分析。
免疫学检验的基本原理与方法
免疫学检验的基本原理与方法免疫学检验是一种常见的实验室技术，在医学、生物学等领域具有广泛的应用。
本文将介绍免疫学检验的基本原理和常用的方法，并探讨其在疾病诊断、病毒检测和药物研发中的应用。
一、免疫学检验的基本原理免疫学检验基于机体免疫系统的特性，利用抗原与抗体之间的特异性结合反应来检测和定量分析抗原或抗体的存在。
其基本原理如下：1. 特异性识别：抗体可以识别并结合与之对应的抗原，形成特异性的抗原-抗体复合物。
2. 高度敏感性：免疫学检验可以检测极低浓度的抗原或抗体，提供高度敏感的结果。
3. 双重验证：通过采用一对互补的抗原和抗体，可以用于验证检测结果的准确性。
二、常见的免疫学检验方法在免疫学检验中，常用的方法包括酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫印迹（Western Blotting）、免疫荧光等。
下面将对这些方法进行具体介绍：1. 酶联免疫吸附实验（ELISA）ELISA是一种常见且广泛应用的免疫学检验技术。
它利用酶标记的抗体与待检测样品中的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标记物复合物。
通过添加底物，酶标记物能够催化底物的反应，产生可测量的信号。
ELISA可用于定量或半定量测定目标物的浓度，并可应用于多种领域，如感染性疾病的诊断、蛋白质的定量等。
2. 免疫印迹（Western Blotting）免疫印迹是一种常用于检测特定蛋白质的免疫学技术。
该方法通过将复杂的蛋白质混合物经SDS-PAGE电泳分离后，将之转移到固体载体上。
然后，用特异性抗体与目标蛋白质结合，并通过酶标记的二抗与一抗结合，产生可见的信号。
免疫印迹可用于诊断疾病、检测蛋白质相对分子质量和检测表达水平等。
3. 免疫荧光免疫荧光是一种利用抗体对荧光染料标记的抗原进行特异性识别的免疫学技术。
该技术通过与荧光探针结合并激发荧光信号，来检测细胞或组织中特定抗原的定位和表达。
免疫荧光广泛应用于免疫组织化学、细胞信号转导、病毒感染等领域，可用于研究细胞和组织的结构、功能以及疾病的发生机制。
免疫学检测技术的基本原理及其应用
免疫学检测技术的基本原理及其应用免疫学检测技术是一种通过测定机体中的抗体或抗原来进行诊断、监测或研究的检测方法。
其基本原理是利用人体免疫系统的特性，通过抗原与抗体的特异性结合来检测和定量分析抗原或抗体的存在与水平。
下面将详细介绍免疫学检测技术的基本原理及其主要应用。
一、免疫学检测技术的基本原理1.直接免疫检测方法：直接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体标记物直接反应，利用标记物发出的信号来检测目标物质。
常用的标记物有放射性同位素、荧光物质、酶和金等。
2.间接免疫检测方法：间接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体反应后，再经过第二抗体与标记物结合的方式来检测目标物质。
这种方法主要应用于寻找含有多重抗原决定簇的抗原。
二、免疫学检测技术的主要应用1.临床应用：免疫学检测技术在临床上应用广泛，例如用于检测病毒、细菌、寄生虫等病原体的感染，常见的如乙肝、艾滋病、流感等病毒的检测。
此外，免疫学检测技术还可用于检测肿瘤标志物、自身免疫性疾病、免疫功能检测等。
2.生物制药与生物工程：免疫学检测技术在生物制药与生物工程中有着重要应用。
例如，通过免疫学检测技术来检测和定量分析生物制药产品中的杂质和残留物，确保产品质量和安全性。
另外，免疫学检测技术还可用于基因工程草甘膦抗性作物的筛选和鉴定。
3.食品安全监测：免疫学检测技术在食品安全监测中起到重要作用。
通过免疫学检测技术可以检测食品中的有害物质或者过敏原，如重金属、农药、酒精、过敏原等，确保食品的质量和安全。
4.动物疫病监测：免疫学检测技术在兽医领域有着广泛应用。
例如，可以通过免疫学检测技术来检测动物体内的病原体感染，如猪瘟、狂犬病、禽流感等，及时采取措施进行防治。
5.环境监测：免疫学检测技术还可用于环境污染物的监测。
例如，通过检测水体、大气中的有害物质，判断环境中的污染程度和对人体的危害。
总结起来，免疫学检测技术基于抗原与抗体的特异性结合反应，可以应用于临床诊断、药物开发、食品安全监测、动物疫病监测和环境监测等多个领域。
免疫学检测原理及临床应用
• ANNEXIN V是种磷脂结 合蛋白，作为探针能识 别凋亡细胞。
• 细胞对细胞活性染料 （如PI）有拒染性。而 坏死细胞能被PI染色。
（二）淋巴细胞功能测定的体内试验
迟发型超敏反应皮肤试验 ●特异性: PPD皮试、过敏原皮试 ●非特异性: PHA 皮试、DNCB皮试
●流式细胞术(flow cytometry，FCM)
●磁分离技术
（三）淋巴细胞亚群计数
●免疫荧光技术（IF） ●补体依赖微量细胞毒试验 ●流式细胞术（FCM） ●花环试验
用FITC-抗IgM 单抗计数B细胞
二、淋巴细胞功能测定
3H-TdR渗入法
淋巴细胞增值试验 MTT法 形态学计数法
体外试验
是指一个抗体分子与整 个抗原之间的结合强度。
之间的结合强度。
High
Affinity Ab
Low
Affinity Ab
Keq =
104
106
Ag
Ag
Avidity Avidity
抗原抗体反应的基本检测方法
（一） 凝集反应 颗粒性抗原与相应的抗体结合，在一定条件下
形成肉眼可见的凝集块。 （二） 沉淀反应
细胞毒试验
51CR释放法 乳酸脱氢酶释放法
细胞凋亡检查法
分泌功能测定 体内试验：皮试
检测细胞因子分泌细胞 检测抗体形成细胞
二、淋巴细胞功能测定
（一）淋巴细胞功能测定的体外试验
1. 淋巴细胞增殖试验
●刺激物
* 非特异性：丝裂原PHA、Con A和PWM，抗CD2、 CD3单抗，同种MHC等
* 特异性：破伤风类毒素、PPD、白色念珠菌、肿瘤 细胞等
常用免疫学检验技术的基本原理
常用免疫学检验技术的基本原理免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原。
由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答，在生物体内产生特异性和非特异性T细胞的克隆扩增，并分泌特异性的免疫球蛋白（抗体）.由于抗体－抗原的结合具有特异性和专一性的特点，这种检测可以定性、定位和定量地检测某一特异的蛋白（抗原或抗体)。
免疫学检测技术的用途非常广泛,它们可用于各种疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。
最初的免疫检测方法是将抗原或抗体的一方或双方在某种介质中进行扩散，通过观察抗原－抗体相遇时产生的沉淀反应，检测抗原或抗体，最终达到诊断的目的。
这种扩散可以是蛋白的自然扩散，例如环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散实验。
单向免疫扩散试验就是在凝胶中混入抗体，制成含有抗体的凝胶板，而将抗原加入凝胶板预先打好的小孔内，让抗原从小孔向四周的凝胶自然扩散，当一定浓度的抗原和凝胶中的抗体相遇时便能形成免疫复合物，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈,沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正比.利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷的特性，可以利用人为的电场将抗原、抗体扩散，例如免疫电泳试验和双向免疫电泳。
免疫电泳首先将抗原加入凝胶中电泳，将抗原各成分依次分散开.然后沿电泳方向平行挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原的混合抗体，让各抗原成分与相应抗体进行自然扩散，形成沉淀线。
然后利用标准的抗原－抗体沉淀线进行抗原蛋白（或抗体)的鉴别。
上述的方法都是利用肉眼观察抗原－抗体反应产生的沉淀，因此灵敏度有很大的局限.比浊法引入沉淀检测产生的免疫比浊法就是利用浊度计测量液体中抗原－抗体反应产生的浊度，根据标准曲线来计算抗原(或抗体）的含量。
该方法不但大大提高了检测的灵敏度，且可对抗原、抗体进行定量的检测。
免疫印迹法则首先通过电泳分离标准的已知抗原,然后将电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维膜上，浸于待测血清中。
免疫学检测技术的基本原理
第一节 基于 抗原-抗体 反应的检测 方法
一．抗原抗体反应概念
抗原与相应抗体在体内、外发生的高度特异性结 合反应。在合适条件下所进行的体外反应中，抗 原与相应抗体特异性结合可呈现某种反应现象 （如凝集、沉淀）。由于实验所用抗体存在于血 清中，故又称血清学反应。
二、抗原抗体反 应的特点
高度特异性
通过记录溶血空斑的数 目可知抗原特异性B细胞 的数目
细胞毒试验
51Cr释放法
乳酸脱氢酶释放法
细胞染色法
靶细胞被杀伤后， 向体系中加入台盼 兰，可进入膜破损 的细胞内，将细胞 染成蓝色。活细胞 拒染而不着色。
凋亡细胞 检测法
琼脂糖电泳法
正常细胞基因组DNA 凋亡细胞
TUNEL法
在细胞中加入末端脱氧 核苷酸转移酶(TdT)和 生物素标记的核苷酸
血浆
单 个核细 胞
(PBMC，包
离心
括淋巴细胞、 C和NK)
红细胞和 粒细胞
外周血单个核细胞的分离
稀释 血液
淋巴细胞分 离液(葡聚糖 -泛影葡胺 r=1.078)
血浆
单 个核细胞 (PBMC，包
括淋巴细胞、
DC和NK)
离心
红细胞和 粒细胞
淋巴细胞及其亚群的分离
磁珠分离法
1
免疫吸附分 离法
2
流式细胞术
三．表面化学基团之间的可逆结合
抗原抗体结合除了空间结构互补外，主要以氢键、范德华力和疏水键 等非共价结合。易受温度、酸碱度和离子强度的影响而解离，解离后 抗原抗体仍具有原有特性，可借助亲和层析法纯化抗原或抗体。
抗原抗体反应的2个阶段
○ 第1阶段是抗原抗体特异性结合，可在数秒钟至几分钟内完成；第2阶段 是小的抗原抗体复合物靠正负电荷吸引形成较大复合物，所需时间从数 分钟至数日不等。
免疫学检测原理
免疫学检测原理
免疫学检测是一种常用的生物学分析方法，用于检测体内的抗体或抗原。
其原理基于免疫反应，即抗原与抗体之间的特异性相互作用。
免疫学检测通常分为直接和间接检测两种方法。
直接检测中，样品中的抗原与标记有特定抗体的探针结合，形成抗原-抗体
复合物。
这种复合物可以通过各种方法来检测，例如流式细胞仪、免疫组化等。
间接检测中，样品中的抗原与特定抗体结合后，再与标记有第二抗体的探针结合。
这种方法通常用于检测抗体。
在免疫学检测中，探针的选择很关键。
探针可以是放射性同位素、酶、荧光剂或荧光素等，这些标记物能够产生可检测的信号。
通过测量标记物的信号强度，可以确定样品中的目标抗原或抗体的存在和数量。
免疫学检测方法的选择取决于具体的实验要求以及所需要检测的抗体或抗原类型。
常见的免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、西方印迹（Western blotting）和免疫组化等。
总的来说，免疫学检测是一种快速、敏感且特异的方法，被广泛应用于临床诊断、生物医学研究和药物开发等领域。
通过免疫学检测，可以获得关于免疫系统功能和疾病状态的重要信息，有助于了解疾病的发展机制和制定相应的治疗策略。
免疫学研究的原理与方法
免疫学研究的原理与方法免疫学是研究免疫系统和免疫反应的学科。
随着生物技术的不断发展和进步，免疫学在治疗疾病和研究疾病机制方面扮演着越来越重要的角色。
本文将介绍免疫学研究的原理和方法。
一、免疫系统的基本原理免疫系统是由许多种不同的细胞和分子组成的。
其中最重要的细胞是白细胞，这些细胞分为两类：B细胞和T细胞。
B细胞可以产生抗体，而T细胞可以直接杀死病原体。
除了白细胞，免疫系统还包括其他细胞和分子，如补体系统、巨噬细胞和自然杀伤细胞等。
当人体感染病原体时，免疫系统会出现反应。
这个反应有两个阶段。
在第一阶段中，免疫系统会尽可能快地识别和杀死病原体。
在这个过程中，病原体与宿主细胞相互作用，产生大量的分子信号和细胞因子。
宿主细胞会释放化学物质，吸引免疫细胞到感染部位。
这些免疫细胞会摧毁病原体并清除它们。
第二阶段则包括免疫系统的记忆部分。
当我们感染同样的病原体时，免疫系统能够快速产生反应，并尽可能快地清除病原体。
这就是为什么我们有免疫力，能够抵御疾病的再次侵袭。
二、免疫学研究的方法1.细胞培养细胞培养是免疫学研究中常用的实验方法之一。
研究人员可以将免疫细胞从人体中分离出来并放入培养皿中，使它们在特定条件下继续生长和繁殖。
这些细胞还可以用作基因工程和其他免疫学研究。
2.流式细胞术流式细胞术是一种用于研究单个细胞的方法。
该技术可用于研究免疫系统中不同类型的细胞、它们的分化状态和功能等。
流式细胞术的基本原理是使用标记的抗体让细胞变得可辨识，并利用激光束扫描和信号记录来获取单个细胞的信息。
3.ELISA实验酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种用于检测抗体或抗原的方法。
ELISA实验通常用于检测疾病的诊断和疫苗开发等方面。
该方法涉及将抗体添加到试液中，并将任何与之结合的抗原分子杂交至试剂板上。
通过测量这种结合而得出的结果，可以确定抗体或抗原的存在。
4.免疫印迹法免疫印迹法是一种用于检测蛋白质的方法。
该技术利用标记的抗体识别蛋白质，并通过电泳和其他手段将其分离。
免疫学实验的实验原理应用
免疫学实验的实验原理应用1. 介绍免疫学实验是研究生物体对抗外来生物、化学物质或病原体的反应的一种重要方法。
它通过检测和分析免疫系统产生的抗体和细胞因子等来评估免疫功能。
本文将介绍免疫学实验的实验原理和主要应用。
2. 实验原理免疫学实验的基本原理是通过特定的抗原与免疫系统中的抗体结合产生反应，从而检测和研究抗体的产生和功能。
以下是常见的免疫学实验原理：2.1. 免疫沉淀技术免疫沉淀技术通过特异性抗体与待测抗原结合，形成免疫沉淀复合物，然后利用沉淀复合物的性质进行检测或纯化。
免疫沉淀技术主要包括单克隆抗体和多克隆抗体的应用。
2.2. 免疫染色技术免疫染色技术主要使用抗体与标记物结合的原理，通过标记物的特异反应产生颜色或荧光信号，用于检测待测物质的存在和定位。
常见的免疫染色技术有免疫组化染色和免疫荧光染色。
2.3. 免疫印迹技术免疫印迹技术是一种通过分析目标蛋白在凝胶上的特异性识别，进而定性和定量目标蛋白的方法。
免疫印迹技术主要包括Western blotting和ELISA等。
3. 实验应用免疫学实验在医学研究、生物工程、环境监测和农业等领域有广泛的应用。
以下是免疫学实验的主要应用：3.1. 诊断疾病免疫学实验常被用于疾病的诊断，例如通过检测特定抗体或抗原来确定某种病原体的感染。
例如，ELISA可以用于检测HIV感染，免疫荧光染色可以用于诊断肿瘤。
3.2. 药物开发免疫学实验可以用于药物的研发和评价。
例如，在药物开发过程中，可以使用免疫沉淀技术来纯化目标蛋白，进而设计新的治疗方法。
此外，免疫染色技术可以用于评估候选药物的效果。
3.3. 生物学研究免疫学实验在生物学研究中起到关键作用。
例如，通过免疫印迹技术可以确定蛋白质的表达水平和翻译后修饰的情况，通过免疫沉淀技术可以研究蛋白质间的相互作用。
3.4. 免疫治疗免疫学实验在免疫治疗中有重要的应用。
例如，通过免疫沉淀技术可以纯化单克隆抗体用于治疗某种疾病，通过免疫染色技术可以评估免疫治疗的效果。
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志。HCV RNA亦可定量，定量测定有助于了解
病毒复制程度、抗病毒治疗的选择及疗效评估等。
为什么要同时检测 抗HCV 及 HCV RNA？
★ 抗病毒治疗的要求。 ★ 防止漏诊。
有 报 道 223 例 丙 型 肝 炎 病 例 中 ， 抗 HCV 和 HCV RNA 同时阳性 86 例，单纯抗 HCV 阳性 118例，单纯HCV RNA 阳性19例。 表明单做其中一项可能导致漏诊。
ELISA 方法的种类
双抗体夹心法 间接法 双抗原夹心法 HBsAg、HBeAg HCV、Dengue-IgG HBsAb、HIV、TP
竞争性抑制法
中和抑制法 捕获法
抗－HBc
HBeAb HBc-IgM、HA-IgM
双抗体夹心 ELISA 法示意图
影响因素
试剂因素 标本因素（内源性、外源性） 操作因素
洗涤应彻底。
中山生物产品
乙肝两对半（缺少e抗原） 丙肝
梅毒
EB病毒
登革热
G6PD
乙型肝炎病毒血清标志物检测
HBsAg
★ 常用ELISA法检测。
★ 目前HBsAg诊断试剂质量较高，灵敏度可达
0.2ng/L。从全国室间质控评价结果显示，阳 性标本率达到或超过98％。
★ HBsAg滴度越高，HBeAg、HBV DNA阳性的
免疫学反应
是抗原与抗体的反应，仅在高等脊椎 动物中存在。 这是已知的最精妙复杂的 身体抵御外部物质的系统。
抗原(Antigen)
抗原是指能刺激机体免疫系统产生 免疫应答而生成抗体和致敏淋巴细胞等 免反应原性。一般抗 原都是外来物，如细菌、病毒、寄生虫、 大分子蛋白等 。
标本因素(内源必干扰)
类风湿因子（假阳性） 检测抗原时可用2-巯基乙醇 加入到标本稀释液中,使其降解或F(ab)2代替完整IgG。 补体（假阳性） 可用EDTA稀释标本或灭活补体。 嗜异性抗体、自身免疫性抗体、交叉反应物质等。
操作时影响因素
加样应加在孔的下1/3处，注意不可溅出或有 气泡产生。 加样应每人一吸头，防止交叉污染。 样本的稀释(目的是减少非特异性反应) 要先 加稀释液再加标本并用微量振荡器混匀30秒。 加试剂时应摇匀并弃去第一滴。
可能性越大。
★ 血液与肝组织的HBsAg含量并不完全相关。
为什么血清HBsAg阴性不能排除HBV感染？
★ 检测试剂不够敏感。 ★ S基因变异（抗原性发生改变）。 ★ X基因变异（转录受抑制）。 ★ 重叠HCV感染（干扰HBsAg合成）。
如何诊断血清HBsAg阴性的HBV感染？
★ 提高检测敏感性
★ 采用针对变异抗原的检测试剂 ★ HBV DNA的检测 ★ 组织中标志物的检测
HBsAb
阳性就万无一失了吗？
低滴度应注意假阳性 单一HBsAb阳性HBV DNA检出率0-11.8%：
★ 先后感染了不同的HBV亚型
★ S基因变异
★ X基因变异
HBsAb阳性HBV DNA阴性
并不排除肝细胞内HBV的存在
HBsAg 与 HBsAb共存
★ 可出现在HBV感染的恢复期，此时HBsAg未 消失，HBsAb已产生，大部分归功于检测敏 感性的提高。 ★ S基因发生变异，野生株HBsAb不能将其清 除； ★ HBsAb阳性者感染了不同亚型HBV或免疫逃 避株。
艾滋病血清学检测
★ 初筛试验：酶联免疫吸附试验（ELISA） 用于对检测对象感染情况的初步筛查，检测结 果可能会有假阳性，不能发抗体阳性报告。 ★ 确认试验：免疫印迹法（Western Blot） 确定检测对象是否有HIV抗体，可发抗体阳性 报告。
第一代 ELISA 试剂
2、抗原、抗体的结合是分子表面的结合，这 种结合虽相当稳定，但是可逆的。 3、抗原、抗体的结合是按一定比例进行的， 只有比例适当时，才能出现可见反应。
最适比例示意图
血清学反应的一般特点
4、血清学反应大体分为两个阶段进行，但其 间无严格界限。第一阶段为抗原抗体特异性结合 阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即 可完毕，但不出现肉眼可见现象。第二阶段为抗 原抗体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补 体结合反应等。反应速度慢，需几分、几十分以 至更长时间。
抗体(Antibody)
机体受外来抗原物质刺激后，产生 的一种能与该抗原发生特异性结合的免 疫球蛋白(Ig)。
免疫球蛋白分类
Ig通常是指具有抗体活性和（或）抗体样结 构的球蛋白。应用免疫电泳与超速离心分析可将 Ig分5类： IgG、IgA、IgM、 IgD、 IgE。
IgG：含量最多或最主要的Ig（75%），唯一 能够通过胎盘的Ig。主要由脾脏和淋巴结中的浆 细胞合成与分泌。
酶联免疫吸附试验
enzyme linked immunosorbent assay ELISA
ELISA方法的技术根据
抗原或抗体能结合到固相载体的表面，并保 持其免疫活性。
抗原或抗体与酶连接所形成的结合物仍保持 免疫学和酶的活性。 在测定时待测血清与固相载体的抗原或抗体 结合，然后再加入酶标记的抗原或抗体，形成复 合的结合物，最后加入底物溶液，与酶反应的颜 色深浅与标本中相应抗原或抗体的量成比例。
1 、 乙 肝 核 心 抗 体 IgM 增 高 可 诊 断 急 性 乙型肝炎。 2 、单纯核心抗体 IgG 增高常表示有既往 感染。
乙型肝炎核心抗体 (HBcAb)
3 、 HBcAb 的出现表明肝内乙肝病毒复制 活跃，肝细胞受损较重，并且传染性 较强。 4、HBcAb对乙型肝炎无保护作用，其持 续阳性可长达数十年甚至保持终身。
临床二对半检测常见模式
HbsAg -HBs HBeAg -HBe -HBc
1
2 3 4 5 6 7
＋
＋ ＋ － ＋ － －
－
－ － － － － ＋
＋
－ － － － － －
－
＋ ＋ ＋ － － ＋
＋
＋ － ＋ ＋ ＋ ＋
模式 1 ：急肝、慢肝活动期，有传染性， （大三阳）。 模式 2：急性乙肝、病毒复制减弱；慢性乙 肝、传染性弱（小三阳）。 模式 3 ：急性 HBV 感染，趋向恢复，慢性 HbsAg携带者。 模式4：近期既往感染，急性HBV感染恢复 期。 模式 5：急肝、慢肝表面抗原携带者，传染 性弱。 模式 6：急性窗口期，既往感染过。 模式7：康复期，近期感染过HBV，有免疫 力。 模式 8：既往感染过，乙肝恢复期，仍有免 疫力。 模式 9：康复期或被动免疫后 。 模式10：现在或过去未感染乙型肝炎病毒。
丙型肝炎
HCV抗体不是保护性抗体，是存在HCV感染
的标志。抗HCV IgM在发病后即可检测到，一般
持续1～3个月。如果抗HCV IgM持续阳性，提示
病毒持续复制，易转为慢性。低滴度抗HCV IgG
提示病毒处于静止状态，高滴度提示病毒复制活
跃。
HCV RNA
HCV RNA阳性是病毒感染和复制的直接标
1 、 HBeAg 增高说明患有乙型肝炎具有较强的传染 性，它的出现往往是乙型肝炎的早期或者是活动期。 2 、如 HBeAg 阳性持续时间大于 10 周以上或更长时 乙型肝炎e 抗原 间，病人可能进展为慢性持续性感染，肝组织常有 (HBeAg） 较严重的损害，急性乙型肝炎容易演变成慢性肝炎 或肝硬化。 3 、 HBeAg 阳性孕妇有垂直传染性， 9% 以上的新生 儿将受乙型肝炎病毒感染，HBeAg也为阳性。
乙型肝炎e 抗体 2 、 HBeAb 阳性率增高，表明多数患者乙型肝炎病 (HBeAb) 毒感染的时间可长达7－27年。 3 、 HBeAb 阳性仍会有一定的传染性。在 HBeAb 阳 性的孕妇分娩婴儿中可有20%感染乙型肝炎病毒。
1 、慢性乙型肝炎 HBeAb 阳性占 48.3% ，肝硬化为 68.3%，肝癌为80%。
★ 抗HBc IgG 其阳性滴度高，表明患有乙型肝炎，
指正在感染；低滴度为既往感染指标，体内时间 长。
乙型肝炎病毒各项标志物
检测的临床意义
1 、 HBsAg 阳性，常为慢性 HBsAg 携带者、急 性乙型肝炎潜伏期、慢性迁延性肝炎与慢性活 动性肝炎、肝硬化。 乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)
2 、 HBsAg 阳性还可见于输血后肝炎病人的血 中，有少数急性黄疸性肝炎的病人血中 HBsAg 呈阳性反应，随着病情的好转HBsAg消失。
试剂因素
选择优良的检测试剂，操作前平衡到室温 不同批号的试剂不能混用
在有效期内使用
标本因素(外源性干扰)
标本应避免溶血，细菌的污染(假阳性)； 抗凝不完全的标本(假阳性)，建议尽量不用抗凝剂血 尤其是肝素抗凝剂； 标本保留时间过长(间接法本底值增高)，如需保存一 周以上，则应-20℃保存,融解后应充分混匀； 标本间应避免交叉污染，不应与生化标本共用同一管 标本； 不能用NaN3防腐。
（前C区变异）
② HBsAg(﹣)乙型肝炎
（S区变异）
③ 低水平感染
单项抗HBc(﹢)乙型肝炎
HBV DNA检测的临床意义
2、 疗效判断： HBV DNA 是目前判断乙肝抗病毒药物疗效 最敏感的指标 。 3、预后判断： HBV DNA水平与病情有一定的关系。
HBV DNA检测的临床意义
调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处 于HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三 阳”的病人 HBV 都无复制。因此，要准确知道 HBV是否处于复制状态，最准确的方法还是通过 检测HBV DNA来决定。
免疫学原理及检测
技术支持部
胡贺
主要内容
免疫学基本内容 血清学一般特点 ELISA方法的技术根据 ELISA方法的种类 影响因素 中山生物产品 各类产品简介