毛细管电泳化学发光PPT幻灯片
合集下载
《毛细管电泳原理》课件
过程
将样品溶液注入毛细管一端,施加电 场后,带电粒子在电场作用下开始电 泳迁移,经过一定时间后,到达毛细 管的另一端,经过检测器检测。
毛细管电泳的应用
环境监测
用于检测水体、土壤等环境样 品中的污染物,如重金属离子
、有机物等。
生物分析
用于蛋白质、DNA、RNA等生 物分子的分离和检测,可应用 于生物医学研究、临床诊断等 领域。
标准化处理
将数据转换为统一标准,便 于比较和分析。
统计分析
运用统计学方法对实验数据 进行处理,提取有意义的信 息。
结果分析与解读
趋势分析
分析实验数据的变化趋势,揭示潜在规律。
差异分析
比较不同样本或条件下的数据差异,找出关键影响因 素。
相关性分析
探究实验数据之间的关联性,揭示变量之间的相互作 用。
误差来源与控制
06
毛细管电泳的未来发展 与展望
技术创新与改进
高效分离技术的研发
01
通过改进分离介质、优化分离条件等手段,提高毛细管电泳的
分离效率。
检测技术的升级
02
研究新型检测方法,提高检测灵敏度和特异性,满足更多样品
的检测需求。
微型化与集成化
03
将毛细管电泳技术集成到微流控芯片中,实现微型化、便携式
分析。
应用领域的拓展
毛细管清洗
实验结束后,对毛细管进行必要的清洗,以 便下次使用。
数据整理与保存
将实验数据整理并保存,以便后续分析。
仪器清洁与保养
对仪器进行必要的清洁与保养,延长其使用 寿命。
REPORT
CATALOG
DATE
ANALYSIS
SUMMAR Y
05
将样品溶液注入毛细管一端,施加电 场后,带电粒子在电场作用下开始电 泳迁移,经过一定时间后,到达毛细 管的另一端,经过检测器检测。
毛细管电泳的应用
环境监测
用于检测水体、土壤等环境样 品中的污染物,如重金属离子
、有机物等。
生物分析
用于蛋白质、DNA、RNA等生 物分子的分离和检测,可应用 于生物医学研究、临床诊断等 领域。
标准化处理
将数据转换为统一标准,便 于比较和分析。
统计分析
运用统计学方法对实验数据 进行处理,提取有意义的信 息。
结果分析与解读
趋势分析
分析实验数据的变化趋势,揭示潜在规律。
差异分析
比较不同样本或条件下的数据差异,找出关键影响因 素。
相关性分析
探究实验数据之间的关联性,揭示变量之间的相互作 用。
误差来源与控制
06
毛细管电泳的未来发展 与展望
技术创新与改进
高效分离技术的研发
01
通过改进分离介质、优化分离条件等手段,提高毛细管电泳的
分离效率。
检测技术的升级
02
研究新型检测方法,提高检测灵敏度和特异性,满足更多样品
的检测需求。
微型化与集成化
03
将毛细管电泳技术集成到微流控芯片中,实现微型化、便携式
分析。
应用领域的拓展
毛细管清洗
实验结束后,对毛细管进行必要的清洗,以 便下次使用。
数据整理与保存
将实验数据整理并保存,以便后续分析。
仪器清洁与保养
对仪器进行必要的清洁与保养,延长其使用 寿命。
REPORT
CATALOG
DATE
ANALYSIS
SUMMAR Y
05
高效毛细管电泳法PPT课件
20
第20页/共50页
21
第21页/共50页
四、柱效和分离度
(一)理论塔板数和塔板高度
引入与色谱相似的处理和表达方法,用理论塔板数n和 塔板高度H表示柱效。n可以直接由电泳图求出
n
5.54
tm W1/ 2
2
16
tm W
2
tm为起点到谱峰最高点所对应的时间,称为迁移时间。因为 毛细管中,没有固定相,不存在组分在固定相中分配和保留。
(2)阴离子的影响
在其他条件相同,浓度相同而阴离子不同时,毛细管中 的电流有较大差别,产生的焦耳热不同。
缓冲溶液离子强度,影响双电层的厚度、溶液黏度和工 作电流,明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加,电 渗流下降。
17
第17页/共50页
18
第18页/共50页
4. 温度的影响
毛细管内温度的升高,使溶液的黏度下降,电渗流增大。 温度变化来自于“焦耳热” 焦耳热:毛细管溶液中有电流通过时,产生的热量; HPCE中的焦耳热与背景电解质的摩尔电导、浓度及电场强度成正比。 温度每变化1,将引起背景电解质溶液黏度变化2%~3%;
二、电渗和电渗流
ef i i ep
i
1.电渗现象
当固体与液体相接触时,如果固体表面因某种原因带一 种电荷,则因静电引力使其周围液体带相反电荷,当液体两 端施加一定电压时,就会发生液体相对于固体表面的移动, 我们把这种液体相对于带电固体表面移动的现象叫做电渗。
7
第7页/共50页
目前,高效毛细管电泳大多使用石英毛细管,在内充缓冲 液PH>2时,管壁的硅醇基(-SiOH)开始部分离解成硅醇 基阴离子(-SiO-),使管壁带负电荷,并由此吸引溶液中 的阳离子,在管壁和溶液之间形成双电层。毛细管内壁的双 电层及其电势分布见下图。
第20页/共50页
21
第21页/共50页
四、柱效和分离度
(一)理论塔板数和塔板高度
引入与色谱相似的处理和表达方法,用理论塔板数n和 塔板高度H表示柱效。n可以直接由电泳图求出
n
5.54
tm W1/ 2
2
16
tm W
2
tm为起点到谱峰最高点所对应的时间,称为迁移时间。因为 毛细管中,没有固定相,不存在组分在固定相中分配和保留。
(2)阴离子的影响
在其他条件相同,浓度相同而阴离子不同时,毛细管中 的电流有较大差别,产生的焦耳热不同。
缓冲溶液离子强度,影响双电层的厚度、溶液黏度和工 作电流,明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加,电 渗流下降。
17
第17页/共50页
18
第18页/共50页
4. 温度的影响
毛细管内温度的升高,使溶液的黏度下降,电渗流增大。 温度变化来自于“焦耳热” 焦耳热:毛细管溶液中有电流通过时,产生的热量; HPCE中的焦耳热与背景电解质的摩尔电导、浓度及电场强度成正比。 温度每变化1,将引起背景电解质溶液黏度变化2%~3%;
二、电渗和电渗流
ef i i ep
i
1.电渗现象
当固体与液体相接触时,如果固体表面因某种原因带一 种电荷,则因静电引力使其周围液体带相反电荷,当液体两 端施加一定电压时,就会发生液体相对于固体表面的移动, 我们把这种液体相对于带电固体表面移动的现象叫做电渗。
7
第7页/共50页
目前,高效毛细管电泳大多使用石英毛细管,在内充缓冲 液PH>2时,管壁的硅醇基(-SiOH)开始部分离解成硅醇 基阴离子(-SiO-),使管壁带负电荷,并由此吸引溶液中 的阳离子,在管壁和溶液之间形成双电层。毛细管内壁的双 电层及其电势分布见下图。
毛细管电泳分析解析PPT课件
细管(内经2-5m) 中粗管(内径 25-75m) 粗管(内径100-250m)
第24页/共61页
(3)毛细管的改性: 通常在毛细管内壁涂一层亲水性非离子型聚合物(如:聚 丙烯酰胺、甲基纤维素等),这些涂层提高了对生物大分 子分离的效率。涂层的方法有两种。 物理涂层:将涂料经适当处理在毛细管内侧形成一层薄膜 化学涂层:是将涂料通过化学键偶联在毛细管的内侧。
第30页/共61页
图表面活性对分离的影响示意图 A: 未加表面活性的分离效果, B:加入表面活性的分离效果
第31页/共61页
5 进样方式 由于毛细管的内径非常细,其进样方式与常规电泳和层析 的进样方式有所不同。毛细管电泳的进样方式主要有两类 ,一类是电迁移进样,另一类是流体力学进样。
第32页/共61页
E = V/Lt V: 电压 Lt: 毛细管两端的总长度
第5页/共61页
(3)电泳淌度(Electric Field Mobility,简称ep ) 带电粒子在毛细管中,作定向运动的电泳速度与所在电 场强度之比。电泳淌度的单位用cm2/V.sec表示。
Ld/tm ep = Vep /E = ───
第25页/共61页
3.3检测器: 毛细管电泳配置的检测器与高效液相层析使用的检测器大 致相同,都属于超微量分析,对检测器的灵敏度要求比较 高,常用的检测器 . 紫外检测器 灵敏度可达到10-17g 激光诱发荧光检测器,灵敏度可达到10-19g 质谱检测器,灵敏度可达到10-21g 核磁共振检测器,灵敏度可达到10-21g
第13页/共61页
(8)热效应 (Joule Heating) 在高电场下毛细管中的电解质和电流发生剧烈的摩擦, 产生大量的热,这种自热现象,称之为热效应。
第14页/共61页
第24页/共61页
(3)毛细管的改性: 通常在毛细管内壁涂一层亲水性非离子型聚合物(如:聚 丙烯酰胺、甲基纤维素等),这些涂层提高了对生物大分 子分离的效率。涂层的方法有两种。 物理涂层:将涂料经适当处理在毛细管内侧形成一层薄膜 化学涂层:是将涂料通过化学键偶联在毛细管的内侧。
第30页/共61页
图表面活性对分离的影响示意图 A: 未加表面活性的分离效果, B:加入表面活性的分离效果
第31页/共61页
5 进样方式 由于毛细管的内径非常细,其进样方式与常规电泳和层析 的进样方式有所不同。毛细管电泳的进样方式主要有两类 ,一类是电迁移进样,另一类是流体力学进样。
第32页/共61页
E = V/Lt V: 电压 Lt: 毛细管两端的总长度
第5页/共61页
(3)电泳淌度(Electric Field Mobility,简称ep ) 带电粒子在毛细管中,作定向运动的电泳速度与所在电 场强度之比。电泳淌度的单位用cm2/V.sec表示。
Ld/tm ep = Vep /E = ───
第25页/共61页
3.3检测器: 毛细管电泳配置的检测器与高效液相层析使用的检测器大 致相同,都属于超微量分析,对检测器的灵敏度要求比较 高,常用的检测器 . 紫外检测器 灵敏度可达到10-17g 激光诱发荧光检测器,灵敏度可达到10-19g 质谱检测器,灵敏度可达到10-21g 核磁共振检测器,灵敏度可达到10-21g
第13页/共61页
(8)热效应 (Joule Heating) 在高电场下毛细管中的电解质和电流发生剧烈的摩擦, 产生大量的热,这种自热现象,称之为热效应。
第14页/共61页
毛细管电泳课件PPT课件
E=V/L
• 电场力:在溶液中,电场对带电离子作用力(F)的大小等于带电离子 所带的净电荷(q)与电场强度的乘积:
F=q·E
• 在电泳迁移过程中,介质粘滞力(F’)必然会阻碍离子的迁移。 • 粘滞力的大小与离子大小、形状、缓冲液粘度、甚至电泳介质孔径均有
关系,与带电离子的移动速度更是直接相关。对于球形分子F’的大小 服从Stokes定律:
电荷,溶液表面带负电荷,电渗流流向阳极。
第12页/共52页
2.CE中电渗流的流形
• 液相色谱中的溶液流动为层流,抛物线流型,管壁 处流速最慢,管中心处的速度为平均速度的2倍 (引起谱带展宽较大)。
• 在毛细管电泳中,电荷均匀分布,整体移动,电渗 流的流动为平流,塞式流动(区带展宽很小),故 柱效较高。
第24页/共52页
第三节 毛细管电泳仪
第25页/共52页
一、仪器主要部件
第26页/共52页
1.高压电源 (1)0~30 kV 稳定、连续可调的直流电源; (2)具有恒压、恒流、恒功率输出; (3)电场强度程序控制系统; (4)电压稳定性:0.1 %; (5)电源极性易转换;
第27页/共52页
2. 毛细管
移μ速ef率(或Ee称f
电泳淌度)
q
6πr
:
由此可知,球形带电离子的迁移率,主要取决于自身状态,即与其所
带电量成正比,与其半径及介质粘度成反比。电泳过程中正是利用带
第8页/共52页
二、电渗流
石英毛细管柱,内壁大约有8.31 mol/m2的硅醇基 (Si-OH),其等电点约为1.5,内充液pH>3时,表 面电离成SiO-,管内壁带负电荷,形成双电层。
• (2)快速:可在十几分钟甚至几十秒内完成分离;
• 电场力:在溶液中,电场对带电离子作用力(F)的大小等于带电离子 所带的净电荷(q)与电场强度的乘积:
F=q·E
• 在电泳迁移过程中,介质粘滞力(F’)必然会阻碍离子的迁移。 • 粘滞力的大小与离子大小、形状、缓冲液粘度、甚至电泳介质孔径均有
关系,与带电离子的移动速度更是直接相关。对于球形分子F’的大小 服从Stokes定律:
电荷,溶液表面带负电荷,电渗流流向阳极。
第12页/共52页
2.CE中电渗流的流形
• 液相色谱中的溶液流动为层流,抛物线流型,管壁 处流速最慢,管中心处的速度为平均速度的2倍 (引起谱带展宽较大)。
• 在毛细管电泳中,电荷均匀分布,整体移动,电渗 流的流动为平流,塞式流动(区带展宽很小),故 柱效较高。
第24页/共52页
第三节 毛细管电泳仪
第25页/共52页
一、仪器主要部件
第26页/共52页
1.高压电源 (1)0~30 kV 稳定、连续可调的直流电源; (2)具有恒压、恒流、恒功率输出; (3)电场强度程序控制系统; (4)电压稳定性:0.1 %; (5)电源极性易转换;
第27页/共52页
2. 毛细管
移μ速ef率(或Ee称f
电泳淌度)
q
6πr
:
由此可知,球形带电离子的迁移率,主要取决于自身状态,即与其所
带电量成正比,与其半径及介质粘度成反比。电泳过程中正是利用带
第8页/共52页
二、电渗流
石英毛细管柱,内壁大约有8.31 mol/m2的硅醇基 (Si-OH),其等电点约为1.5,内充液pH>3时,表 面电离成SiO-,管内壁带负电荷,形成双电层。
• (2)快速:可在十几分钟甚至几十秒内完成分离;
《毛细管电泳法》PPT课件
蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关, CZE方式很难分别,采用CGE能获得良好分别。
;
毛细管凝胶电泳综合了电泳技术和平板 凝胶电泳的优点 :
电泳峰锋利,柱效极高 短柱上实现极好的分别 试样容量为10-12g
主要缺陷:制备柱较困难,寿命较短 已成为分别分析生物大分子如蛋白质、 多肽、核 酸、DNA等强有力的工具。 例运用CGE分别与激光诱导荧光检测相 结合,用于DNA序列快速分析。
;
5 毛细管等电聚焦 CIEF
1、毛细管内充有两性电解质〔合成的具有不同等电点 范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物〕,当施加直流电压 〔6~8V〕时,管内将建立一个由阳极到阴极逐渐升高 的pH梯度;
2、氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有 关,在酸性溶液中带正电荷,反之带负电荷。在其等电 点时,呈电中性,淌度为零;
vT=vA=vB=vC=vL 或:
TET= AEA= BEB= CEC= LEL
式中, ,有效淌度, E,电场强度
由于
T〉 A〉 B〉 C〉 L,
所以有: E T < E A < E B < E C < E L
各区带的电场强度不同。前导电解质区带的电场强度最 小。
;
假设某一区带的离子进入前一区带, 由 于电场强度变小而减速,由假设进入到 下区带,由于电场强度变大而加速, 都 退回到原区带, 结果导致各区带构成鲜 明的界面.
毛细管电泳法
Capillary Electrophoresis, CE
;
毛细管电泳是带电粒子在电场力的 驱动下,在毛细管中按其淌度或分配系 数不同进展高效、快速分别的电泳新技 术,也称为高效毛细管电泳。
一、毛细管电泳的原理 二、分别方式
;
毛细管凝胶电泳综合了电泳技术和平板 凝胶电泳的优点 :
电泳峰锋利,柱效极高 短柱上实现极好的分别 试样容量为10-12g
主要缺陷:制备柱较困难,寿命较短 已成为分别分析生物大分子如蛋白质、 多肽、核 酸、DNA等强有力的工具。 例运用CGE分别与激光诱导荧光检测相 结合,用于DNA序列快速分析。
;
5 毛细管等电聚焦 CIEF
1、毛细管内充有两性电解质〔合成的具有不同等电点 范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物〕,当施加直流电压 〔6~8V〕时,管内将建立一个由阳极到阴极逐渐升高 的pH梯度;
2、氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有 关,在酸性溶液中带正电荷,反之带负电荷。在其等电 点时,呈电中性,淌度为零;
vT=vA=vB=vC=vL 或:
TET= AEA= BEB= CEC= LEL
式中, ,有效淌度, E,电场强度
由于
T〉 A〉 B〉 C〉 L,
所以有: E T < E A < E B < E C < E L
各区带的电场强度不同。前导电解质区带的电场强度最 小。
;
假设某一区带的离子进入前一区带, 由 于电场强度变小而减速,由假设进入到 下区带,由于电场强度变大而加速, 都 退回到原区带, 结果导致各区带构成鲜 明的界面.
毛细管电泳法
Capillary Electrophoresis, CE
;
毛细管电泳是带电粒子在电场力的 驱动下,在毛细管中按其淌度或分配系 数不同进展高效、快速分别的电泳新技 术,也称为高效毛细管电泳。
一、毛细管电泳的原理 二、分别方式
《毛细管凝胶电泳》课件
安全。
02
毛细管凝胶电泳的 基本原理
电泳的基本原理
电泳是利用带电粒子 在电场中的迁移速度 差异进行分离的方法 。
迁移速度与带电粒子 的电荷量、半径、介 质粘度等有关。
带电粒子在电场中受 到库仑力的作用,产 生定向移动。
凝胶电泳的原理
凝胶电泳利用凝胶作为支持介 质,对带电粒子进行分离。
凝胶具有三维网络结构,能够 限制带电粒子的迁移路径,从 而实现分离。
拓展应用领域
将毛细管凝胶电泳技术应用于更多领域,如医学诊断、环境监测、 食品安全等,拓展其应用范围。
05
毛细管凝胶电泳的 应用实例
在生物大分子分离中的应用
蛋白质分离
毛细管凝胶电泳在蛋白质分离中具有 高分辨率和高分离效率的特点,可用 于分离复杂的蛋白质混合物,如细胞 提取物、血清等。
多糖分离
利用毛细管凝胶电泳可以分离和表征 各种多糖,如细菌荚膜多糖、植物细 胞壁多糖等,对于糖类化合物的结构 和功能研究具有重要意义。
标准化与规范化
为了更好地推广和应用毛细管凝胶电泳技术,需 要制定相关的标准和技术规范,提高技术的可靠 性和可重复性。
THANKS
感谢您的观看
技术优势与局限性
该技术具有高分辨率、高灵敏度、快速分离等优势,但也 存在一些局限性,如样品制备繁琐、成本较高等。
展望
1 2 3
技术创新
未来毛细管凝胶电泳技术将不断优化和改进,提 高分离效率和检测灵敏度,降低操作成本。
应用拓展
随着技术的进步和应用需求的增加,毛细管凝胶 电泳技术在更多领域将得到应用和推广,如临床 诊断、药物研发等。
优点
高分离效率
毛细管凝胶电泳技术利用微米尺度的 分离通道,能够实现高分离效率,尤 其适合分离复杂生物样品。
02
毛细管凝胶电泳的 基本原理
电泳的基本原理
电泳是利用带电粒子 在电场中的迁移速度 差异进行分离的方法 。
迁移速度与带电粒子 的电荷量、半径、介 质粘度等有关。
带电粒子在电场中受 到库仑力的作用,产 生定向移动。
凝胶电泳的原理
凝胶电泳利用凝胶作为支持介 质,对带电粒子进行分离。
凝胶具有三维网络结构,能够 限制带电粒子的迁移路径,从 而实现分离。
拓展应用领域
将毛细管凝胶电泳技术应用于更多领域,如医学诊断、环境监测、 食品安全等,拓展其应用范围。
05
毛细管凝胶电泳的 应用实例
在生物大分子分离中的应用
蛋白质分离
毛细管凝胶电泳在蛋白质分离中具有 高分辨率和高分离效率的特点,可用 于分离复杂的蛋白质混合物,如细胞 提取物、血清等。
多糖分离
利用毛细管凝胶电泳可以分离和表征 各种多糖,如细菌荚膜多糖、植物细 胞壁多糖等,对于糖类化合物的结构 和功能研究具有重要意义。
标准化与规范化
为了更好地推广和应用毛细管凝胶电泳技术,需 要制定相关的标准和技术规范,提高技术的可靠 性和可重复性。
THANKS
感谢您的观看
技术优势与局限性
该技术具有高分辨率、高灵敏度、快速分离等优势,但也 存在一些局限性,如样品制备繁琐、成本较高等。
展望
1 2 3
技术创新
未来毛细管凝胶电泳技术将不断优化和改进,提 高分离效率和检测灵敏度,降低操作成本。
应用拓展
随着技术的进步和应用需求的增加,毛细管凝胶 电泳技术在更多领域将得到应用和推广,如临床 诊断、药物研发等。
优点
高分离效率
毛细管凝胶电泳技术利用微米尺度的 分离通道,能够实现高分离效率,尤 其适合分离复杂生物样品。
《毛细管凝胶电泳》幻灯片
ab
聚丙烯酰胺凝胶毛细管柱的制备方法
检测窗口制备 内壁修饰 120°C热空气吹,室温氨气冲洗2h,后50%3-
甲基丙烯酰氧丙基-三甲氧基硅烷〔3- methacryloxypropyl-trimethoxysilane)充满一昼夜 后,用甲醇和水冲洗 缓冲溶液制备 1.1g Tris和 0.01g EDTA溶于100 ml 7M尿 素溶液,用NaH2PO4调至pH 8.6 单体溶液制备 29g 丙烯酰胺和1g N-甲叉双丙烯酰胺溶解 在100ml 缓冲溶液中 催化剂制备 0.2g 过硫酸铵溶于2ml 缓冲溶液中 凝胶溶液制备 10ml 单体溶液参加到30ml缓冲溶液中,甲 4ul 催化剂溶液,2.5 ul 四甲基乙二胺〔TEMED〕预聚 合45分钟 灌注聚合 上述凝胶溶液注入毛细管到无气泡,将两端浸入
《毛细管凝胶电泳》幻灯 片
本课件PPT仅供大家学习使用 学习完请自行删除,谢谢! 本课件PPT仅供大家学习使用 学习完请自行删除,谢谢! 本课件PPT仅供大家学习使用 学习完请自行删除,谢谢! 本课件PPT仅供大家学习使用 学习完请自行删除,谢谢!
CITP CZE CIEF CGE CEC
亲水高分子聚合物无胶筛分体系
Mobility of dsDNA and the choice of gel concentration
凝胶的浓度-ssDNA
Concentration of HPMC on the separation of dsDNA ladder A-0.1%, B-0.3%, C-0.7%
Denaturing of protein before SDS-C-PAGE
Denature condition: 1% Sanol 30min at 90C.
聚丙烯酰胺凝胶毛细管柱的制备方法
检测窗口制备 内壁修饰 120°C热空气吹,室温氨气冲洗2h,后50%3-
甲基丙烯酰氧丙基-三甲氧基硅烷〔3- methacryloxypropyl-trimethoxysilane)充满一昼夜 后,用甲醇和水冲洗 缓冲溶液制备 1.1g Tris和 0.01g EDTA溶于100 ml 7M尿 素溶液,用NaH2PO4调至pH 8.6 单体溶液制备 29g 丙烯酰胺和1g N-甲叉双丙烯酰胺溶解 在100ml 缓冲溶液中 催化剂制备 0.2g 过硫酸铵溶于2ml 缓冲溶液中 凝胶溶液制备 10ml 单体溶液参加到30ml缓冲溶液中,甲 4ul 催化剂溶液,2.5 ul 四甲基乙二胺〔TEMED〕预聚 合45分钟 灌注聚合 上述凝胶溶液注入毛细管到无气泡,将两端浸入
《毛细管凝胶电泳》幻灯 片
本课件PPT仅供大家学习使用 学习完请自行删除,谢谢! 本课件PPT仅供大家学习使用 学习完请自行删除,谢谢! 本课件PPT仅供大家学习使用 学习完请自行删除,谢谢! 本课件PPT仅供大家学习使用 学习完请自行删除,谢谢!
CITP CZE CIEF CGE CEC
亲水高分子聚合物无胶筛分体系
Mobility of dsDNA and the choice of gel concentration
凝胶的浓度-ssDNA
Concentration of HPMC on the separation of dsDNA ladder A-0.1%, B-0.3%, C-0.7%
Denaturing of protein before SDS-C-PAGE
Denature condition: 1% Sanol 30min at 90C.
高效毛细管电泳仪ppt课件
NH3+ OH-
P
P
NH3+
NH2
OH-
P
H+
COOH
COO- H+
COO-
pH<pI
pH=pI
pH> pI
等电聚焦电泳
等电聚焦电泳具有很高的分辨率,在等电点 上只有有0.01pH单位的差异就能准确地分离
特别适合分离分子量相近而等电点不同的蛋 白质组分
特点:
等速电泳(isotachophoresis,ITP)
一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,在此 体系中,不同的蛋白质即移动到或聚焦于其 相当的等电点位置上,也就是说被聚焦于一 个狭的区带中,电泳技术中的等电点聚焦也 称为聚焦电泳。 两性电解质:就是在不同PH环境下,电解质可 酸性电离,也可碱性电离,如磷酸(二)氢钠
等电聚焦电泳
蛋白质分子在不同pH下的解离状态
溶液离子强度:强度愈高,电泳速度愈慢。适宜强 度0.02~0.20mol/kg.
四、影响电泳的因素
电渗:液体相对于固体支持物的移动。泳动方向 与电渗方向一致时,则加快泳动速度;当颗粒的 泳动方向与电渗方向相反时,则降低颗粒的泳动 速度。
温度:温度每升高10c,迁移率增加2.4% 迁移率:
五、常用的电泳方法
类型 紫外-可见 荧光 激光诱导荧光 电导
检测限/mol 10-13~10-15 10-15~10-17 10-18~10-20 10-18~10-19
特点 加二极管阵列,光谱信息 灵敏度高,样品需衍生 灵敏度极高,样品需衍生 离子灵敏,需专用的装置
3.高效毛细管电泳仪实图
4.毛细管电泳的分离模式
Zeta电势ξw
扩散层 δ
剪切面
色谱分析法第九章 毛细管电泳法简介26页PPT
出版社 社文分社
图9.13 CIEF分离机理示意图 4)聚焦区带的活动化 5)CIEF的应用 9.5.5毛细管等速电泳(CITP) 1)CITP的原理
CITP是一种置换色谱的电泳配对物。
16 页 退出
色谱分析法
出版社 社文分社
图9.14 CITP分离机理示意图 2)等速电泳图的外观
图9.15 等速电泳谱图
一恒定电场、恒定电流或恒定功率,并且有电场反向功能的模块。
9.2.7数据处理
9.3 毛细管电泳与其他分离技术的比较
高效液相色谱(HPLC)和气相色谱(GC)与毛细管电泳相似,在于
这三种方法中数据表示、数据处理和自动化基本相同。Jorgenson
曾经将毛细管电泳描述为“电泳的高效分离机理与色谱的设备和自
EOF)。在正常模式中,电渗流的方向是由正极向着负极,缓冲液从
入口池通过毛细管和检测器到达出口池。
图9.6 溶质通过毛细管的顺序
图9.7阳离子、中性分子、阴离子 的电泳谱图
8 页 退出
色谱分析法
1)电渗流的作用 2)电渗流的产生
出版社 社文分社
图9.8 电渗流的产生
9 页 退出
色谱分析法
出版社 社文分社
色谱分析法
出版社 社文分社
第九章 毛细管电泳法简介
1 页 退出
色谱分析法
出版社 社文分社
9.1.1简介 电泳(Electrophoresis)是指带电粒子或分子在电场的作用下
在导电液体通常是水介质中的运动。毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)是在毛细管中实现电泳分离的技术。如图 9.1所示,充满了电解质或缓冲液的水性介质的玻璃管的两端与装 有相同缓冲液的容器连接在一起,并在这两个容器中插入连有高压 电源的两个铂电极。假设有一个样品含有分子大小不同的中性分子 和带电离子,而且带电的离子带有不同的电荷。将样品放置在玻璃 管的正极端,在整个体系中加上电场,则样品中的离子就趋向于以 不同的速度沿不同的方向在管内迁移。迁移的速度和方向取决于离 子的尺寸和离子所带电荷的大小和符号。
《毛细管电泳原理》课件
分离的程度。
分辨率
02
分辨率是指毛细管电泳谱中相邻两峰之间的分离程度,分辨率
越高,分离效果越好。
检测限
03
指在毛细管电泳谱中能够检测到的最小样品浓度,检测限越低
,灵敏度越高。
定量分析
标准曲线法
通过绘制标准曲线,将毛细管电泳谱中的峰高或峰面积与样品浓度进行线性回归 分析,从而进行定量分析。
内标法
通过在样品中加入内标物,利用内标物与样品中各组分的分离度和响应因子相同 的特点,进行定量分析。
数据分析方法
峰高法
通过测量毛细管电泳谱中各组分的峰高,利用峰高与样品浓 度的线性关系进行定量分析。
峰面积法
通过积分毛细管电泳谱中各组分的峰面积,利用峰面积与样 品浓度的线性关系进行定量分析。
05
毛细管电泳的优缺点与展望
优点与缺点
高分离效能
毛细管电泳具有极高的分离效率,可 实现复杂样品的快速分离。
药物分析
毛细管电泳在药物分析中 可用于药物成分的分离和 检测,以及药物代谢产物 的分析。
食品安全
毛细管电泳可用于食品安 全检测,如食品添加剂、 农药残留等的检测。
02
毛细管电泳的仪器与实验条
件
仪器介绍
毛细管电泳仪的基本构成
检测器的选择
包括高压电源、进样系统、毛细管电 泳柱、检测器和数据采集系统等部分 。
配制电解质溶液
按照所需的浓度和比例,配制 电解质溶液。
数据处理与分析
采集实验数据,进行数据处理 和分析,得出结论。
03
毛细管电泳的分离模式与分
离机制
分离模式
毛细管区带电泳(CZE)
胶束电动色谱(MEKC)
毛细管凝胶电泳(CGE)
毛细管电泳技术及应用ppt课件
电渗流的大小用电渗流速度ν 度μ和电场强度E。即
电渗流表示,取决于电渗淌
ν
电渗流
= μE
ξ
电渗淌度取决于电泳介质及双电层的Zeta电势,即 μ = ε
0ε
ε 0—真空介电常数;ε —介电常数;ξ —毛细管壁的Zeta电势。
ν ν
电渗流
= ε 0ε ξ E = Lef/teo
ppt课件 12
实际电泳分析,可在实验测定相应参数后,按下式计算
(球形离子)
物质离子在电场中差速迁移是电泳分离的基础。 淌度μ :单位电场强度下的平均电泳速度。
q E 6π
q—离子所带的有效电荷; E —电场强度; γ —离子的表观液态动力学半径 η —介质的粘度;
ppt课件 9
电渗现象与电渗流
electroosmosis and electroosmotic flow
(1)毛细管改性 表面键合阳离子基团; (2)加电渗流反转剂 内充液中加入大量的阳离子表面活性剂,将使石英毛细 管壁带正电荷,溶液表面带负电荷。电渗流流向正极。
ppt课件 13
4. CE中电渗流的流形
电荷均匀分布,整体移动,电渗流的流动为平流,塞式 流动(谱带展宽很小);
液相色谱中的溶液流动为层流,抛物线流型,管壁处流 速为零,管中心处的速度为平均速度的2倍(引起谱带展宽 较大)。
电渗流
Lef —毛细管有效长度; teo—电渗流标记物(中性物质)的迁移时间。
CE中电渗流的方向
电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质: 内表面带负电荷,溶液带正电荷,电渗流流向负极; 内表面带正负电荷,溶液带负电荷,电渗流流向正极; 石英毛细管;带负电荷,电渗流流向阴极;
改变电渗流方向的方法:
电渗流表示,取决于电渗淌
ν
电渗流
= μE
ξ
电渗淌度取决于电泳介质及双电层的Zeta电势,即 μ = ε
0ε
ε 0—真空介电常数;ε —介电常数;ξ —毛细管壁的Zeta电势。
ν ν
电渗流
= ε 0ε ξ E = Lef/teo
ppt课件 12
实际电泳分析,可在实验测定相应参数后,按下式计算
(球形离子)
物质离子在电场中差速迁移是电泳分离的基础。 淌度μ :单位电场强度下的平均电泳速度。
q E 6π
q—离子所带的有效电荷; E —电场强度; γ —离子的表观液态动力学半径 η —介质的粘度;
ppt课件 9
电渗现象与电渗流
electroosmosis and electroosmotic flow
(1)毛细管改性 表面键合阳离子基团; (2)加电渗流反转剂 内充液中加入大量的阳离子表面活性剂,将使石英毛细 管壁带正电荷,溶液表面带负电荷。电渗流流向正极。
ppt课件 13
4. CE中电渗流的流形
电荷均匀分布,整体移动,电渗流的流动为平流,塞式 流动(谱带展宽很小);
液相色谱中的溶液流动为层流,抛物线流型,管壁处流 速为零,管中心处的速度为平均速度的2倍(引起谱带展宽 较大)。
电渗流
Lef —毛细管有效长度; teo—电渗流标记物(中性物质)的迁移时间。
CE中电渗流的方向
电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质: 内表面带负电荷,溶液带正电荷,电渗流流向负极; 内表面带正负电荷,溶液带负电荷,电渗流流向正极; 石英毛细管;带负电荷,电渗流流向阴极;
改变电渗流方向的方法:
毛细管电泳ppt课件
• 1909年,L.Michaelis提出“电泳
(electrophoresis) ”这一术语,他的实验是用
于测定蛋白质的等电点。
• 1937年,瑞典科学家A.Tiselius 成功研制出界 面电泳仪,并建立了移动界面电泳法,用于人血 清蛋白的分离。
• Tiselius于48年获诺贝尔化学奖。
整理版课件
24
uapuosuef uap uos uapuosuef
阴离子
电渗 流
中性分子
阳离子
整理版课件
25
四、 分离效率和谱带展宽
1. 柱效参数-理论塔板数和塔板高度
理论塔板数: n5.54(tm/W1/2)2
tm — 迁移时间, W1/2 —时间半峰宽
塔板高度: HLd /n
Ld ——进样口到检测器之间的距离
• 经典电泳法
自由界面电泳(无载体电泳)
区带电整理泳版课(件有载体支持电泳)
4
• 界面电泳 :在没有惰性支持物的液体接界面上 进行的电泳。
缺点:对流较严重,组分不能完全分离,检测困难
整理版课件
5
• 区带电泳: 是在溶液中加入一些惰性物质或凝胶 物质作为支持物,泳动物质在支持物间隙中移动 的电泳方法。 避免对流的干扰。
整理版课件
20
电渗的速度可以表示为: uos os•E
• eo—电渗率,单位电场下的电渗流的线速度
os
os
-介质的介电常数
-介质的粘度
-管壁的 Zeta 电势,即双 电层到管壁很近的地方之间的 电位差。
总之,Zeta 电势越大,介电常数越大,粘度越小,
电渗流越大。
在电场作用下,电泳和电渗同时存在,电渗流速度
一、毛细管电泳的分类 二、毛细管区带电泳法 三、胶束电动毛细管色谱 四、凝胶毛细管电泳法 五、毛细管电色谱法
(electrophoresis) ”这一术语,他的实验是用
于测定蛋白质的等电点。
• 1937年,瑞典科学家A.Tiselius 成功研制出界 面电泳仪,并建立了移动界面电泳法,用于人血 清蛋白的分离。
• Tiselius于48年获诺贝尔化学奖。
整理版课件
24
uapuosuef uap uos uapuosuef
阴离子
电渗 流
中性分子
阳离子
整理版课件
25
四、 分离效率和谱带展宽
1. 柱效参数-理论塔板数和塔板高度
理论塔板数: n5.54(tm/W1/2)2
tm — 迁移时间, W1/2 —时间半峰宽
塔板高度: HLd /n
Ld ——进样口到检测器之间的距离
• 经典电泳法
自由界面电泳(无载体电泳)
区带电整理泳版课(件有载体支持电泳)
4
• 界面电泳 :在没有惰性支持物的液体接界面上 进行的电泳。
缺点:对流较严重,组分不能完全分离,检测困难
整理版课件
5
• 区带电泳: 是在溶液中加入一些惰性物质或凝胶 物质作为支持物,泳动物质在支持物间隙中移动 的电泳方法。 避免对流的干扰。
整理版课件
20
电渗的速度可以表示为: uos os•E
• eo—电渗率,单位电场下的电渗流的线速度
os
os
-介质的介电常数
-介质的粘度
-管壁的 Zeta 电势,即双 电层到管壁很近的地方之间的 电位差。
总之,Zeta 电势越大,介电常数越大,粘度越小,
电渗流越大。
在电场作用下,电泳和电渗同时存在,电渗流速度
一、毛细管电泳的分类 二、毛细管区带电泳法 三、胶束电动毛细管色谱 四、凝胶毛细管电泳法 五、毛细管电色谱法
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
带电离子,中性分子
➢ 最小检出限低 1
➢ 分析成本低:毛细管本身成本低,溶剂和试剂消耗量少 ➢ 样品用量少:仅为纳升级(10-9L) ➢ 仪器简单:只需一个高压电源、一个检测器、一截毛细管 ➢ 环境友பைடு நூலகம்:分离介质多为水相,且产生废液量少,环境影响小 。
: 三高二少 高灵敏度,高分辨率, 高速度;样品少,成本低。
化学发光体系
化学发光的主要类型有: 1.自身反应能量激发产物分子的化学发光,
如鲁米诺、光泽精等的化学发光; 2.激发中间体能量传递的化学发光,
如化学发光激发荧光; 3.光解化学发光; 4.电致化学发光; 5.火焰化学发光; 6.相间化学发光等
鲁米诺化学发光体系
毛细管电泳化学发光特点
毛细管电泳与化学发光的结合,兼备了毛细管电泳 分离效率高和化学发光灵敏度高的特点,直接用于复杂 样品中微量组分的分离与测定,同时解决了选择性差和 灵敏度低的问题。
术。 电场作用下,毛细管柱中出现:电泳现象和电渗
现象。
电渗
电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质: 内表面带负电荷,溶液表面带正电荷,电渗流流向 负极; 内表面带正电荷,溶液表面带负电荷,电渗流流向 正极; 石英毛细管,带负电荷,电渗流流向负极;
影响电渗流的因素很多,比如:
1. 电场强度 5. 离子强度
唯一的既能分离中性溶质又 能分离带电组分的电泳技术。
此外,MECC 还能容易地通过改 变流动相和胶束相组成来增加分离 选择性,非常适合手性化合物的分 离。
毛细管电泳法特点
与传统电泳技术相比:
➢ 分离效率高:解决了因提高电压带来的焦耳热问题 ➢ 分离模式多:由电渗流和电泳流共同作用结果,故有多种分类 ➢ 应用范围广:有机、无机小分子,多肽、蛋白质大分子、
2. 温度
3. pH值 4. 缓冲溶剂
6. 添加剂 7. 管壁涂层
毛细管电泳法原理
离子在毛细管内电 解质中的迁移速度 (V) 等于电泳迁移速 度(Vep) 和电渗流速 度 (Veo)的矢量和, 即 V = Vep + Veo
阳离子运动方向与电渗流一致,最先流出。所带正电荷越多,分子质量越 小,即核质比越大的正电离子流出越快;
毛细管凝胶电泳 (CGE)
凝胶充入毛细管中作支持物,不同体积的被测物分 子在“分子筛”作用的凝胶聚合物中得以分离。由于 毛细管内填充凝胶,而凝胶黏度大,抗对流,能减少
溶质的扩散,因1此能限制谱带的展度,所得的峰形尖
锐,柱效极高,所以 CGE 法是分离效率最高的一种毛 细管电泳模式。
缺点:制作麻烦,寿命短
优点:极高的分辨率,可以分离等电点差异<0.01pH 单位的两种蛋白质。
1.进样 2.聚焦
3.迁移
毛细管等速电泳(CITP)
采用两种不同的缓冲液系统,一种是前导电解质,首 先充满整个毛细管,其淌度高于任何样品组分;另一种是 尾随电解质,放置于一端电极槽中,其淌度低于体系中任 何样品组分。样品组分夹在两种组分中间。待加上电压后 ,体系中各组分,包括前导电解质,样品中不同组分,以 及尾随电解质中组分,以各自淌度均匀向毛细管另一端迁 移,形成各自独立的区带。在制备中很有用途,可作为柱 前浓缩方法用于样品富集,但缓冲体系的选择较困难。
毛细管等电聚焦 (CIEF)
将普通等电聚焦电泳转移到毛细管中进行,通过管壁 涂层使电渗流减小到最小,以防止蛋白质吸附及破坏稳定 的聚焦区带。在高压作用下,毛细管内部建立 pH 梯度, 蛋白质在毛细管中向各自的等电点聚焦,形成明显的区带
。用于测定蛋白质1等物质的等电点、分离异构体和其它方
法难以分离的一些物质。
化学发光(CL)
某些物质在进行化学反应时,反应物或生成物吸收 了反应时产生的化学能激发至激发态,处于激发态 的分子返回基态时以辐射的形式释放能量。这种由 化学能使分子激发的分子发光过程称为化学发光。
1)A + B C* + D C* C + h
直接发光
激发发 光
2)A + B C* + D C * +F F * +C F* F + h
中性粒子的电泳速度为“零”,迁移速度即为电渗流速度 ,阳离子之 后流出;
阴离子运动方向与电渗流相反,在中性粒子之后流出,各种粒子因其迁 移速度不同得以分离。
毛细管电泳法仪器构造
1
进样系统
:压力进
样、
电动法、
浓差扩散
紫外检测器、二极管阵列检 测器、激光诱导荧光检测器 、电化学检测器、质谱检测 器等。
毛细管电色谱( CEC)
将高效液相分离技术中应用的固定相微粒填充到毛 细管中,以样品与固定相之间的相互作用为分离机制, 电渗流为流动相驱动力而实现样品的分离。该模式既有 毛细管电泳的高柱效,又有高效液相色谱的高选择性, 常用于分离中性物质及带电组分。
毛细管胶束电动色谱 (MECC)
分离机理:基于胶束与被分离组分分子间的相互作用。溶质在水相和胶束 相(准固定相)之间分配,粒子因其本身疏水性不同,在两相中的分配行 为有差异,疏水性强的和胶束结合牢,流出时间就长,最终按粒子疏水性 的不同而得以分离。
毛细管电泳法操作步骤
清洗毛细管
更换电泳缓冲液
1
流体力学进样方式
进样
电动进样方式
扩散进样
电泳并同时在线检测
毛细管电泳法分类
毛细管区带电泳(CZE) 毛细管凝胶电泳(CGE) 毛细管等电聚焦(CIEF) 毛细管等速电泳(CITP)
分离模式 1 毛细管胶束电动色谱(MECC/MCKC)
微乳液毛细管电动色谱(MEEKC) 毛细管电色谱(CEC) 亲和毛细管电泳(ACE) 非胶毛细管电泳(NGCE)
毛细管区带电泳 (CZE)
分离原理:基于样品组分荷质比的差异 主要操作变量:电压、缓冲液浓度、pH值和添加剂等
在毛细管和检测池内充以相同的
缓冲溶液,样品用1电迁移或流体动
力学方式从毛细管一端导入,施加 分离电压,基于分析物表面电荷密 度的差别,组份在电泳和电渗驱动 下以不同的泳动速度迁移至检测器 端,形成不连续的移动区带。
目录
1、毛细管电泳基本原理 2、化学发光简介 3、文献介绍
毛细管电泳(CE)
1
毛细管电泳法原理
2
毛细管电泳法仪器构造及操作步骤
3
毛细管电泳法分类
4
毛细管电泳法特点
毛细管电泳法原理
毛细管电泳(CE)是一类以高压直流电场为驱动力 ,毛细管为分离通道,依据样品中各组分之间淌度和
分配行为的差异1而实现分离、分析的新型液相分离技
➢ 最小检出限低 1
➢ 分析成本低:毛细管本身成本低,溶剂和试剂消耗量少 ➢ 样品用量少:仅为纳升级(10-9L) ➢ 仪器简单:只需一个高压电源、一个检测器、一截毛细管 ➢ 环境友பைடு நூலகம்:分离介质多为水相,且产生废液量少,环境影响小 。
: 三高二少 高灵敏度,高分辨率, 高速度;样品少,成本低。
化学发光体系
化学发光的主要类型有: 1.自身反应能量激发产物分子的化学发光,
如鲁米诺、光泽精等的化学发光; 2.激发中间体能量传递的化学发光,
如化学发光激发荧光; 3.光解化学发光; 4.电致化学发光; 5.火焰化学发光; 6.相间化学发光等
鲁米诺化学发光体系
毛细管电泳化学发光特点
毛细管电泳与化学发光的结合,兼备了毛细管电泳 分离效率高和化学发光灵敏度高的特点,直接用于复杂 样品中微量组分的分离与测定,同时解决了选择性差和 灵敏度低的问题。
术。 电场作用下,毛细管柱中出现:电泳现象和电渗
现象。
电渗
电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质: 内表面带负电荷,溶液表面带正电荷,电渗流流向 负极; 内表面带正电荷,溶液表面带负电荷,电渗流流向 正极; 石英毛细管,带负电荷,电渗流流向负极;
影响电渗流的因素很多,比如:
1. 电场强度 5. 离子强度
唯一的既能分离中性溶质又 能分离带电组分的电泳技术。
此外,MECC 还能容易地通过改 变流动相和胶束相组成来增加分离 选择性,非常适合手性化合物的分 离。
毛细管电泳法特点
与传统电泳技术相比:
➢ 分离效率高:解决了因提高电压带来的焦耳热问题 ➢ 分离模式多:由电渗流和电泳流共同作用结果,故有多种分类 ➢ 应用范围广:有机、无机小分子,多肽、蛋白质大分子、
2. 温度
3. pH值 4. 缓冲溶剂
6. 添加剂 7. 管壁涂层
毛细管电泳法原理
离子在毛细管内电 解质中的迁移速度 (V) 等于电泳迁移速 度(Vep) 和电渗流速 度 (Veo)的矢量和, 即 V = Vep + Veo
阳离子运动方向与电渗流一致,最先流出。所带正电荷越多,分子质量越 小,即核质比越大的正电离子流出越快;
毛细管凝胶电泳 (CGE)
凝胶充入毛细管中作支持物,不同体积的被测物分 子在“分子筛”作用的凝胶聚合物中得以分离。由于 毛细管内填充凝胶,而凝胶黏度大,抗对流,能减少
溶质的扩散,因1此能限制谱带的展度,所得的峰形尖
锐,柱效极高,所以 CGE 法是分离效率最高的一种毛 细管电泳模式。
缺点:制作麻烦,寿命短
优点:极高的分辨率,可以分离等电点差异<0.01pH 单位的两种蛋白质。
1.进样 2.聚焦
3.迁移
毛细管等速电泳(CITP)
采用两种不同的缓冲液系统,一种是前导电解质,首 先充满整个毛细管,其淌度高于任何样品组分;另一种是 尾随电解质,放置于一端电极槽中,其淌度低于体系中任 何样品组分。样品组分夹在两种组分中间。待加上电压后 ,体系中各组分,包括前导电解质,样品中不同组分,以 及尾随电解质中组分,以各自淌度均匀向毛细管另一端迁 移,形成各自独立的区带。在制备中很有用途,可作为柱 前浓缩方法用于样品富集,但缓冲体系的选择较困难。
毛细管等电聚焦 (CIEF)
将普通等电聚焦电泳转移到毛细管中进行,通过管壁 涂层使电渗流减小到最小,以防止蛋白质吸附及破坏稳定 的聚焦区带。在高压作用下,毛细管内部建立 pH 梯度, 蛋白质在毛细管中向各自的等电点聚焦,形成明显的区带
。用于测定蛋白质1等物质的等电点、分离异构体和其它方
法难以分离的一些物质。
化学发光(CL)
某些物质在进行化学反应时,反应物或生成物吸收 了反应时产生的化学能激发至激发态,处于激发态 的分子返回基态时以辐射的形式释放能量。这种由 化学能使分子激发的分子发光过程称为化学发光。
1)A + B C* + D C* C + h
直接发光
激发发 光
2)A + B C* + D C * +F F * +C F* F + h
中性粒子的电泳速度为“零”,迁移速度即为电渗流速度 ,阳离子之 后流出;
阴离子运动方向与电渗流相反,在中性粒子之后流出,各种粒子因其迁 移速度不同得以分离。
毛细管电泳法仪器构造
1
进样系统
:压力进
样、
电动法、
浓差扩散
紫外检测器、二极管阵列检 测器、激光诱导荧光检测器 、电化学检测器、质谱检测 器等。
毛细管电色谱( CEC)
将高效液相分离技术中应用的固定相微粒填充到毛 细管中,以样品与固定相之间的相互作用为分离机制, 电渗流为流动相驱动力而实现样品的分离。该模式既有 毛细管电泳的高柱效,又有高效液相色谱的高选择性, 常用于分离中性物质及带电组分。
毛细管胶束电动色谱 (MECC)
分离机理:基于胶束与被分离组分分子间的相互作用。溶质在水相和胶束 相(准固定相)之间分配,粒子因其本身疏水性不同,在两相中的分配行 为有差异,疏水性强的和胶束结合牢,流出时间就长,最终按粒子疏水性 的不同而得以分离。
毛细管电泳法操作步骤
清洗毛细管
更换电泳缓冲液
1
流体力学进样方式
进样
电动进样方式
扩散进样
电泳并同时在线检测
毛细管电泳法分类
毛细管区带电泳(CZE) 毛细管凝胶电泳(CGE) 毛细管等电聚焦(CIEF) 毛细管等速电泳(CITP)
分离模式 1 毛细管胶束电动色谱(MECC/MCKC)
微乳液毛细管电动色谱(MEEKC) 毛细管电色谱(CEC) 亲和毛细管电泳(ACE) 非胶毛细管电泳(NGCE)
毛细管区带电泳 (CZE)
分离原理:基于样品组分荷质比的差异 主要操作变量:电压、缓冲液浓度、pH值和添加剂等
在毛细管和检测池内充以相同的
缓冲溶液,样品用1电迁移或流体动
力学方式从毛细管一端导入,施加 分离电压,基于分析物表面电荷密 度的差别,组份在电泳和电渗驱动 下以不同的泳动速度迁移至检测器 端,形成不连续的移动区带。
目录
1、毛细管电泳基本原理 2、化学发光简介 3、文献介绍
毛细管电泳(CE)
1
毛细管电泳法原理
2
毛细管电泳法仪器构造及操作步骤
3
毛细管电泳法分类
4
毛细管电泳法特点
毛细管电泳法原理
毛细管电泳(CE)是一类以高压直流电场为驱动力 ,毛细管为分离通道,依据样品中各组分之间淌度和
分配行为的差异1而实现分离、分析的新型液相分离技